Badanie krzepnięcia krwi

Metody do badania układu krzepnięcia krwi obejmują następujące grupy:

1. Orientacyjny (ogólny), co daje wyobrażenie o stanie całego kaskady krzepnięcia jako całości i jego poszczególnych etapach (rejestracja można zrobić wizualnie lub poszczególnych urządzeń - koagulografa, tromboelastografia i innych.);
2. różnicowania poszczególnych czynników deficyt - badania krzepnięcia naprawcze, Próby mieszania badania osocza w osoczu krwi u pacjentów ze znaną znany niedobór niektórych czynników;
3. Oznaczenie ilościowe poszczególnych składników na ich aktywności funkcjonalnej (badania krzepnięcia, badania i inne substraty chromogenne) i (lub) markerów immunologicznych;
4. Identyfikacja wewnątrznaczyniowej aktywacji krzepnięcia krwi i fibrynolizy z funkcjonalnych lub markery molekularne Taka aktywacja - określenie krążących aktywowane czynniki krzepnięcia, Degranulacji płytek wyrobów, rozdzielanie składników krzepnięcia krwi, lub ich metabolity, Pojawienie się nowego markera aktywacji czynników antygenowej i ich kompleksy, przyspieszone metabolizm oznaczone elementy krzepnięcia krwi (skrócić okres ich półtrwania w obiegu).

Tak więc, przy ocenie stanu układu krzepnięcia krwi zastosowania zarówno własnych Metoda krzepnięcia (laboratoryjne i instrumentalne), stanowiących podstawę procesu diagnostycznego, i immunologiczny, Promieniotwórczych i innych rodzajów badań. W wielu przypadkach elementy mogą być określone jako aktywność funkcjonalną, i immunologicznie - zawartość odpowiedniego antygenu we krwi. Jednoczesne stosowanie tych technik pozwala nam odróżnić formy patologii, związane z brakiem syntezy odpowiedniego czynnika krzepnięcia (W tym przypadku sama jak obniżona aktywność funkcjonalną, i ilość antygenu), i pleśń, w którym syntetyzowana cząsteczka jest czynnikiem, ale to jest nienormalne i funkcjonalnie uszkodzony.

Odnosi się do liczby pierwszych form odpowiedni współczynnik dodaje się znak "-" (np, VIII-, IX- i T. d.), a drugi - znak " " (np, VIII , IX ).

Szorstki (ogólny) badania krzepnięcia

Oznaczanie czasu krzepnięcia

Oznaczanie czasu krzepnięcia (Korzystnym sposobem Lee-White) - Długo stosowane bystrovypolnimy (przy łóżku) Badanie orientacyjne, pozwala zidentyfikować znaczące zaburzenia krwawienia, związane z deficytem czynników krzepnięcia (oprócz czynnika VII) lub działanie leków przeciwzakrzepowych i fibrynolitycznego. Jest on używany jako przewodnik dla testu i kontroli nad heparyną, Eliminacja heparyny siarczan protaminy. Test jest stosunkowo niska czułość, jego dane są podzielone tylko na wyraźne zmniejszenie czynników krzepnięcia w osoczu (poniżej 4-5 %), a zatem nie nadaje się do wykrywania łagodnych postaciach hemofilii A i B, jak również zaburzenia krwawienia, gdy angiohemophilia, Niedobór czynnika XI, prekalikreiny i kininogen wysokiej masie cząsteczkowej. Z tych powodów, test nie może być stosowany u pacjentów przedoperacyjnie: przy normalnym teście wydajności (5-10 Minut) mogą wystąpić obfite krwawienie pooperacyjne.

Czas powtórnego uwapnienia plazmowe

Czas powtórnego uwapnienia plazmowe - niestandardowe niska czułość testu, mniej wiarygodne do wykrywania hypocoagulation, niż cały czas krzepnięcia krwi. Nie można zalecać do diagnozowania zaburzeń hemostazy.

Częściowej tromboplastyny ​​po aktywacji, plazmowe

Częściowej tromboplastyny ​​po aktywacji, plazmowe (APTT, Test kaolin kefalinovыy) - Wysoka czułość metody, ukazując proces krzepnięcia krwi po uruchomieniu mechanizmu wewnętrznego. Selektywnie wrażliwe na niedobór czynników krzepnięcia w osoczu (ponieważ niedobór płytek krwi i czynników 3 Płytek kompensowane podawać zewnętrznie lub Kefalonia eritrofosfatidom).

Jest on używany do monitorowania leczenia heparyną, przedoperacyjnego badania pacjentów i tak dalej. d. Wartości standardowe zależy od użytych próbek kephaline, W większości przypadków do 37-50 (optymalnie - od 37-45).

Kaolin plazmowy czas

Kaolin podczas osocza - test, Podobnie jak w poprzednim, bez dodawania kephaline plazmowego (eritrofosfatida), przy czym jest to nie tylko dla wrażliwych niedoboru czynników krzepnięcia osocza, a także z braku czynnika płytkowego 3 Płytek krwi. Szacunkowa ocena aktywności tego czynnika może być wykonane przez porównanie czasu osocza badanego kaolin o wysokiej i niskiej zawartości płytek (Norma - 57-70 z).

