Пароксизмална нощна хемоглобинурия – Заболяванията Marchiafava Michele

Пароксизмална нощна хемоглобинурия сравнително рядко е установено придобитите форма на хемолитична анемия, свързани с промяна на структурата на еритроцити, Неутрофилите гранулоцит и тромбоцити. Потоците с признаци на интраваскуларна хемолиза, където има хемоглобинурия, gemosiderinuriya, увеличаване на нивото на плазмата свободен хемоглобин. Заболяването е често усложнява от периферните вени и съдовата тромбоза вътрешните органи.

Етиологията и патогенезата на Пароксизмална нощна gemoglobinurii

Първото описание на болестта е дадена 1882 ж. Е описано по-подробно в 1928 ж.

Общото име на болестта е Пароксизмална нощна хемоглобинурия (APG), Въпреки това тя наистина съвпада малко болестта, защото там е не присъства пароксизмална хемоглобинурия се наблюдава не винаги.

Интраваскуларна хемолиза с gemosiderinuriej в допълнение APG се наблюдава в много форми на автоимунна хемолитична анемия като с топлина, и със студена антитела, особено когато форми с топлина gemolizinami, както и в някои форми на наследствени хемолитична анемия, свързани с нарушаване на структурата на мембрана на еритроцитите.

Болест на Markiafavy-Micheli наблюдавани на различна възраст. Причината за повишено разрушаване на червените кръвни клетки е дефект на еритроцитите, самите.

Червените кръвни клетки на пациенти с PNH, както бе посочено по-горе, komplementom лесно да свиете при създаването на оптимални условия за неговата валидност, или когато подкисляване серум, или при увеличаване на концентрацията на комплемента около еритроцит чрез създаване на ниска концентрация йони в saharoznoj сряда. Червените кръвни клетки на пациенти с PNH имат повишена чувствителност към ефектите на антитела като аглутини, и, особено, hemolysins.

Когато PNG се отразява не само червени кръвни клетки, но левкоцити и тромбоцити на пациента. Тромбоцити и левкоцити на пациенти с PNH имат повишена чувствителност към ефектите на комплемента както при подкисляване серум, и сряда със захароза ниска йонната сила. Те са много пъти по-чувствителни към ефектите на izoaggljutininov, от донор тромбоцити и левкоцити. По този начин, тромбоцити и бели кръвни клетки имат същия дефект в мембрана, че и червени кръвни клетки.

Откриване на антитела на повърхността на червените кръвни клетки, левкоцити и тромбоцити и по този начин да се докаже членство на APG autoagressivnyh група от заболявания, не може да бъде най-чувствителните методи.

Има убедителни доказателства за съществуването на две различни популации на APG в еритроцити. Най-устойчиви клетки в един здрав човек е reticulocyte APG са по-уязвими. Това предполага, че, Това патологично червени кръвни клетки население просто не оцелее до съзряване, и по-възрастни зрели еритроцити се отнасят за здрави или почти здрави населението.

АЗ Н 1970 в изследването на еритроцитите Латина, засегнатите PNG, Тя е била открита, че те съдържат, както и при здрави мулат жени, електрофореза варианти на две нормални г-н 6-РР; Вариант, често срещано сред хората от Африка, и опция в, типични за населението на Европа. След като прекара хемолиза се обърна, че необичайни червени кръвни клетки съдържат само една опция, г-н 6-РР, и нормалните червени кръвни клетки — двете електрофореза варианти на g-6-PD. Следователно, лизирана червените кръвни телца са произлезли от една единствена клетка.

Този факт с голяма точност показва наличието на две популации на еритроцити, различни не само функционално, като, напр, в mikrosferocitoze, но също така и по произход: с други думи, Това потвърждава наличието на патологичен клонинг клетки, T. е. соматични мутации. Самоличността на еритроцитите мембрана лезии, неутрофилите и тромбоцити предполага, че, тази патологична информация най-вероятно получава клетката, Следваща за стволови, T. е. предшественик клетка mielopojeza. Blastomnyj растеж за PNG не е специфичен. Опишете само изолирани случаи на бързото развитие на левкемия на фон PNG. Въпреки това, Можем да предположим,, че PNG е вариант на доброкачествен тумор на кръвоносната система, за дълго време произвеждащи няма тумор клетъчната пролиферация, характерен за други форми на левкемия.

