Štúdium zrážanie krvi

Metódy pre štúdium systému zrážanie krvi patria nasledujúce skupiny:

1. Indikatív (všeobecný), dáva predstavu o stave celého koagulačné kaskády ako celku a jeho jednotlivých etapách (registrácia môže byť vykonané vizuálne alebo pomocou jednotlivých zariadení - koagulografa, Tromboelastografie a ďalšie.);
2. rozlišovanie deficit jednotlivých faktorov - nápravné koagulačné testy, Testy miešanie štúdiu v krvnej plazme krvnej plazme pacientov so známou známym nedostatkom niektorých faktorov;
3. kvantifikácie jednotlivých komponentov na ich funkčné aktivity (koagulačné testy, štúdií a ďalších chromogénne substráty) a (alebo) na imunologických markerov;
4. identifikácia intravaskulárna aktivácia krvný koagulácie a fibrinolýzy funkčných vlastností alebo molekulárnych markerov, ako aktivačných - identifikovať cirkulujúce aktivované koagulačné faktory, Doštičiek Product degranuláciu, rozdelenie zložiek krvného zrážania alebo ich metabolitov, Vznik novej antigénne značky aktivuje faktory a ich komplexy, zrýchlené metabolizácie značené zložky krvného zrážania (skrátenie doby ich polčasu v obehu).

Tak, pri posudzovaní stavu koagulačný systém využíva oba jeho vlastný metóda koagulácia (laboratórne a inštrumentálne), tvorí základ diagnostického procesu, a imunologické, Rádionuklid a ďalšie typy výskumu. V mnohých prípadoch, môžu byť zložky definovaná ako funkčná aktivity, a imunologicky - obsah zodpovedajúceho antigénu v krvi. Súbežné použitie týchto techník nám umožňuje rozlíšiť formy patológia, súvisiace s nedostatkom syntézy príslušného koagulačného faktora (v tomto prípade rovnaká, ako sa znižuje funkčnú aktivitu, a množstvo antigénu), a plesne, v ktorej je molekula syntetizovaná faktor, ale je abnormálne a funkčne defektné.

Ak chcete sa vzťahujú k počtu prvých foriem zodpovedajúcim faktorom je pridaný znak "-" (napr, VIII-, IX- a t. d.), a druhá - znamienko " " (napr, VIII , IX ).

Hrubý (všeobecný) koagulačné testy

Stanovenie zrážanlivosti

Stanovenie zrážanlivosti (Výhodný spôsob Lee-White) - Long použitý bystrovypolnimy (u lôžka) Orientačná skúška, umožňuje identifikáciu významných krvácavých porúch, spojený s deficitom koagulačných faktorov (okrem faktora VII) alebo s účinkom antikoagulantov a fibrínolytiká. Používa sa ako vodítko pre skúšku a kontrolu nad heparín, odstránenie heparínu protamínsulfátu. Test je relatívne nízka citlivosť, Jeho údaje sú rozdelené iba výraznému poklesu plazmatické koagulačné faktory (Nižšie 4-5 %), a teda nevhodný pre detekciu miernych foriem hemofílie A a B, rovnako tak ako krvácanie poruchy pri angiohemophilia, Nedostatok faktora XI, prekallikrein, a s vysokou molekulovou hmotnosťou kininogen. Z týchto dôvodov, test nemôže byť použité pre predoperačné pacientov: pod normálne skúške výkonnosti (5-10 Minút) môže dôjsť k výdatné pooperačné krvácanie.

Plasma rekalcifikácie čas

Plazmové rekalcifikácie time - non-štandardizovaný test nízkej citlivosti, menej spoľahlivé pre detekciu hypocoagulation, než celú dobu zrážania krvi. To nemožno odporučiť pre diagnostiku porúch hemostázy.

Aktivovaný parciálny tromboplastínový čas, plazma

Aktivovaný parciálny tromboplastínový čas, plazma (APTT, kaolín-kefalinovыy testu) - Vysoko citlivá metóda, odhaľovať proces zrážania krvi pri spustení vnútorný mechanizmus. Selektívne citlivý na nedostatok plazmatických koagulačných faktorov (preto, že nedostatok krvných doštičiek a faktorov 3 Doštičiek vyrovnaná podávané zvonka alebo Kefalonia eritrofosfatidom).

To sa používa na monitorovanie heparínovej liečby, predoperačné vyšetrenie pacientov a tak ďalej. d. Štandardné hodnoty závisia od použitých vzoriek kephaline, vo väčšine prípadov až 37-50 (optimálne - 37-45).

