Изследването на кръвосъсирването

Методи за разследване на системата за коагулация на кръвта включват следните групи:

1. Показателен (общ), дава представа за състоянието на цялата коагулационната каскада като цяло и отделните му етапи (регистрация може да се направи визуално, или от отделни устройства - koagulografa, thromboelastography и др.);
2. диференциране на дефицит от индивидуални фактори - тестове коригиращи коагулационни, Тестове за смесване изследване на кръвна плазма в кръвната плазма на пациенти с изключително известен недостатък на някои фактори;
3. количествено определяне на отделни компоненти на тяхната функционална активност (коагулационни тестове, изследвания и други хромогенни субстрати) и (или) на имунологични маркери;
4. Идентификация на интраваскуларна активиране на кръвосъсирването и фибринолизата на функционалните характеристики или молекулни маркери за активиране - да се идентифицират циркулиращи активирани фактори на кръвосъсирването, дегранулация на тромбоцитите продукти, разделяне на компонентите на кръвосъсирването, или техни метаболити, поява на нов антигенен маркер активиран фактори и техните комплекси, ускорени метаболизиране белязан компоненти на кръвосъсирването (съкращаване на срока за тяхното полуживот в обращение).

По този начин, при оценяването на състоянието на кръвосъсирването се използват правилно метод на кръвосъсирването (лабораторни и инструментални), формиране на базата на диагностичния процес, и имунологичен, Радионуклиди и други видове изследвания. В много случаи, компонентите могат да бъдат определени като функционална активност, и имунологично - съдържанието на съответния антиген в кръвта. Едновременната употреба на тези техники ни позволява да се диференцира форми на патология, свързани с липсата на синтез на съответния фактор на кръвосъсирването (В този случай същите като се спуска функционална активност, и количеството на антиген), и формуляри, в който молекулата се синтезира фактор, но това е ненормално и функционално дефектна.

За да се отнасят до броя на първите форми на съответния коефициент е добавен знака "-" (напр, VIII-, IX- и Т. д.), а вторият - знак "+" (напр, VIII +, IX +).

Груб (общ) коагулационни тестове

Определяне на времето на съсирване

Определяне на времето на съсирване (Предпочитан метод на Ли-White) - Long използва bystrovypolnimy (до леглото) индикативен тест, позволява да се идентифицират значителни нарушения на кръвосъсирването, свързано с дефицит на фактори на кръвосъсирването (Освен Фактор VII) или с ефекта на антикоагуланти и фибринолитична. Той се използва като ръководство за изпитването и контрола на хепарин, отстраняване на хепарин сулфат протамин. Тестът е сравнително ниска чувствителност, фигури му са счупени само при значително намаляване на плазмените коагулационни фактори (долу 4-5 %), и следователно неподходяща за откриване на леки форми на хемофилия А и Б, както и нарушения в кръвосъсирването, когато angiohemophilia, Фактор XI дефицит, прекаликреинов и висока кининоген молекулно тегло. Поради тези причини изпитването не може да се използва за предоперативни пациенти: при нормално изпитване на ефективност (5-10 Минути) може да изпитате обилно кървене следоперативен.

Plasma време рекалцификация

Plasma време рекалцификация - не-стандартизиран тест ниска чувствителност, по-малко надеждни за откриване hypocoagulation, отколкото през цялото време съсирване на кръвта. Това не може да се препоръча за диагностика на заболявания на хемостаза.

The активираното парциално тромбопластиново време, плазмата

The активираното парциално тромбопластиново време, плазмата (АРТТ, каолин-кефалинов тест) - Високо чувствителен метод, разкривайки процеса на съсирване на кръвта, когато стартирате вътрешния механизъм. Селективно чувствителни към недостиг на плазмените фактори на кръвосъсирването (защото недостигът на тромбоцитите и факторите 3 Тромбоцити компенсирани прилага външно или Кефалония eritrofosfatidom).

Той се използва за наблюдение на хепарин, предоперативно изследване на пациенти, и т.н.. д. Стандартните стойности зависят от пробите, използвани kephaline, в повечето случаи до 37-50 (оптимално - от 37-45).

