Анемия, поради дефицит на активност на глюкозо-6-фосфат дехидрогеназа

Дейност дефицит glukozo-6-fosfatdegidrogenaza (G-6-PD) е най-често срещаните наследствени аномалия на червените кръвни клетки, причинява хемолитична krizam, свързани с придобиването на редица лекарствени средства. Вън кризи при повечето пациенти е състояние на пълно обезщетение, Въпреки че лица държи постоянно хемолитична анемия.

Първото описание на дейността дефицит, -6-FD е в 1956 ж. на хора, като профилактично против малария на наркотици primaquine. Независимо от тези изследвания 1957 ж. Г-н дефицит е открита 6-FD в еритроцитите на болните, които периодично са наблюдавани хемолитични кризи без да получават никакви лекарства.

Сега, описани в повече 250 различни мутантни форми на g-6-PD. Те се различават по електрофореза мобилност на ензима, афинитета му към субстрати е глюкозо-6-фосфат и nikotinamidadenindinukleotidfosfatu (NADP) В следствие на ниска affinity е липсата на ензима дейност в условията на, Когато концентрацията на субстрати е строго ограничен от скоростта на реакциите им предишни образование. Липсата на активност не означава в повечето случаи косопад на ензима като такъв, въпреки че там може да се наблюдава and. Най-често липсата или намалената активност на ензима е резултат от своя пациент в патологични ниско ниво форма.

На структурни гени и генни контрол, направи синтез на г-н 6-РР, са разположени върху хромозома X, Следователно наследството на дефицит на този ензимна активност в еритроцити винаги се оформят с X-свързан.

Има две основни форми на мутант, в която амино киселина замяна не се отнасят до активни центрове, и двете тези широко мутации са нормални. Те се различават един от друг в електрофореза мобилност, Въпреки това афинитет към субстрата те са еднакво. На съвременни номенклатура, една от тези форми, често в Европа, наречен форма BB, а другият, тенденцията в Африка е форма на A. В момента описани и други мутантни форми, Това също не се различаваше в кинематичен индикатори, но имат различни електрофореза мобилност.

Sceplennost′ ензим с Павел дава значително преобладаване на мъжете сред лица с клинични прояви на патология. Тя наблюдава при хомозиготна недостатъчност мъже, наследени патология на майката с нейния Х хромозома, хомозиготна недостатъчност жени са (болестта е наследен от двамата родители) и част от жените, хетерозиготни, nasledovavših болест от един родител с мутантния фенотип.

Най-често дейност дефицит, -6-FD е намерен в европейски страни, Разположен на брега на Средиземно море, Гърция, Италия, както и в някои страни от Латинска Америка, Африка и др.

Може Би, че изключително високо натрупване на необичайни ген в някои населени места улеснява консервирани Обичаят на женитба, Това води до натрупване в популации хомозиготна недостатъчност женски, дава тежки клинични прояви на болестта са по-вероятно, от geterozigotnye медии, и увеличаване на вероятността от раждане на хомозиготна недостатъчност мъже, както извор както широко разпространени, в миналото, тези места тропическа малария.

Според хипотезата на съществуващите, човек, като г-н дефицит 6-РР, издържи тропическа малария и рядко умират от тази болест. В полза на тази хипотеза се казва факта неравномерно разпределение на паразита сред жените, хетерозиготни еритроцити. Установено е,, че в нормални клетки съдържат много голям брой на паразити, отколкото в оскъдни. Има две хипотетичен обяснения за този факт. Първата от тях: еритроцит g-6 дефицит-РР не е в състояние да издържат на последиците от паразита и веднага се разделя в системата на фагоцитна макрофаги, където умира плазмодий. Друга гледна точка включва склад за развитието на паразита намалява глутатион, сумата на която намалява в еритроцити с дефицит на г-н 6-РР.

Етиология и патогенеза

Първата фаза на въздействието на наркотици е превръщането му в тялото, Премести активния формуляр, Това може да предизвика промени в структурата на мембраната на еритроцитите. Активната форма на лекарства взаимодейства с 550nm са. Когато количеството на водороден пероксид.

