Research фибринолиза

За клиниките е изключително важно, тъй като определянето на увеличаване на фибринолитична активност на кръв, и намаляване, че може да се дължи на високата консумация на активатори на плазминоген и когато активиране и фиксация в куп, и тромби, или да увеличи antiplazminovoy antiaktivatornoy и активността на плазмения. Винаги трябва да се помни,, че интензивна фибринолизата на връзки и тромби, откриваем за подобряване на съдържанието на FDP в плазмата, логически комбинира с активатори на намаляването и резерв плазминоген в плазмата (циркулираща кръв).

Статутът на природен съсирек лизиране

Преглед на състоянието на природната лизиране на съсирека може да осигури метод Kotovshchikova-Kuznik изменение в. P. Baluda или модификация E. P. Иванова.

Принципът на метода е, че с оглед на хематокрита и червено съдържание клетки от кръвта се определя от броя на последните, отпадна на куп в депозит за определен период от инкубацията. Чрез увеличаване на обема на кръвта фибринолитична активност от тази фракция (трета) увеличава еритроцитите. В случай на дълбоко антикоагулация и hypofibrinogenemia, която произвежда дефектни и по-свободни букети, тези методи могат да дадат подвеждащи резултати.

В процедура модификация Bidwell D. АЗ Н. Andreenko фибринолиза оценява от загуба на фибринови съсиреци.

Проучване фибринолитична активност euglobulin фракции на плазмените

Изследователски фибринолитична активност euglobulin плазмени фракции е най-важният Основното изпитване, което се потвърждава и от Комисията на Европейската асоциация на тромбоза.

За да направите това, използвайте класическите методи за определяне euglobulin съсирек лизиране, определение на литична активност euglobulin фракция на фибрин плочи (В последния случай, ефектът на различни количества от изпитвания фибрин показания изравни). Lysis на тези тестове се дължи на, в euglobulin фракция се изолира и плазминогенни активатори, че инхибитори на фибринолиза, по-голямата част от заличава. Следователно, като се използва тест измерва euglobulin Плазмените нива на плазминогенни активатори и.

При получаването на кръв при базално метаболизма, T. е. сутрин на празен стомах, Преди повдигане на пациента от леглото, активатор на тъканния плазминоген в кръвта е почти няма. Следователно, в такива условия се определя основно от вътрешното състояние (правилното кръвно) Активирането на плазминоген.

Този процес може да бъде значително ускорено чрез активиране предварително контакт фактори ХПа-каликреин-кининоген VM каолин, в резултат на намален euglobulin лизис с 2.5-3 часа до 2-10 минути. Този принцип се основава контакт активиране методи за определяне на XII-зависимо фибринолиза.

Способността на съдовия ендотелен секретира в кръвта външно активатор фибринолизата (тъканен тип активатор, Bridging Digital Divide) Смята се, за да се ускори euglobulin лизиране след компресиране съдове маншет от уреда за измерване на кръвното налягане (Тест на Ойвин-Чекалина), или след дозирано физическо натоварване на ергометър цикъл, или фармакологично стимулиране (вазопресин производни - дезмопресин или adiuretinom).

В литературата много модификации на тези техники.

Така, напр, по време на тест за компресия на класическата техника маншет налягане се поддържа 10,7 кРа (80 мм Hg. Чл.) или 1,3 кРа (10 мм Hg. Чл.) по-висока диастолна за 15-20 минути, и в по-скорошно модификация на теста в. P. Ball - 3 мин при компресия на 1,3 кРа (10 мм Hg. Чл.) по-висока систолично кръвно налягане. И в двата случая, за втори път за проучване на кръвта, взета от притискане на съда за отстраняване на маншетите.

С такива проби могат да бъдат изучавани ефекта на компресия не само фибринолиза, и други антитромботични свойства на стените на кръвоносните съдове (антикоагулант, антиагрегантно и така нататък.).

