Napadowa nocna hemoglobinuria – Choroba Marchiafava Michele

Napadowa nocna hemoglobinuria - Raczej rzadka postać niedokrwistości hemolitycznej nabyte od, związane ze zmianą w strukturze czerwonych krwinek, granulocytów obojętnochłonnych i płytek. Wpływy z objawów hemolizy, w której znajduje się hemoglobinuria, gemosiderinuriya, podniesienie poziomu w osoczu wolnej hemoglobiny. Choroba jest często utrudnione przez zakrzepicy żył obwodowych i naczyń krwionośnych w narządach wewnętrznych.

Etiologia i patogeneza napadowa nocna hemoglobinuria

Pierwszy opis choroby podano w 1882 g. Bardziej szczegółowo, opisano to w 1928 g.

Wspólna nazwa choroby - napadowa nocna hemoglobinuria (PNG), ale to jest małe odpowiada istoty choroby, Ponieważ nie ma prawdziwe napady i nie zawsze obserwowane hemoglobinurię.

Hemolizy z gemosiderinuriey wyjątkiem APG obserwowano w wielu formach autoimmunologicznej niedokrwistości hemolitycznej, zarówno termicznej, i zimnymi przeciwciałami, w szczególności w formach z hemolizyny cieplnej, a także, w niektórych postaciach dziedzicznej niedokrwistości hemolitycznej, związane z zaburzeniem struktury błon erytrocytów.

Choroba Marchiafava Michele obserwowane w różnym wieku. Powodem zwiększenia zniszczenia krwinek czerwonych wadliwe same erytrocyty.

Czerwone ciałka krwi pacjentów z APG, jak wskazano powyżej, Jest łatwo zniszczone przez uzupełnienie w tworzeniu optymalnych warunków dla jego działań, albo przez zakwaszenie surowicy, albo zwiększając stężenie erytrocytów uzupełnienie około tworząc niskiego stężenia jonów w pożywce sacharozy. Czerwone ciałka krwi pacjentów z powiązanym gazu mają zwiększoną wrażliwość na działanie przeciwciał jako aglutynina, i, szczególnie, hemolysins.

Gdy APG wpływa nie tylko na czerwonych krwinek, ale także leukocytów i trombocytów. Płytek krwi i leukocytów pacjentów z APG mają zwiększoną wrażliwość na skutki dopełniacza jak w serwatce zakwaszania, i w pożywce o niskiej sile jonowej sacharozy. Są one o wiele bardziej wrażliwe na działanie idioagglutinin, niż dawcy płytek krwi i leukocytów. Tak więc, płytki i białe krwinki mają taką samą membranę defektów, w erytrocytach.

Dowiedzieć się immunoglobulin na powierzchni czerwonych komórek krwi, leukocyty i płytki krwi, a tym samym udowodnić własność APG do grupy nie mogą być choroby auto-agresywne metody najbardziej wrażliwe.

Istnieją mocne dowody związane gazu w dwóch różnych populacji krwinek czerwonych. Komórki najbardziej odporne w zdrowej osoby - retykulocyty są najbardziej delikatne w APG. Oznacza to, że, zaburzenia populacji erytrocytów, że po prostu nie przetrwa do terminu wymagalności, podczas gdy starsze dojrzałe krwinki czerwone są zdrowe lub prawie zdrowe społeczeństwo.

IN 1970 badanie Mulaci erytrocytów, stradaûŝej PNG, Znaleziono, zawierać, jak w zdrowym mulat, dwa normalne elektroforetyczne warianty G-6-PD; Opcja A, rozpowszechniona wśród mieszkańców Afryki, i opcja B, charakterystyczne dla populacji Europy. Po pojawieniu się hemolizy, patologicznych erytrocytów zawiera tylko jedną postać G-6-PD, i normalne krwinki czerwone - dwa elektroforezy warianty G-6-PD. Stąd, hemolizą krwinek czerwonych pochodzą z pojedynczej komórki.

