Kịch phát về đêm hemoglobinuria – Bệnh Marchiafava Michele

Kịch phát về đêm hemoglobinuria tương đối hiếm khi tìm thấy các hình thức mua lại của hemolytic thiếu máu, kết nối với các thay đổi cấu trúc của hồng cầu, Bạch cầu trung tính, bạch cầu hạt và tiểu cầu. Các dòng chảy với dấu hiệu của mạch hemolysis, nơi có những hemoglobinuria, gemosiderinuriya, tăng mức độ của plasma miễn phí hemoglobin. Bệnh thường xuyên được phức tạp của tĩnh mạch ngoại vi và các cơ quan bên trong mạch máu huyết khối.

Nguyên nhân và bệnh sinh của paroxysmal nocturnal gemoglobinurii

Mô tả đầu tiên của bệnh đã được đưa ra 1882 g. Nó được miêu tả chi tiết hơn trong 1928 g.

Tên phổ biến của bệnh là paroxysmal nocturnal hemoglobinuria (APG), Tuy nhiên, nó thực sự phù hợp với bệnh ít, bởi vì có không có hemoglobinuria paroxysmal hiện nay là quan sát không phải luôn luôn.

Mạch hemolysis với gemosiderinuriej ngoài ra APG quan sát thấy ở nhiều hình thức tự miễn dịch hemolytic thiếu máu như với nhiệt, và với kháng thể lạnh, đặc biệt là khi các hình thức với nhiệt gemolizinami, cũng như ở một số hình thức của di truyền bệnh thiếu máu, liên quan đến vi phạm của các cấu trúc màng erythrocyte.

Bệnh Markiafavy-Micheli quan sát thấy ở lứa tuổi khác nhau. Lý do hủy tế bào máu đỏ, tăng là hồng cầu chính mình đào tẩu.

Tế bào hồng cầu của bệnh nhân với PNH, như đã nói ở trên, komplementom dễ dàng sụp đổ khi tạo điều kiện tối ưu cho hiệu lực của nó, hoặc khi quá trình axit hóa huyết thanh, hoặc khi bạn tăng nồng độ bổ xung quanh thành phố erythrocyte bằng cách tạo ra các ion nồng độ thấp trong saharoznoj thứ tư. Tế bào hồng cầu của bệnh nhân với PNH có cao độ nhạy cảm với những tác động của kháng thể như agglutinins, và, đặc biệt, hemolysins.

Khi PNG có ảnh hưởng đến không chỉ tế bào máu đỏ, nhưng leukocytes và tiểu cầu của bệnh nhân. Tiểu cầu và leukocytes của bệnh nhân với PNH có một độ nhạy cảm cao với những ảnh hưởng của bổ sung như khi quá trình axit hóa huyết thanh, và thứ tư với sucrose thấp sức mạnh ion. Họ rất nhiều lần nhạy cảm với những tác động của izoagglûtininov, so với các nhà tài trợ tiểu cầu và leukocytes. Như vậy, tiểu cầu và tế bào máu trắng có lỗi tương tự trong màng tế bào, đó và tế bào máu đỏ.

Phát hiện kháng thể trên bề mặt tế bào máu đỏ, leukocytes và tiểu cầu và do đó để chứng minh tư cách thành viên của APG autoagressivnyh nhóm bệnh không thể phương pháp nhạy cảm nhất.

Đó là thuyết phục các bằng chứng về sự tồn tại của hai quần thể riêng biệt của APG trong hồng cầu. Đặt kháng các tế bào ở một người khỏe mạnh là một reticulocyte APG dễ vỡ nhất. Điều này cho thấy rằng, dân số bệnh lý tế bào máu đỏ đó chỉ đơn giản là không tồn tại để trưởng thành, và hồng cầu trưởng thành lớn liên quan đến dân lành mạnh hoặc hầu như lành mạnh.

IN 1970 trong nghiên cứu của erythrocyte Latina, PNG bị ảnh hưởng, Nó được phát hiện, chúng chứa, như với các phụ nữ khỏe mạnh mulatto, electrophoretic các biến thể của hai bình thường ông 6-FD; Biến thể một, phổ biến giữa các người dân châu Phi, và chọn tùy chọn trong, điển hình dân số của châu Âu. Sau khi chi tiêu hemolysis bật, Các tế bào máu đỏ bất thường chứa chỉ có một tùy chọn ông 6-FD, và các tế bào máu đỏ bình thường-cả hai phiên bản electrophoretic của g-6-PD. Do đó, RBCs phân có nguồn gốc từ một tế bào duy nhất.

