Hemoglobinuria paroxistica nocturna – Boală Marchiafava Michele

Hemoglobinuria paroxistica nocturna relativ rar se găseşte dobândite sub formă de anemie hemolitică, în legătură cu schimbarea structurii de eritrocite, Granulocite neutrofile şi trombocite. Fluxurile cu semne de hemoliza intravasculara, în cazul în care există hemoglobinuria, gemosiderinuriya, creştere a nivelului de hemoglobina gratuit plasma. Boala este frecvent complicat de vene periferice şi tromboza vasculara organelor interne.

Etiologia si patogeneza paroxistice nocturne gemoglobinurii

Prima descriere a bolii a fost dat 1882 g. A fost descris în detaliu în 1928 g.

Denumirea bolii este hemoglobinuria paroxistica nocturne (APG), Cu toate acestea, într-adevăr se potriveşte boala little, deoarece nu există nici hemoglobinuria paroxistica prezent se observă nu întotdeauna.

Hemoliza intravasculara cu gemosiderinuriej în plus APG se observă în mai multe forme de anemie hemolitică autoimună, ca cu căldură, si cu anticorpii reci, mai ales când forme cu căldură gemolizinami, precum şi în unele forme de anemie hemolitică ereditare, legate de încălcarea din structura membranei hematiilor.

Boala Markiafavy-Micheli observate la diferite vârste. Motivul pentru creşterea distrugerea celulelor rosii din sange este defect al eritrocitelor se.

Celulele roşii din sânge de pacienţi cu PNH, după cum sa menţionat mai sus, komplementom colaps cu uşurinţă atunci când se creează condiţii optime pentru valabilitatea acestuia, sau când acidifiere ser, sau când vă creşte concentraţia de completare în apropiere de eritrocite prin crearea ionii de concentraţie scăzută în saharoznoj miercuri. Celulele roşii din sânge de pacienţi cu PNH au sporit de senzitivitate la efectele anticorpilor agglutinins, și, în special, hemolysins.

Când PNG afectează nu numai celulele roşii din sânge, dar leucocitele şi Trombocitele pacientului. Trombocite si leucocite de pacienţi cu PNH au o sensibilitate sporită la efectele de completare ca atunci când acidifiere ser, şi miercuri cu zaharoză scăzut puterea ionice. Ele sunt de multe ori mai sensibil la efectele izoagglûtininov, decât donator de trombocite si leucocite. Astfel, Plachete şi celule albe din sânge au același defect în membrana, care şi celulele roşii din sânge.

Depistarea anticorpilor pe suprafata celulelor rosii din sange, leucocitele și Trombocitele şi astfel pentru a demonstra calitatea de membru al APG autoagressivnyh grup de boli nu poate fi metodele cele mai sensibile.

Este convingătoare dovadă a existenţei a două populaţii distincte de APG în eritrocite. Cele mai rezistente celule într-o persoană sănătoasă este un reticulocyte APG sunt cele mai fragile. Aceasta indică faptul că, care populaţia patologice de celule roşii din sânge pur şi simplu nu a supravieţuit la maturarea, şi mai în vârstă de eritrocite mature se referă la populaţia sănătoasă sau aproape sanatos.

IN 1970 în studiul de eritrocite Latina, afectate PNG, S-a descoperit, că ele conţin, ca cu femeile sănătoase mulate, variante electroforetică de două normale Dl 6-FD; Varianta o, frecvente în rândul persoanelor din Africa, şi opţiune în, tipice ale populaţiei din Europa. După ce a petrecut hemoliza transformat, că anormale celulele roşii din sânge conţin numai o singură opţiune Dl 6-FD, şi celulele normale roşii din sânge-ambele variante electroforetică de g-6-PD. Prin urmare, provenit RBCs sunt coborate de la o singură celulă.

Acest lucru cu mare precizie indică prezenţa a două populaţii de eritrocite, diferite nu numai funcţional, ca, de exemplu,, la mikrosferocitoze, dar, de asemenea, de origine: cu alte cuvinte, Confirmă prezenţa celulelor patologice clona, t. este. mutaţii somatice. Identitatea de leziuni de membrana hematiilor, Neutrofilele și Trombocitele sugerează că, că informaţiile patologice ajunge cel mai probabil cuşcă, viitoare pentru stem, t. este. predecesorul mobil mielopoèza. Blastomnyj de creştere pentru PNG nu este specific. Descriu doar cazuri izolate de dezvoltare rapidă de leucemie pe un fundal PNG. Cu toate acestea, Putem presupune, că PNG este o varianta de tumora benigna a sistemului de sânge, pentru o lungă perioadă de timp, producând nu proliferarea celulelor tumorale, caracteristic pentru alte forme de leucemie.