Fakt ten z wysoką ufności wskazuje na obecność dwóch populacji czerwonych krwinek, różniące się nie tylko funkcjonalne, jako, np, kiedy microspherocytosis, ale pochodzenie: Innymi słowy, potwierdza obecność nieprawidłowego klonu komórkowego, t. to jest. Mutacja somatyczna. Tożsamość uszkodzeń błony erytrocytów, neutrofili i płytek krwi sugeruje, prawdopodobne, że otrzymał informacje patologiczne komórki, po trzpieniu, t. to jest. Prekursor komórek szpikowych. Nowotworowa wzrost nie jest typowe dla PNG. Opisano tylko kilka przypadków białaczki w tle szybkiego APG. Niemniej jednak, Możemy założyć,, że APG - wariant łagodny nowotwór układu krwionośnego, Dawno nie dając proliferacji guza, Charakterystyczne dla innych rodzajów białaczki.

Mechanizm komplementchuvstvitelnosti w APG jest jasne.

Istotne zmiany w aktywności enzymów glikolizy i cyklu pentozofosforanowy nieobecności.

Gdy APG zmniejsza aktywność erytrocytów acetylocholinoesterazy, najprawdopodobniej z powodu zakłóceń w strukturze błony czerwonych krwinek, ponieważ enzym ten znajduje się na powierzchni membrany i jest łatwo przerwane podczas przegranej. Znany, że inhibitory acetylocholinoesterazy nie miało wpływu na czas przeżycia erytrocytów. Jednakże zmniejszenie aktywności acetylocholinoesterazy w przypadku innych postaci niedokrwistości hemolitycznej, w związku z tym, nie można wyjaśnić zjawisko zwiększonej komplementchuvstvi- nych.

Istnieją dowody, wykazujące wzrost ilości nienasyconych kwasów tłuszczowych, Członkowie fosfolipidów, błony erytrocytów. Możliwe jest, który zmienia się w lipidach - jest tylko odbiciem wszelkie inne zmiany w strukturze błony erytrocytów. W APG białka badaniu pacjenci błony erytrocytów przez elektroforezę w żelu poliakryloamidowym z dodatkiem sodowego siarczanu dodecylu zestaw, że ilość frakcji o zawartości białka były istotnie różne od kontroli.

Główną rolę w patogenezie powikłań zakrzepowych wewnątrznaczyniowej APG przypisany rozpad czerwonych krwinek i czynników krzepnięcia stymulacji, zwolnieniu z czerwonych krwinek w trakcie rozpadu. Gdy APG zniszczone głównie retikulocytów, Może to być, a ta częstotliwość należy wyjaśnić zakrzepowych komplikacji związanych z tą chorobą, w przeciwieństwie do innych postaci niedokrwistości hemolitycznej, towarzyszy ciężkiej hemolizy wewnątrznaczyniowej.

Kliniczne objawy napadowa nocna hemoglobinuria

Choroba często rozpoczyna się stopniowo. Pacjenci skarżą się na osłabienie, złe samopoczucie, zawroty głowy. Czasami subikterichnost twardówki. Często pierwsze zarzuty są: bóle głowy, ból brzucha z różnych lokalizacji. Tendencja do wzrostu zakrzepicy powoduje pacjenta do lekarza. Hemoglobinuria są rzadkością jest pierwszym objawem choroby, w niektórych przypadkach może nie występować w APG. W niektórych przypadkach wydaje się, pierwsze 2-3 lata, a nawet po 10 lat po rozpoczęciu.

Jedną z charakterystycznych cech APG - napady bólu brzucha. Lokalizowanie może być bardzo różne. Poza okresem kryzysu ból brzucha, zwykle, Nie obserwowano. Często łączy wymioty. Najprawdopodobniej, ból brzucha u pacjentów z APG związane z zakrzepicy krezkowych.

Zakrzepicę naczyń obwodowych (częściej - żylnych kończyn górnych i dolnych, naczyń nerkowych - rzadko) jako charakterystyczny objaw napadowa nocna hemoglobinuria. W 12 % Obserwowano zakrzepowe zapalenie żył pacjentów APG. Powikłania zakrzepowe są najczęstszą przyczyną zgonów w tej chorobie.