Komplementchuvstvitel'nosti развитие механизъм в PNG докато неясно.

Значими промени в активността на ензимите на гликолизата и pentozno-фосфат цикъл няма.

Когато PNG намалена активност на acetylcholinesterase на еритроцитите, най-вероятно поради нарушаване на структурата на еритроцитни мембрани, тъй като ензима се намира на повърхността на мембраната и лесно счупена когато неговото поражение. Известен, че употребата на инхибитори на acetylcholinesterase няма никакъв ефект върху оцеляването на еритроцити. Въпреки това падането на acetylcholinesterase активност се наблюдава и в други форми на хемолитична анемия, Следователно не може да обясни феномена на повишената komplementchuvstvi- Леми.

Има доказателства, доказателства за увеличаване на броя на ненаситени мастни киселини, включени в структурата на фосфолипиди, еритроцит мембрана. Има възможност, че промените в липиди — е само отражение на всякакви други промени в структурата на еритроцитни мембрани. В изследването на протеин на мембраната на еритроцитите на пациенти с PNH в електрофореза в полиакриламиден гел в присъствието на натриев dodecilsulfata, това, в редица фракции на белтъчно съдържание се различава значително от контрола.

Главната роля в патогенезата на тромботична усложнения в APG изпада vnutrisosudistomu разбивка на червените кръвни клетки и кръвосъсирването фактори стимулация, освободен от еритроцити по време на раздялата си. Когато APG унищожени предимно reticulocyte, може би, Това и трябва да обясни на честотата на тромботична усложнения в тази болест, за разлика от други форми на хемолитична anemias, придружени от силно изразена интраваскуларна хемолиза.

Клиничните прояви Пароксизмална нощна gemoglobinurii

Заболяването често започва с хленчене. Пациентите се оплакват от слабост, физическо неразположение, виене на свят. Понякога отбелязва, subicteric skler. Често първите оплаквания от главоболие, болки в корема на различна локализация. Склонност към образуване на повишена тромб причинява на пациента да потърси медицинска помощ.. Хемоглобинурия доста рядко е първият симптом на заболяването и някои пациенти на APG може да отсъства изобщо. В някои случаи тя се появява за първи път през 2-3 години и дори чрез 10 години след началото на заболяването.

Една от характерните черти на PNG-пристъпи на болка в корема. Локализиране на него може да бъде много различен. Извън периода на kriza болки в стомаха, обикновено, не са наблюдавани. Често се присъединява към повръщане. Най-често, Коремна болка при пациенти с PNH е свързана с DVT мезентериалните съдове.

Периферни съдови тромбози (по-често, отколкото не-вените на горните и долните крайници, най-малко-на бъбречни съдове) също така характерен симптом Пароксизмална нощна gemoglobinurii. Аз Н 12 % APG пациенти наблюдава throm. Тромбоемболични усложнения са най-честата причина за смърт в тази болест.

Когато цел проучване на пациента често отбележи бледност с леко докосване на zheltushnym. Често има подпухналост на лицето, понякога прекалено пълнота. Може би леко нарастване на далака и черния дроб, Макар че не е типично за APG.

За Пароксизмална нощна gemoglobinurii се характеризира с признаци на интраваскуларна хемолиза, най-важното от които е повишена плазма свободен хемоглобин. Тази тема периодично почти всички пациенти на APG. Въпреки това степента на увеличаване на плазмените свободни хемоглобин варира и зависи, в какъв период от заболяване, изследване. По време на кризата на този дял се увеличава значително, Също така е налице увеличение на броя на metal'bumina плазма.