Mecanismul de dezvoltare Komplementčuvstvitel′Nosti în PNG în timp ce neclar.

Semnificative schimbări în activitatea enzimelor ciclului Glycolysis şi pentozno-fosfat nu.

Când PNG redus activitatea acetylcholinesterase de eritrocite, cel mai probabil din cauza întreruperi ale structurii membranelor celulelor roşii din sânge, pentru că enzima este situat pe suprafaţa membranei şi uşor rupt atunci când înfrângerea. Cunoscut, că utilizarea de inhibitori de acetylcholinesterase are nici un efect asupra supraviețuirea eritrocitelor. Cu toate acestea, scăderea activităţii acetylcholinesterase este, de asemenea, observate în alte forme de anemie hemolitică, prin urmare, nu pot explica fenomenul de crescut komplementčuvstvi- Iulia.

Există dovezi, dovezi de creştere a numărului de acizi graşi nesaturaţi, incluse în structura de fosfolipide, membrana hematiilor. Există posibilitatea, care se schimbă în lipide-este doar o reflectare a orice alte modificări în structura membranelor celulelor roşii din sânge. În studiul de proteina de membrana hematiilor de pacienţi cu PNH în electroforeză în gel de poliacrilamidă în prezenţa de sodiu dodecilsulfata set, că, în mai multe fracţiuni de conținutul de proteine este semnificativ diferit de control.

Rolul principal în patogeneza complicaţii trombotice la APG retrogradat defalcare vnutrisosudistomu de celule roşii din sânge şi stimulare de factori de coagulare, eliberat din eritrocite în timpul lor de despartire. Când APG distrus cea mai mare parte reticulocyte, poate, Aceasta şi explică frecvenţa complicaţiilor trombotice în această boală, spre deosebire de alte forme de hemolitică Anemiile, însoţite de o hemoliza intravasculara pronunţat.

Manifestări clinice paroxistice nocturne gemoglobinurii

Bolii adesea începe cu un scâncet. Pacienții se plâng de slăbiciune, indispoziție, amețeală. Uneori note de skler subicteric. Adesea primul plângeri de dureri de cap, durere de stomac de localizare diverse. O tendinta de a crescut tromb formarea determină pacientul să ceară sfatul medicului. Hemoglobinuria destul de rar este primul simptom al bolii şi unii pacienţi de APG poate fi absent la toate. În unele cazuri apare pentru prima dată prin 2-3 ani şi chiar prin 10 ani de la debutul bolii.

Una din trăsăturile caracteristice ale PNG-crize de dureri abdominale. Localizare a acestuia poate fi foarte diferită. În afara perioadei de durere de stomac anca, obișnuit, nu au fost observate. Adesea se alătură vărsături. Cel mai probabil, dureri abdominale la pacienţii cu PNH este asociat cu TVP vasele mezenterice.

Tromboza vasculara periferica (cel mai adesea — venele extremitatilor inferioare și superioare, cel puţin-vaselor renale) de asemenea, simptom caracteristic paroxistice nocturne de gemoglobinurii. În 12 % APG pacienţii observă throm. Complicaţii tromboembolice sunt cauza cea mai frecventa de deces în această boală.

Când un obiectiv de studiu de paloare adesea remarcat pacientului cu o atingere usoara de želtušnym. Multe ori există facial pungile, uneori excesiv plinătatea. Probabil o uşoară creştere în splină şi ficat, Deşi nu este tipic pentru APG.

Pentru paroxistice nocturne gemoglobinurii se caracterizează prin semne de hemoliza intravasculara, cele mai importante dintre care este hemoglobina crescut plasmă gratuit. Acest subiect periodic aproape toţi pacienţii din APG. Cu toate acestea, gradul de crestere a hemoglobinei gratuit plasma variază şi depinde de, în ce perioadă de studiu de boală. În timpul crizei din aceasta proporţional creşte în mod semnificativ, A existat, de asemenea, o creştere a numărului de metal′bumina plasma.