Obiektywne badania pacjenta często przyciąga uwagę bladość nieco żółtaczkę. Często zdarza się, nalany wygląd twarzy, czasem nadmierne pełnia. Niewielki wzrost śledziony i wątroby, chociaż nie jest to typowe dla PNG.

Dla napadowa nocna hemoglobinuria charakterystycznych objawów hemolizy, najważniejsze z których - wzrost w osoczu wolnej hemoglobiny. Funkcja ta okresowo obserwuje się u prawie wszystkich pacjentów APG. Jednakże wysokość wzrostu w wolnej hemoglobiny w osoczu jest zmienny i zależy od, w każdym okresie choroby badanych. W okresie kryzysu, liczba ta znacznie wzrasta, Odnotowano również wzrost liczby metalbumina plazmowego.

Poziom w osoczu wolnej hemoglobiny jest zależna od stopnia hemolizy w rzeczywistości, Zawartość haptoglobiny, stopień filtracji hemoglobiny z moczem, a szybkość zniszczenia zespolonej hemoglobiny - haptoglobina. W przypadku niewielkiego stopnia hemolizy od poziomu w osoczu wolnej hemoglobiny byłoby niewystarczające dla jego filtracji przez filtr nerek. Tak więc hemoglobinurię nie jest obowiązkowa objawem. Po przejściu przez kanaliki nefronów przydzielonego hemoglobiny częściowo zniszczonych i zdeponowanych w nabłonku cewek nerkowych. To jest przyczyną wydalania z moczem hemosyderyna.

Hemosyderyna wydalane z moczem w ogromnej większości pacjentów z napadową nocną hemoglobinuria. Czasami to nie pojawia się natychmiast gemosiderinuriya. Jest to ważny, ale nie specyficzne dla znaków APG choroby.

Wyniki badań laboratoryjnych w napadowa nocna hemoglobinuria

Zawartość hemoglobiny u pacjentów APG wynosi od 1,86- 3,1 mmol / l (30-50 G / l) i jeszcze niżej do normy w remisji.

Liczba czerwonych krwinek u pacjentów z APG zmniejsza się w zależności od poziomu obniżenia hemoglobiny. Indeks Kolor długi okres pozostaje bliski jedności. Gdzie, Jeśli pacjent traci znaczną ilość żelaza w moczu jak hemosyderyna i hemoglobiny, poziom żelaza jest stopniowo zmniejszana. Niski wskaźnik barwy obserwowane u około połowy pacjentów. Niektóre z nich mają podwyższony poziom hemoglobiny P, zwłaszcza w okresie zaostrzenia.

Znaczna część pacjentów retikulocytów wzrosła, ale stosunkowo niskie (2- 4 %). Liczba leukocytów APG w większości przypadków zredukowana. U wielu pacjentów, to jest 1,5-3 F w 1 l, ale czasem zmniejsza się do 0,7-0,8 F w 1 l. Leukopenia, zwykle, tam zmniejszenie liczby granulocytów. Czasami liczbę leukocytów we krwi w APG prawidłowym lub wysokim - do 10-11 T 1 l.

Gdy APG zmniejszył aktywność fagocytozy neutrofilów.

Małopłytkowość również często obserwowane w APG, jednak stan funkcjonalny płytek z normalnym. Prawdopodobnie, Wyjaśnia to rzadkość powikłań krwotocznych w tej chorobie, Mimo, że liczba płytek jest czasem obniżona w znacznym stopniu - 10-20 G 1 l. Zazwyczaj większość pacjentów płytek w T 50-100 1 l. Normalna liczba płytek krwi nie wyklucza rozpoznania napadowa nocna hemoglobinuria.

Badanie szpiku kostnego bezobjawowy, ogólnie charakterystyczne niedokrwistości hemolitycznej - nudny czerwony kiełków hematopoezy w normalnej ilości myelokaryocytes. Liczba pacjentów występuje nieznaczny spadek liczby megakariocytów.

