Studiul hemostazei-vasculare trombocite

Încălcarea la acest nivel de hemostază poate avea loc cu o tendință la hemoragie sau tromboză, în funcție de care metode sunt selectate studiu. În afară de, Toate metodele de cercetare de trombocite Hemostaza împărțită în primar și secundar, sau al doilea testele seria, care se aplică numai în cazul, Dacă utilizați teste relevat încălcări. Principalele (de bază) Următoarele sunt teste.

Probele de rezistență (fragilitate) capilare - manșetă, Borcan, angiorezistometriya

Din aceste teste, cele mai accesibile și totuși suficient de informativ Sample Konchalovsky-Tiller-LEED.

Estimarea se face cu privire la numărul și dimensiunea de hemoragie, formată pe partea de sus a suprafeței palmare a antebrațului (într-un cerc cu diametrul 5 cm) După 5 minute de compresie la un umăr manșetă presiune 12-13,3 kPa (90-100 Mm Hg. Art.). Rezultatele sunt luate în considerare prin 5 min după îndepărtarea manșetei. Numărul de petesii mai 10 subliniază fragilitatea crescută a microvessels, care este adesea asociat cu trombocitopenie sau afectarea functiei plachetare angiotroficheskoy. De asemenea, ia în considerare apariția de hemoragie, și chiar sub guler.

Eșantion Banochnaya este realizată în aceeași zonă de piele la presiunea negativă construirea in niveluri - de la 20 kPa (150 mm Hg. Art.) și mai mici. La evaluarea rezultatelor, petesii, apărut la bănci.

Probele privind durata și amploarea hemoragiei capilare

În clasice Proces duce mai mic lobul urechii cu role, după o încălzire lumina ei străpuns la o adâncime de 3,5-4 mm. Sângerarea în acest studiu nu depășesc în mod normal 4 m, o picătură de sânge pe hârtie de filtru sunt relativ scăzute și începe să scadă rapid, deoarece aproximativ 1-1,5 minute după puncție. Când și-a exprimat trombocitopenie (Mai puțin 20 T în 1 L) disfuncție plachetară și timpul de sângerare severă a crescut la 20-40 de minute, Petele de sânge sunt mult mai mari, iar reducerea pe termen lung sau diminua valurile, apoi crește din nou. Eșantion Duke nu sunt suficient de sensibile, în 2/3 pacienții cu thrombocytopathies dă rezultate normale.

Mai multe teste sensibile, în care timpul de sângerare este cercetat pe fundalul unui stazei venoase creat în mod artificial, pentru care umar este suprapusă pe aparatul de manșetă pentru măsurarea tensiunii arteriale și a duratei studiului sprijinit presiunea, egal 5,3 kPa (40 mm Hg. Art.). Pe fondul unei astfel de stază în Borchgrevink proba-Vaaler pe suprafața palmară a treimii superioare a Lancet antebrațului adâncime incizie transversal aplicat 1 mm și o lungime de 8-10 mm (rata timpului de sângerare - up 10 m), și proba Ivey et al. la fel aplicat la Lancet antebrațul pentru a trage de sange de la o adâncime de trei puncție deget transversal 3 mm (rata timpului de sângerare - up 7 m).

Pe fondul aceluiași stazei venoase efectuat Un studiu privind. DIN. Shitikova, prin care în falange terminale profunzime înțepătură aplicat 3 mm, apoi vârful degetului înmuiată într-o ceașcă 5 ml de soluție izotonică de clorură de sodiu și numărate timpul de sângerare în lumina transmisă (dacă soluția este intens colorat cu sânge, follow-up la degetul este mutat la o ceașcă diferit). Cantitatea de sânge pierdută este determinată de creșterea volumului de lichid în cupele (rata timpului de sângerare - up 4 m, volumul de sânge pierdut - de la 0,01 la 0,4 ml).

În testul in T. N. Sushkevich pierdut volumul sanguin este determinată de culoarea amoniac (0,04 %) , care sunt scufundate hârtie cu pete de sânge, de colorimetrie pe colorimetru medical.

Teste Indicații pentru durata de sângerare, Anormal, dovezi de abuz și-a exprimat-trombocite vascular hemostaza, Cu toate acestea, în conformitate cu rezultatele normale ale acestor probe nu exclude prezența thrombocytopathy ușoară exprimat.