Каолин време плазма

Каолин време плазма - тест, подобен на предишния, но без добавяне на плазма kephaline (eritrofosfatida), при което е чувствителен не само до дефицит на плазмените фактори на кръвосъсирването, но също така липсата на тромбоцитите фактор 3 Тромбоцитите. Прогнозна оценка активност на този фактор може да се извършва чрез сравняване на времето на плазмата тестове каолин с високо и ниско съдържание на тромбоцитите (норма - 57-70 с).

Ние не препоръчваме използването на фосфолипидни компоненти, даващи в аРТТ съсирване равна на 55 ите и по-, тъй като това значително намалява точността и възпроизводимостта на тестове, включително количествено определяне на фактор VIII и IX.

Силиконов време плазма

Силиконов време плазмата - време плазмен рекалцификация, в резултат на което игла silikonirovaniya, тръби, пипета, T. е. с минимален контакт активиране. Тестът е чувствителен към свръхкоагулация състоянието на вътресъдова активиране на фазата на контакт на стартиране (фактори XII и XI), обаче, това нарушение се разкрива по-ясно чрез определяне на времето за съсирване на силикон от цялата кръв (въз основа на Lee-бял или регистрационния процес tromboelastograficheskoy силиконизирана кювета).

Фиксирани стойности зависят от силикон и е решена изследването на кръвта на здрави хора за всеки от отделна извадка. При избора на силикон е най-добрият, която се простира в най-голяма степен на време на съсирване (плазма).

Протромбиновото (тромбопластиново) време плазма

Протромбиновото (тромбопластиново) време плазма (Бързо времето, Индекс на протромбиново) характеризира скоростта на съсирване на кръвна плазма recalcified стартиране на процеса на външно устройство, T. е. добавяне на човешкия мозък тромбопластиново (или заек).

Active тромбопластиново стандартизиран за смесени проби от нормалното (тест) плазма. Най-често използваните тромбопластиново активност с 12-18 (в класическата техника с Kvika- 12-13). По-слабият тромбопластин, по-голямата метода на грешка.

В нормална плазма тест протромбиновото време помага за идентифициране на изолиран или кумулативният дефицит на протромбин комплекс - VII, х, V и II, , от които три фактора (VII, X и II) K-vitaminozavisimy и тяхната активност намалява под влиянието на непреките антикоагуланти. В това отношение, изпитването на протромбиновото е от основно значение за контролиране на кумарините дозирани (neodikumarin, или pelentan, sinkumar и др.) и други лекарства в тази група (fenilin).

Протромбиновото време е нормално с дефицит на факторите на вътрешен механизъм за активиране на протромбиназния - фактор XII, XI, IX, VIII (T. е. за всички видове хемофилия и дефект Hageman), както и недостиг на прекаликреинов и кининоген високо молекулно тегло (VM kininogena)

В литературата различното наименование на резултатите от изпитванията протромбинови. Най-целесъобразно да се уточнят протромбиновото време на изследването и контрола на кръвната плазма в секунди (като информацията и активността на тромбопластиново използва). Понякога използвам съотношението на тези две стойности, T. е. индекс (PV проучване плазма, от ,)/(MF контрол плазма, от), (скоростта на 0.9-1.1).

Друга форма на оценка на този показател, която е най-широко използвани в лаборатории, Индекс на протромбиновото е да се изчисли процентът от съставянето на обратна връзка аритметични пропорциите (норма - 90-110%), Все пак, това изчисление не е наред, защото между концентрацията на фактори на кръвосъсирването и време на съсирване не е аритметика, логаритмична зависимост. Освен това, тест протромбиновото е чувствителен само до намаляване на фактори на кръвосъсирването под 50 % нормалната им размер. По силата на този целесъобразно да се използват за определяне индекса на протромбиновото Процент чрез крива на разреждане (1:2, 1:4, 1:8 и Т. д.) смесена проба от нормалната плазма. Такава крива е построена веднъж за thromboplastins различна първоначална дейност (от 12 към 18 от) и се определя от индекса на протромбина в изследваните пациенти. Предимството на този метод се състои в това, че, че резултатите от всички проучвания, включително, извършена в динамика в различни дни, не съответства на различни проби на случаен нормална кръвна плазма, и да бъде средно същите стандартни параметри, в резултат на което значително намалява метод грешка. Индекси, получен чрез пропорционално и разреждане крива на нормалната плазма, не съответстват един на друг. Това трябва да се има предвид при наблюдението на ефекта на непреките антикоагуланти, За индекса да намалява конвенционална 50 % приблизително съответства на намаление на разреждането на кривата на индекса до 25-30% • В този смисъл анализът трябва винаги да определяте, Как е съотношението на протромбиново, какви са нормите за експлоатация за дейността на тромбопластин.