Poziom żelaza w surowicy w APG To zależy od stadium choroby, wewnątrznaczyniowej hemolizy i stopień aktywności hematopoezy. Gdzie, Jeśli pacjenci mają uporczywe lub częste hemoglobinuria, a także ciągłego gemosiderinuriya, Zawartość żelaza w organizmie, i stąd, i maleje w surowicy, czasami bardzo znacznie. Czasami APG zaczyna się oznaki niedorozwoju. Zapasów żelaza w organizmie pacjenta, w zależności od APG, jedna strona, straty żelaza w moczu, a z drugiej strony natężenie erytropoezy. Dlatego niedobór żelaza nie może być uznane za diagnostyczne napadowa nocna hemoglobinuria.

Poziom stężenia bilirubiny w surowicy w APG W większości przypadków prawidłowe lub podwyższone nerezko, głównie ze względu na pośrednie. Średnio, bilirubina jest 22-28 mmol / l. Należy wziąć pod uwagę,, że rozpad hemoglobiny powstaje kompleks wewnątrznaczyniowej hemoglobina-gaptoglobinovy, i które potem rozkłada się z wytworzeniem bilirubiny.

U niektórych pacjentów choroba zaczyna się od obrazu PNG niedokrwistość aplastyczna.

Rozpoznanie napadowa nocna hemoglobinuria

Gdy napadowa nocna hemoglobinuria utrudniała strukturę błon erytrocytów, co przejawia się zwiększoną wrażliwością na działanie jego dopełnieniem. Ta zwiększona czułość jest wykrywane przy użyciu sondy Hema, Testy więcej sacharozy lub wrażliwych. Jednakże, w niektórych przypadkach, zwłaszcza w postaci hemolizyny autoimmunologiczna anemia hemolityczna, Próbka sacharoza może dawać fałszywie dodatnie wyniki. Hemolizyny są zamocowane na powierzchni swoich komórek erytrocytów w obecności dopełniacza sacharozy w medium je zniszczyć, podczas gdy typowe zniszczenia dopełniacza APG komórek bez narażenia na przeciwciało.

Aby wyeliminować formy hemolizyny badań autoimmunologicznej niedokrwistości hemolitycznej hemolysins zalecane zgodnie z powyższym sposobem i za pomocą przekroju sacharozy z próbki surowicy pacjenta i czerwonych ciałek krwi dawcy odnogruppnoy, a nie odwrotnie, w sposób zwyczajowo. Gdy APG bezpośredniego testu jest pozytywny, i krzyż - negatywny. Gdy forma hemolizyna AIHA może być postrzegane jako pozytywny, i cross-ujemne próbki. W tych przypadkach celowe jest użycie trzeciego wykonania testów sacharozy - przy użyciu zarówno surowica, i czerwone krwinki pacjenta. Stopień hemolizy w tym przykładzie wykonania, minimalna i maksymalna w APG w postaci AIHA hemolizyny. Wyjaśnić taki wynik może być tylko bardzo specyficzne przeciwciała w surowicy pacjenta tworzą hemolizyny autoimmunologicznej niedokrwistości hemolitycznej wobec antygenu, bogaty w erytrocytów pacjenta, niż dawcy krwinki czerwone. Bezpośredni próbka sacharoza jest dodatni u tych pacjentów jest związane, prawdopodobnie, z obecnością przeciwciał przeciwko ustalonym na erytrocytach.

Zidentyfikuj hemolysins autorem agregatgemagglyutinatsii i innych pomóc w prawidłowej diagnozy. Nie może on być stosowany jako donor surowicy pacjenta, wynik jak w przypadku zawartości w nim hemolizyny może być fałszywie dodatni. Może wystąpić Negatywny wynik, Jeśli jako źródło dopełniacza surowicy APG pacjenta lub surowicy u pacjentów z marskością wątroby, revmatoidnыm poliartritom, toczeń rumieniowaty układowy i innych chorób, w którym zmniejszona poziom dopełniacza. Sacharoza próbki i próbka Hema stają się mniej wyraźne, Jeśli chwytania krwi pacjenta jest stosowana jako antykoagulant, heparynę, zamiast cytrynianu sodowego. Po hemolitycznej kryzysu intensywności próbki HEMA i sacharozy Próbka zredukowana, ale nie stać się ujemne.