Nivelul de hemoglobina gratuit plasma depinde de gradul de hemoliza în momentul, continut gaptoglobina, gradul de filtrare a hemoglobinei in urina si viteza de distrugere Complexul hemoglobinei — haptoglobin. În cazul un grad mic de hemoliza hemoglobina gratuit concentraţiilor plasmatice nu va fi suficient să se filtrează prin filtrul renal. Prin urmare, hemoglobinuria nu este obligatorie simptom boala. Când trece prin nefronov de canaliculi secretat de hemoglobina este parţial distruse şi depus în epiteliul tubular. Acesta este motivul pentru hemosiderina urina.

Prevăzute cu hemosiderina urină în Marea majoritate a pacienţilor cu hemoglobinuria paroxistica nocturne. Gemosiderinuriâ, uneori nu apare imediat. Acest lucru este un important, dar nu sunt specifice pentru PNG semn de boală.

Parametri de laborator în gemoglobinurii de noapte paroxizmalna

Hemoglobina la pacienţii cu PNH variază de la 1.86- 3,1 mmol / l (30-50 g/l) şi chiar mai scăzut la normal în timpul scutiri.

Numărul de eritrocite la pacienţii cu PNH scade nivelul de reducere a hemoglobinei. Indicatorul de culoare o perioadă mai lungă rămâne aproape de unitate. Unde, În cazul în care pacientul pierde cantităţi semnificative de fier cu urina, sub forma de hemosiderina şi hemoglobina, nivelurile de fier este treptat în scădere. Indicatorul de culoare mici se observă în aproximativ jumătate din pacienţii. Unele dintre ele au crescute nivelurile hemoglobinei (P), mai ales în perioadele de crescut.

O mare parte a pacienţilor conţinut crescut de reticulocyte, dar relativ scăzut (2- 4 %). Numărul de leucocite în PNG în cele mai multe cazuri redus. La multi pacienti este 1,5-3 grame 1 L, dar uneori redus la 0,7-0,8 g 1 L. Leucopenie, obișnuit, Există prin reducerea numărului de granulocite neutrofile. Uneori sânge în APG normală sau mare-până la 10-11 g 1 L.

Când APG reduce neutrofile activitatii fagocitare a granulocitelor.

Trombocitopenie de asemenea, frecvent observate la PNG, Cu toate acestea, starea funcţională a trombocitelor în mod normal. Probabil, Acest lucru explică raritatea de sângerare complicaţii atunci când această boală, Deşi de trombocite, uneori, este redus în mod semnificativ-până la 10-20 g 1 L. De obicei, în majoritatea pacienţilor trombocite 50-100 g 1 L. Trombocite normale nu exclude un diagnostic de gemoglobinurii paroxistice nocturne.

În studiul de măduvă osoasă Detectat simptome, în principal caracteristica de anemie hemolitică este o iritare roşu germeni azotos în mielokariocitov numărul normal. La unii pacienţi are o uşoară reducere a numărului de Megakaryocyte.

Nivelul seric de fier în PNG depinde de stadiul bolii, gradul de hemoliza intravasculara si activitatea de sânge. Unde, În cazul în care pacienţii au constant sau frecvente hemoglobinuria, precum şi constantă gemosiderinuriâ, conţinutul de fier din organism, și, prin urmare, şi scade în ser, uneori foarte semnificativ. Uneori PNG începe cu semne de hipoplazică. Magazine de fier în organism al pacientului depinde de APG, o parte, la pierderea de fier în urină, şi, pe de altă parte, intensitatea eritropoezei. Prin urmare, nu pot lua fier deficit semn diagnostic al paroxistice nocturne gemoglobinurii.

Nivelul bilirubinei serice în PNG în majoritatea cazurilor, în afara focusului crescut sau normal, în principal prin indirecte. Conținutul mediu de bilirubina este de 22-28 μmol/l. Trebuie luat în considerare, că, atunci când hemoglobinei hemoglobina format dezintegrare complex de vnutrisosudistom-gaptoglobinovyj, Cine şi în cele din urmă, de asemenea, desparte cu formarea de bilirubina.

Unii pacienţi cu boală PNH începe cu picturi de anemie aplastică.