Плазмено ниво на свободен хемоглобин зависи от степента на хемолиза в момента, съдържание gaptoglobina, степен на филтрация на хемоглобин в урината и скоростта на унищожаване сложни хемоглобин-haptoglobin. В случай на малка степен на хемолиза свободен хемоглобин в плазма нива няма да бъде достатъчно, за да филтрира през филтъра на бъбреците. Следователно хемоглобинурия не е задължително симптом болест. Когато минава през nefronov каналчета, отделяна от хемоглобина е частично разрушена и депозирани в тръбна епител. Това е причината урината hemosiderin.

Снабдени с урината hemosiderin в огромното мнозинство от пациентите с Пароксизмална нощна хемоглобинурия. Gemosiderinurija понякога не се появява веднага. Това е важна, но не е специфична за PNG признак на заболяване.

Лабораторните параметри в paroxizmalna нощ gemoglobinurii

Хемоглобин при пациенти с PNH варира от 1,86 — 3,1 ммол / л (30-50 g/l) и още по-ниско към нормалното по време на ремисия.

Броят на еритроцитите при пациенти с PNH намалява нивото на намаляване на хемоглобина.. Цветови индикатор по-дълъг период остава близо до единица. Където, Ако пациентът губи значителни количества желязо с урината под формата на hemosiderin и хемоглобин, нива на желязо постепенно намалява. В около половината от пациентите се наблюдава ниско цвят индикатор. Някои от тях имат повишени нива на хемоглобин (P), особено по време на увеличена.

Голяма част от пациентите съдържание повишена reticulocyte, но с относително ниско (2- 4 %). Броят на левкоцитите в PNG в повечето случаи намалени. При много пациенти е 1.5-3 грама 1 л, но понякога се намали до 0,7-0,8 g 1 л. Левкопения, обикновено, Там е чрез намаляване на броя на неутрофилите гранулоцити. Понякога кръв в APG нормална или висока-до 10-11 g 1 л.

Когато APG намалява неутрофилите фагоцитна дейност на гранулоцити.

Тромбоцитопения също така често се наблюдава в PNG, Въпреки това нейното функционално състояние на тромбоцитите в нормално. Вероятно, Това обяснява редкостта на кървене усложнения при тази болест, Въпреки че тромбоцитите понякога се намалява значително-до 10-20 гр 1 л. Обикновено в повечето пациенти тромбоцити 50 — 100 g 1 л. Нормално тромбоцитите не изключва диагнозата на Пароксизмална нощна gemoglobinurii.

В изследването на костния мозък откритите симптоми, главно характеристика на хемолитична анемия е червен дразнене зародиш кръвообразуване в нормален брой mielokariocitov. При някои пациенти има леко намаление на броя на Megakaryocyte.

На нивото на серум желязо в PNG Това зависи от стадия на заболяването, степен на интраваскуларна хемолиза и дейността на кръв. Където, Ако пациентите имат постоянно или чести хемоглобинурия, както и постоянен gemosiderinurija, съдържанието на желязо в организма, и следователно, и намалява в серум, понякога много значително. Понякога PNG започва с признаци на плаващи. Желязо се съхранява в тялото на пациента APG зависи от, една страна, от загуба на желязо в урината, и, от друга страна, интензивността на еритропоезата. Следователно не можете да вземете Железен дефицит диагностичен признак на Пароксизмална нощна gemoglobinurii.

Ниво на серумен билирубин в PNG в повечето случаи, извън фокус повишена или нормално, главно чрез косвени. Средното съдържание на билирубин е 22-28 μmol/l. Трябва да се вземе под внимание, че когато хемоглобин Хемоглобинът формира разпад vnutrisosudistom-gaptoglobinovyj комплекс, кой и в крайна сметка също се разделя с образуване на билирубин.

Някои пациенти с болест на PNH започва с картини на апластична анемия.

Диагностика на Пароксизмална нощна gemoglobinurii

Ако Пароксизмална нощна gemoglobinurii черупка структура на еритроцитите е счупен, както е отразено в високата степен на чувствителност към ефектите от нея допълнение. Тази свръхчувствителност се открива с помощта на проби или Хема, или по-чувствителни saharoznoj проби. В някои случаи, обаче,, особено в gemolizinovoj форма на автоимунна хемолитична анемия, saharoznaja проба може да даде фалшиво положителен резултат. Gemoliziny са фиксирани на повърхността на техните собствени червени кръвни клетки и при наличие на комплемента в saharoznoj сряда унищожени им, Докато PNG се характеризира с унищожаването на клетки komplementom без излагане на антитела.