Oznaczanie wolnej hemoglobiny w osoczu przez Bing w modyfikacji i Derviz Byalko gdy napadowa nocna hemoglobinuria

Metoda ta jest oparta na zdolności hemoglobiny do reakcji z benzydyny w środowisku kwaśnym, w obecności nadtlenku wodoru, w celu wytworzenia koloru zielonego, przechodząc najpierw w niebieski, wtedy czerwono-fioletowy. Intensywność zabarwienia jest proporcjonalna do ilości hemoglobiny.

Odczynniki.

1. Buforu octanu 0,1 M, pH 4,6: 27,22 g octanu sodowego rozpuszcza się w 1 l wody (0,2 M roztworu); W innej kolbie przygotowano 1 l 0,2 M roztwór kwasu octowego; mieszany 480 Numer ml 1 i 520 Numer ml 2.
2. Nadtlenek wodoru 0,3 % rozwiązanie (przygotowane przed użyciem przez rozcieńczenie w perhydrol 100 czas).
3. Chlorowodorek Benzydyna 0,1 % rozwiązanie: 50 mg solnego benzydyny rozpuszcza się w 35-40 ml buforu octanowego, Roztwór ogrzewa się w 80 ° C w łaźni wodnej, a po ochłodzeniu nastawia się buforem octanowym 50 ml.

Przesączyć ciemno butelce i przechowywano w temperaturze pokojowej nie więcej niż 7 dni. Odczynnik Pozheltevshiy nieodpowiedni, z szybkim ciemnienie należy rekrystalizacji z alkoholu benzydyny.

Metoda.

Próbki krwi z żyły w suche igły krzemowego rury, zawierające dowolny antykoagulant. Antykoagulantem krwi wirowano w większości 10 minut w 1500 / Min. Po oddzieleniu osocza ponownie wirowano 10 minut w 8000 obr / min w celu pastylkowania białych krwinek.

Wlać rury 4 ml buforu octanowego, 2 ml nadtlenku wodoru, 2 ml i benzydyna 0,04 ml badanego osocza zmieszano i pozostawiono 3 m, Następnie wlewa się do długości drogi optycznej kuwety 1 cm i fotometryczne przeciwko rozwiązania kompensacyjnego na zielonym filtrem. Intensywność koloru niebieskiego wzrasta w ciągu 4-5 min, tak pomiaru powtarza się 3-5 razy z rzędu i rejestruje maksymalną odczyt. Po 5-6 minutach, zabarwienie surowicy staje się fioletowo-brązowy odcień, a gęstość optyczna zaczyna maleć. Z dwóch zidentyfikowanych najlepszych wyników ma średnią gęstość optyczną.

Rozwiązanie kompensacja, składający się z 6 ml buforu octanowego, 8 ml nadtlenku wodoru, 3 ml benzydyna i 0,06 ml izotonicznego roztworu chlorku sodowego, wytwarza się jednocześnie z próbką.

Wyjście krzywa kalibracji roztworu hemoglobiny. We krwi, podjęte w celu uzyskania roztworu hemoglobiny, mierzona przez jego treści (kolorymetr w refraktometru medycznego lub medycznej). Do roztworu hemoglobiny o stężeniu 1 g / l, Roztwór niższym stężeniem: 0,005,0,025, 0,05, 0,1 i 0,2 g / l. Z każdego powstałego roztworu dodano 0,04 ml mieszaniny 4 ml buforu octanowego, 2 ml benzydyna i 2 ml nadtlenku wodoru.

Podstawowym Hemolizat rozwiązanie (1 g / l) dla krzywej kalibracji muszą być przechowywane w chłodzie, i roztwory robocze o mniejszej koncentracji powinien być przygotowany bezpośrednio przed badaniem.