Рециклирани глутатион пероксидаза система using detoxifies някои от прекис, реакция процес рециклирани глутатион се окислява.

При здрави хора, остра хемолитична криза се развива с въвеждането на големи количества на лекарствения продукт (токсична доза). Kriz могат да възникнат, Когато възстановяването на системата не може да се справи с глутатион превишението формират комплекси и окислява глутатион. С дефицит на дейността на глюкозо-6-фосфат дехидрогеназа и възстановяване disturbed NADP, Въпреки обичайната дейност на глутатион редуктазата, нарушени възстановяването му, защото няма нормален водород източник. Рециклирани глутатион не могат да устоят оксидативен ефекти на конвенционалните терапевтични дози от лекарства. Това води до окисляването на хемоглобин, загуба на heme от хемоглобин молекули, загуба в globin ген вериги. Далака отделя кръв от Телец Gejnca. По този начин, загубил част от повърхността на червените кръвни клетки, Това води до смърт.

В патогенезата на хемолитична анемия, свързани с поглъщането на Fava фасул, все още много неизвестни. FAVISM (favizm) само при някои индивиди се развива с дефицит на дейност g-6-PD. Вероятно, да демонстрира тази анемия изисква комбинация от две ензимни дефекти. Може Би, Какво ще се говори за липсата на просвет при някои индивиди на токсични вещества, съдържащи се в кон Боб, или върху формирането на метаболит, извикване на злоупотреби в сулфхидрилни групи на еритроцити. При здрави индивиди получаване на малко количество от кон Боб не причинява изразен хемолитична анемия, тъй като в присъствието на намалени глутатион в червените кръвни клетки може да противодейства на токсичните ефекти на метаболит. Наследството на този дефицит, очевидно, autosomnoe господстващо. С комбинация от извънредни трансформации в тялото на токсични вещества, съдържащи се в кон Боб, с дефицит на г-н дейност 6-РР проявяват клинични признаци на primahinovoj анемия.

Клиничните прояви

Експертите, които подразделят опции, г-н 6-FD съобразно клиничните прояви на пациенти с хомозиготна недостатъчност са и нивото на активност в еритроцитите на четири класа.

Първи клас -Опции, придружени от хронична хемолитична анемия.

Втори клас -Опции за дейност, -6-FD в еритроцити е 0 10 % от нормата, превозвач, което води до липса на хемолитична анемия, kriza, и кризи, свързани с употребата на наркотици или пиене кон Боб.

Трети клас -Опции за дейност в еритроцити 10-60 % от нормата, в които светлината може да се наблюдават клинични прояви, свързано с прием на лекарства.

Четвърти клас — варианти с нормално или близко до нормалните нива на дейност, не е придружен от клинична патология.

Когато се роди дете има хемолитична анемия, свързани с двете първи, и вторият клас г-н дефицит 6-РР.

Нивото на активност на г-н 6-РР в еритроцити не винаги корелират с тежестта на клиничните прояви. В много версии на първи клас се определя от 20-30 % нивото на активност на ензима. От друга страна, на нулево ниво на активност при някои пациенти не се наблюдава никакви клинични симптоми. Това се дължи, Първо, със свойствата на lutantnyh ензими, на второ място, по всяка вероятност, със скоростта на освобождаване на наркотици citohromnym апарат черния дроб пациента.

Най-често дейност дефицит, -6-FD не предоставя клинични прояви без специални провокации хемолитична криза. В повечето случаи хемолитична криза започва след като се sulfanamides (norsulfazola, streptocida, sulfadimetoksina, sulfazil-natria, etazola, biseptola), лекарства против малария (primahin, xinina, akrihina), nitrofuranovyh наркотици (furazolidona, furadonina, furagina, 5-NOK, nevigramona), наркотици izonicotinova киселина (tubazida, ftiwazida), PASC-натрий, както и нитроглицерин.