Diagnosticul de gemoglobinurii paroxistice nocturne

În cazul în care structura de coajă gemoglobinurii paroxistice nocturne de eritrocite este rupt, aşa cum se reflectă în grad ridicat de sensibilitate la efectele ei completare. Aceasta hipersensibilitate este detectat folosind fie ionut, sau mai sensibile probe de saharoznoj. În unele cazuri, cu toate acestea,, în special sub formă de gemolizinovoj de anemie hemolitică autoimună, saharoznaâ proba poate da un fals rezultat pozitiv. Gemoliziny sunt fixate pe suprafaţa de propriile celule roşii din sânge şi în prezenţa completează în saharoznoj miercuri distrus lor, În timp ce PNG se caracterizează prin distrugerea celulele komplementom fără expunere la anticorpi.

Pentru a exclude forma gemolizinovoj anemie hemolitică autoimună studiu recomandat hemolysins aşa cum este descris mai sus şi folosind cross-saharoznoj cu probele de ser de la pacient şi donator de eritrocite odnogruppnogo, şi nu invers, aşa cum se obişnuieşte. Când APG probă directă este pozitiv, şi cruce-negativ. Când gemolizinovoj forma ADRIAN pot apărea ca un rezultat pozitiv, şi eco-probă negativă. În aceste cazuri se recomandă să utilizaţi treia opţiune saharoznoj probe — folosind ambele ser, şi celule roşii din sânge al pacientului. Gradul de hemoliza în această variantă minim atunci când PNG şi maxim gemolizinovoj formă de ADRIAN. Explica un astfel de rezultat poate fi numai anticorpi foarte specifici din serul pacientului gemolizinovoj forma autoimune anemie hemolitică antigenul, disponibile în cantităţi mari în eritrocite bolnavi, decât în eritrocitele donatorului. Saharoznaâ directe de probă pozitive acestor pacienţi este asociat, probabil, cu prezenţa de eritrocite fixate anticorpi.

Detectarea hemolysins metoda agregatgemagglûtinacii şi alte ajută pune diagnosticul corect. Nu poate fi folosit ca un ser de donator de pacienţi, ca şi în cazul gemolizina conţinut rezultat nu poate fi ložnopoložitel′nym. Un rezultat negativ poate aparea, În cazul în care sursa foloseste serul pacientului completarea APG sau serul bolnavilor de ciroză hepatică, Artrita reumatoida, Lupusul eritematos sistemic si alte boli, în completare care scade nivelul. Saharoznaâ eşantion şi probă maria devine mai puţin pronunţat, În cazul în care luaţi sânge la un pacient ca anticoagulant de heparina este folosit, mai degrabă decât de citrat de sodiu. După criza hemolitica intensitatea probe maria şi saharoznoj probe este redus, dar nu devin negative.

Definiţia de hemoglobina gratuit plasma din metoda de modificare Bing Derviz şi Bâlko cu gemoglobinurii paroxistice nocturne

Metoda se bazează pe capacitatea de hemoglobină să reacționeze cu acidul-benzidină miercuri în prezenţa peroxid de hidrogen cu formarea de colorant verde, prima rulare în albastru, şi apoi într-un roşu-purpuriu. Intensitatea este proporţională cu numărul de hemoglobina.

Reactivi.

1. Tampon acetat 0,1 M, pH 4,6: 27,22 g acetat de sodiu dizolvat în 1 l de apă (0,2 Soluție M de); într-o altă măsurare bec Cook 1 L 0,2 Soluție de M de uksousnokisloy acid; amestecat 480 ml nr. 1 și 520 ml nr. 2.
2. Peroxid de hidrogen 0,3 % soluție (se prepară înainte de utilizare prin reproducţie o soluţie în 100 timp).
3. Solânokislyj benzidină 0,1 % soluție: 50 mg solânokislogo benzidină dizolvata in 35-40 ml de tampon acetat, soluţia de căldură 80 ° C într-o baie de apă şi după răcire, aduce tampon acetatnym 50 ml.

Flacon de filtrare şi magazin în întuneric la temperatura camerei cel mult 7 zi. Îngălbenite reactiv este nepotrivit, Potemnenii rapidă, trebuie să vă perekristallizovat′ benzidină la alcool.

Metodă.

Sânge pentru studii luate din venele AC uscată într-un tub de silikonirovannuû, conţine orice anticoagulant. Sânge cu anticoagulant centrifugat nu mai 10 minute la 1500 / Min. După separarea sale plasmatice se centrifughează din nou pentru 10 minute la 8000 RPM pentru depunerea de leucocite.