Kaolín čas plazma

Kaolín počas plazmou - skúška, Podobne ako v predchádzajúcom, ale bez pridania plazmy kephaline (eritrofosfatida), čím je citlivý nielen k deficitu plazmatických koagulačných faktorov, ale aj k nedostatku doštičkový faktor 3 Doštičiek. Odhadovaný hodnotiace činnosti tohto faktora môže byť vykonané na základe porovnania čas kaolín testovanej plazmy s vysokým a nízkym obsahom krvných doštičiek (norma - 57 - 70 s).

Neodporúčame použitie fosfolipidových komponentov, dávať v aPTT časy zrážania rovná 55 s a viac, ako je to značne znižuje presnosť a reprodukovateľnosť testu, vrátane kvantitatívne stanovenie faktora VIII a IX.

Silikónová čas plazma

Silikónové čas plazma - doba plazma rekalcifikácie, čo má za následok ihly silikonirovaniya, Mikroskúmavky, pipetok, T. to je. s minimálnou kontaktné aktiváciou. Tento test je citlivý na hyperkoagulačního state-of intravaskulárna aktivácia kontaktného fázy štartu (faktory XII a XI), Avšak, toto porušenie sa prejavuje jasnejšie tým, že definuje čas silikónové zrážanie krvi (Na základe Lee-White alebo tromboelastograficheskoy registračného procesu křemíkováného kyvety).

Štandardné hodnoty závisia na silikónovej a odhodlaným štúdie krv zdravých ľudí, pre každý z jeho samostatného vzorky. Pri výbere silikón je najlepší, ktorá sa rozprestiera do najvyššieho stupňa zrážavosti (plazma).

Protrombínový (thromboplastin) Doba plazma

Protrombínový (thromboplastin) Doba plazma (Rýchla doba, index protrombín) charakterizuje rýchlosť zrážanie krvnej plazmy recalcified proces spustenia pre externé zariadenia, T. to je. pridaním ľudského mozgu tromboplastín (alebo králik).

Aktívne thromboplastin štandardizovaný na zmesových vzorkách normálne (test) plazma. Najčastejšie sa používa tromboplastínový aktivita s 12-18 (v klasickej technike s Kvika- 12-13). Slabšie thromboplastin, tým väčšia je chyba metódy.

Za normálneho protrombínového času plazma Test odhalí izolované alebo kumulatívne deficit protrombínového komplexu - VII, X, V a II, z ktorých tri faktory (VII, X a II) K-vitaminozavisimy a ich aktivita klesá pod vplyvom nepriamych antikoagulancií. V tomto ohľade, je skúška protrombín je zásadný pri kontrole dávkovania kumaríny (neodikumarin, alebo pelentanu, sinkumar a kol.) a ďalšie lieky v tejto skupine (fenilin).

Protrombínový čas je normálne s deficitom faktorov vnútorného mechanizmu aktivácie protrombinázy - faktor XII, XI, IX, VIII (T. to je. pre všetky typy hemofílie a vady Hageman), rovnako ako nedostatok prekallikrein a vysokej molekulovej hmotnosti kininogen (VM kininogena)

V literatúre odlišné označenie výsledkov testov protrombinových. Najviac účelné určiť protrombínového času štúdium a kontrolné plazmu v sekundách (poskytujúce informácie a aktivitu tromboplastínu použitého). Niekedy som použiť pomer týchto dvoch hodnôt, T. to je. index (PV štúdie plazma, z ,)/(Ovládanie plazmy MF, z), (rýchlosť 0,9-1,1).

Ďalšia forma posúdenia tohto ukazovateľa, ktorý je najčastejšie používané v laboratóriách, Index protrombín je výpočet percentuálneho podielu, o zostavovaní spätnoväzbových aritmetické proporcie (norma - 90 - 110%), Avšak, tento výpočet je zle, preto, že medzi koncentrácia faktorov zrážania a doby zrážanie nemá aritmetický, logaritmické závislosť. Okrem, protrombín test je citlivý len k zníženiu faktory zrážania nižšie 50 % ich normálnu veľkosť. Na základe tohto účelné využiť určovanie indexu protrombínový percentách riediaceho krivkou (1:2, 1:4, 1:8 a t. d.) zmiešaná vzorka normálnej plazmy. Takáto krivka je postavený raz thromboplastins inú východiskovú aktivity (z 12 na 18 z) a je určené, indexom protrombínového vo študovaných pacientov. Výhodou tejto techniky spočíva v tom, že, že výsledky všetkých štúdií, vrátane prevádzkovej dynamiky v rôznych dňoch, To sa nevzťahuje na náhodnými rôzne vzorky normálny krvnej plazmy, a priemeru rovnaké štandardné parametre, čo má za následok podstatne zníženej Spôsob odstraňovania. Indexy, získaný podiel a riedenie krivky normálnej plazmy, nezodpovedajú navzájom. To by sa malo vziať do úvahy pri sledovaní vplyvu nepriamych antikoagulancií, Pre index k poklesu konvenčné 50 % približne zodpovedá zníženiu indexu krivky zriedenie na 25 až 30% • V tomto smere analýza by mal vždy určiť, Ako je pomer protrombínový, aké sú výkonnostné normy pre činnosť tromboplastínu.

