Методе откривања лајшманије у размазу коштане сржи

Реагенси за откривање лајшманије

• Метил алкохол, или апсолутни етил алкохол, или мешавина Никифорова (мешавина једнаких количина сумпорног етра и апсолутног етил алкохола).
• Фосфатни пуфер пХ 6,9-7,1, за чију припрему се мешају 40 мл раствора КН₂РО₄ (9,078 г суве материје КН₂РО₄ у 1 л решење) и 60 мл раствора Na₂ПХО₄ (11,876 г суве материје 1 л решење).
• Азуреозин према Романовском.

Метода за откривање лајшманије у брису коштане сржи

Из коштане сржи пунктирајте одмах након пажљивог узимања, како не би згњечили или деформисали ћелије,припремити танке потезе. Ако је пунктат густ, направити отисак. Са значајном додатком крви у пунктату, из њега се на стаклу издвајају мале беличасте масне грудвице., ако се разликују, и од њих припремити мрље.

Припремљени размаз се суши на ваздуху., онда поправи, као крвне мрље. Суви фиксирани брисеви могу се чувати неколико дана.

Боја Романовског разређена у пуферу се сипа на размаз (око 3-5 мл) и оставити за 30— 50 м. Након бојења, препарат се испере дестилованом водом., осушене и прегледане под микроскопом са имерзионим системом.

Процена резултата детекције лајшманије у брису коштане сржи

На врхунцу болести, лајшманија се обично налази у тачкама коштане сржи у значајном броју и стога их је лако открити.. Међутим, у раној фази болести и код лечених пацијената, како би се, за идентификацију патогена, захтева дуг преглед целог размаза (најмање 40 м).

Лајшманије се налазе у макрофагима или екстрацелуларно у облику тела округлог или пиринчаног облика пречника 3-5 микрона.. Цитоплазма је обојена сивкасто плавом бојом., а језгро је црвенкастољубичасто. Кинетопласт се налази у цитоплазми - заобљена или шипкаста формација, обојена интензивније од језгра.

Лајшманија се понекад погрешно сматра тромбоцитима или "фрагментима" ћелија. (грудвице цитоплазме, који садрже нуклеарни материјал), налази на брисевима коштане сржи, страних микроорганизама (на пример, једноћелијске алге), ухваћен у мрљу током бојења. У размазу су интензивније обојене., него лајшманија (тамноплава цитоплазма и светло гримизно језгро), кинетопласт одсутан.