Normalnie, w 1 l osocza krwi zawiera 0,0005 mmol / l (0,01-0,04 G) Hemoglobina.

Określenie hemosyderyna moczu z napadowa nocna hemoglobinuria

W rozpadu hemoglobiny żelaza to absorbuje nabłonka kanalików nerkowych i jest częścią hemosyderyna. Złuszczone komórki nabłonka z kanalików nerkowych w tych przypadkach zawierają ziarno hemosyderyna.

Dokładne badanie osadu moczu po wirowaniu hemosyderyna ziarna widać bez specjalnych plam. Jednakże, wyróżnia się wyraźniej w kolorze Metoda Perls.

Metoda.

Po odwirowaniu moczu jej górną warstwę odessano, Do pozostałości dodano świeżo przygotowany roztwór 1 % żelazowo-a 1 % Kwas chlorowodorowy (zmieszać równe objętości 2 % kwas solny i żelazocyjanku). Po 10 minut po wymieszaniu, mieszaninę odwirowuje się, a osad przeglądania. Ziarna hemosyderyna barwiony na niebiesko.

Określenie spektrofotometria plazmowy methemalbumin

Odczynniki.

1. Bufor fosforanowy izoosmotycznym (pH 7,4): mieszany 18 ml 0.15 M roztwór diwodorofosforanu sodowego (24,4 d ЫaN2R04 1 l wody) i 82 ml 0,15 M roztworu wodorofosforanu disodowego (21,3 ─ NaH₂PO₄ na 1 l wody).
2. Wodorosiarczyn sodowy.
3. Wodorotlenek sodu 1 M.
4. Roztwór albuminy surowicy ludzkiej (40 g / l).
5. Roztwór heminy (5 mg / 100ml); wytwarza się bezpośrednio heminy przez rozpuszczenie w niewielkiej ilości wodorotlenku sodowego, i wtedy: doprowadzenia do objętości roztworu albuminy surowicy.

Metoda.

K 2 ml surowicy lub osocza dodaje się 1 ml roztworu zabuferernogo izoosmotycznej, pH 7,4. Mieszaninę wirowano 30 przy 1200-1500 m / min. Oznaczyć gęstość optyczną w 569 nm. Następnie rozcieńczone osocze umieszczano we fiolce i dodano w przybliżeniu 5 mg suchej wodorosiarczan sodowy. Przez 5 min re-zmierzyć absorbancję przy tej samej długości fali. Różnica pomiędzy tymi dwiema wartościami gęstości optycznej odpowiada gęstości optycznej methemalbumin. Methemalbumin stężenie określa się z wykresu wzorcowego.

Krzywą kalibracji oblicza się w następujący. Roztwór heminy albuminy przeniesiono do probówki testowej w ilości 0,01 do 0,1 g / l (z 0,2 do 2 ml). W tych rur, znamienny tym, że ilość soli jest mniejsze 2 ml, dodaje się do 2 ml roztwór albuminy. Następnie dodaje się 1 ml fosforanu izoosmotycznej buforowej. Mieszaninę odwirowuje się przy 1500 / Min, po czym mierzy się gęstość optyczną. Różnica między pomiarami wykreślono w zależności od liczby heminy.

Normalnie gemalbumin plazmowy nieaktywny. On pojawia się w przypadku hemolizy, np, kiedy napadową formą hemoglobinurię hemolizyna lub autoimmunologiczna niedokrwistość hemolityczna, i w przypadku braku haptoglobiny, kiedy hem jest związana z albuminą.

Hema próbka przy napadowa nocna hemoglobinuria

Hema próbki oparte na erytrocytach u pacjentów z obniżoną odpornością APG spadek pH w podłożu w obecności świeżej dopełniacza surowicy.

Odczynniki.

1. Roztwór kwasu chlorowodorowego 0,2 n.
2. Roztwór amoniaku 0,04 %.

Metoda.