Да изключите gemolizinovoj автоимунна хемолитична анемия проучване препоръчва hemolysins както е описано по-горе и използване кръст-saharoznoj със серумни проби от пациента и донора odnogruppnogo еритроцити, а не обратното, както е прието. Когато APG директна проба е положителна, и кръст-отрицателни. Когато gemolizinovoj форма АЙГА може да възникне като положителен, и отрицателни кръст-проба. В тези случаи е препоръчително да използвате третата опция saharoznoj проби — с помощта на двете серум, и червените кръвни клетки на пациента. Степента на хемолиза в този вариант минимум когато PNG and максимална gemolizinovoj формата на АЙГА. Обясни такъв резултат може да бъде само много специфични антитела на серума на пациента gemolizinovoj форма на автоимунна хемолитична анемия на антиген, налични в големи количества в еритроцитите на болни, отколкото в еритроцитите на дарителя. Директен положителна проба saharoznaja тези пациенти е свързан, вероятно, с наличието на еритроцити фиксирани антитела.

Откриване на hemolysins метод agregatgemaggljutinacii и други помага постави правилна диагноза. Не може да се използва като донор серум от пациенти, както в случая на gemolizina съдържание резултат не може да бъде lozhnopolozhitel'nym. Отрицателен резултат може да възникне, Ако източникът използва пациента серумен комплемент APG или серум на пациента чернодробна цироза, Ревматоиден артрит, Системен лупус еритематозус и други болести, в която допълва ниво намалява. Saharoznaja проба и към пробните Hema става по-слабо изразено, Ако приемате кръв от пациента като антикоагулант хепарин се използва, вместо натриев цитрат. След хемолитична криза интензитет е намалена проби Хема и saharoznoj проби, но те не се превърнат в отрицателни.

Дефиницията на свободен плазма хемоглобин в Бинг Derviz модификация метод и Bjalko с Пароксизмална нощна gemoglobinurii

Методът се основава на способността на хемоглобина да реагират с киселина-бензидин сряда в присъствието на водороден прекис с образуването на зелено оцветяване, Подвижен първо в синьо, и след това в червеникаво-лилаво. Интензитет е пропорционална на броя на хемоглобин.

Реактиви.

1. Ацетатен буфер 0,1 M, pH 4,6: 27,22 g натриев ацетат разтворен в 1 л вода (0,2 М разтвор на); в друга измервателна крушка Кук 1 л 0,2 M разтвор на uksousnokisloy киселина; смесен 480 ml No. 1 и 520 ml No. 2.
2. Водороден пероксид 0,3 % решение (преди употреба се подготвят от разплод решение в 100 време).
3. Soljanokislyj бензидин 0,1 % решение: 50 mg soljanokislogo бензидин разтворени в 35-40 мл от ацетатен буфер, Разтворът се нагрява до 80 ° C на водна баня и след охлаждане, донесе на acetatnym буфер 50 мл.

Филтърна колба и се съхранява на тъмно при стайна температура не повече от 7 дни. Пожълтели реактив е негоден, Бързо potemnenii, вие трябва да perekristallizovat "бензидин от алкохол.

Метод.

Кръв за изследвания, взети от вени суха игла в silikonirovannuju тръба, съдържа всички антикоагулант. Кръв с антикоагулант центрофугира не повече 10 минути при 1500 / Мин. След отделянето на нейните плазма отново се центрофугира 10 минути при 8000 RPM за отлагане на левкоцити.

В епруветката се пълни 4 мл ацетат буфер, 2 ml водороден прекис, 2 ml бензидин and 0,04 ml тестов серум се смесва и на престояване 3 м, след това Изсипете в оптична дължина на траекторията кюветата 1 Вижте и fotometrirujut срещу обезщетение решение в зелена козирка. Интензивността на на синьото оцветяване се увеличава по време на 4-5 минути, Следователно измерване на повторете 3 - 5 пъти в един ред и записва максимално показанията. След 5-6 минути оцветяване серум става виолетово кафяв оттенък, и оптична плътност стойност започва да намалява. Две определени максимални резултати, Оптическата плътност на средата е взето.