Điều này thực tế với độ chính xác tuyệt vời cho thấy sự hiện diện của hai quần thể hồng cầu, khác nhau không chỉ chức năng, như, ví dụ:, tại mikrosferocitoze, nhưng cũng bởi nguồn gốc: nói cách khác, Nó khẳng định sự hiện diện của các tế bào bệnh lý nhân bản, t. nó là. đột biến Soma. Danh tính của erythrocyte màng tế bào tổn thương, bạch cầu trung tính và tiểu cầu cho thấy rằng, thông tin bệnh lý đó nhiều khả năng được lồng, tiếp theo cho thân cây, t. nó là. mielopoèza tế bào tiền thân. Blastomnyj tăng trưởng cho PNG là không cụ thể. Mô tả chỉ bị cô lập các trường hợp phát triển nhanh chóng của bệnh bạch cầu trên nền PNG. Tuy nhiên, Chúng ta có thể giả định, PNG là một biến thể của các khối u lành tính của hệ thống máu, một thời gian dài, sản xuất không có sự gia tăng tế bào khối u, đặc trưng cho các hình thức khác của bệnh bạch cầu.

Cơ chế phát triển Komplementčuvstvitel′nosti tại PNG trong khi không rõ ràng.

Thay đổi quan trọng trong các hoạt động của các enzym của chu trình Glycolysis và pentozno-phosphate không.

Khi PNG giảm hoạt động của acetylcholinesterase của hồng cầu, có lẽ do sự phá vỡ cấu trúc của màng tế bào máu đỏ, bởi vì enzym nằm trên mặt màng và dễ dàng bị hỏng khi thất bại của nó. Known, rằng việc sử dụng các chất ức chế của acetylcholinesterase không có hiệu lực vào sự tồn tại của hồng cầu. Tuy nhiên, sự sụp đổ của acetylcholinesterase hoạt động cũng quan sát thấy trong các hình thức khác của bệnh thiếu máu, do đó không thể giải thích hiện tượng tăng komplementčuvstvi- Lems.

Có bằng chứng, bằng chứng về sự gia tăng trong số lượng các axit béo không bão hòa, bao gồm trong cấu trúc của phospholipid, erythrocyte màng. Đó là một khả năng, rằng những thay đổi trong chất béo-chỉ là một sự phản ánh của bất kỳ thay đổi nào khác trong cấu trúc của màng tế bào máu đỏ. Trong các nghiên cứu về protein của erythrocyte màng của bệnh nhân với PNH trong polyacrylamide gel electrophoresis sự hiện diện của natri dodecilsulfata, điều đó, trong một số phân số của protein nội dung là đáng kể khác nhau từ sự kiểm soát.

Vai trò chính trong sinh bệnh học của bớt biến chứng trong APG xuống hạng vnutrisosudistomu phân tích của các tế bào máu đỏ và kích thích các yếu tố đông máu, được phát hành từ các tế bào máu đỏ trong thối rữa. Khi APG phá hủy chủ yếu là hồng cầu lưới, có lẽ, và tần số này cần được giải thích các biến chứng huyết khối của căn bệnh này, trái ngược với các hình thức khác của bệnh thiếu máu huyết tán, kèm theo tán huyết nội mạch nặng.

Biểu hiện lâm sàng của kịch phát về đêm hemoglobinuria

Bệnh thường bắt đầu dần. Bệnh nhân phàn nàn về sự yếu đuối, tình trạng bất ổn, chóng mặt. Màng cứng đôi khi có subikterichnost. Thông thường, các khiếu nại lần đầu là đau đầu, đau bụng nội địa hóa khác nhau. Một xu hướng tăng thrombus hình gây ra các bệnh nhân để tìm kiếm sự tư vấn y khoa. Hemoglobinuria khá hiếm là triệu chứng đầu tiên của bệnh và một số bệnh nhân của APG có thể vắng mặt ở tất cả. Trong một số trường hợp, nó xuất hiện lần đầu tiên 2-3 năm qua, và thậm chí thông qua 10 năm sau khi sự khởi đầu của bệnh.

Một trong những tính năng đặc trưng của PNG những cơn đau bụng. Nội địa hóa của nó có thể rất khác nhau. Ngoài thời gian đau bụng kriza, thông thường, không quan sát. Thường xuyên tham gia các nôn mửa. Nhiều khả năng, đau bụng ở những bệnh nhân với PNH được liên kết với các mạch mạc treo cấp trên DVT.