Plasma trombínu čas

Plasma trombínu čas, T. to je. čas zrážania citrátovej plazme, tým, že ho štandardné aktivity trombínu, To je hlavný test pre vyhodnotenie záverečnej fáze zrážania krvi. Zahrnutie tohto ukazovateľa je dôležité pre správnu interpretáciu všetkých ostatných koagulačné testy, Za porušenie záverečnej fáze zrážania krvi nevyhnutne musí viesť k predĺženiu času zrážania vo všetkých z vyššie uvedených metód.

Vo väčšine prípadov, počas skúšky, trombín použitý túto koncentráciu roztoku trombínu, , Ktoré pri zmiešaní s rovnakým objemom krvnej plazmy koagulácie za to, že 12- 18 z, ale uznáva disfibrinogenemy používa a slabšie koncentrácie (čo vedie k zníženiu o 30 až 35 s).

Doba trombínu - Dôležitý diagnostický indikátor, poškodzovaniu jeho pozorovali ako vrodený, a keď sa získal spoločný (sekundárne) gipoprotrombinemii, vo väčšine disfibrinogenemy, ako aj pod vplyvom heparínu, Fibrinolýza Product (PDF) a ďalšie inhibítory self-montáž a antitrombínu monoméry fibrínu. Na základe tejto doby trombínu v prvom rade a stále viac rozbité v akútnej a subakútnej DIC, , Že hrá dôležitú úlohu pre rýchlu diagnózu tejto patológie.

Autokoagulyatsionny skúška

Autokoagulyatsionny skúška (Povolenie) - Vysoko citlivý v dvoch krokoch, Popisuje proces zrážania krvi, keď to začalo interné mechanizmus. Rovnako ako aPTT, Test nie je citlivý na nedostatok faktora VII, ale zároveň jeho svedectvo nezávisí na obsahu fibrinogénu (фактора Aj) v testovacom sére, ako sa líši od všetkých ostatných vzoriek orientačné koagulácie.

Ďalšia výhoda spočíva v tom, ACT, že vyšetroval riedi krv, čo podstatne zvyšuje citlivosť testu k deficitu koagulačných faktorov a, Okrem, vykonávanie AKT nevyžaduje použitie kaolínu a kephaline, od štandardizácie aktivácie kontaktného fosfolipidu a dosiahla jeho vlastné červených krviniek hemolýzou skúmané.

SÚHRN ACP je, v tomto 2 ml hypotonického roztoku (0,222 %) Chlorid vápenatý sa pridáva 0,1 ml krvný test.

V tomto hemolyzátu-kalcia je zmes vytvorená a protrombinázu trombínu, Aktivita sa stanovuje postupným pridaním 0,2 ml tejto zmesi na 0,2 ml Test plazmy (každý 2 min počas prvých 10 m, a potom - po každej 10 min pre 1 žiadna).

Plazma je zdrojom fibrinogénu skúmaná, ktoré testovali aktivitu trombínu generovaného v zmesi. Ako vyplýva z početných štúdií, to môže byť nahradená krvnej plazme zdravých ľudí alebo roztoku fibrinogénu. V tomto prípade, prietok krvi pacienta je znížený na 0.1-0,2 ml (To môže byť prevzatá z prsta!), čo transformuje autokoagulyatsionny test v mikrokoagulyatsionny (MKT) a to je veľmi vhodný pre použitie v pediatrii, vrátane štúdium hemostázy u novorodencov.

Koagulácie činnosť v zákone a MKT spočiatku zvyšuje u zdravých ľudí zvyčajne dosahuje maximálne 10 minút, inkubácii zmesi kalcia (KKS), Keď plazma koagulácia substrát dochádza na 10 ± 1. Potom koagulačné aktivita začne klesať KKS, To indikuje, že inaktivácia trombínu ňom vytvorený. S hemofíliou, pôsobenia heparínu a iné koagulačné zrážanie činnosti KKS výrazne znížená, a maximálny presunie z 10. minúty na neskôr. Ak dôjde k hyper skôr a ďalšie významné zvýšenie aktivity trombínu v CCS.

Pri vykonávaní testu v jednej skúmavke (definícia len 10 minút inkubácie KKS) môže byť použitý pre sledovanie heparínovej liečby. Výhodou tejto metódy skúšania cez aktivovaný parciálny tromboplastínový čas, že to zrovnal rozdielny vplyv na rôzne cefaliny časových heparín zrážanie.