Против малария лекарства с активност g-6-PD може да бъде присвоена delagil, от sulfanilamidnykh-ftalazol. Редица лекарства, във високи дози причинява хемолитични кризи, в малки дози може да се използва с дефицит на г-н дейност 6-РР. Те включват ацетилсалициловата киселина, amidopirin, fenacitin, levomicetin, Стрептомицин, Антидиабетични средства sulfa наркотици.

Всички лекарства, може да причини хемолитична криза, катализира окислително denaturatia хемоглобин молекулен кислород.

Клиничните прояви на заболяването може да възникне на втория третия ден от началото на прием на лекарства. Първоначално се появяват лесно scleral, потъмняване на урината. Когато спрете приема на лекарства по време на този период на тежка хемолитична криза не се развива. Ако лечението продължава, за 4-5 дни могат да се появят хемолитична Kriz разпределение на урината черно или понякога Браун, Това е свързано с разпадане интраваскуларна червени кръвни клетки. Хемоглобин може да намалее с 2-3 %.

Когато тежко заболяване е повишаване на телесната температура, появи остри главоболие, болки в крайниците, повръщане, Понякога диария. Хрипове възниква, намалява кръвното налягане. Често се увеличава далака, Понякога черния дроб.

В редки случаи развива бъбречна недостатъчност, свързани с рязък спад на бъбречната филтрация и бъбречна тубулна блокиране кръвни съсиреци.

Лабораторни находки

В изследването на кръвта идентифицирани анемия с повишен брой на reticulocytes. Налице е увеличение в броя на клетки с преминаването към mielozitov. При някои пациенти,, особено при деца, брой на клетките, понякога може да доведе до значещи цифри (100 T в 1 L и по-). Броят на тромбоцитите не се променя. В оцветяване на еритроцитите е открита виолетов кристал в тежки хемолитични кризи голям брой Телец Gejnca.

Открити рязко дразнене на зародиш, червен костен мозък. Повишаване на серумния свободен хемоглобин съдържание, често повишени нива на билирубин поради косвени. С помощта на benzidinovoj проба откри наличието на хемоглобин в урината без червени кръвни телца, Понякога откриват hemosiderin.

В някои форми на недостатъчност glukozo-6-fosfatdegidrogenaza има самоконтрол хемолиза, T. е. хемолитична криза приключва, въпреки, пациентът продължава да взема лекарства, Това предизвикало хемолитична Kriz. Способността да ограничават хемолиза е причинена от нараства почти към нормален цифри нивото на дейността на ензим в retikulocitah. В повечето форми на това значително намалява.

Децата имат тежки хемолитични кризи се случват по-често, отколкото при възрастни. Израз дейност на г-н дефицит 6-FD те понякога се случват веднага след раждането. Това е хемолитична болест на новороденото, не са свързани с имунологичен конфликт. Тя може да бъде също толкова трудно, както и при хемолитична анемия, Благодарение на майката и плода rezusnesovmestimost′û. Може би за наличието на керниктер с отчаяно неврологични симптоми.

Патогенезата на тези кризи учи не е достатъчно. Още не е определено, дали тези кризи се появяват спонтанно с физиологичен недостиг на ензима глутатион пероксидаза дейност при раждането или да ги карат е използването на определени антисептик при обработка на пъпната връв на детето. Може Би, че понякога кризи, свързани с приемането на майката на някои лекарства.

В някои случаи хемолитични кризи в дефицит, г-н дейност 6-FD възникват на фона на инфекциозните болести: Грип, салмонелоза, вирусен хепатит. Кризи също може да бъде провокирано от azidozom захарен диабет или бъбречна недостатъчност.

Една малка част от пациенти с дефицит на дейност g-6-PD наблюдава постоянно хемолитична анемия, свързана с вземането на наркотици. В тези случаи маркирани лекото увеличение на далака, умерено normochromal анемия с повишено съдържание на reticulocytes, èritrokariocitov в костния мозък и нивата на билирубина. Обостряне на болестта е възможно или след получаване на по-горе лекарства, или в лицето на инфекция.