Плазмените време тромбин

Плазмените време тромбин, T. е. на време на съсирване на цитратна плазма чрез добавяне на стандартен активност на тромбина, Тя е основен тест за оценка на крайния етап на съсирването на кръвта. Отчитане на този показател е важен за правилното тълкуване на всички други изпитвания на коагулацията, за нарушение на финалната фаза на кръвосъсирването трябва неизбежно да доведе до удължаване на времето на съсирване във всички по-горе методи.

В повечето случаи по време на изпитването, тромбин използва тази концентрация на тромбин разтвор, които при смесване с равен обем от кръвна плазма за съсирване дава 12- 18 от, но disfibrinogenemy признаване използва и по-слаби концентрации (което води до намаляване на 30-35 с).

тромбиново време - Важен диагностичен показател, нарушение на своята наблюдавана като вродена, и когато придобитите общо (вторичен) gipoprotrombinemii, в най-disfibrinogenemy, както и под влиянието на хепарин, Каталог на фибринолиза (PDF) и други инхибитори на самостоятелно сглобяване и антитромботични лекарствени фибринови мономери. По силата на този път тромбин, на първо място, и все по-остра и подостра нарушен DIC, че играе важна роля в бързо диагностициране на тази патология.

Autokoagulâcionnyj тест

Autokoagulâcionnyj тест (АКТ) - А силно чувствителна двустепенен, Той описва процеса на съсирване на кръвта, когато е започнала вътрешния механизъм. Подобно на АРТТ, изпитване не е чувствителен към недостиг на фактор VII, но в същото време показанията му не зависи от съдържанието на фибриноген (фактор I) в тест-серума, как то се различава от всички други проби, показателни за коагулация.

Друго предимство на ACT състои в, че изследва разредена кръв, което значително увеличава чувствителността на теста до дефицит на фактори на кръвосъсирването и, Освен това, изпълнение на Съвместната парламентарна асамблея АКТБ не изисква използването на каолин и kephaline, тъй като стандартизация на активирането на контакт на фосфолипид и го постига своя собствена червени кръвни клетки хемолизат разследван.

РЕЗЮМЕ ACP е, с това, че 2 мл хипотоничен разтвор (0,222 %) Се добавя калциев хлорид 0,1 мл кръвен тест.

В този хемолизат калциев смес се формира и протромбиназата тромбин, Активността е определена чрез последователно прибавяне 0,2 мл от тази смес на 0,2 мл плазмен тест (всеки 2 мин време на първата 10 м, и след това - след всеки 10 мин за 1 не).

Плазмата е източник на фибриноген изследва, който изпитва активността води до смес на тромбин. Както се вижда от многобройни изследвания, той може да бъде заменен от кръвна плазма от здрави хора или фибриноген разтвор. В този случай, кръвния поток на пациента се намалява до 0.1-0,2 мл (Това може да бъде взето от пръст!), какво transformiruet autokoagulâcionnyj тест mikrokoagulâcionnyj (МКГ) и тя го прави много удобен за употреба в педиатрията, включително изследване на хемостаза в новородени.

Коагулация дейност в Закона и ILC първоначално се увеличава при здрави хора, обикновено достига максимум 10 минути, инкубиране на кръвта калциев микс (KCS), Когато плазма коагулация субстрат протича при 10 ± 1. Тогава коагулация дейност KKS започва да намалява, Тя се показва, че инактивирането на тромбин, оформен в него. Когато gemofïlïyax, действието на хепарин и други съсирване коагулация Дейността на KKS рязко намали, и максималните движи от 10-ата минута на по-късна дата. Когато свръхкоагулация наблюдава по-рано и по-значително увеличение на тромбин активност в CCS.