Based ACP (MKT) To vyvinula jednoduchú a presnú metódu diferenciálnej diagnóza hemophilias.

S odkazy citované v prevodných tabuliek indikácie ACT (MKT) môže byť vyjadrený v percentách a grafe - autokoagulogrammy.

Pre odhad množstva všeobecných parametrov sú široko využívané krvnej zrážanlivosti a inštrumentálne vyšetrovacie metódy, predovšetkým pomocou rôznych koagulografov a Tromboelastografie.

Tromboelastografie nielen dáva predstavu o časových parametrov zrážanlivosti krvi alebo plazmy, ale tiež na štruktúrnych a mechanických vlastností zrazenín tvorený. V posledných rokoch, hardware a spôsoby zápisu predstavil normalizácie a fosfolipidov kontaktné aktivácia koagulácie. Koagulácia vytvoril tiež pre hromadné vykonávanie spoločných koagulačné testy - aPTT, protrombín, trombínu a iné automatické zaznamenávanie výsledkov.

Metódy diferenciáciu rôznych deficitu koagulačných faktorov a ich kvantitatívne stanovenie

V nasledujúcej tabuľke sú uvedené údaje, že predbežná štúdia zrážanie krvi pomocou troch základných testov umožňuje rozlišovanie deficitné skupina rôznych plazmových koagulačné faktory. Tak, spomalenie iba v teste zrážania protrombín (Aj тип нарушения) Za normálnych hodnôt všetkých ostatných charakteristiky dedičnou deficienciou faktora VII alebo na zníženie úrovne tohto faktora v raných fázach vývoja obštrukčnej žltačky alebo v prvých 1-2 deň liečby s antikoagulanciami nepriame akcie, Pri potlačení syntézy faktora VII je dopredu v jeho zníženie na rozvoj všetkých ostatných K-vitaminozavisimyh faktory zrážania.

Porušenie iba vnútorného mechanizmu koagulácie, T. to je. aktivovaný parciálny tromboplastínový čas a ACP (II typ), je tu nedostatok faktora XII, XI, IX, VIII, Villeʙranda (nie vo všetkých formách), prekallikrein a kininogen VM. Z nich, v dedičných vád zrážacie faktor Nedostatky XII, prekallikrein a kininogen WM je extrémne vzácna a nie je sprevádzaný žiadnym krvácaním, keďže, nedostatku faktora VIII (Hemofílie), IX (Hemofílie B) a von Willebrandov faktor je veľmi časté (je väčšia než 96 % všetky dedičné poruchy krvácania) a je sprevádzaná závažným krvácaním. Medzi nimi na prvom mieste, a vykonať ďalšie diferenciálnu diagnostiku.

Nedostatok faktora XI pomerne vzácny (o 0,5-1,0 % Všetky hemophilias), prebieha s veľmi miernym krvácaním (väčšinou po úrazoch a operáciách) a zaujíma strednú pozíciu medzi prvou podskupiny asymptomatických porúch a hemofília a von Willebrandovej choroby.

Ďalší typ porúch charakterizovaných predĺženie ako parciálny tromboplastínový čas a AKT, a protrombínového času. Je charakteristické pre nedostatok faktorov V, X alebo II alebo pre komplexné chýbanie K-faktory vitaminozavisimyh (VII, X, IX, II), , Ktorá je pozorovaná u obštrukcií a ďalšími formami vitamínu K deficitu, a pri príjme nepriamych antikoagulanciá.

A nakoniec, ako je vidieť z tejto tabuľky, možné porušenie svedectvo troch skúšok (IV typ), ktorý je pozorovaný v dedičné a získané injekčnej striekačke- a disfibrinogenemiyah (nie všetko), ak užívate antikoagulanciá z priamej akcie (geparina, geparinoidov, hirudínu a kol.), liečba fibrinolýzy aktivátory a defibriniruyuschimi liekov (streptokináza, urokináza a kol.), sa objaví v krvi a patologickej látok antitrombínu, prevenciu spojenie (montáž) fibrín-monomérovej - paraproteinov, kryohlobulynov, imunokomplexmi, ako aj sofistikované zrážanie, spôsobené DIC. Trombínového času na Tak je často narušená vo väčšej miere, a o niečo skôr, ako ostatné testy.

Ak sa vezme do úvahy doba trvania ochorenia a možnosť dedičných pôvodu alebo vedľajších prepojení s inými ochoreniami a lieky alebo inými účinkami,, prítomnosť alebo neprítomnosť krvácania a jeho typu nemôže správne identifikovať genézu týchto porúch hlboko zrážanie krvi.