În eprubetă este umplut 4 tampon acetat ml, 2 peroxid de hidrogen ml, 2 ml benzidina şi 0,04 ml de ser de testat se amestecă și se lasă să stea 3 m, apoi se toarnă într-un pathlength cuvă 1 cm și fotometrice împotriva compensarea soluției la un filtru de lumina verde. Intensitatea crește culoare albastru timpul 4-5 min, astfel măsurarea se repetă de 3-5 ori la rând și înregistrați citirea maximă. După 5-6 minute, ser colorația devine nuanta purpuriu-brun, iar densitatea optică începe să scadă. Două rezultate maxime identificate densitatea optică de mediu este luat.

Solutia de compensare, constând din 6 tampon acetat ml, 8 peroxid de hidrogen ml, 3 ml benzidina şi 0,06 ml soluție izotonică de clorură de sodiu, se prepară în acelaşi timp cu.

Calibrare ecran curba pe o soluţie de hemoglobina. În sânge, luate pentru soluţie de hemoglobina, măsură de conţinutul său (la kolorimetre medicale sau medicale refraktometre). Se prepară o soluție de concentrație de hemoglobină 1 g / l, din ea se prepară soluții de concentrație mai mică: 0,005,0,025, 0,05, 0,1 și 0,2 g / l. Fiecare soluţie rezultată Adauga 0,04 ml de amestec 4 tampon acetat ml, 2 ml benzidina şi 2 peroxid de hidrogen ml.

Soluţie principală gemolizata (1 g / l) pentru calibrarea curbă să fie stocate în vreme rece, şi soluţii de concentrație de lucru ar trebui să fie preparat imediat înainte de examinarea.

În mod normal, în 1 litri de plasma de sânge conţine 0,0005 mmol / l (0,01-0.04 G) Hemoglobină.

Definiţie de hemosiderina urină cu paroxistice nocturne gemoglobinurii

De degradare a hemoglobinei este adsorbită renală epiteliului tubular de fier şi face parte din hemosiderina. Sluŝennye celulele epiteliului tubular renal în aceste cazuri conţine boabe de hemosiderina.

Un studiu atent al sediment urină după centrifugare cereale hemosiderina vizibil şi fără speciale de colorat. Cu toate acestea, ei stau mai mult în mod clar atunci când colorare în Perlsa metoda.

Metodă.

După centrifugare urină stratul superior de supt, la pescaj se adaugă soluție de svejeprigotovlenny 1 % Galben sare de sânge şi 1 % acid clorhidric (Se amestecă cantități egale de 2 % soluție de acid clorhidric și galben sânge sare). După 10 minute după amestecare, amestecul este centrifugat și sedimentul se uita la. Cereale hemosiderina colorarea albastru.

Determinarea de plasmă metgemal′bumina metoda spectrofotometrică

Reactivi.

1. Izoosmotičeskij de tampon fosfat (pH 7,4): amestecat 18 ml 0.15 Digidrofosfata de sodiu soluţie M (24,4 YaN2R04 g pe 1 l de apă) și 82 ml 0,15 Hidrogen de sodiu soluţie M (21,3 g NaH₂DUPĂ₄ pe 1 l de apă).
2. Bisulfit de sodiu.
3. Hidroxid de sodiu 1 M.
4. Soluţie de ser albumină umană (40 g / l).
5. Soluţie gemina (5 mg / 100ml); pregăteşte imediat prin dizolvarea gemina în cantităţi mici de Sodă caustică, și apoi: aducând-o până la cantitatea necesară de soluţie de ser albumină.

Metodă.

K 2 se adaugă ml ser sau plasma de sânge 1 ml soluție de izoosmotičeskogo de zabuferernogo, pH 7,4. Amestecul este centrifugat 30 minute la 1200-1500 rpm. Determina densitatea optică la 569 nm. Apoi, dacă diluat cu plasmă este plasat într-o eprubetă și se adaugă aproximativ 5 mg uscate hydrous sulfat de sodiu. Prin 5 min în mod repetat se măsoară densitatea optică la aceeaşi lungime de undă. Diferenţa dintre două valori densitatea optică corespunde densității optice de metgemal′bumina. Concentrația de Metgemal′bumina determinate de programul de calibrare.

Calibrare grafic de afişare după cum urmează. Soluţie gemina albuminom transferul în tuburi din cantitatea de 0,01 la 0,1 g / l (de la 0,2 la 2 ml). În aceste tuburi, în cazul în care cantitatea de soluţie mai puţin 2 ml, adăuga până la 2 albumina ml. Apoi se adaugă pe 1 ml fosfat tampon izoosmotičeskogo. Se centrifughează amestecul la 1500 / Min, şi apoi se măsoară densitatea optică. Diferenţa dintre dimensiuni se aplică la diagramă, respectiv numărul de gemina.