При извършване на тест ин витро (разделителна способност само на 10 минути от инкубацията, ЦКР) може да се използва за наблюдение на хепарин. Предимството на този метод за тестване на активираното парциално тромбопластиново време е, че тя успя да изравни различното влияние на различни цефалини време на съсирване хепарин.

Въз ACP (МКГ) разработи прост и точен метод за диференциална диагноза hemophilias.

С източници, цитирани при преобразуване ACT маси указания (МКГ) може да бъде изразен като процент и начертава - autokoagulogrammy.

За да изчислите са широко използвани броя на общите параметри на съсирването на кръвта и инструментални методи на разследване, главно с помощта на различни koagulografov и thromboelastography.

Thromboelastography не само дава представа за времевите параметри на кръвта или плазмата съсирване, но също така и по отношение на структурата и механичните свойства на съсиреци формира. През последните години, хардуер и методи за регистрация на въведени стандартизация и фосфолипид активиране с коагулацията. Коагулация също се създава за масовото изпълнение на общи коагулационни тестове - аРТТ, протромбиновото, тромбин и други автоматично записване на резултатите.

Методи за разграничаване на различните дефицит на коагулационни фактори и тяхното количествено определяне

Следващата таблица показва данни, че започващото изследване на съсирването на кръвта с помощта на три основни тестове дава възможност за разграничаване група дефицит различни плазмени коагулационни фактори. Така, само забавяне в тест на съсирване протромбиновото (Тип I нарушения) при нормални стойности на всички други особености на наследствена недостатъчност на фактор VII или да се намали нивото на този фактор в ранните етапи на развитие на обструктивна жълтеница или през първите 1-2 дни от лечението с антикоагуланти на непряко действие, Когато потискане на синтеза на фактор VII е по-напред в своето развитие за намаляване на всички други фактори, K-vitaminozavisimyh съсирване.

Нарушаването на само на вътрешния механизъм на коагулация, T. е. активираното парциално тромбопластиново време и Съвместната парламентарна асамблея АКТБ (II вид), има дефицит на фактор XII, XI, IX, VIII, Villeʙranda (Не във всички форми), прекаликреинов и кининоген VM. От тези дефекти в наследствения фактор на кръвосъсирването XII дефицит, прекаликреинов и кининоген WM е изключително рядко и не е съпроводено с кървене, като има предвид дефицита на фактор VIII (Хемофилия А), IX (Хемофилия B) и фактор на фон Вилебранд е много често (е по-голяма от 96 % всички нарушения наследствен кървене) и е придружен от силен кръвоизлив. Между тях на първо място и за провеждане на допълнително диференциална диагноза.

Фактор XI дефицит сравнително рядко (около 0.5-1.0 % vsex gemofïlïy), постъпленията с много леки кръвоизливи (най-вече след травми и операции) и заема междинно положение между първата подгрупа от асимптоматични заболявания и хемофилия и болест на фон Вилебранд.

Друг тип нарушения характеризира с удължението като парциално тромбопластиново време и Съвместната парламентарна асамблея АКТБ, и протромбиново време. Характерно за дефицит на фактори V, X или II, или за по-комплексен дефицит на K-фактори vitaminozavisimyh (VII, х, IX, II), че се наблюдава в обструктивна жълтеница и други форми на витамин К-дефицит, и при получаване на непреките антикоагуланти.

В заключение, както може да се види от таблицата, възможно нарушение на показанията на трите изпитвания (IV тип), че се наблюдава в наследствен и придобит хипогликемия- и disfibrinogenemiyah (не всички), при прием на антикоагуланти от преки действия (хепарин, gyeparinoidov, хирудин и др.), лечение на фибринолиза активатори и defibriniruyuschimi лекарства (стрептокиназа, урокиназа и др.), се появява в кръвта и патологични вещества антитромботични лекарствени средства, предотвратяване връзка (монтаж) фибринови мономери – парапротеини, kryohlobulynov, имунни комплекси, както и изискан съсирването, причинени от DIC. Така тромбин време често е нарушен по-голяма степен, и малко по-рано, в сравнение с други тестове.

Когато се вземат предвид продължителността на заболяването и възможността за наследствена или вторични връзки с други болести и лекарства или други ефекти,, наличието или отсъствието на кървене и неговия вид не може да се определи правилно генезиса на тези дълбоки нарушения на кръвосъсирването.