Thrombosis mạch máu ngoại vi (thường xuyên hơn không-tĩnh mạch chi dưới trên và dưới, tối thiểu-mạch thận) còn các triệu chứng đặc trưng paroxysmal nocturnal gemoglobinurii. Trong 12 % APG bệnh nhân quan sát throm. Thromboembolic biến chứng là nguyên nhân thường gặp nhất của cái chết trong căn bệnh này.

Khi một mục tiêu học tập của paleness thường cần lưu ý bệnh nhân với một chạm nhẹ của želtušnym. Thường có sưng mặt, đôi khi quá nhiều sung mãn. Có lẽ là một sự gia tăng nhẹ trong lá lách và gan, Trong khi nó không phải là điển hình cho APG.

Cho paroxysmal gemoglobinurii về đêm được đặc trưng bởi các dấu hiệu của mạch hemolysis, quan trọng nhất là hemoglobin miễn phí huyết tương tăng. Chủ đề này theo định kỳ, hầu hết các bệnh nhân của APG. Tuy nhiên, mức độ gia tăng của plasma miễn phí hemoglobin khác nhau và phụ thuộc vào, trong giai đoạn của bệnh học. Trong cuộc khủng hoảng này tỷ lệ tăng lên đáng kể, Cũng đã có một gia tăng trong số các metal′bumina plasma.

Plasma hemoglobin miễn phí cấp phụ thuộc vào mức độ hemolysis ở thời điểm này, nội dung gaptoglobina, mức độ lọc của hemoglobin trong nước tiểu và tốc độ của hủy diệt phức tạp hemoglobin — haptoglobin. Trong trường hợp của một mức độ nhỏ của hemolysis hemoglobin miễn phí ở mức độ huyết tương sẽ không đủ để lọc thông qua các bộ lọc thận. Vì vậy, hemoglobinuria không phải là bắt buộc các triệu chứng bệnh. Khi đi qua nefronov canaliculi tiết ra bởi hemoglobin là một phần bị phá hủy và lắng đọng trong biểu mô hình ống. Đây là lý do nước tiểu hemosiderin.

Cung cấp nước tiểu hemosiderin ở đa số bệnh nhân với paroxysmal nocturnal hemoglobinuria. Gemosiderinuriâ đôi khi không xuất hiện ngay lập tức. Điều này là quan trọng, nhưng không cụ thể để PNG các dấu hiệu của bệnh.

Phòng thí nghiệm tham số trong paroxizmalna đêm gemoglobinurii

Hemoglobin trong bệnh nhân với PNH khoảng từ 1.86 — 3,1 mmol / l (30-50 g/l) và thấp hơn bình thường trong remissions.

Số lượng hồng cầu trong bệnh nhân với PNH giảm mức độ giảm của hemoglobin. Màu chỉ một thời gian dài vẫn gần với đơn vị. Ở đâu, Nếu bệnh nhân mất một lượng đáng kể sắt với nước tiểu dưới dạng hemosiderin và hemoglobin, mức độ sắt đang dần dần giảm. Chỉ số thấp màu được quan sát thấy trong khoảng một nửa bệnh nhân. Một số người trong số họ đã nâng lên mức haemoglobin (P), đặc biệt là trong giai đoạn trầm trọng.

Một phần lớn các bệnh nhân nội dung tăng reticulocyte, nhưng tương đối thấp (2- 4 %). Số lượng các leukocytes trong PNG trong hầu hết trường hợp, giảm. Nhiều bệnh nhân là 1,5-3 gram 1 l, nhưng đôi khi giảm 0,7-0,8 g 1 l. Giảm bạch cầu, thông thường, Đó là bằng cách giảm số lượng bạch cầu trung tính cầu hạt. Đôi khi máu trong APG bình thường hoặc cao-lên đến 10-11 g 1 l.

Khi APG làm giảm bạch cầu trung tính thực hoạt động của cầu hạt.

Giảm tiểu cầu cũng thường thấy trong PNG, Tuy nhiên, bang tiểu cầu bình thường, chức năng. Có lẽ, Điều này giải thích sự hiếm hoi của biến chứng chảy máu khi bệnh này, Mặc dù số lượng tiểu cầu đôi khi giảm đáng kể — lên tới 10-20 g 1 l. Thông thường trong hầu hết bệnh nhân tiểu cầu 50-100 g 1 l. Số lượng tiểu cầu bình thường không loại trừ chẩn đoán paroxysmal nocturnal gemoglobinurii.