Стрес-тестовете стандартизиран начин, към нормалното euglobulin лизиране ускори през 2 или повече пъти (не прави изследвания в базалния метаболизъм води до много големи случайни грешки, Следователно на пациента преди да започне изследването на сутринта не трябва да ставам от леглото, венепункция трябва да се проведе в Дома).

Отслабването на реакцията пресоването товар или показва липса на реактивност на фибринолитичната система и повишен риск от тромбогенна, проверено, че броят на проучвания.

Съдържанието на плазминоген в плазмата

Съдържанието на плазминоген в плазмата То може да бъде полу-количествено оценява чрез добавяне euglobulin фракция специфична доза от стрептокиназа. Съгласно процедурата Slobozhankinoy - Fedorova, избрал такава дейност стрептокиназа, който предвижда лизиране euglobulin за 9-11 минути, Въпреки това е възможно да се използват големи концентрации (стандартните стойности се показват във всяка лаборатория отделно). На дефицит от време плазминоген лизиране в този тест се удължава до още по-, по-малка тази проензим.

Проучване съсирек лизиране плазмата

Паралелно проучване на съсирек лизиране плазма по същия метод, при стимулиране на стрептокиназа позволява разлики в резултат стойности за оценка на активността на антиплазмин в плазмата тест, защото euglobulin фракция -antiplasmin практика няма, и коагулира в целия плазмата има.

Сумата се изчислява в размер на антиплазмина

(Plc SAND)/SAND;

където PLC - плазма лизис на съсирека време в присъствието на стрептокиназа,

ELS - euglobulin лизис на съсирека време в присъствието на същата доза на стрептокиназа.

Още, Използването на този фактор, антиплазмин активност се определя като процент на крива предварително разреждане съставен (получен в смесени проби от нормален кръвна плазма).

По-точно, но същевременно лесна за изпълнение изследователски методи фибринолизата чрез разделяне azofibrina, представлява съединение фибрин, ковалентно свързан към хромогенен субстрат (azopeptidom)

Принципът на метода е, че три тръби за пипети 10 мг azofibrina, смесва с буфер (рН 7,4), След това две от тях на пипетата, 0,15 мл кръвна плазма и изследван допълнително в една от тези тръби - 10000 U / мл стрептокиназа.

След инкубиране 1 Н, разтворът се филтрува и фотометрично спектрофотометър при дължина на вълната 440 нм или медицинска колориметър в синя светлина филтър.

Плазминът активност се определя от плазмата в пробата без стрептокиназа Промени в оптичната плътност на филтрата в сравнение със съдържанието на трети тръби, и плазмените нива на плазминоген - в пробата със стрептокиназа. Инкубиране на плазмин и изследване на плазмата на същия субстрат е решена antiplazminovaya дейност. Показатели, получени при проучвания на нормалната плазма, приети за 100 %.

По този начин, с помощта на относително малък набор от прости лабораторни-функционални методи може да се получи представа за състоянието на различните механизми на фибринолиза, съдържание в плазмата и освободен от плазминогенът на съдовите стени, неговите активатори и инхибитори.

Както и в изследване на кръвосъсирването, Тези данни могат да бъдат значително допълнени имунологично определяне на компонентите на системата на фибринолиза и продукти на разпадане на фибриноген и фибрин.

Методи за откриване на "свидетели" и молекулярни маркери за интравазална коагулация и фибринолиза

В процеса на интравазална коагулация и фибринолиза настъпва интензивен свързана, една страна, потребление и по-голяма или по-слабо изразено намаление в кръвта на някои съставки на хемостатично система, От друга страна - появата на части, фрагменти и метаболити, които при нормална плазма не съдържа или малко количество.

Идентифицирането на тези "свидетели", и активиране маркери на интравазална коагулация и фибринолиза е от голямо диагностична стойност в дисеминирана интравазална коагулация, тромбоемболични заболявания от различен произход и mikrotrombovaskulitah (инфекциозен, С имунитет, тумор и т.н.. д.).