Всичко диференциращи тестове се основават на принципа на корекция, T. е. за определяне, степента, до която разкри нарушения в кръвосъсирването или елиминиран, Обратно, Не отстранените проби от кръв, плазма или кръвни продукти, получени по изкуствен ясно известен дефицит на фактор на кръвосъсирването.

За тази цел, специализирани лаборатории за създаване на колекция от кръвна плазма faktorodefitsitnyh, ги получаваме от пациентите с известен набор дълбоко (по-малко 1 %) Дефицитът на всеки фактор и да ги съхранявате в малки опаковки (от 0,5 мл) температура - 30 ° С. Ако е необходимо, тези проби се размразяват и се използват в диагностични тестове.

Плазмените, било случайно се размрази или останат неизползвани, повторно замразяване не е обект на. Поправителния тестове не трябва да се използват с имунната плазмен инхибитор на фактор. Диагностичните комплектите няколко фирми съдържа лиофилизирани проби от кръвна плазма дефицитни фактори на кръвосъсирването, идентифицирани (субстрат плазма). Въпреки това, много нарушения в кръвосъсирването, рядко се вижда в клиничната практика, относно работа с изкуствено получени кръвните съставки нормално недостиг на някои фактори на кръвосъсирването, и хетерогенна плазма (пилета, патета и др.).

Таблицата по-долу дава информация за съдържанието на фактори на кръвосъсирването в кръвните съставки, използвани за корекция на коагулационни тестове, в зависимост от условията на тяхното съхранение. Използването на тази маса, лесно да се разчете доказателства за всеки от трите основни тестове на коагулацията. Коригиращите техники от този вид се използва тестове, стандартизиран от контакт и активиране на фосфолипид, T. е. каолин-кефалин или с помощта на хемолизат (в ACT).

Тестове смесителни кръвната плазма на пациенти с плазмена, със сигурност е известен дефицит на фактор

Определя се активира парциално тромбопластиново време в плазмата тест, Normal плазма (контрол) и плазмената ясно известен фактор VIII дефицит (на пациенти с хемофилия А), IX (на хемофилия В), XI и XII. След това смес от цитратни плазмени проби изследвани (7/10 обема) и последователно с всеки от плазми-дефицитната (3/10 обема), тъй като дефицит на фактор VIII и IX (най-често срещаните форми на патология!).

Към сместа се прибавя каолин и цефалин, и 2 мин подлага на рекалцификация (при температура 37 ° С). Към сместа, където активираното парциално тромбопластиново време не се нормализира, Той има същия дефект в съсирването.

Така, ако пациентът изпитван активираното парциално тромбопластиново време се нормализира чрез добавяне на кръвната плазма на пациенти с известна известен дефицит на фактор VIII, но коригира кръвната плазма на пациенти с дефицит на фактор IX, има Хемофилия А.

По същия начин,, но въз основа на теста се диференцират протромбиновото дефицит протромбин комплекс (х, V, VII и II).

Тест тромбопластиноВо поколение

За диференциация на нарушения на вътрешния механизъм на кръвосъсирването, най-често се използва класически тест тромбопластиново поколение замяната на тромбоцитите компонент, приготвянето на който изисква значителни инвестиции на време и кръв, Кефалония неизгодно положение поколение тест тромбопластиново са си обемност, необходимостта за получаване на голям брой реагенти, значително време за изпълнението й.

Коригиращо тест, въз основа на базата на тест autokoagulyatsionnogo.

Rapid диагноза на проблемите е съвсем различни отговори поправителен тест, въз основа на втория корекция, същите компоненти на нормално кръвно-базиран тест autokoagulyatsionnogo.

Този тест е изключително надеждна, бързина и лекота на изпълнение и изисква малко (няма повече 0,5 мл) размер на кръвен тест, може да се използва при педиатрични пациенти.

То, както при изпитването за генериране тромбопластиново, използвани за корекция на плазма и серум адсорбирания възраст, който отново се центрофугират преди изследването. В три флакона излива 2 мл 0,222 % се прибавя разтвор на калциев хлорид и две от тях 0,1 адсорбираните мл нормална плазма (1-I флакон) и 0,1 мл стара нормален серум (2-I флакон). Другите три тръби за пипети 0,2 мл цитратна обикновена плазма. След това във всички епруветки с разтвор на калциев хлорид се добавя 0,1 цитрат мл кръв на теста.