Обезщетение разтвор, състоящ се от 6 мл ацетат буфер, 8 ml водороден прекис, 3 ml бензидин and 0,06 мл изотоничен разтвор на натриев хлорид, подготвят и едновременно с.

Калибровъчна крива дисплея на разтвор на хемоглобин. В кръвта, взети за разтвор на хемоглобин, измерва се съдържанието му (на медицинските kolorimetre или медицински refraktometre). Приготвя се разтвор на концентрация на хемоглобина 1 г / л, от него се приготвят разтвори на по-ниска концентрация: 0,005,0,025, 0,05, 0,1 и 0,2 г / л. Добавяне на всеки полученият разтвор 0,04 ml смес 4 мл ацетат буфер, 2 ml бензидин and 2 ml водороден прекис.

Основният разтвор gemolizata (1 г / л) за калибриране крива трябва да се съхраняват в студено време, и работещи решения по-ниски концентрации трябва да бъдат подготвени непосредствено преди изпита.

Обикновено, в 1 литра на кръвната плазма съдържа 0,0005 ммол / л (0,01-0.04 g) Хемоглобин.

Определение на hemosiderin урина с Пароксизмална нощна gemoglobinurii

Разграждането на хемоглобина желязо ИТ адсорбирано бъбречна тубулна епител и е част от hemosiderin. Slushhennye клетки на бъбречна тубулна епитела в тези случаи съдържат зърна от hemosiderin.

Внимателно проучване на урината утайка след центрофугирането зърно hemosiderin видими и без специални оцветяване. Въпреки това, те изпъкват по-ясно при оцветяване в Perlsa метод.

Метод.

След центрофугиране урината горния слой засмуква на разстояние, за газене добавя svejeprigotovlenny разтвор 1 % Жълта кръвна сол and 1 % солна киселина (Смесете равни количества 2 % разтвор на солна киселина и жълта кръвна сол). След 10 минути след смесване, сместа се центрофугира и седимента се разглеждат. Зърно hemosiderin оцветяване синя.

Определяне на плазмените metgemal'bumina спектрофотометричен метод

Реактиви.

1. Фосфатен буфер izoosmoticheskij (рН 7,4): смесен 18 мл 0.15 M разтвор на натриев digidrofosfata (24,4 g YaN2R04 на 1 л вода) и 82 мл 0,15 M разтвор на натриев водороден (21,3 g нах₂СЛЕД₄ На 1 л вода).
2. Натриев бисулфит.
3. Натриев хидроксид 1 M.
4. Човешки серумен албумин разтвор (40 г / л).
5. Разтвор gemina (5 мг / 100ml); подготвя незабавно чрез разтваряне gemina в малки количества от сода каустик, и тогава: донасям то до необходимото количество разтвор на серумен албумин.

Метод.

K 2 добавя се мл кръвен серум и кръвна плазма 1 ml разтвор на zabuferernogo izoosmoticheskogo, рН 7,4. Сместа се центрофугира 30 минути при 1200-1500 rpm. Определяне на оптичната плътност при 569 nm. Тогава, ако разреден плазма се поставя в епруветка и добавете приблизително 5 mg изсушени Хидратна натриев сулфат. През 5 мин многократно измерване на оптичната плътност при същата дължина на вълната. Разликата между двете стойности Оптическата плътност съответства на оптичната плътност на metgemal'bumina. Metgemal'bumina концентрация, определена от графика за калибриране.

Калибриране графика дисплей както следва. Разтвор gemina albuminom прехвърляне в епруветки в количество от 0,01 към 0,1 г / л (от 0,2 към 2 мл). В тези тръби, където размерът на разтвор на по-малко 2 мл, Добавете до 2 ml албумин. След това добавете на 1 мл фосфатен буфер izoosmoticheskogo. Центрофугира смес при 1500 / Мин, и след това се измерва оптичната плътност. Разликата между нивата на аналитичност се прилага към диаграмата, съответно брой gemina.