Všetko rozlišovacími testy sú založené na princípe korekcie, T. to je. pre stanovenie, rozsah, v ktorom odhalil krvácaním alebo eliminované, naopak, To trvá vzorky krvnej plazmy alebo krvné produkty získané umelo jasne známy nedostatok o zrážacie faktor.

Za týmto účelom, špecializované pre laboratóriá vytvoriť zbierku krvnej plazmy faktorodefitsitnyh, ako je z pacientov so známou sadou hlboké (menej 1 %) Nedostatok každého faktora a ukladať ich v malom balení (podľa 0,5 ml) pri teplote - 30 ° C. Ak je to potrebné, tieto vzorky sa nechajú roztopiť a použité v diagnostických testoch.

Plazma, Bol náhodne alebo odmrazovanie zostáva nevyužitá, re-zmrazenie nepodlieha. Nápravných testy by nemali byť používané s imunitnými plazmovými inhibítory faktora. Diagnostické súpravy celej rady firiem, obsahuje lyofilizované vzorky krvnej plazmy s deficitom faktorov zrážania zistených (plazma substrát). Avšak, mnoho porúch krvácanie zriedka videný v klinickej praxi, týkajúce sa využitia umelo pripravené zložky krvi normálne nedostatok určitých faktorov zrážania, a heterogénne plazma (kurčatá, kačice a ďalšie.).

Nasledujúca tabuľka obsahuje informácie o obsahu koagulačných faktorov v krvných zložiek, použitý pre korekciu koagulačných testov, v závislosti na podmienkach ich skladovanie. Pomocou tejto tabuľky, ľahko dešifrovať dôkazy o niektorú z troch hlavných koagulačné testy. Nápravné techniky tohto druhu použité testy, štandardizovaný kontakt a aktivovať fosfolipid, T. to je. kaolín-kefalinovыe alebo primeneniem gemolizata (v ACT).

Testy miešanie krvnej plazmy pacientov s plazmou, má určite známy nedostatok faktora

Určite aktivovaný parciálny tromboplastínový čas v testovacom plazme, Normálna plazma (ovládanie) a jasne známy faktor nedostatok plazma VIII (u pacientov s hemofíliou A), IX (hemofílie B), XI a XII. Potom sa zmes vzorky citrátovej plazmy skúmané (7/10 objem) a postupne s každým z plazmy s deficitom (3/10 objem), od nedostatku faktora VIII a IX (Najčastejšími formami patológie!).

K tejto zmesi bolo pridané kaolín a kefalin, a 2 min podrobená rekalcifikácie (pri teplote 37 ° C). K tejto zmesi, kde aktivovaný parciálny tromboplastínový čas nie je normalizovaná, To má rovnakú vadu zrážanlivosti.

Tak, v prípade, že vyšetrovaný pacient aktivovaný parciálny tromboplastínový čas je normalizovaný pridaním krvnej plazme pacientov so známym známym nedostatkom faktora VIII, ale opravil krvnej plazme pacientov s deficitom faktora IX, má to Hemofílie.

Podobne,, ale na základe testu protrombínu rozlišovať deficitu protrombínového komplexu (X, V, VII a II).

Test tromboplastínu generácie

Pre diferenciáciu porušenie vnútorného mechanizmu zrážania krvi sa najčastejšie používa klasický Test thromboplastin generácie nahradenie doštičiek komponenty, príprava si vyžaduje značné investície času a krvi, Kefalonia znevýhodňuje Test thromboplastin generácie sú jeho objemnosť, že je potrebné pripraviť veľké množstvo činidiel, významný čas na jej realizáciu.

Opravné skúšky, založený na základe skúšobného autokoagulyatsionnogo.

Rýchla diagnostika problémov je úplne odlišné odpovede nápravné skúška, vychádza z druhej náprave, rovnaké zložky normálnym krvným báze skúšobného autokoagulyatsionnogo.

Tento test je veľmi spoľahlivý, rýchlosť a jednoduchosť implementácie a vyžaduje len málo (nie viac 0,5 ml) Množstvo krvný test, môže byť použitý u detských pacientov.

V ňom, ako pri skúške generácie tromboplastínový, sa používajú na korekciu adsorbovaného plazmy a sérového staré, ktorý znovu centrifugován pred štúdiou. V troch fľaštičkách naleje 2 ml 0,222 % a pridá sa roztok chloridu vápenatého dvaja z nich 0,1 ml adsorbované normálnej plazmy (1-Aj fľaštička) a 0,1 ml starý normálne sérum (2-Aj fľaštička). Ostatné tri rúrky, aby pre 0,2 ml citrátovej normálnej plazmy. Potom do všetkých skúmaviek s roztokom chloridu vápenatého bolo pridané 0,1 ml citrátovej krvi testu.