Точно 4 мин инкубиране на сместа от своя кръвосъсирваща активност се изпитва на нормална плазма.

Резкият спад в активността на коагулация само в първата епруветка (нормалната BaSO₄-плазма) Това показва дефицит на фактор IX пациент (Хемофилия B), Само през втората тръба (Serum от стария) - Дефицитът на фактор VIII (Хемофилия А); Ако корекция възниква в двете тръби (еднакво силни), тогава, очевидно, има недостиг на фактор XI или XII (см. Маса. 14).

Този тест е много чувствителен, като изследването се провежда в развежда 20 към момента на обезщетението фактор кръв 3 Тромбоцити хемолизат. Единственият реагент заети - хипотоничен разтвор на калциев хлорид, вземане на проба публично.

Също толкова лесно е метода на пробите за корекция, извършва въз основа на тест за протромбиново дефицит на фактор II диференциация, V и VII +, х (Маса).

За да се разделят дефицита на фактор VII и X, допълнителни коагулационни тестове, проведени с добавянето на изследваната кръвна плазма разтвор змийска отрова пепелянка - медикаменти лебетокс (избрана такава концентрация на отрова, kephaline които в присъствието на калциев хлорид предизвиква коагулация с 20-25; Всички съставки са взети в количество, 0,1 мл и микс) (Таблицата по-долу).

Със същата цел препаратът се използва Russell усойница отрова, живееше в Индия (подготовка стипвен).

Диференциална диагноза се попълни, ако е необходимо, чрез количествено оскъдните фактори или специфични имунни инхибиторите, Защо са специални силно чувствителни, стандартизирани методи. Тези строителни техники, използвани за разреждане на криви на смесени проби от нормална кръвна плазма с дефицита на корекция на фактора, В допълнение към теста. Тези криви определят активността на фактора на тест в плазмата на пациенти.

Особено важно количествено определяне на фактор VIII и IX концентрация на, и присъствието на инхибитори при пациенти с хемофилия А и Б (особено преди и по време на операция и интензивно заместителна терапия), както и отсрочени обилни кръвоизливи след раждането, когато е необходимо да се направи разграничение на DIC и рядко патология - появата на имунната инхибитор на фактор VIII (все още много по-малко - Фактор V).

С дълбока дефицит на фактор XIII (много рядка наследствена патология) всички коагулационни тестове са нормални, но се разтвори съсиреци в 5М и 7М уреа.

Той помага да се разграничат различните дефицит на фактори на кръвосъсирването също отчита степента и, особено, отношение на нормализирането четения тестове на пациенти след интравенозно приложение на кръвни продукти, T. е. Коригирана ин виво по метод А,. 3. Barkagan.

Тази техника е особено ефективен, когато голяма разлика в продължителността на живота диференцируема фактор в обращение. Така, половината продължителност на живота протромбин комплекс варира от няколко часа (фактор VII) до няколко дни (фактор II). Междинно положение между тях вземат X Factor (2-2.5 Days) и V (12-18).

Ето защо, след масивни трансфузии на индексни плазма джет протромбиновото нараства с фактор VII дефицит е много кратък, дефицит на фактор V - малко по-дълго (приблизително 4-6 пъти), дефицит на фактор X и, особено, II за по-дълъг период (в продължение на 1-2 дни). Показателно е, в това отношение и ефектът върху индекса протромбиновото наркотици PPSB (концентрат на фактор VII, IX, X и II). Той също така накратко нормализира протромбиново време, фактор VII дефицит, и по-трайни (многократно!) дефицит на фактор X и II. Тъй като това лекарство не е фактор V, Този дефицит не е да ги коригира.

Подобна разлика се открива в кръвопреливане и заместителна терапия на коагулационни фактори вътрешен механизъм (XII, XI, IX и VIII), че регистрирано активирано парциално тромбопластиново тест.