Trong nghiên cứu của tủy xương phát hiện triệu chứng, chủ yếu là đặc trưng của bệnh thiếu máu là một màu đỏ kích thích mầm hematopoiesis trong mielokariocitov số bình thường. Trong một số bệnh nhân có giảm nhẹ số lượng Megakaryocyte.

Mức độ huyết thanh sắt trong PNG Nó phụ thuộc vào giai đoạn của bệnh, mức độ mạch hemolysis và hoạt động của máu. Ở đâu, Nếu bệnh nhân có thường xuyên hoặc thường xuyên hemoglobinuria, cũng như gemosiderinuriâ liên tục, nội dung của sắt trong cơ thể, và do đó, và giảm trong huyết thanh, đôi khi rất đáng kể. Đôi khi PNG bắt đầu với dấu hiệu của hypoplastic. Mua sắm sắt trong cơ thể của bệnh nhân APG phụ thuộc, một bên, mất sắt trong nước tiểu, và, mặt khác, cường độ của erythropoiesis. Vì vậy, bạn không thể mất sắt thiếu dấu hiệu chẩn đoán của paroxysmal nocturnal gemoglobinurii.

Mức độ bilirubin huyết thanh trong PNG trong hầu hết trường hợp, ngoài tập trung tăng hoặc bình thường, chủ yếu là thông qua các gián tiếp. Nội dung trung bình của bilirubin là 22-28 μmol/l. Nó cần phải được đưa vào tài khoản, rằng khi hemoglobin hemoglobin thành lập phân rã phức hợp vnutrisosudistom-gaptoglobinovyj, người và cuối cùng cũng phá vỡ lên với sự hình thành của bilirubin.

Một số bệnh nhân bị bệnh PNH bắt đầu với bức tranh của thiếu thiếu máu.

Chẩn đoán của paroxysmal nocturnal gemoglobinurii

Nếu cấu trúc vỏ paroxysmal gemoglobinurii về đêm của hồng cầu bị hỏng, như được phản ánh ở mức độ cao của nhạy cảm với những ảnh hưởng của bổ ngữ của mình. Quá mẫn cảm này được phát hiện bằng cách sử dụng một trong hai mẫu Hema, hoặc nhạy cảm hơn saharoznoj mẫu. Trong một số trường hợp, Tuy nhiên,, đặc biệt trong hình thức gemolizinovoj tự miễn dịch bệnh thiếu máu, saharoznaâ mẫu có thể cho kết quả dương tính giả. Gemoliziny cố định trên bề mặt của tế bào máu đỏ riêng của họ và sự hiện diện của các bổ sung trong saharoznoj thứ tư bị phá hủy của họ, Trong khi PNG được đặc trưng bởi sự phá hủy của các tế bào komplementom mà không cần tiếp xúc với kháng thể.

Để loại trừ các hình thức gemolizinovoj tự miễn dịch hemolytic thiếu máu nghiên cứu khuyến cáo hemolysins như mô tả ở trên và sử dụng cross-saharoznoj với các mẫu huyết thanh từ bệnh nhân và các nhà tài trợ odnogruppnogo hồng cầu, và không phải ngược, như là phong tục. Khi APG trực tiếp mẫu là tích cực, và qua âm. Khi gemolizinovoj mẫu AIGA có thể xảy ra như là một tích cực, và cực âm chữ thập-mẫu. Trong những trường hợp này nó được khuyến khích để sử dụng các tùy chọn thứ ba saharoznoj mẫu-sử dụng cả hai serum, và tế bào máu đỏ của bệnh nhân. Mức độ hemolysis trong biến thể tối thiểu khi PNG và tối đa gemolizinovoj hình thức AIGA. Giải thích kết quả chỉ có thể đánh giá cao cụ thể kháng huyết thanh mẫu gemolizinovoj bệnh nhân thiếu máu bệnh tự miễn dịch với kháng nguyên, có sẵn với số lượng lớn trong các hồng cầu của bệnh nhân, hơn trong hồng cầu của nhà tài trợ. Trực tiếp mẫu tích cực saharoznaâ những bệnh nhân này có liên quan, có lẽ, với sự hiện diện của hồng cầu cố định kháng thể.