Numărarea numărul de plachete sanguine

Numărarea numărul de plachete sanguine (Goryaeva într-o cameră de numărare în contrast de faza sau tentă, sau cu ajutorul unor contoare de particule) - Cel mai important mod de a diagnostica trombocitopenie și thrombocytopathy, curge o scădere constantă sau periodică a numărului acestor celule (anomalie Bernard-Soulier, Meia Hegglina și altele.).

Numărarea numărul de trombocite sugerează, de asemenea,, dacă este posibil să se efectueze lor de cercetare în continuare funcționale și în ce mod ar trebui să fie făcut (cu trombocite preconcentrare sau fără, fotometric sau microscopic, etc.. d.).

Studiul a mărimii plachetelor sanguine din frotiurilor de sânge – trombotsitometriya

Studiul a mărimii plachetelor sanguine din frotiurilor de sânge (trombotsitometriya) Acesta vă permite să facă o hotărâre preliminară cu privire la diferitele populații de celule în sânge testului și a obține informații cu privire la o serie de anomalii, precum saturația de granule plachetare.

În unele thrombocytopathy (Sindromul Viskotta-Aldrich) Trombocite sunt dominate de foarte mici (la 2 microni în diametru), în timp ce alții - forma gigant (anomalie Bernard-Soulier, Meah-Hegglina) — pentru a 8 m sau mai mult. Într-un număr de aceste celule sunt granule thrombocytopathy săraci (cm. de mai jos), în timp ce alții - de centralizare margele rupte de la plachete de raspandire pe sticla, care constituie o încălcare a reacției și eliberarea de granule care conțin substanțe, necesare pentru punerea în aplicare a hemostazei. Toate aceste proprietăți, și capacitatea de trombocite la răspândirea și procesele de formare, evaluarea structurii acestor celule pot fi studiate cu ajutorul microscopiei convenționale și electronică de baleiaj, și de interferența de optica Nomarski.

Retragerea de un cheag de sânge a încălcat în mod regulat cu trombocitopenie severă (T în mai puțin de 30-40 1 L) și, în unele forme de inferioritate calitativă de trombocite, cele mai multe ori - atunci când trombotsitoastenii Glanzmann, uremic thrombocytopathy etc..

Cercetarea prin lipire-acumularea trombocitelor (AAFT)

Cercetarea prin lipire-acumularea trombocitelor (AAFT) - Cel mai important element de diagnostic de laborator de mai thrombocytopathy. În prezent, un număr de metode de cercetare ușor implementabile și accesibile publicului, inclusiv vizuale, microscopic și hardware (aggregometry, microfiltre și altele.) Această funcție poate fi un indiciu de înregistrare pentru a include următoarele metode.

Metode de retenție de plachete din sticlă (sau filtre)

Numărului de trombocite au fost efectuate in sange venos înainte și după trecerea la standardul de viteză prin coloană cu mărgele de sticlă sau fibră de sticlă coadă; pierderea de trombocite din sânge sunt judecate de gradul de adezivitate.

Mai mult disponibile, deși ceva mai puțin precise, Metoda pentru determinarea numărului de trombocite în sânge înainte și după contactul cu acesta într-o anumită perioadă cu suprafața interioară a vasului, rotirea la o anumită viteză. O metodă mai precisă pentru determinarea întârziere de trombocite filtrele Millipore (Diametrul porilor - 15-20 microni). În aceste teste, evaluarea poate fi condusă de creșterea gradientului de presiune deasupra și dedesubtul filtrului (porii înfundate și agregate plachetare duce la o creștere a acestui indicator).

Metode de studierea agregarea trombocitelor

Testare Hemolysate-agregare bazat pe capacitatea hemolizat eritrocitele, investigat în creșterea 10^-2 și 10^-6, cu agitare pentru a provoca agregare în propria plasmă, a câștigat un număr mare de trombocite (raport volumetric de plasmă citrat și hemolysate - 1,0:0,2). Luând în considerare timpul de apariție a agregare (rata în concentrație ridicată, cu-hemolysate 11-17, low - 40-54 cu) și severitatea ei. Dinamica procesului și intensitatea acesteia pot fi estimate ca fotometrie (Colorimetru medical, filtru verde, agitare) și orice agregografe proiectare.