В нормалната кръвна плазма gemal'bumin липсва. Тя се появява при интраваскуларна хемолиза, напр, Ако Пароксизмална нощна gemoglobinurii или gemolizinovoj форма на автоимунна хемолитична анемия, както и в отсъствието на gaptoglobina, Когато heme се свързва с албумин.

Hema опит в paroxizmalna нощ gemoglobinurii

Hema опит въз основа на намаляване на съпротивлението на червените кръвни клетки на пациенти с PNH до по-ниско pH сряда в присъствието на пресен серум допълнение.

Реактиви.

1. Разтвор на солна киселина 0,2 п.
2. Амонячен разтвор 0,04 %.

Метод.

От Виена вземат 5- 6 мл кръв. Като антикоагулант използват натриев цитрат или оксалат. В същото време вземе 15-20 мл кръв от донора на същата група. Отделяне на червените кръвни клетки от кръвната плазма на пациента и донора.

На донора серум се изсипва върху 0,5 ml в шест епруветки, двама от тях постави на 20 min на водна баня с температура на 56 ° C да инактивират серумен комплемент, други четири епруветки са оставени на стайна температура. Червените кръвни клетки на пациента два пъти измиват izotoniceski разтвор на натриев хлорид, след това suspenzirujut същия разтвор в съотношение 1:1.

Диаграма на проучването са представени в таблица.

Съдържанието на всяка епруветка се смесват, постави на вашия 1 h в термостат при температура 37 ° С, и след това центрофугира.

За престой от извадката 0,05 м червените кръвни клетки на пациента и донора се добавя отделно към 0,55 мл изотоничен разтвор на натриев хлорид.

След центрофугата степента на хемолиза може да се прецени на око. Да се определи количествено степента на хемолиза във всяка епруветка за 4,7 мл 0,04 % Добавя се амонячен разтвор 0,3 ml повърхностния слой, но в епруветка с празен пробив — 0,3 ml на референтния серум.

За идентифициране на 100 % хемолиза на 4,7 Добавяне на ml амонячен разтвор 0,3 mL суспенсия на еритроцити (0,05 ml еритроцити пациент в 0,55 мл изотоничен разтвор на натриев хлорид).

Оптичната плътност на разтвора се измерва при медицинските kolorimetre и сравняват показанията с оптична плътност амонячен разтвор без червени кръвни клетки:

% хемолиза =((Е₁-Е₂)/Е₃)*100;

където E₁ -Оптическата плътност на анализиране сонда; Е₂-Оптическата плътност празна проба; Е₃-Оптическата плътност 100 % gemolizata.

Нормално не повече от gemoliziruetsja 5 % еритроцитите.

Пробата се счита за положителен Хема в случай, Ако gemoliziruetsja повече 6 % еритроцитите.

В paroxizmalna нощ gemoglobinurii и gemolizinovoj форма на автоимунна хемолитична анемия gemoliziruetsja понякога до 50-80 % еритроцитите. За тези заболявания се характеризира хемолиза само при наличието на серум neinaktivirovannoj (-No. 2). Ако инактивация на серум не пречи на хемолиза (-No. 3), Можем да приемем съществуването на други форми на хемолитична анемия или грешка при определянето на изследвания.

За унищожаване на червените кръвни клетки на пациенти с Пароксизмална нощна хемоглобинурия сряда при рН 6,5 изисква задължително присъствие на комплемента, съдържащи се в пресен серум.

Saharoznaja tryout с Пароксизмална нощна gemoglobinurii

Saharoznaja проба се основава на, че червените кръвни клетки на пациенти с Пароксизмална нощна хемоглобинурия и gemolizinovoj форма на автоимунна хемолитична анемия са унищожени в разтвори с нисък йонната сила в присъствието на комплемента.

Реактиви.