От особен интерес е корекционен коефициент високоговорител VIII и аРТТ четения, когато трансфузионна терапия на хемофилия А и болест на фон Вилебранд. Първото от тези условия е открита незабавно максимална кървене подобрение след кръвопреливане (спрей, бърз!) Антихемофилен плазма или криопреципитат администрация, последвано от сравнително бързо (за 10—18 ч) постоянен спад в своята, като има предвид, vWF се наблюдава известна активност увеличение съсирване в рамките на няколко часа след кръвопреливане, и след спада си - много по-бавно, от. В тази връзка, в лечението на болестта на фон Вилебранд рядко се използва повече заместване трансфузия, от хемофилия А.

Изследване на функционалната активност на фактори на кръвосъсирването и компоненти на каликреин-кинин и фибринолитичните системи, използващи хромогенни субстрати

Методите се основават на изследване на активността на протеолитични ензими и техните инхибитори, участват в кръвосъсирването, образуване на фибринолиза и кинин, по интензивност и скоростта на разцепване специално чувствителни към тези ензими пептиди, която се освобождава по време на разграждането на оцветител (б-нитроанилин).

Степента на оцветяване на взаимодействие на смес определя чрез спектрофотометрия, и нейната интензивност е осъден за дейността на съответните ензими (фактор на кръвосъсирването, kallikreina, плазмин и други.), и да попречат на процеса - активността на ензим.

Така, напр, ефект на хепарина и антитромбин III може да се оцени чрез разцепване на хромогенни субстрати отслабване тромбин или фактор Ха, и активността на α₂-антиплазмин - за намаляване на съответния хромогенен субстрат плазмин. Хромогенни субстрати или имат числената стойност (напр, S-2222), или посочени съкратен префикс hromozinami, обозначаващ ензима, към която чувствителен субстрат (напр, Chromozym PL - субстрат плазмина, Chromozym TH - тромбинов субстрат, Chromozym PK е субстрат за прекаликреин/каликреин и t. д.).

Хромогенни субстрати разширяват възможностите на изследване на хемостазната система, но там не е достатъчно достъпна за много лаборатории. Някои проучвания, направена с тяхна помощ, Те имат предимства пред конвенционалните коагулационни тестове и да им даде резултати на съвпадение; в други случаи, тяхната употреба опростява и ускорява проучване, Това го прави по-точно; в третата - тези техники имат самостоятелно значение и не могат да бъдат заменени коагулационни тестове (напр, определение прекалликреина).

Имунологичното определяне на компонентите на хемостазната система

Имунологичното определяне на компонентите на системата на хемостатично се извършва чрез методи:

• Имунопреципитацията;
• Имуноелектрофореза;
• Радиоимуноанализ, а другият с подходящ антисеруми

Това очакваното съдържание на антигена в кръвната плазма на фактор на кръвосъсирването (или негови фрагменти), не функционална активност, който може да бъде значително намалена с нормална антиген в плазмата. Тази ситуация е характерна за всички случаи, Когато синтезира в тялото анормален (функционално дефектна) фактори, запазване на неговата антигенетичност, но няма възможността да участва в хемостаза.

Това ви позволява да се прави разлика между пълното преустановяване на синтез на съответните фактори и образуването на анормални форми.

Въпреки това, няколко компонента на системата на хемостатично могат да се определят само имунологично.

Тази група включва такива важни проучвания, като определянето на следните компоненти:

• б-тромбоглобулина;
• a2-макроглобулина;
• протеинов C и S;
• антигени фактор VIII:C и VIII:Р_памет;
• Каталог на фибринолиза (PDF);
• неоантигени на тромбин-антитромбин III и плазмин-антиплазминови комплекси;
• редица други тестове.

Следователно, имунологично изследване значително допълват функционално оценка на различните компоненти на системата на хемостаза.

Диагностичните тестове, базирани на употребата на наркотици като реагенти от змийски отрови

Отдавна е установено, че много змийски отрови съдържат силно активни протеолитични ензими, причинявайки съсирване на кръвта и въздействието върху различните звена на коагулационната каскада. Следователно, змийски отрови и се изолира от тях коагулаза широко използвани за откриване на хемостатични нарушения, Количествено определяне на фактори на кръвосъсирването, откриване и количествено определяне на разтворим фибринови мономери комплекси (RFMK) и редица други изследвания.