Консумация маркери и активиране на тромбоцитите хемостаза

За консумация и за активиране на тромбоцитите маркери хемостаза са тромбоцитопения, повишаване на плазмените компоненти на гранулите - antigeparinovogo фактор 4 Тромбоцитите, (3-thromboglobulin и др., както и запазване на функционалната циркулация по-малко активно и по-малко агрегация на тромбоцити.

Ключови маркери за щети и функционално увреждане съдовия ендотел - увеличение на плазмените нива на фактор на фон Вилебранд, отговор релаксация euglobulin лизисни кораби по време на компресия на маншета, физически упражнения или прилагане на вазопресин аналози.

Хиперкоагулация

Хиперкоагулация, ако е налична, може да показва активирането на кръвосъсирването. Тя разкрива чрез общи изследвания коагулация и образни изследвания (thromboelastography), и клиника - въз основа на трудността за получаване на кръв от вената - тромбоза на двата съда белия дроб, и игла, и непълна стабилизиране на кръв, като го разбърквате с цитрат (Образование ин витро макро- и microclots).

Това частично съсирена кръв е напълно неподходящ за по-нататъшно проучване на хемостатично система, така че не забравяйте да се центрофугира кръвта трябва да се проверява, дали тя се съсирва. При наличие на кръвни съсиреци, не подлежи на по-нататъшно проучване (но може да се използва за получаване на серум и серия от биохимични анализи). Опитът показва, това не е достатъчно спазването на тази препоръка е често е източник на сериозни грешки в изследването на хемостатично система.

Хиперкоагулация в някои тестове все още няма доказателства за опасността от тромбогенна. Освен това, Голям брой от тромбофилия, които се характеризират с първоначалната хипо-, вместо хиперкоагулацията. Те включват тромбофилия, причинено от дефицит на фактор XII, прекаликреинов и кининоген VM, disfibrinogenemiyami, дефицит на протеин С, и т.н.. д. Съсирване почти непроменена в склонността към тромбоза поради повишена индекс хематокрит (Често, докато има hypocoagulation), тромбоцитемии, малоценност на фибринолиза и т.н.. д.

Въз основа на изложените мотиви, не може да се приравни с хиперкоагулация и тромбогенна риск, Не, при която функцията в момента е сред най-стигмата тромбофилия включено.

Активиране на "мост" между ХПА каликреина фактори и Фактор VII

Активиране на "мост" между ХПА каликреина фактори и Фактор VII, който се разпознава от разглеждането на протромбиновото време с говежди тромбопластин и след охлаждане до проучване кръвна плазма в продължение на 18-24 часа при 4 ° С (студен тест за активиране). В редица тромбофилия след охлаждане се наблюдава намаление на протромбиновото време 25-50 %. Други тромбопластиново, с изключение на говедата, за това проучване са неподходящи.

Наличието в плазмата на свободен пептид

Наличието в плазмата на свободен пептид, открива чрез имунологични методи, Това е директна thrombinemia доказателства, главно защото тромбин разделя на разстояние от фибриноген молекула пептиди A. Техниката на ограничената наличност се дължи на трудности при получаването на имунната анти-А серум.

Освен това, повишаване на плазмените пептид обикновено преходна, след това бързо се елиминира от системата циркулация на мононуклеарни фагоцити. В това отношение, нивото на пептид информационен само при повишаване, който е надежден знак на присъствието на активен тромбин в кръвта.

The стратификация и формирането на пул от фибриногена в мономерни комплекси плазмен разтворим фибрин (RFMK)

При здрави хора, свойствата на фибриноген, Електрофоретичната подвижност и чувствителност към тромбин, напълно коагулира в анализа на тромбин, чрез добавяне на 12-14 секунди тромбин-.

Обратно, когато активиране на интраваскуларно съсирване (trombinemii) и фибринолиза случи сноп фибриноген басейн, Образование SFMC, свързването на фибриноген (Заключен фибриноген), и може би, ранно продукт на фибринолиза (фрагменти X и V), и ранния и късния FDP свободно състояние. SFMC и свързаната с фибриноген или тромбин които не се влияят коагулира (остава в серума), или коагулира бавно и само когато е изложен на висока концентрация на тромбин (3-секунди). За откриване на плазма и серум SFMC и други инертни компоненти фибриноген басейн, следните тестове paracoagulation.