Phát hiện hemolysins phương pháp agregatgemagglûtinacii và khác giúp đưa chẩn đoán đúng. Không thể được sử dụng như là một nhà tài trợ huyết thanh của bệnh nhân, như trong trường hợp của gemolizina kết quả nội dung có thể không là ložnopoložitel′nym. Một kết quả tiêu cực có thể xảy ra, Nếu nguồn sử dụng huyết thanh bệnh nhân bổ sung APG hoặc huyết thanh bệnh nhân xơ gan, Viêm khớp dạng thấp, Lupus ban đỏ hệ thống và các bệnh khác, trong đó bổ sung mức giảm. Saharoznaâ mẫu và mẫu Hema trở nên ít rõ nét, Nếu bạn đang dùng máu từ một bệnh nhân như heparin chống đông máu được sử dụng, thay vì Citrat natri. Sau khi cường độ bệnh khủng hoảng giảm mẫu Hema và saharoznoj mẫu, nhưng họ không trở thành tiêu cực.

Định nghĩa của miễn phí plasma hemoglobin trong Bing Derviz sửa đổi phương pháp và Bâlko với paroxysmal nocturnal gemoglobinurii

Các phương pháp được dựa trên khả năng của hemoglobin để phản ứng với axít-benzidine thứ hai sự hiện diện của hydrogen peroxide với sự hình thành của màu xanh lá cây, lăn đầu tiên màu xanh, và sau đó trong một màu tím đỏ. Cường độ là tỷ lệ thuận với một số hemoglobin.

Hoá chất.

1. Đệm acetate 0,1 M, pH 4,6: 27,22 g natri axetat hòa tan trong 1 l nước (0,2 M dung dịch); trong một bóng đèn đo Cook 1 l 0,2 Giải pháp M uksousnokisloy axit; hỗn hợp 480 ml No. 1 và 520 ml No. 2.
2. Hydrogen peroxide 0,3 % dung dịch (chuẩn bị trước khi sử dụng bằng một giải pháp trong chăn nuôi 100 thời gian).
3. Solânokislyj benzidine 0,1 % dung dịch: 50 mg solânokislogo benzidine giải tán năm 35-40 ml axetat đệm, đun nóng dung dịch để 80 ° C trong một bồn tắm nước và sau khi làm mát, mang các bộ đệm acetatnym 50 ml.

Bình lọc và các cửa hàng trong bóng tối ở nhiệt độ phòng không quá 7 ngày. Vàng tinh khiết là không phù hợp, Potemnenii nhanh chóng bạn phải perekristallizovat′ benzidine từ rượu.

Phương pháp.

Máu cho các nghiên cứu được thực hiện từ tĩnh mạch khô cây kim trong một ống silikonirovannuû, chứa bất kỳ anticoagulant. Máu với anticoagulant centrifuged nữa 10 phút ở 1500 / Min. Sau khi tách ly tâm huyết tương của nó một lần nữa cho 10 phút ở 8000 vòng/phút cho lắng đọng của leukocytes.

Trong ống nghiệm chứa đầy 4 ml dung dịch đệm acetate, 2 ml hydrogen peroxide, 2 ml benzidine và 0,04 ml thử nghiệm huyết thanh hỗn hợp và để lại đứng 3 m, sau đó đổ vào chiều dài con đường quang Cuvette 1 xem và fotometriruût chống lại một giải pháp bồi thường tại visor màu xanh lá cây. Cường độ màu xanh tăng trong thời gian 4-5 phút, Do đó, đo lặp lại 3 - 5 lần liên tiếp và ghi lại các bài đọc tối đa. Sau 5-6 phút màu huyết thanh sẽ trở thành màu tím nâu tint, và giá trị của mật độ quang bắt đầu giảm. 2 kết quả được xác định tối đa mật độ quang của các phương tiện được thực hiện.

Giải pháp bồi thường, bao gồm 6 ml dung dịch đệm acetate, 8 ml hydrogen peroxide, 3 ml benzidine và 0,06 ml dung dịch natri clorid đẳng trương, chuẩn bị cùng một lúc với.

Hiển thị đường cong hiệu chuẩn trên giải pháp một số hemoglobin. Trong máu, thực hiện các giải pháp của hemoglobin, đo lường các nội dung của nó (kolorimetre y tế hoặc y tế refraktometre). Chuẩn bị dung dịch nồng độ hemoglobin 1 g / l, từ đó chuẩn cho các giải pháp của nồng độ thấp hơn: 0,005,0,025, 0,05, 0,1 và 0,2 g / l. Mỗi giải pháp kết quả thêm 0,04 ml hỗn hợp 4 ml dung dịch đệm acetate, 2 ml benzidine và 2 ml hydrogen peroxide.