Диагностика

Основа за диагностициране на този ензимен дефицит на еритроцитите е да определят дейността на g-6-PD в probanda и нейните роднини. На качествени методи, за тази цел, да се препоръча най-прост метод.

Метод Бърнстейн ви дава възможност да се диагностицира не само на дейност дефицита, г-н 6-FD във всички gemizigotnyh мъже, хомозиготна недостатъчност женски, но грубо оцени недостига на този ензим от хетерозиготни жени. Този метод успява да разкрие за 50 % хетерозиготни жени. Предимството на този метод е неговата годност за употреба в масово населението проучване в експедиционен условия.

Методът се основава на обезцветяване на коса 2.6-dihlorfenolindofenol и неговата реконструкция. В присъствието на g-6-PD настъпва окисляване на глюкоза 6-фосфат и NADP възстановяване с образуването на NADP-n. Това вещество възстановява fenazinmetasul′fat, което от своя страна възстановява 2.6-dihlorfenolindofenol. Fenazinmetasul′FAT работи в тази реакция като много активен вектор на електрони от NADP г-н цвят. Без fenazinmetasul′fata реакция е няколко часа, и в присъствието на fenazinmetasul′fata обезцветяване се случва по време на 15- 30 м.

Реактиви.

1. Разтвор на NADP: 23 mg NADP разтворен в 10 мл вода.
2. Разтвор на глюкозо-6-фосфат (G-6-s): 152 mg на натриева сол на глюкозо-6-фосфат разтворен в 10 мл вода. Бариев сол на глюкозо-6-фосфат трябва да бъдат прехвърлени към натриева сол. За да направите това, се претегля 265 mg бариева сол на глюкозо-6-фосфат, разтворен в 5 мл вода, добави 0,5 мл 0,01 М разтвор на солна киселина and 1 mg сух натриев сулфат. Утайката е центрофугира. Неутрализиране на Nadosadočnyj слой 0,01 М разтвор на натриев хидроксид и дестилирана вода 10 мл.
3. Разтвор fenazinmetasul′fata: 2 fenazinmetasul′FATA mg разтворен в 100 ml ТРИС-буфер 0,74 M; pH 8,0.
4. Боядисват разтвор на 2,6-dihlorfenolindofenola (натриева сол): 14,5 боядисване на mg разтворен в 100 ml буферен разтвор на ТРИС-HCL (0,74 M; pH 8,0). Буферен разтвор, приготвен от 1,48 М разтвор на ТРИС-gidroksimetilaminometana (42,27 г-н 250 мл вода) и 1,43 М разтвор на солна киселина (2 ампули fiksanala, съдържа 0,1 g-EQ, привеждане на вода 135 мл). K 230 ml ТРИС-gidroksimetilaminometala добавя 110 мл солна киселина, рН се довежда до 8,0 и добавете вода до 460 мл.

Преди употреба Пригответе смес от реактиви: 1 не. разтвор NADP (1), 1 не. Mr. разтвор 6-f (2), 2 не. разтвор fenazinmetasul′fata (3) и 16 не. Разтвор на 2,6-dihlorfenolinodofenola (4).

Метод.

В епруветка, съдържа 1 мл дестилирана вода, допринесе 0,02 мл кръв.

След появата на хемолиза Добавяне 0,5 ml смес от реактиви. Резултатите се отчитат чрез 30 м. Реакцията се разглежда като нормално с пълно обезцветяване на коса. Където, Когато не се случва за боядисване обезцветяване (остава интензивно синьо-зелен цвят и), реакции като остри-положителни. Ако се намали интензитета, но синьо зелен цвят остава, реакция мисля Поло-положителни. Където, Когато има ясно обезцветяване, но в сравнение с контролата остава зеленикав нюанс, реакция като плюс-минус.