Beta-тест naftolovyj

Beta-тест naftolovyj (предишно наименование - определянето на фибриногена B) недостатъчно конкретна, така че сега рядко се използва.

Същността му се състои в това, че разтворът на кръвната плазма се прибавя β-нафтол в 50 % етанол (5 капки за 1 мл). Ако след 10 минути с разклащане, се утаява под формата на груби люспи, извадката се счита за положителен.

Тест

Тест - legkovypolnim, за да 0,4 мл плазма разследван, стабилизиран натриев цитрат се смесва с аминокапронова киселина (за блокиране на фибринолиза), добави 0,15 мл 50 % етанол (проверете концентрацията Спиртомери).

Образование чрез 10 мин нежна, показва наличието на съсирек в кръвната плазма SFMC. Тест специфичен, но разкрива само част от SFMC (основно - krupnomolekulyarnyh), Тя дава положителен резултат при DIC, тромбоза и други видове thrombinemia. В етап III на двигателя на фона на тежка hypofibrinogenemia (по-малко от 0.5-0.7 г / л), Що се отнася до heparinization, Тест често става отрицателна.

Protaminsulfatny тест

Protaminsulfatny тест се основава на отлагане на началото на продуктите на фибринолиза и на протамин сулфат SFMC, получен от млякото на риба. Тестът е доста специфична, но и за поведението му подходящ само определени видове протаминсулфат.

Способността да се инактивира хепарин и протаминсулфат кауза paracoagulation несвързан. С това пробите протамин сулфат, използва за тестване paracoagulation, Първо трябва да се тества на разтвор или фибрин мономер, или нормална плазма, към която се прибавя малко количество предварително тромбин и стрептокиназа (или просто стрептокиназа).

Когато този тест става положителна, протамин сулфат е подходящ за използване при диагностика. В много патентовани диагностикуми включва контрол (Препратка) плазма, даде положителен тест protaminsulfatnogo. Той се използва за тестване на реагент.

Трябва да се вземе под внимание, какво използване на етанол и protaminsulfatnogo тестове идентифицирани различни компоненти фибриноген басейн, във връзка с който техните резултати не винаги съвпадат една с друга. Така, При някои пациенти с DIC двата теста са положителни, други - само един от тях. Следователно, за надеждна диагноза е необходимо да се изпълнява и двете изпитвания.

Ortofenantrolinovy ​​тест

Ortofenantrolinovy ​​тест (OFT) - Лесно е информационен, Тя дава възможност за качествено и количествено определяне на SFMC в плазмата с малко количество на тромбоцитите (центрофугира 20 минути при 4000 / Мин).

За провеждане на изпитванията: само подходящ хидрохлорид ortofenantrolin. Ortofenantrolina The разтвор 0,033 M (0,78 %) Тя се смесва при стайна температура в продължение на равни количества (от 0,1 мл) да учат плазма върху предметно стъкло и люлеещ се определя към момента на появата на първите снежинки, смесени.

Записването се извършва за 2 м.

Резултати (в секунди) преобразува чрез кривата на калибриране в размер SFMC. Калибрационната крива се получава чрез добавяне на различни концентрации fibrinmonomera, получен по метода Radzevich-Hodorova, пул от кръвна плазма от здрави хора (Дарител). Обикновено люспи се появяват в 120 от; толкова по-бързо те се появяват, по-SFMC съдържа в плазмата тест.

Тестът е по-надежден, от етанол и protaminsulfatny.

Идентификация на SFMC еритроцитна аглутинация, покрити с фибринови мономери (FM-тест)

I човешки еритроцити(О) Групи, обхванати от мономерите фибрин се използват в DIAGNOSTICUM.

В кръвната плазма се смесва с стъкло изпитване еритроцити. Появата на аглутинация (оценена от + към +++) Това показва наличието на SFMC, взаимодейства с фибринови мономери на повърхността на червените кръвни клетки.