Giải pháp chính gemolizata (1 g / l) Đối với hiệu chuẩn đường cong nên được lưu trữ trong thời tiết lạnh, và làm việc nồng độ thấp hơn các giải pháp nên được chuẩn bị ngay lập tức trước khi kiểm tra.

Thông thường, trong 1 lít huyết tương có chứa 0,0005 mmol / l (0,01-0,04 G) Huyết sắc tố.

Định nghĩa của hemosiderin nước tiểu với paroxysmal nocturnal gemoglobinurii

Sự thoái hóa của hemoglobin sắt nó adsorbed biểu mô ống thận và là một phần của hemosiderin. Sluŝennye các tế bào biểu mô ống thận trong những trường hợp có chứa hạt hemosiderin.

Một nghiên cứu cẩn thận của trầm tích nước tiểu sau khi số hạt hemosiderin có thể nhìn thấy và không có màu đặc biệt. Tuy nhiên, họ đứng ra nhiều hơn nữa rõ ràng khi màu trong Phương pháp Perlsa.

Phương pháp.

Sau khi centrifuging nước tiểu đầu lớp hút ra, để tươi thêm giải pháp svejeprigotovlenny 1 % Vàng huyết muối và 1 % axít clohiđric (Trộn một lượng bằng nhau 2 % giải pháp của axít clohiđric và máu vàng muối). Sau 10 phút sau khi trộn, hỗn hợp ly và trầm tích xem xét. Hạt hemosiderin nhuộm màu xanh.

Quyết tâm của plasma metgemal′bumina Spectrophotometric phương pháp

Hoá chất.

1. Phosphat đệm izoosmotičeskij (pH 7,4): hỗn hợp 18 ml 0.15 M giải pháp natri digidrofosfata (24,4 g YaN2R04 trên 1 l nước) và 82 ml 0,15 M giải pháp natri hydro (21,3 g NaH₂SAU ĐÓ₄ trên 1 l nước).
2. Natri bisulfit.
3. Natri hiđroxit 1 M.
4. Giải pháp nhân huyết thanh albumin (40 g / l).
5. Giải pháp gemina (5 mg / 100ml); chuẩn bị ngay lập tức bằng cách hòa tan gemina với số lượng nhỏ của xút, và sau đó: mang lại cho nó lên đến số tiền yêu cầu của huyết thanh albumin giải pháp.

Phương pháp.

K 2 ml huyết thanh hoặc huyết tương được thêm vào 1 giải pháp izoosmotičeskogo ml zabuferernogo, pH 7,4. Hỗn hợp ly 30 phút 1200-1500 RPM. Xác định mật độ quang tại 569 nm. Sau đó, nếu pha loãng plasma được đặt trong một ống nghiệm và thêm khoảng 5 mg khô hydrous Sunfat natri. Xuyên qua 5 phút liên tục đo mật độ quang tại bước sóng tương tự. Sự khác biệt giữa mật độ quang hai giá trị tương ứng với mật độ quang của metgemal′bumina. Metgemal′bumina nồng độ được xác định theo lịch biểu hiệu chuẩn.

Hiệu chỉnh biểu đồ hiển thị như sau. Giải pháp gemina albuminom chuyển vào ống số lượng từ 0,01 đến 0,1 g / l (từ 0,2 đến 2 ml). Ở những ống, nơi mà số tiền của giải pháp ít 2 ml, Thêm lên đến 2 Albumin tạo ml. Sau đó, thêm vào 1 ml phosphat đệm izoosmotičeskogo. Centrifuge hỗn hợp tại 1500 / Min, và sau đó đo mật độ quang học. Sự khác biệt giữa các kích thước được áp dụng cho bảng xếp hạng tương ứng số lượng gemina.

Trong huyết tương bình thường gemal′bumin là mất tích. Nó xuất hiện trong trường hợp của mạch hemolysis, ví dụ:, Nếu paroxysmal nocturnal gemoglobinurii gemolizinovoj hình thức hoặc tự miễn dịch bệnh thiếu máu, cũng như trong sự vắng mặt của gaptoglobina, Khi heme liên kết với albumin.

Hema thử nghiệm tại paroxizmalna đêm gemoglobinurii

Hema thử nghiệm dựa trên làm giảm sức đề kháng của tế bào hồng cầu của bệnh nhân với PNH pH thấp thứ hai sự hiện diện của bổ sung tươi huyết thanh.

Hoá chất.