În plasma sanguină normală lipseşte gemal′bumin. Apare în cazul hemoliza intravasculara, de exemplu,, Dacă paroxistice nocturne gemoglobinurii sau gemolizinovoj formă de anemie hemolitică autoimună, precum şi în lipsa de gaptoglobina, Când HEM se leaga de albumina.

Ionut proces în gemoglobinurii de noapte paroxizmalna

Ionut proces bazat pe scăderea rezistenţei de celule roşii din sânge de pacienţi cu PNH la un pH mai mic miercuri în prezenţa complementului seric proaspete.

Reactivi.

1. O soluție de acid clorhidric 0,2 n.
2. Soluție de amoniac 0,04 %.

Metodă.

La Viena ia 5- 6 ml de sânge. Ca anticoagulant folosit citrat de sodiu sau oxalat. În acelaşi timp ia 15-20 ml de sânge de la donator din acelaşi grup. Separa celulele roşii din sânge de plasma de sânge de pacient şi donator.

Donatorilor din ser este turnat 0,5 ml în tuburi de şase, cei doi au pus 20 min într-o baie de apă cu o temperatură de 56 ° C pentru a inactiva complementului seric, alte patru eprubete sunt lăsate la temperatura camerei. Roşii din sânge celule pacientul două ori spălate izotoniceski soluţie de clorură de sodiu, apoi suspenziruût aceeaşi soluţie în raport 1:1.

Schema de studiu sunt prezentate în tabelul.

Conținutul din fiecare eprubetă se amestecă, pune dumneavoastră 1 h în termostat la temperatura 37 ° C, şi apoi centrifugat.

Pentru idle eşantionaţi 0,05 m celulele roşii din sânge de pacient şi donator se adaugă separat la 0,55 ml soluție izotonică de clorură de sodiu.

După centrifugare gradul de hemoliza poate fi estimată prin ochi. Pentru a cuantifica gradul de hemoliza în fiecare tub să 4,7 ml 0,04 % Se adaugă soluție de amoniac 0,3 stratul de suprafaţă ml, dar în eprubetă cu breakout inactiv — 0,3 ml de ser de referință.

Pentru a identifica 100 % hemoliza la 4,7 Adauga ml de soluție de amoniac 0,3 mL suspensie de eritrocite (0,05 ml eritrocitele pacientului în 0,55 ml soluție izotonică de clorură de sodiu).

Densitatea optică a soluției se măsoară la kolorimetre medicale şi compara lecturi cu soluție de amoniac de densitate optică fără celule roşii din sânge:

% hemoliza =((IS₁-IS₂)/IS₃)*100;

unde E₁ -densitatea optică a analiza sonda; IS₂-densitatea optică probă martor; IS₃-densitatea optică 100 % gemolizata.

În mod normal, nu de mai mult de gemoliziruetsâ 5 % eritrocite.

Proba este considerat pozitiv maria în caz, Dacă gemoliziruetsâ mai multe 6 % eritrocite.

În paroxizmalna noapte gemoglobinurii şi gemolizinovoj formă de anemie hemolitică autoimună gemoliziruetsâ uneori până la 50-80 % eritrocite. Pentru aceste boli se caracterizeaza prin hemoliza numai în prezenţa ser neinaktivirovannoj (-Nr. 2). Dacă inactivarea ser nu împiedică hemoliza (-Nr. 3), Putem presupune existenţa unor alte forme de anemie hemolitică sau o greşeală în crearea de cercetare.

Pentru distrugerea celulele roşii din sânge de pacienţi cu hemoglobinuria paroxistica nocturne miercuri la pH-ul 6,5 necesită prezenţa obligatorie de completare, conţinute în ser proaspăt.

Saharoznaja tryout cu paroxistice nocturne gemoglobinurii

Saharoznaja probei se bazează pe, că celulele roşii din sânge de pacienţi cu paroxistice nocturne hemoglobinuria şi gemolizinovoj formă de anemie hemolitică autoimună sunt distruse în soluţii a scăzut puterea ionice in prezenta complementului.

Reactivi.