Тестът е много чувствителен, разкрива концентрация над SFMC 10 мг / мл.

Пълната идентификация на коагулация на фибриноген и SFMC басейн използването на отровен ефа пясък

Ефа The разтвор отрова пясък или коагулация на фракцията (ehitoks, ekarin) напълно коагулирания фибриноген, Всички продукти SFMC и началото на фибринолиза, във връзка с който може да се използва за оценка на общото количество компоненти фибриноген коагулацията в кръвната плазма басейн и броя на SFMC и фибриноген заключена, оставащо след първоначалния срив в серума, получена след съсирването на тромбин.

Използвайте концентрацията на отровата, което предизвиква коагулация на нормална плазма за 20-30.

В присъствието на пробата SFMC отрова плазмен фибриноген разкри повече, отколкото в теста с тромбин, в серум, получена след 15-секунден тромбин съсирване, с добавяне на отрова произвежда втори съсирек, което продължава през целия SFMC и свързаната заключена фибриноген, както и по-рано PDF.

Тези явления са типични за thrombinemia и масивна интравазална коагулация (DIC, тромбоемболизъм, и др.), като има предвид, в серума на здрави хора за изпитване не показва отрова SFMC и заключени фибриноген. След коагулация отрова фибриноген и макромолекулни производни, които не са намерили някоя хроматография, аудио чрез тест лепило стафилококи.

В допълнение към горното, за определяне на SFMC и началото на разпадане продукти на фибриноген (или фибрин) плазмин може да се прилага следните тестове.

Сцепление Тест на стафилококи

Сцепление Тест на стафилококи (TSS, Staphylococcal тест klamping) - Един прост и високо информативен метод за откриване на серумния SFMC и началото на продукцията на фибринолиза (фрагменти X, както и свързаните с заключена фибриноген).

Тя се основава на способността на някои щамове на Staphylococcus (Нойман Д₂S и други) поради наличието на тяхната повърхност конкретен фактор klamping подложи аглутинация повлияни останалата серум, SFMC след пресичане и началото на PDF (фрагменти X).

Кръв за научни изследвания е взето на стабилизиращ разтвор се смесва с аминокапронова киселина предотвратява фибринолиза ин витро.

Изпитването се изпълнява върху стъклото или върху плаки 74 гнезда чрез смесване на равни обеми на диагностични инструменти и изследване на кръвния серум при разреждания 1:2, 1:4, 1:8 и Т. д.

Взети предвид окончателното разреждане, които все още се определя аглутинация. При здрави хора, съдържанието на SFMC и началото на FDP в серума не превишава 0,002 г / л (2 мкг / мл).

Immunological определяне на ранния и късния FDP в серума

Immunological определяне на ранния и късния FDP в серума се основава на възможността за производство на antifibrinogenovoy валежите компоненти фибриноген басейн имунен серум (Чувствителност се определя от серумни разреждания на фибриноген).

Когато имуноелектрофореза поради различни мобилност SFMC, фрагменти X, И, D и Е са може би показателно за решимостта си. Количествена оценка се извършва чрез изследване на различни разреждания на фибриноген, плазма и серум. По-специфични тестове със специфични антисеруми анти-D, анти-димер D и др.

Тест PDF латекс

Test лепене на латексови частици, натоварени с анти-D, анти-Е, антидимер D и др. (Тест PDF латекс), е да се определи с помощта на диагностикуми вписана PDP лепене латексовите частици чрез смесване на различни разреждания на серума.

Определяне на плазма активиран фактор XIII като индикатор на тромбин в кръвообращението

Фактор XIII, активируем от тромбин в присъствието на калциеви йони, А верига е разделена на, имащи фибрин-стабилизираща активност, и инерционно верига S.

Разделно определяне на съдържанието им (от степента на стабилизиране на фибрин олигомери и имунологичен) за диагностициране интраваскуларна коагулация на кръв от присъствието thrombinemia. Метод сложен, Тя се използва главно за научни изследвания. Се разработват по-достъпни методи за определяне на фактор XIIIa.