Atunci când înregistrarea grafică a utilizării hemolizat diluție înaltă (10^-6) Acesta oferă un agregatogrammu două val, în cazul în care al doilea val este asociat cu eliberarea de endogene stimulatoare agregării plachetare - ADP, catecolamine, tromboxan, etc.. Acest al doilea val se caracterizează prin reacția de eliberare, aceasta nu este observată în absența granulelor dense trombocite (depozitare boală piscină) sau în încălcarea de reacții de presă (-aspirina ca sindromul și altele.).

Testare Hemolysate-agregare este disponibil pentru a efectua în orice laborator, Este nevoie de nici reactivi speciale.

Determinarea micrometoda vizuală a agregării plachetare

Esența ei constă în faptul, care a obținut în silikonirovaniya sânge venos stabilizat volum dublu 3,8 % citrat de sodiu (raport 2,4:0,6 ml), acesta este centrifugat 6 minute la 100 v / / min, și plasma bogată în plachete rezultat se aplică prin 0,02 ml pe lamele de sticlă și se tratează cu același volum de agenți de agregare - ADP, trombinom, Colagenul, noradrenalinom sau ristomitsinom. Concentrațiile finale ale agenți de agregare în plasma de testare ar trebui să fie:

• ADF 0,5*10^-4 mmol / l;
• noradrenalinei - 0,015%;
• trombină - 0,125 U / ml (concentrația de colagen este selectat empiric).

Poate că testul ca inferior, și concentrații mai ridicate de agenți de agregare. Selectarea concentrația poate varia în funcție de activitatea preparatelor de producției diferite inegale și activitatea de probe de diferite, în legătură cu care a pre-potrivi concentrația fiecărui agent în plasma normală.

Un amestec de plasmă agent agregare bogată în plachete se amestecă prin balansarea diapozitiv, pe un fundal întunecat, cu o lupă înregistrat momentul apariției unități ca "furtună de zăpadă". La evaluarea numărul numărate de trombocite din plasma. Așa, ADP-time agregare, crește de la 27-37 secunde la 400 T în 1 l trombocite la 62-75 secunde la 50 T în 1 L, și trombină-agregare - respectiv, 40-52 la 79- 106 de la.

Agregare de înregistrare grafic

Înregistrare grafic de agregare sub influența acelorași agenți de agregare - metoda foarte informativ de studii de trombocite functionale. Efectuate pe sau agregografah.

Când grafica registrul determine nu numai debutul agregare, dar intensitatea acesteia (cel mai mare curba deviației și zona agregatogrammy), prezența prima și a doua val de agregare - atunci când se utilizează concentrații scăzute de epinefrină și ADP (Acesta descrie reacția al doilea val de eliberare), și dezagregare patologice.

Vizuale sau grafic agregarea trombocitelor studiu sub influența ristomycin

Extrem important este agregarea trombocitelor studiu vizual sau grafice sub influența ristomycin. A încălcat acest tip de agregare (ristomycin concentrație finală de 0,8-1,0 mg / ml) la unul dintre cele mai comune diateza hemoragica - angiohemophilia (boala von Willebrand), precum și anomalii de trombocite Bernard-Soulier și unele forme dobândite de sinteză opresiune a factorului von Willebrand (uremie, inhibarea imunitar, și deci. d.).

Determinarea cantitativă a factorului von Willebrand în plasma sanguină

Determinarea cantitativă a factorului von Willebrand în plasma sanguină este realizată pe aglutinare ristomycin suspensie formaldehidă de trombocite normale în diferite diluții ale bestrombotsitarnoy plasmă de test.

Metoda este importantă atât pentru diagnostic și inhibarea sintezei secundare angiogemofnlii acestui factor, și pentru evaluarea severității endoteliale (vasculita, ateroscleroza și altele.) și tendințele de tromboză, în care conținutul de factor von Willebrand în sânge de multe ori crește în mod semnificativ.

Nivelul factorului von Willebrand Aceasta indică abilitatea de endoteliului a sintetiza (aigiogemofilii reduse atunci când) și gradul de înfrângerea vasculita endoteliului, ateroscleroza si alte boli, continua cu înfrângerea de captuseala interioara a vaselor de sange.

Pentru trombocite normale fixe către plasmă bogată în plachete de indivizi sănătoși sunt adăugați pe rând 0,2 % EDTA (0,5 ml 5 ml plasmă) și de 2 min - soluție de fixare (20 ml 40 % formol 1000 tampon fosfat ml 0,2 g EDTA, pH 6,4).