Presne 4 min inkubácie sa zmes jeho zrážací aktivitu bola testovaná na normálnu plazmou.

Výrazný pokles koagulačné aktivity len v prvom skúmavke (normálne BaSO₄-plazma) To ukazuje na prítomnosť nedostatku pacienta faktora IX (Hemofílie B), Až v druhej rúrke (Sérum z starý) - O nedostatku faktora VIII (Hemofílie); Ak sa oprava sa vyskytuje v oboch rúrkach (rovnako silné), potom, samozrejme, je tu nedostatok faktora XI alebo XII (cm. Stôl. 14).

Tento test je vysoko citlivý, pretože štúdia sa vykonáva v rozvedený 20 Doba krv v kompenzačné faktor 3 Doštičiek hemolýzou. Iba reagujúcu zložku činné - hypotonická roztok chloridu vápenatého, Vďaka verejnej vzorka.

Rovnako jednoduchá je metóda vzoriek korekčných, vykonáva na základe testu pre nedostatok protrombín diferenciačný faktor II, V и VII , X (v tabuľke).

, Aby sa oddelil nedostatok faktora VII a X, ďalšie koagulačné testy vykonané s prídavkom študovaného riešenie hadieho jedu zmije krvnej plazmy - lieky lebetoks (volená tak, koncentrácia jedu, , Ktoré v prítomnosti chloridu vápenatého a kephaline spôsobuje koaguláciu 20-25 s; Všetky zložky sú prijímané vo výške 0,1 ml a mix) (Nižšie uvedená tabuľka).

S rovnakým účelom prípravok sa používa Russell vretenica jed, obydlia v Indii (príprava stipven).

Diferenciálnej diagnóza je dokončená, ak je to potrebné kvantifikáciu vzácne faktory alebo špecifických imunitných inhibítorov, Prečo sú špeciálne vysoko citlivé, štandardizované metódy. Tieto konštrukčné metódy používané zriedení krivky zmesných vzoriek normálny krvnej plazmy s korekčným deficitu faktorov, okrem testu. Tieto krivky definujú účinnosti testovaných faktora v plazme pacientov.

Zvlášť dôležitý kvantitatívne stanovenie koncentrácie faktora VIII a IX, a majúci svoje inhibítory u pacientov s hemofíliou A a B (najmä pred a počas chirurgického zákroku a intenzívnej substitučnej liečby), rovnako ako odložený bohatú popôrodné krvácanie, kedy je nutné rozlišovať DIC a zriedkavé ochorenie - vzhľad imunitný inhibítora faktora VIII (stále oveľa menej - Factor V).

S hlbokou nedostatku faktoru XIII (veľmi zriedkavé dedičné patológie) všetky koagulačné testy sú normálne, ale rozpúšťajú krvné zrazeniny v 5M a 7M močoviny.

Pomáha rozlíšiť rôzne nedostatok koagulačných faktorov tiež zodpovedá za rozsahu a, obzvlášť, Podmienky normalizácie čítania testov pre pacientov po intravenóznom podaní krvných produktov, T. to je. Upravený naživo spôsobom A, pričom. 3. Barkagan.

Táto technika je obzvlášť účinný, keď veľký rozdiel v očakávanej dĺžke života differentiable faktor v obehu. Tak, polčas trvania life protrombínového komplexu sa pohybuje od niekoľkých hodín (faktor VII) do niekoľkých dní (faktor II). Medzipoloha medzi nimi držať X Factor (2-2,5 Dni) a V (12-18).

Preto po masívnych transfúziách indexových plazmového lúča protrombín sa zvyšuje s nedostatku faktora VII, je veľmi krátka, nedostatok faktora V - o niečo dlhšia (približne 4-6 krát), nedostatok faktora X a, obzvlášť, II na dlhšiu dobu (viac ako 1 až 2 dni). Je príznačné, v tomto ohľade a vplyv lieku na index protrombínu PPSB (koncentrát faktora VII, IX, X a II). On tiež stručne normalizuje protrombínového času nedostatok faktora VII a dlhšia (mnohokrát!) nedostatok faktora X a II. Vzhľadom k tomu, že tento liek nie je faktor V, Tento nedostatok nie je im opravená.

Podobný rozdiel je odhalené v transfúzne a substitučná terapia koagulačné faktory vnútorný mechanizmus (XII, XI, IX a VIII), že registrovaný aktivovaný parciálny tromboplastínový test,.