Z Wiednia wziąć 5- 6 ml krwi. Jak stosuje się przeciwzakrzepowego cytrynian sodowy lub szczawian. Jednocześnie, 15-20 ml krwi pobrano z dawcy o tej samej grupie. Oddzielenie osocza od krwinek czerwonych w krwi pacjenta i donor.

Surowicy dawcy nalał 0,5 Sześć ml probówki, dwa z nich zostały umieszczone na 20 minuty w łaźni wodnej o temperaturze 56 ° C dlya inaktywacji uzupełnieniem sыvorotki, Cztery probówki odstawia się w temperaturze pokojowej. Czerwone krwinki pacjenta przemyto dwukrotnie izotonicznego roztworu chlorku sodowego, zawieszono w tym samym roztworze o proporcji 1:1.

Projekt badania przedstawiono w tabeli.

Zawartość każdej probówki mieszano, umieszczone na 1 godziny w piecu w temperaturze 37 ° C, a następnie wirowano.

Do wykroju 0,05 m krwinek czerwonych pacjenta i dawcy dodaje się oddzielnie do 0,55 ml izotonicznego roztworu chlorku sodowego.

Po odwirowaniu, stopień hemolizy może być określona wzrokowo. W celu oszacowania stopnia hemolizy w każdej probówki 4,7 ml 0,04 % roztworu amoniaku 0,3 ml warstwy powierzchniowej, i rur półfabrykaty - 0,3 ml oryginalne surowicy.

Aby zidentyfikować 100 % do hemolizy 4,7 ml roztworu amoniaku dodano 0,3 ml zawiesiny krwinek czerwonych (0,05 ml krwinek czerwonych u pacjenta 0,55 ml izotonicznego roztworu chlorku sodowego).

Gęstość optyczna roztworu mierzy się przy medycznych pomiarów kolorymetrem i porównano z gęstością optyczną roztworu bez erytrocytów amoniaku:

% gemoliza =((IS₁-IS₂)/IS₃)*100;

gdzie E₁ - Gęstość optyczna w próbce testowej; IS₂- Gęstość optyczna półwyrobu; IS₃- Absorbancji 100 % gemolizata.

Zwykle nie więcej niż hemolizie 5 % erytrocyt.

Hema próbę uznaje się za pozytywny, jeżeli, Jeśli hemolizowane więcej 6 % erytrocyt.

Gdy napadową formą hemoglobinurię hemolizyna i autoimmunologiczna niedokrwistość hemolityczna hemolizowane czasami nawet do 50-80 % erytrocyt. W przypadku tych chorób charakteryzujących się obecnością hemolizy tylko neinaktivirovannoy surowicy (Numer rury 2). Jeśli inaktywacja surowicy nie wyklucza hemolizę (Numer rury 3), Możesz założyć istnienie innych form niedokrwistości hemolitycznej lub błąd w ustawieniu badań.

Dla zniszczenia krwinek czerwonych u pacjentów z napadową nocną hemoglobinurią w pH pożywki 6,5 To wymaga obowiązkowej obecności dopełniacza, zawarte w świeżej surowicy.

Sacharoza próbka na napadowa nocna hemoglobinuria

Sacharozy Próbka opiera się na, że erytrocyty pacjentów z napadową nocną hemoglobinurią i stanowią hemolizyny autoimmunologicznej niedokrwistości hemolitycznej zniszczeniu w roztworze o niskiej sile jonowej w obecności dopełniacza.

Odczynniki.

1. Sacharoza: 9,42 Sacharozę rozpuszcza się w 0,005 M bufor fosforanowy; pH 6,2 (91 ml 0,005 МNaH₂PO₄ i 9 ml 0,005 M Na₂HPO₄).
2. Odczynnik do określania stężenia hemoglobiny: 200 mg czerwona sól rozpuszcza się w krwi 1 l wody destylowanej, dodano 0,5 ml acetonu, cyjanohydryny.

Metoda.