1. Разтвор на захароза: 9,42 захарозата се разтваря в 0,005 М fosfatnom буфер; рН 6,2 (91 мл 0,005 М Нее₂СЛЕД₄ и 9 мл 0,005 M Na₂HPO₄).
2. Реактив за определяне на концентрацията на хемоглобин: 200 mg червени кръвни сол се разтваря в 1 l дестилирана вода, Там добави 0,5 ml atsetontsiangidrina.

Метод.

Кръв в пациент като от Виена до две тръби е сухо (8-10 ml) и с антикоагулант (2- 3 мл). Като антикоагулант използват натриев цитрат. Еритроцитите на тръби за събиране на кръв с антикоагулант два пъти изпиране izotoniceski разтвор на натриев хлорид. След прането и повърхностния слой добив на 0,4 Добавяне на ml еритроцити 0,25 мл изотоничен разтвор на натриев хлорид.

В същото време като кръв от донор на една и съща група от кръв в две епруветки — с антикоагулант (2-3 мл), Тя се третира по същия начин, като кръвта на пациента, и сухи (8- 10 мл) да получи серум. След отделяне на серум на донора 0,5 ml, тя се поставя във водна баня при температура 56 °С на 30 мин за инактивиране на комплемента. На донора серум трябва да вземат ежедневно опит и пазят в студа. Схемата на изследване е дадено в таблица.

Епруветките се поставят в термостат на 30 минути при 37 ° С, и после се центрофугира за 10 мин скорости 2000 RPM и оценява степента на хемолиза.

За да направите това, епруветката се изсипва върху 3,4 ml реактив за определяне на концентрацията на хемоглобина and 0,6 ml на- седименти от всеки тест-епруветки. През 10 мин измерва оптичната плътност на разтвора в тръби с 540 NM за здравето refraktometre (Спектрофотометър) или медицински kolorimetre (Fotokolorimetre-м. декември) Когато зелен Визор, чрез сравняване на данните, получени с оптична плътност на разтвор за определяне на хемоглобин. Вземам на средната стойност на две четения всеки опит. Изчислението се извършва по формулата:

% хемолиза ин витро =((Е₁-Е₅)/(Е₈-Е₅))*100

където E₁ -оптична плътност на разтвора в тест тръба не. 1; Е₅ -оптична плътност на разтвора в тест тръба не. 5, необходимо да се изключат оцветяване серум; Е₈ -оптична плътност на разтвора в тест тръба не. 8, където 100 % хемолиза.

За кръст-saharoznoj проби (-No. 2) 100%-TH хемолиза ин витро е изследвана No. 7.

Оценка на резултатите.

Нормално ин-витро No. 1, съдържа червени клетки сондира пациента, хемолиза не надвишава 2-3 %.

В paroxizmalna нощ gemoglobinurii и gemolizinovoj форма на автоимунна хемолитична анемия (AIGA) в този витро хемолиза надвишава 6 % В епруветки-No. 4, съдържащи кръвта на пациента и на донора серум inaktivirovannuju, епруветка # 5, съдържащи еритроцити и серум донор, и номер 6, съдържащи серум вместо изотоничен разтвор на натриев хлорид разтвор — хемолиза не трябва да надвишава 1-2 %.

Кръст-saharoznaja опит (-No. 2) Когато gemolizinovoj формата на АЙГА обикновено положителен (при наличие на hemolysins в серума), но тя може да бъде отрицателно. In vitro No. 3 (червените кръвни клетки и серум на пациента) хемолиза, както беше отбелязано в APG, и в gemolizinovoj формата на АЙГА. В paroxizmalna нощ gemoglobinurii максимално хемолиза се открива в нормален saharoznoj проба (-No. 1), по-слабо изразени — със свой проба клетка пациента (-No. 3); Няма хемолиза в кръста-saharoznoj проба (-No. 2).

Когато gemolizinovoj формата на АЙГА най-много произнася хемолиза е открит в пробата със собствения кръвен серум и еритроцитите на болните (-No. 3), малко по-слабо изразени — ин витро No. 1. In vitro No. 2 хемолиза се наблюдава често, но липсата на това не изключва форма gemolizinovuju АЙГА.