1. Soluţie de zaharoză: 9,42 zaharoză dizolvat în 0,005 Tampon de fosfatnom M; pH 6,2 (91 ml 0,005 M NaH₂DUPĂ₄ și 9 ml 0,005 M Na₂HPO₄).
2. Reactiv pentru determinarea de concentrația hemoglobinei: 200 sare de sânge roşu mg dizolvat în 1 l distilat apa, Adauga acolo 0,5 ml atsetontsiangidrina.

Metodă.

Tensiunii la un pacient ţinând din Viena a două tuburi este uscat (8-10 ml) şi cu anticoagulant (2- 3 ml). Ca anticoagulant folosi citrat de sodiu. Eritrocitelor din sânge Colectia tuburile cu anticoagulant spăla de două ori izotoniceski soluţie de clorură de sodiu. După extragerea spălării şi supernatant la 0,4 Adauga ml eritrocite 0,25 ml soluție izotonică de clorură de sodiu.

În acelaşi timp, lua sange de la un donator de acelaşi grup de sânge în două tuburi — cu anticoagulant (2-3 ml), Aceasta este tratată în acelaşi mod, ca sângele pacientului, şi uscată (8- 10 ml) pentru a obţine ser. După separarea de ser donatorului 0,5 ml este plasat într-o baie de apă la o temperatură 56 ° C 30 min pentru inactivare de completare. Donatorului ser ar trebui să ia zilnic experienţă şi ţine în frig. Schema de studiu este prezentat în tabelul.

Tuburile sunt introduse în termostatul pe 30 minute la 37 ° C, și apoi se centrifughează pentru 10 minute la 2000 RPM şi evalua gradul de hemoliza.

Pentru a face acest lucru, în eprubetă se toarna 3,4 ml reactiv pentru determinarea de concentrația hemoglobinei şi 0,6 ml pe- sedimentele din fiecare eprubete. Prin 10 min se măsoară densitatea optică a soluției în tuburi cu 540 NM refraktometre sănătate (Spectrofotometru) sau medicale kolorimetre (DEC fotokolorimetre-m) Când un verde vizor, prin compararea datelor obţinute cu densitatea optică soluţie pentru determinarea hemoglobinei. Ia medie de două lecturi fiecare experienta. Calculul se face conform formulei:

% hemoliza în vitro =((IS₁-IS₅)/(IS₈-IS₅))*100

unde E₁ -densitatea optică a soluției într-un test tub nr. 1; IS₅ -densitatea optică a soluției într-un test tub nr. 5, este necesar să se excludă ser de colorat; IS₈ -densitatea optică a soluției într-un test tub nr. 8, în cazul în care 100 % hemoliza.

Pentru probele de cross-saharoznoj (-Nr. 2) 100%-lea hemoliza în vitro este investigat nr. 7.

Evaluarea rezultatelor.

Normale in vitro nr. 1, conţine eritrocite cercetat pacientul, hemoliza este mai mare de 2-3 %.

În paroxizmalna noapte gemoglobinurii şi gemolizinovoj formă de anemie hemolitică autoimună (Aiga) în acest vitro hemoliza depăşeşte 6 % În eprubete-nr. 4, care conţin sânge de pacient şi donator ser inaktivirovannuju, tub de testare # 5, care conțin eritrocite și ser donator, și numărul 6, care conțin ser în loc de soluție de clorură de sodiu izotonică — hemoliza nu trebuie să depășească 1-2 %.

Cross-saharoznaja proces (-Nr. 2) Atunci când gemolizinovoj formă de adrian de obicei pozitivă (în prezenţa hemolysins în ser), dar poate fi negativ. In vitro nr. 3 (celulele roşii din sânge şi serul pacientului) hemoliza constatate la APG, şi în gemolizinovoj formă de adrian. În paroxizmalna noapte gemoglobinurii maxim hemoliza este detectat în probă normale saharoznoj (-Nr. 1), mai puţin pronunţat — cu propria pacientul de celule eşantion (-Nr. 3); Hemoliza nici o cruce-saharoznoj eșantion (-Nr. 2).

Atunci când gemolizinovoj formă de adrian cel mai pronunţat hemoliza este detectat într-un eșantion cu serul sangvin şi eritrocite bolnavi (-Nr. 3), ceva mai puţin pronunţat — în vitro nr. 1. In vitro nr. 2 hemolitică se observă frecvent, dar lipsa acesteia nu exclude forma gemolizinovuju adrian.