Osobitný záujem Korekčný faktor úroveň reproduktora VIII a aPTT čítania keď transfúzie terapia hemofílie A a von Willebrandovho choroba. Prvá z týchto podmienok, je detekovaná okamžite maximálny zlepšenie krvácanie po transfúzii (sprej, rýchly!) Antihemophilic plazma alebo kryosraženiny správa, nasleduje pomerne rýchle (pre 10 až 18 hodín) trvalý pokles v jeho, keďže, vWF je pozorované nejaké zvýšenie zrážacie aktivitu v priebehu niekoľkých hodín po transfúzii, a potom jej pokles - oveľa pomalšie, než. V tejto súvislosti, pri liečbe von Willebrandovej choroby sa používa zriedka viac substitučnú transfúzie, ako hemofília A.

Štúdie funkčnej aktivity koagulačných faktorov a zložiek kallikreinového-kinínového a fibrinolytického systémov využívajúcich chromogénne substráty

Tieto metódy sú založené na štúdiu aktivity proteolytických enzýmov a ich inhibítorov, podieľajú na zrážanie krvi, fibrinolýza a kinínového formácie, v intenzite a rýchlosti štiepenia špecificky citlivé na tieto enzýmy peptidy, ktorý sa uvoľňuje počas degradácie farbiva (b-нитроанилин).

Stupeň zafarbenia reakčnej zmesi stanovené spektrofotometricky, a jeho intenzita je posudzovaná na aktivitu príslušných enzýmov (zrážacie faktor, kalikreín, plazmínu a ďalšie.), a na procese brzdenia - činnosť inhibítory enzýmov.

Tak, napr, účinok antitrombínu III a heparínu môže byť hodnotená štiepením chromogénnych substrátov oslabenie faktor Xa alebo trombín, a aktivita α₂-antiplazmín - pre redukciou zodpovedajúceho chromogénneho substrátu plazmín. Chromogénne substráty alebo majú číselné označenie (napr, S-2222), alebo sa odvolával na kondenzovaných hromozinami prefix, označujúci enzýmu, , Na ktoré sa substrát citlivý (napr, Chromozym PL - субстрат плазмина, Chromozym TH - субстрат тромбина, Chromozym PK - prekallikrein substrát / kalikreín, atď.. d.).

Chromogénny substráty rozšíriť príležitosti výskumu hemostatického systému, ale nie je k dispozícii dostatok na mnohé laboratóriách. Niektoré štúdie, vyrobené s ich pomocou, Oni majú výhody oproti bežným koagulačné testy a poskytnúť im zodpovedajúce výsledky; v iných prípadoch, ich použitie zjednodušuje a urýchľuje štúdie, To robí to presnejšie; V tretej - tieto techniky majú samostatný význam a nemožno vymeniť koagulačné testy (napr, prekallikrein stanovenie).

Imunologické stanovenie zložiek hemostatického systému

Imunologické stanovenie zložiek hemostatického systému, sa vykonáva spôsobmi, ktoré sú:

• Immunoprecipitacii;
• Immunoelektroforeza;
• Radioimunotest a druhá sa príslušných antisér

Zároveň sa do látky v krvnej plazme antigénu na zrážacie faktor (alebo jeho fragmenty), nie je funkčná aktivita, , Ktoré môžu byť dramaticky znížené s normálnou antigénom v plazme. Táto situácia je typická pre všetky prípady, Ak bol syntetizovaný v tele abnormálne (funkčne chybné) faktory, zachovanie jeho antigenitu, ale chýba schopnosť zúčastniť sa hemostasis.

To umožňuje rozlíšiť medzi úplného ukončenia syntézy relevantných faktorov a vzniku abnormálnych.

Avšak, niekoľko zložiek hemostatického systému môže byť stanovená len imunologicky.

Táto skupina zahŕňa také dôležité štúdie, ako definície nasledujúcich komponent:

• b-тромбоглобулина;
• a2-макроглобулина;
• proteín C a S;
• antigény faktora VIII:C a VIII:R_pamäť;
• Fibrinolýza Product (PDF);
• neoantigenov kompleksov trombínu - antitrombínu III a plazmín - antiplazmín;
• rada ďalších testov.

Z tohto dôvodu, imunologické štúdie významne dopĺňajú funkčné vyhodnotenie rôznych zložiek systému hemostázy.

Diagnostické testy, na základe užívanie drog, ako činidiel z hadích jedov

Už dlhú dobu je založená, že mnoho hadie jedy obsahujú vysoko aktívne proteolytické enzýmy, spôsobujúce zrážanie krvi a vplyv na rôzne odkazy na koagulačné kaskády. V dôsledku toho, hadie jedy a izolovaný od koagulázo nich široko používaný pre detekciu hemostatických porúch, Kvantitatívne stanovenie koagulačných faktorov, Detekcia a kvantitatívne stanovenie rozpustného fibrínu monomérnych komplexov (RFMK) a rad ďalších štúdií.

Vzorky hadieho jedu je často oveľa jednoduchšie a urobiť včasnejšie diagnózu hemostatických porúch.