Проби от змийска отрова често е много по-лесно и по-бързо да диагностика на заболявания на хемостаза.

Таблицата показва данни за механизма на действие на отрови за съсирването на кръвта, и използването на диагностични възможности на всеки от тях.

Тези способности нататъшното разширяване на едновременното използване на няколко отрови и прости тестове обща коагулационни. Така, напр, едновременното използване на коагулационни тестове с отрова от пепелянка ефа, и го прави лесно да се прави разлика между дефицит на фактор VII, H-V и II (в таблицата по-долу), и с допълнителна корекция на филтрува нормална плазма (фактор на мощността V и II) -defitsit Factor X и V.

Определяне на основните физиологични антикоагуланти

Най-важното е определянето на дейността на основните физиологични антикоагуланти - антитромбин III, намаляване които могат да бъдат генетично определена (Основно тромбофилия) или вторично поради интензивното консумация (DIC, Massive тромбоза) или ускорено метаболизъм (lyechyeniye gyeparinom, L-аспарагиназа, синтетични контрацептиви) и блокада на имунни комплекси, парапротеини, фибронектин, остри фазови протеини.

Във всеки случай, намаляване на активността на антитромбин III-долу 60-65 % Той поддържа интравазална коагулация, Това прави по-слабо изразен ефект на хепарин антикоагулант. Въпреки това, много често между нивото на антитромбин III и намалена чувствителност към хепарин няма закон спазване.

Обикновено е отслабване на антикоагулантна действието на хепарин значително преобладава над степента на спад в активността на антитромбин III. Доказа, че дефицити в различни форми на антитромбин III си афинитет хепарин могат да варират в различни степени. Освен това, различни фракции на хепарин, съотношението на медикаменти, които в много променливо, също имат различен афинитет към антитромбин III. Поради това, на практика, е важно да се изследва както действителната активност на антитромбин III, и способността му да се превърне под влиянието на бързо действащ антикоагулант хепарин.

Антикоагулантна активност на антитромбин III

Антикоагулантна активност на антитромбин III Тя се определя от капацитета на плазмената опитна (разведен - Методът или Copley Winterstein дефибринирана топлинна денатурация при температура 56 ° C - методи Loligera, Abildgaarda и др.) инактивира за определен период от вложените от чужбина тромбин. Тромбин остатъчна активност в плазмата може да се определи за неговото кръвосъсирваща активност (на фибриногене, бариев сулфат адсорбиран плазма) или чрез разцепване на хромогенен субстрат, чувствителен на тромбин или фактор Ха (тъй като антитромбин III инактивира и този фактор).

Хепарин-kofaktornaya aktivnosti

Хепарин кофактор дейност, съдържаща се в плазмата антитромбин III дълъг период от време, определен от тест толеранс от плазмата към хепарин, който може да се счита като показателно, защото това дава една много широка разпръсна на нормалните стойности и да се възпроизвежда достатъчно.

Много по-точна PLAY izvodimy тестове, която изследва ефекта на различни концентрации на хепарин на тромбин време проучване плазма, съдържаща малко количество на тромбоцитите. Сравнение се извършва с удължаване на тромбиновото време на нормална плазма контрол, към които се добавят същите проби хепарин.

Така, тромбин хепарин анализ за изследване на кръвната плазма се прибавя към количеството на хепарин, които удължават тромбин контрол на времето с 15 до 32-35 с (ниска концентрация) и до 95-110 (висока концентрация на хепарин). От тези данни, индексът на активността се изчислява антитромботични лекарствени плазма (AAP) и резервен антикоагулант плазма (На ARP).

Също така е широко използван подобни техники за оценка на степента на инактивиране на тромбин в коагулационни тестове, и хромогенни субстрати.

Immunological откриване на антиген на антитромбин III

Immunological откриване на антиген на антитромбин III Тя ви позволява да се направи разграничение между различните видове тромбофилия:

• с неадекватен синтез на антитромбин III (намалени нива на антигенния маркер съответно намалени дейност);
• със запазена синтез на необичайни и функционално дефектни му форми (нивото на антигенен маркер е много по-висока, активност от).

Протеини C и S, тромбомодулин и един₂-макроглобулин определя от имуноензимни методи.