Krew pobierana jest z żyły pacjenta do dwóch probówek - suche (8-10 Ml) i antykoagulant (2- 3 ml). Stosowanie jako przeciwzakrzepowy cytrynian sodowy. Czerwone krwinki z rur przeciwzakrzepowe dwukrotnie przemyto roztworem chlorku sodu, izotoniczny. Po przemyciu i odessanie supernatantu do 0,4 ml krwinek czerwonych dodano 0,25 ml izotonicznego roztworu chlorku sodowego.

Jednocześnie pobiera się krew od dawcy o tej samej grupie krwi do dwóch probówek - z antykoagulantami (2-3 Ml), traktuje się go z tą samą, Krew pacjenta, i suche (8- 10 ml) w surowicy. Po oddzieleniu od dawcy osocza 0,5 ml jest umieszczona w kąpieli wodnej w temperaturze 56 ° C 30 min Dlya uzupełniają inaktywacji. W surowicy krwi dawcy należy podjąć w dniu doświadczenia i przechowywać w zimnie. Schemat badania przedstawiono w Tabeli.

Probówki umieszcza się w inkubatorze w temperaturze 30 minut w 37 ° C, i wirowano przez 10 minut w 2000 obr / min, a ocena stopnia hemolizy.

W tym celu wlewa do fiolek 3,4 ml odczynnika do oznaczania stężenia hemoglobiny i 0,6 ml przez- warstwa osadu z każdej probówki. Przez 10 min mierzy absorbancję roztworu w probówkach z 540 nm refraktometrów medyczne (spektrofotometr) lub kolorymetr medyczne (Fotokolorymetry FЭK-M) gdy filtr zielony, Porównując dane uzyskane przy gęstości optycznej roztworu do oznaczania hemoglobiny. To trwa średnią z dwóch odczytów każdego eksperymentu. Obliczenie jest wzorem:

% hemoliza in vitro =((IS₁-IS₅)/(IS₈-IS₅))*100

gdzie E₁ - Gęstość optyczna roztworu liczby probówek 1; IS₅ - Gęstość optyczna roztworu liczby probówek 5, konieczne, aby uniknąć poplamienia surowicy; IS₈ - Gęstość optyczna roztworu liczby probówek 8, gdzie było 100% hemolizy.

Na próbie cross-sacharozy (Numer rury 2) 100%-Najpierw studiował w liczbie hemolizy in vitro 7.

Ocena wyników.

Zwykle ilość in vitro 1, zawierających czerwone krwinki z badanych pacjentów, Hemoliza nie przekracza 2-3 %.

Gdy napadową formą hemoglobinurię hemolizyna i autoimmunologiczna niedokrwistość hemolityczna (Aiga) Ten hemolizy in vitro przekracza 6 % Probówki - № 4, zawierające czerwonych krwinek pacjenta i surowicy dawcy inaktywowane, Numer rury 5, zawierające czerwonych krwinek i dawcy surowicy, i numer 6, zawierających surowicę zamiast izotoniczny roztwór chlorku sodu, - hemoliza nie powinna przekraczać 1-2 %.

Krzyż próbka sacharoza (Numer rury 2) gdy forma hemolizyna AIHA zwykle pozytywne (w obecności hemolizyny w surowicy), ale może być także ujemna. W wielu vitro 3 (Czerwone ciałka krwi i surowicy pacjentów) hemoliza obserwuje się zarówno w APG, w postaci AIHA hemolizyny. Gdy napadową hemoglobinuria maksymalna hemolizy jest wykrywany w konwencjonalnej próbce sacharozy (Numer rury 1), mniej widoczny - w próbce własnych krwinek czerwonych pacjenta (Numer rury 3); brak hemolizy w przekroju próbki sacharozy (Numer rury 2).

Gdy forma hemolizyna AIHA Najbardziej widoczne hemolizy jest wykrywane w próbce z własnym surowicy krwi i krwinek czerwonych pacjenta (Numer rury 3), nieco mniej wyraźny - w wielu probówki 1. W wielu vitro 2 często obserwowane hemoliza, ale jego brak nie wyklucza AIHA formularz hemolizyna.