V tabuľke sú uvedené údaje o mechanizme pôsobenia jedov na zrážanlivosť krvi a príležitostí diagnostické použitie každého.

Tieto schopnosti ďalej rozšíriť súčasné použitie niekoľkých jedov a jednoduchých obyčajný koagulačné testy. Tak, napr, Súčasné použitie koagulačných testov s vretenica jed a uľahčuje rozlišovať Efa nedostatkom faktora VII, H-V a II (v nasledujúcej tabuľke), a s ďalšie korekcie filtruje normálnej plazmy (účinník V a II) -defitsit faktory X a V.

Stanovenie základných fyziologických antikoagulanciá

Najdôležitejšie je stanovenie aktivity hlavných fyziologických antikoagulanciá - antitrombín III, pokles, ktorý môže byť geneticky podmienené (Primárne trombofília) alebo sekundárne v dôsledku intenzívnej spotrebe (DIC, Masívne trombóza) alebo zrýchlený metabolizmus (Liečba heparín, L-asparagináza, syntetické antikoncepcie) a blokáda imunitných komplexov, paraproteínu, fiʙronektinom, proteíny akútnej fázy.

V každom prípade, zníženie aktivity antitrombínu III, nižšie 60-65 % Podporuje intravaskulárna koagulácia, To robí menej výrazný antikoagulačný účinok heparínu. Avšak, veľmi často sa medzi úrovňou antitrombínu III a znížená citlivosť na heparín žiadny zákon-dodržiavanie.

To je zvyčajne oslabenie antikoagulačného pôsobenia heparínu značne prevažuje nad stupňom poklesu aktivity antitrombínu III. Preukázané, že deficity v rôznych formách svojho antitrombínu III afinitnej heparínu sa môže líšiť v rôznych stupňoch. Okrem, rôzne frakcie heparínu, pomer, ktorý v liečivách veľmi premenlivých, mať tiež inú afinitu k antitrombínu III. Z tohto dôvodu, v praxi je dôležité, aby skúmať ako na vlastnú aktivitu antitrombínu III, a jeho schopnosť otočiť pod vplyvom rýchlo pôsobiaceho antikoagulačnej heparínu.

Antikoagulačná aktivita antitrombínu III

Antikoagulačná aktivita antitrombínu III Je určený kapacitou testovanej plazmy (rozvedený - Metóda Copley Winterstein alebo defibrinované tepelná denaturácia pri teplote 56 ° C - metódy Loligera, Abildgaard a kol.) deaktivovať po určitú dobu vstupu od vonkajšieho trombínu. Zvyšková aktivita trombínu v plazme môže byť určený pre jeho zrážacie aktivitu (z fibrinogénu, síran bárnatý adsorbovaný plazma) alebo štiepením chromogénneho substrátu, citlivé na trombín alebo faktor Xa (as antitrombínu III a inaktivuje faktor).

Heparín-kofaktornaya aktivnosti

Heparínový kofaktor aktivity obsiahnuté v plazme antitrombínu III dlhšia lehota stanovená toleranciou skúšobnom plazmy na heparín, , Ktoré môžu byť považované za indikatívne, pretože to dáva veľmi veľké rozdiely normálnych hodnôt a reprodukovať dosť.

Oveľa presnejšie PLAY izvodimy testy, že skúmanie účinku rôznych koncentrácií heparínu na trombínu času štúdia plazmy, obsahujúce malé množstvo krvných doštičiek. Porovnanie sa vykonáva s predĺžením trombínu dobe normálneho ovládania plazmového, ku ktorej sa pridal rovnaký vzoriek heparín.

Tak, na trombín-heparín testu na štúdium krvnej plazme sa pridajú k množstvu heparínu, ktoré predlžujú trombínu riadenie času s 15 na 32-35 s (nízka koncentrácia) a až do 95 - 110 (vysoká koncentrácia heparínu). Z týchto údajov sa vypočíta index aktivity antitrombínu plazma (AAP) a rezerva antikoagulačnej plazma (CBA).

To je tiež široko používajú podobné techniky pre odhad stupňa inaktivácia trombínu v koagulačných testoch, a chromogénne substráty.

Imunologická detekcia antigénu antitrombínu III

Imunologická detekcia antigénu antitrombínu III To vám umožní rozlišovať medzi rôznymi typmi trombofília:

• s nedostatočným syntézu antitrombínu III (zníženej hladiny antigénne markeru adekvátne zníženú aktivitu);
• s zachovalou syntézou abnormálnych a funkčne chybných svojich formách (úroveň antigénne markeru je oveľa vyššia,, aktivitu ako).

Proteíny C a S, тромбомодулин и₂-makroglobulínu určená imunoenzymatickou metódami.