Amestecul a fost menținut la + 4 ° C timp de cel puțin 1 h , după care acesta a fost supus centrifugării, supernatantul a fost îndepărtat, și pelete de trombocite a fost spălat de două ori suspendare soluție (Un volum 3,8 % citrat de sodiu, și cinci volume de soluție de clorură de sodiu izotonică; pH-ul este ajustat la 7,4). Suspendarea pregătită de trombocite normale ambalate la formaldehidă 1 ml și depozitate la -20 ° C. Curba de calibrare este construit folosind diluții de bestrombotsitarnoy plasma normală, exemplarelor care fac parte trombocite formică mixte. Mai mult, amestecul este determinat ristomycin aglutinare. Curba de calibrare este determinată de cantitatea de factor von Willebrand în plasmă de test. Trombocite fixe mai bine conservate prin adăugarea unei soluții de conservare într-o cantitate mică de azidă de sodiu.

Teste, reflectând agregarea spontana a plachetelor

Intr-un studiu de pacienti cu tromboembolism venos sau tendința crescută la tromboză și ischemie a tehnicilor de bază includ teste, reflectând agregarea spontana a plachetelor, t. este. apar în sânge sau plasmă întregi fără adaos de agenți de agregare.

Pentru a identifica acest fenomen cu frotiu de sânge atrage atenția raportul dintre numărul de trombocite situată separat și agregatele acestora, 3-5 compus din trombocite și mai. Acest fenomen este cel mai bine revelat atunci când vizualizați nămolului, rezultând în tseitrifu grele- doping plasma bogată în plachete (20Minute la -30 6000 / Min), stabilizate prin citrat sau EDTA, citrat de sodiu. Cu toate acestea, mai multe rezultate stabile oferă următoarele metode de determinare a agregarea spontană.

Метод Wu-Hoak

Metoda Wu-Hoak bazat pe, sânge de la o venă este scris în două tuburi de testare, într-o soluție care conține EDTA, și în celălalt - un amestec din aceeași soluție cu EDTA 4 % soluție formol. După amestecarea conținutului flacoanelor sedimentează 30 min la temperatura camerei.

În timpul agregate de decantare se stabilească, și trombocitele individuale rămân în supernatant. După decantare, se contorizează numărul de trombocite din supernatant în fiecare dintre tuburile. În mod normal, diferența numărului de trombocite în conținutul celor două tuburi să nu depășească 10-15 %, la agregare spontană ridicată, crește.

Metoda H. ȘI. Tarasova

În metoda H. ȘI. Tarasova (1984) scăderea trombocitelor din sânge total în agregatele cu citrat numărate după 3 minute de agitare, sub agitare, AVC-1 a acestuia la o viteză de 90-100 ori 1 m.

Tubul 0,5 ml de sânge, fost supus agitare, introdus 1 ml 1 % soluție formol în soluție izotonică de clorură de sodiu. Al doilea tub nu este supus controlului agitare, și sângele pe care le conține, prin aceeași încercare 3 Ming introdus, de asemenea soluție formol.

Sânge în ambele tuburi pledează 30 m, după care supernatantul este numărate la numărul de trombocite. În mod normal, diferența de trombocite nu contează de maximum 20 %, la o tendință ridicată de agregare, aceasta crește.

În caz de încălcări în aplicarea testelor de bază, caracterizarea hemostaza trombocite, efectua ca sunt necesare mai multe cercetari. Dintre acestea cele mai importante sunt următoarele.

Studii suplimentare pentru a determina hemostaza trombocite

Studiul numărul de megacariocite din myelogram și măduva osoasă trepanate pentru a studia morfologia acestor celule

O creștere semnificativă a numărului de megacariocite în secțiunile de măduvă osoasă, de obicei combinată cu o creștere mai mult sau mai puțin marcate în numărul de trombocite din sânge, observat la eritremii, hemoragic și trombocitoza esentiala a altor boli mieloproliferative și. Megakariotsitoz moderată, combinate cu trombocitopenie, caracteristică de purpură trombocitopenică (purpură trombocitopenică idiopatică).

Când aplazie și hipoplazie a măduvei osoase de orice origine, a scăzut conținutul megacariocitelor în secțiunile de măduvă osoasă, și numărului de trombocite în sângele periferic.

Parțială amegakariotsitoz observat deficit trombotsitopoetina (o forma rara de trombocitopenie congenitale), prin apariția anticorpilor în sânge antimegakariotsitarnyh, эssentsialynoy partsialynoy aplazie megakariotsitov (poate preceda dezvoltarea de leucemie).