1. Một dung dịch axit clohydric 0,2 n.
2. Giải pháp amoniac 0,04 %.

Phương pháp.

Từ viên mất 5- 6 ml máu. Như anticoagulant sử dụng Citrat natri oxalat. Cùng lúc mất 15-20 ml máu từ các nhà tài trợ cùng nhóm. Riêng các tế bào máu đỏ từ huyết tương của các bệnh nhân và các nhà tài trợ.

Huyết thanh của nhà tài trợ được đổ 0,5 ml trong sáu ống, hai người trong số họ đặt trên 20 phút trong một tắm nước với nhiệt độ 56 ° C để hủy kích hoạt bổ sung huyết thanh, Các ống nghiệm bốn khác còn lại ở nhiệt độ phòng. Tế bào máu đỏ bệnh nhân hai lần rửa izotoniceski dung dịch clorua natri, sau đó suspenziruût cùng một giải pháp trong tỷ lệ 1:1.

Sơ đồ của các nghiên cứu được trình bày trong bảng.

Nội dung của mỗi ống nghiệm pha trộn, Đặt trên của bạn 1 h trong nhiệt ở nhiệt độ 37 ° C, và sau đó ly.

Cho nhàn rỗi lấy mẫu 0,05 m tế bào hồng cầu của bệnh nhân và các nhà tài trợ sẽ được thêm vào một cách riêng biệt để các 0,55 ml dung dịch natri clorid đẳng trương.

Sau khi số mức hemolysis có thể được ước lượng bằng mắt. Để định lượng trong phạm vi của hemolysis vào mỗi ống để 4,7 ml 0,04 % Thêm giải pháp amoniac 0,3 lớp bề mặt ml, nhưng trong ống nghiệm với nhàn rỗi breakout — 0,3 ml huyết thanh tài liệu tham khảo.

Để xác định 100 % hemolysis để 4,7 ml amoniac giải pháp thêm 0,3 Hệ thống treo mL của hồng cầu (0,05 ml hồng cầu bệnh nhân trong 0,55 ml dung dịch natri clorid đẳng trương).

Mật độ quang của giải pháp được đo tại kolorimetre y tế và so sánh các bài đọc quang học mật độ amoniac giải pháp mà không có các tế bào máu đỏ:

% hemolysis =((IS₁-IS₂)/IS₃)*100;

nơi E₁ -mật độ quang của phân tích thăm dò; IS₂-mật độ quang mẫu rỗng; IS₃-mật độ quang học 100 % gemolizata.

Bình thường, không nhiều hơn gemoliziruetsâ 5 % hồng cầu.

Các mẫu được coi là tích cực Hema trong trường hợp, Nếu gemoliziruetsâ thêm 6 % hồng cầu.

Paroxizmalna đêm gemoglobinurii và gemolizinovoj hình thức gemoliziruetsâ tự miễn dịch hemolytic thiếu máu đôi khi lên đến 50-80 % hồng cầu. Đối với những bệnh được đặc trưng bởi hemolysis chỉ sự hiện diện của huyết thanh neinaktivirovannoj (-Số 2). Nếu ngừng hoạt động của huyết thanh không ngăn cản hemolysis (-Số 3), Chúng ta có thể giả định sự tồn tại của các hình thức khác của bệnh thiếu máu hoặc một sai lầm trong việc thiết lập các nghiên cứu.

Về việc phá hủy các tế bào máu đỏ của bệnh nhân với paroxysmal hemoglobinuria về đêm thứ tư ở pH 6,5 yêu cầu bắt buộc sự hiện diện của bổ sung, chứa trong huyết thanh tươi.

Saharoznaâ tryout với paroxysmal nocturnal gemoglobinurii

Saharoznaâ mẫu dựa trên các, tế bào hồng cầu của bệnh nhân với paroxysmal nocturnal hemoglobinuria gemolizinovoj dạng và tự miễn dịch hemolytic thiếu máu bị phá hủy trong các giải pháp của sức mạnh ion thấp sự hiện diện của bổ sung.

Hoá chất.

1. Giải pháp của sucrose: 9,42 Sucroza giải thể năm 0,005 M fosfatnom đệm; pH 6,2 (91 ml 0,005 M NaH₂SAU ĐÓ₄ và 9 ml 0,005 M Na₂HPO₄).
2. Thuốc thử để xác định nồng độ hemoglobin: 200 mg máu đỏ muối hòa tan trong 1 l nước chưng cất nước, Có thêm 0,5 ml atsetontsiangidrina.

Phương pháp.