Откриване на активиране на протромбиновото

Когато се активира протромбина фактор Ха разцепва субстрат фрагмент F1-2 на, решена имунологично. Увеличаването на съдържанието на последната в плазмата показва активирането на кръвосъсирването.

Определяне на клетъчни маркери за активиране на интраваскуларна коагулация

Феноменът на увреждане (Раздробяване) еритроцитите

Когато DIC и други видове блокади микроциркулацията в малки съдове, червени кръвни клетки са изложени на нараняване, във връзка с които кръвоносните петна увеличава броя на фрагментирани клетки (повече от 7 10%).

По-специално, това явление се определя чрез разделяне на кръвни клетки в градиент на плътност Ficoll-verografin (плътност 1,077) както е описано в, използван в имунологията за изолиране на лимфоцити и моноцити. Нормалната левкоцитите интерфазата пръстен е белезникав цвят опалесциращ и броене своята камера се съдържат по-малко от Goryaeva 400 еритроцити 1 л (по-често при най- 200).

Когато DIC брой поп-нагоре (Повреден) червени кръвни клетки увеличава драстично (за 1000-40 000 аз н 1 L и по-), във връзка с което пръстенът е боядисан в розово или червено. Количествено, явлението се оценява чрез преброяване на съдържанието на червените кръвни клетки в междинната (камерна Goryaeva).

Методът позволява да се направи разграничение между DIC и блокадата на микроциркулацията тромбоза на големи кораби, в която увреждане на червените кръвни клетки леко.

Феноменът на производство тромбопластиново от моноцити

Някои видове DIC (особено имунния и инфекциозен произход) моноцити се активират и придобиват способността да произвежда тъкани тромбопластиново.

За откриване на това явление кръвни клетки се отделят чрез градиент на плътност (Ficoll-verografinovaya смес, плътност 1,077) за да се получи фракция, съдържащ голям брой моноцити, накратко отглежда, и след това суспензията се определя от кръвосъсирваща активност преди и след разрушаване на клетките. При тежко инфекциозно-септична процес, тази функция може да бъде потиснат от моноцити.

Идентифициране понижаване плазма (потребление) компоненти на коагулацията, фибринолитични и каликреин-кинин системи

При остър и подостър DIC наблюдава повишена консумация и метаболизма на редица компоненти на хемостазната система, Следователно нивото на плазмата е значително намалена. Особено изразеното инхибиране на фактор VIII, V, антитромбин III, протеини C и S, фибронектин, прекалликреина, висока кининоген молекулно тегло, плазминоген.

Определяне на някои от тези параметри е важно не толкова за диагностика, как да се оцени тежестта на процеса и ефективността на заместителна терапия.

Нивото на фактор I (фибриноген) често се свежда, какво, Обаче, първоначално маскирани с високо съдържание на плазмената в инфекциозни и имунни заболявания, токсикоза на бременността, и други форми на патология.

Идентифицирайте neoantigenov

По време на активирането на фактори на кръвосъсирването и фибринолизата и последващо образуване на техните комплекси с физиологични антагонисти възникнат нови антигенни маркери, не съществува отделен на съставни части на тези двойки. Така, напр, комплекс от тромбин-антитромбин III форма антиген, не е характерно за "самостоятелно или тромбин, нито антитромбин III.

По същия начин, оформен в неоантиген сдвояване плазмин - антиплазмин и т.н.. д. В присъствието на антисеруми да те neoantigenam лесно да се установи наличието на активен кръвосъсирването ключови ензими (Тромбин) и фибринолиза (плазмин).

Модерна клиника разполага с достатъчно голям набор от тестове, идентифицират интраваскуларна активиране на кръвосъсирването и фибринолизата.

Много от тези тестове са публично достъпни, бърза и лесна за изпълнение. Използването им в комбинация с някои други проучвания осигурява надеждна лабораторна диагностика на DIC и други видове масивна интравазална коагулация. Гледането на маркери на интравазална коагулация тя е настроена за правилното определяне на динамиката на патологичния процес, ефективността и адекватността на лечението.