Modificări morfologice și citochimice în megacariocitelor observate în multe thrombocytopathy.

Electron studiu microscopic al ultrastructura trombocite

Electron studiu microscopic al ultrastructura trombocite este importantă pentru diagnosticul multor thrombocytopathy, în care lipsesc sau reducerea foarte mult cantitatea de granule non-proteine ​​de densitate optică ridicată (conținând ADP, Serotonina, catecolamine, calciu și alții.), sau α-granule de proteine, ceea ce este tipic pentru un număr de thrombocytopathy, unite într-un grup de boli ale piscinei stocare, absența bolii sau granule.

Poate fi detectat ca defecte în aparatului contractil (Sisteme de mikrotruboček) lizozomii și trombocite.

La scanarea electronică studiu microscopie de trombocite sau prin utilizarea de sisteme optice Nomarski interferența pot fi detectate defecte de fixare de trombocite pe suprafața externă, lor ei de raspandire, germinare, secreția centralizare și granule, ceea ce este tipic pentru multe tipuri thrombocytopathy.

Determinarea anticorpilor anti-plachetare prin immunoflyuorestsent- Studii AREA în imunoglobulină trombocite suspensie, asociată cu aceste celule – Metoda Dixon

Această metodă permite să se diferențieze complex trombocitopenie imună și non-imun.

Cu toate acestea, formele cele mai pronunțate ale bolii, cu o trombocitopenie ascuțit este inacceptabil, pentru determinarea imunoglobulina legat este necesar suficient de mare (40-50 T în 1 L) numărul de trombocite.

Definirea trombocite autologe de viață marcat

Definirea trombocitopenie trombocite autologe de viață marcat permite să se facă distincția între o durata de viata normala de trombocite în circulație (despre 9 Nopți) formă a bolii si durata de viata scurtat acestor celule.

Primul este cel mai frecvent asociat cu producția de trombocite scazut in maduva osoasa, al doilea - cu moartea lor accelerată, sau cu efectul anticorpilor antiplachetari (autoimună trombocitopenia trombocitelor viață se reduce la câteva ore), sau diminuarea intensivă a celulelor în agregate și trombilor la coagularea intravasculară diseminată sau tromboza masivă (Consumul de trombocitopenie).

Determinarea cantitativă a conținutului de în plasma sanguină înainte și după factorii de agregare plachetare

Determinarea cantitativă a conținutului în plasma sanguină înainte și după numărul agregării plachetare de factori - factorul fosfolipide ale membranei 3, Conținutul a-granule (factor antigeparinovogo 4, b-тромбоглобулина, mitogenic trombocite factor) și granule nonproteinici electronică mare densitate optică (Serotonina, catecolamine, ADF), și hidrolaze acide.

Aceste studii da o idee despre conţinutul în trombocite de structuri şi componentele lor, despre eliberarea ei în plasmă în procesul de agregare, precum şi vnutriso- activarea trombocitelor sudistoy, însoțite randament de trombocite din plasma sanguină cu concentrații crescătoare de componente în ultimele dense și a-granule (factor antigeparinovogo 4, p-thromboglobulin și altele.).

Metode de cercetare cantitativă a factorilor plachetari sunt importante pentru identificarea unui număr de thrombocytopathy (Tulburări granule de conservare și componentele acestora, pareza reacției eliberarea acestor componente, creșterea conținutului de plasmă sanguină din cauza intense în interiorul- adeziune vasculară și agregarea plachetară, și alții.). Mai multe trombotsitopaty caracterizată printr-o scădere a conținutului de factorul plachetar Membrane 3 orice încălcare a disponibilitatea de a participa la coagularea sangelui.

Studiul caracteristicilor biochimice de trombocite și a structurilor lor individuale

Studiul caracteristicilor biochimice de trombocite și a structurilor lor individuale - stroma, granule, mitocondriile și t. d. permit documentarea conectarea diferitelor tipuri de patologie și disfuncția de trombocite cu anumite tipuri de deficit de enzime (defitsitom tsiklooksigenazы, tromboxan etc.), în încălcare a structurii de lipoproteine ​​cu membrana, necesare pentru a comunica cu agenții de agregare, și t. d.

Studii similare sunt disponibile bine echipate doar laboratoare de cercetare și, prin urmare nu se aplică practica generala.