Máu ở bệnh nhân dùng từ Vienna đến hai ống là khô (8-10 ml) và với anticoagulant (2- 3 ml). Là anticoagulant sử dụng Citrat natri. Hồng cầu của máu với anticoagulant bộ sưu tập ống hai lần rửa izotoniceski dung dịch clorua natri. Sau khi rửa và supernatant khai thác để 0,4 hồng cầu ml thêm 0,25 ml dung dịch natri clorid đẳng trương.

Đồng thời lấy máu từ một nhà tài trợ cùng nhóm máu trong hai ống — với anticoagulant (2-3 ml), Nó được xử lý theo cùng một cách, như máu của bệnh nhân, và khô (8- 10 ml) để có được huyết thanh. Sau khi tách huyết thanh của nhà tài trợ 0,5 nó được đặt trong một bồn tắm nước nhiệt độ ml 56 ° C 30 Min cho ngừng hoạt động bổ sung. Huyết thanh của nhà tài trợ nên dùng kinh nghiệm hàng ngày và giữ lạnh. Chương trình học được đưa ra trong bảng.

Ống được đặt trong nhiệt trên 30 phút ở 37 ° C, và sau đó cho máy ly tâm 10 phút ở 2000 rpm và đánh giá mức độ hemolysis.

Để làm điều này, trong ống nghiệm được đổ 3,4 ml thuốc thử để xác định nồng độ hemoglobin và 0,6 ml vào- Các trầm tích từ mỗi ống nghiệm. Xuyên qua 10 Min đo mật độ quang của các giải pháp với ống 540 NM trên sức khỏe refraktometre (phối) hoặc y tế kolorimetre (DEC fotokolorimetre-m) Khi một màu xanh visor, bằng cách so sánh dữ liệu thu được với mật độ quang giải pháp xác định hemoglobin. Mất trung bình của hai bài đọc mỗi kinh nghiệm. Tính toán được thực hiện theo công thức:

% hemolysis trong ống nghiệm =((IS₁-IS₅)/(IS₈-IS₅))*100

nơi E₁ -mật độ quang của các giải pháp trong một thử nghiệm ống không có. 1; IS₅ -mật độ quang của các giải pháp trong một thử nghiệm ống không có. 5, cần thiết để loại trừ huyết thanh màu; IS₈ -mật độ quang của các giải pháp trong một thử nghiệm ống không có. 8, nơi hemolysis 100%.

Đối với các mẫu cross-saharoznoj (-Số 2) 100%-th hemolysis trong ống nghiệm điều tra số 7.

Đánh giá kết quả.

Bình thường trong ống nghiệm số 1, chứa các tế bào màu đỏ thăm dò bệnh nhân, hemolysis không vượt quá 2-3 %.

Paroxizmalna đêm gemoglobinurii và gemolizinovoj hình thức tự miễn dịch bệnh thiếu máu (AIGA) trong ống nghiệm này hemolysis vượt quá 6 % Trong ống nghiệm-No. 4, có máu của bệnh nhân và các nhà tài trợ serum inaktivirovannuû, ống nghiệm # 5, có chứa các hồng cầu và huyết thanh nhà tài trợ, và số 6, có chứa các huyết thanh thay vì giải pháp natri clorua đẳng trương — hemolysis không vượt quá 1-2 %.

Cross-saharoznaâ thử nghiệm (-Số 2) Khi gemolizinovoj mẫu AIGA tích cực thường (sự hiện diện của hemolysins trong huyết thanh), nhưng nó có thể được tiêu cực. Trong ống nghiệm số 3 (tế bào hồng cầu và huyết thanh của bệnh nhân) hemolysis như quan sát tại APG, và trong gemolizinovoj hình thức AIGA. Trong paroxizmalna gemoglobinurii đêm tối đa hemolysis được phát hiện trong bình thường saharoznoj mẫu (-Số 1), ít phát âm — với bệnh nhân tế bào mẫu riêng của mình (-Số 3); Không có hemolysis trong cross-saharoznoj mẫu (-Số 2).

Khi gemolizinovoj mẫu AIGA Hầu hết các phát âm hemolysis được phát hiện trong một mẫu của riêng bạn máu huyết thanh và hồng cầu của bệnh nhân (-Số 3), phát âm hơi ít — trong ống nghiệm số 1. Trong ống nghiệm số 2 haemolysis được quan sát thấy thường xuyên, nhưng thiếu nó không loại trừ hình thức gemolizinovuû AIGA.