Rezkopoložitel′NYE и положителна реакция наблюдавани при хомозиготна недостатъчност жените и мъжете gemizigotnyh. Понякога geterozigotnye жени дават положителна реакция, но най-плюс минус. Освен това, плюс-минус отговор, понякога се наблюдават при напълно здрави хора с някои спад в активността на ензима на фона на заболявания или лекарства, като се. Плюс отрицателна реакция трябва да се вземат под внимание и проверете количествения метод на ензимната активност, само когато жените имат съмнение хемолитична анемия, причинено от дефицит на дейността на глюкозо-6-фосфат дехидрогеназа. Не трябва да се вземе предвид плюс замразяване реакция в масово проучване.

Погрешно положителна реакция могат да бъдат изразени при пациенти с анемия поради факта, какво 0,02 мл кръв, тъй като тръбата, съдържа малко количество червени кръвни клетки and, Следователно, малко количество от ензима. В този случай епруветката с дестилирана вода трябва да се добави два или три eyedroppers (от 0,02 мл) кръв, да оцветите тези епруветки преди добавянето на багрилото не се различава от контрола.

Методът на флуоресцентни петна Бойтлер и Мичъл въз основа на специфична флуоресценция на намалени NADP на дълговълнова UV светлина (440- 470 nm), оценяват визуално във фиксирани срокове.

Реактиви.

1. ТРИС-HCl буфер 0,5 M; рН 8,0: 60,55 Тереза разтворен в 800 мл дестилирана вода, добави 20 ml концентрирана HCl, рН се довежда до 8,0 с помощта на 2 М разтвор на HCl и добавете вода до 1 мл; хранилище с Решение на 36 дни при температура от 4° c.
2. Разтвор на глюкозо-6-фосфат 20 M: 6 mg динатриева сол на глюкозо-6-фосфат разтворен в 1 мл дестилирана вода; съхранява до 2 дни при температура от 4° c.
3. Разтвор на NADP 10 M: 8 mg NADP разтворен в 1 мл дестилирана вода; съхранява до 10 дни при температура 4 ° С.
4. Воден разтвор на сапонин 1 % съхранява до 20 дни при температура 4 ° С.
5. Разтвор на окислени глутатион (10 мл): 2,4 мг на глутатион, разтворен в 1 мл дестилирана вода; съхранява до 10 дни при температура от 4° c.

Метод.

Преди да можете да дефинирате Кук инкубация смес, смесване 1 не. разтвор на глюкозо-6-фосфат, 1 не. разтвора върху рН, 2 не. разтвор на сапонин, 5 не. буфер за and 1 не. разтвор на глутатион. Кръв (0,01 мл) в епруветки или клетки gemagglûtinacionnoj дъски и добавяне 0,2 ml от сместа на инкубация. През 15 мин микропипета изберете една капка на инкубация смеси (0,02 мл) от всяка проба и ги тури на хартия под формата на hromatografičeskuû петна с диаметър 10-12 мм. Петна се изсушават на открито при стайна температура и гледане под ултравиолетова светлина за оценка на флуоресценцията. Контролните проби са известни да бъде нормално кръвно. Реактиви за контрол на качеството съдържа няма кръв.

Оценка на резултатите.

Липсата на флуоресценцията показва, че няма никаква дейност, наличието на флуоресценцията (интензивно синьо сияние) — наличие на дейност, като слаб блясък — междинна реакция. При условията на експеримента няма да доведе до фалшиво отрицателни резултати. Източник на фалшиви положителни диагноза могат да бъдат изследвани са изразили анемия, но в много по-малка степен, отколкото Berstein метод. Дори когато се наблюдава изразена анемия, междинна реакция, а не липсата на флуоресценцията.

Използването на количествен метод за определяне на активността на g-6-PD дава възможност да се идентифицира забавянето не само в gemizigotnyh и пациенти с хомозиготна недостатъчност, но жените geterozigot. Защото, че броят на reticulocytes и цвят курс влияе ниво на ензимна активност, Препоръчително е да се изменят на резултатите, като се вземат предвид тези показатели.