Nie zaleca się korzystania z komponentów fosfolipidów, dając w APTT czasy krzepnięcia równa 55 s i więcej, ponieważ znacznie zmniejsza dokładność i powtarzalność testu, włącznie z ilościową czynnika VIII i IX.

Silikon w osoczu w czasie

Silikon czas plazmy - Czas powtórnego uwapnienia plazmowe, w wyniku czego igła silikonirovaniya, mikroprobówkach, pipetok, t. to jest. z minimalnym aktywacji kontaktowej. Test jest wrażliwa na stan nadkrzepliwości, wewnątrznaczyniowej aktywacji fazy kontaktowej rozruchu (czynniki XII i XI), Jednak to naruszenie objawia wyraźniej przez określenie czasu silikonowy krzepnięcia krwi (na podstawie Lee-Białej procesu rejestracji lub tromboelastograficheskoy kuwety silikonowego).

Wartości standardowe zależy od badań silikonowej i zdecydowany krwi zdrowych ludzi, dla każdego z jego oddzielnej próbki. Przy wyborze silikonu najlepiej, która rozciąga się w największym stopniu czasu krzepnięcia (osocze).

Protrombiny (tromboplastyny) Czas w osoczu

Protrombiny (tromboplastyny) Czas w osoczu (Szybki czas, Wskaźnik protrombinowy) charakteryzuje szybkość krzepnięcia osocza krwi uwapniona uruchomienia procesu do urządzenia zewnętrznego, t. to jest. dodanie ludzkiego mózgu tromboplastynę (lub królika).

Aktywny tromboplastyny znormalizowany mieszanych próbek prawidłowych (test) osocze. Najczęściej używane aktywności tromboplastyny ​​z 18/12 (w klasycznej techniki z Kvika- 12-13). Słabsze tromboplastyny, większy błąd metody.

W ramach normalnego czasu protrombinowego Badanie osocza ujawnia izolowany lub skumulowany deficyt kompleksu protrombiny - VII, X, V и II, z których trzy czynniki (VII, X и II) K-vitaminozavisimy a ich aktywność zmniejsza się pod wpływem antykoagulantów pośrednich. W związku z tym testy protrombiny ma zasadnicze znaczenie w kontrolowaniu kumaryny dawkowania (neodikumarin, lub pelentan, sinkumar et al.) i inne leki w tej grupie (fenilin).

Czas protrombinowy jest normalne z deficytem czynników wewnętrznego mechanizmu aktywacji protrombinazy - czynnik XII, XI, IX, VIII (t. to jest. wszystkie rodzaje hemofilię i wady Hageman), oraz niedobór prekalikreiny i kininogenu o wysokiej masie cząsteczkowej (VM kininogena)

W literaturze różnych Oznaczenie wyników badań protrombiny. Najbardziej celowe określenie badania czasu protrombinowego i osocze kontroli w sekundach (podając informacje i aktywność tromboplastyny ​​używany). Czasami używam stosunek tych dwóch wartości, t. to jest. indeks (Badanie osocza PV, z ,)/(Plazmowe kontrola MF, z), (Stawka 0,9-1,1).

Inną formą oceny tego wskaźnika, która jest najczęściej stosowana w laboratoriach, Wskaźnik protrombinowy jest obliczenie wartości procentowej, o zestawianiu opinię arytmetyczne proporcje (normy - 90-110%), Jednak ta kalkulacja jest nie tak, bo między stężeniem czynników krzepnięcia i nie ma czasu krzepnięcia arytmetyczny, zależność logarytmiczna. Oprócz, Test protrombiny jest czuły tylko na zmniejszenie czynników krzepnięcia poniżej 50 % ich normalnej wielkości. Na mocy tego używać określenia celowe Procent przez wskaźnik protrombinowy krzywej rozcieńczania (1:2, 1:4, 1:8 i T. d.) mieszane próbki normalnego osocza. Taka krzywa jest zbudowany raz tromboplastyn różnej aktywności początkowej (z 12 do 18 z) i jest określana przez wskaźnik protrombiny w badanych pacjentów. Zaletą tej techniki polega na tym,, że wyniki wszystkich badań, w tym dynamikę działa na różne dni, Dokument ten nie odnosi się do różnych przypadkowych próbek prawidłowej surowicy krwi, i średnio takie same parametry standardowe, powodując znaczne zmniejszenie błędów metody. Indeksy, pobrane poprzez proporcji i rozcieńczania krzywej normalnego osocza, nie odpowiadają sobie nawzajem. Należy o tym pamiętać podczas monitorowania działanie leków przeciwzakrzepowych pośrednich, Na indeks spadnie konwencjonalna 50 % odpowiada w przybliżeniu zmniejszenie rozcieńczenia krzywej wskaźnika 25-30% • W związku z tym, należy zawsze określić analizy, Jak to stosunek protrombiny, jakie są standardy wydajności dla działalności tromboplastyny.

Czas trombiny w osoczu

Czas trombiny w osoczu, t. to jest. Czas krzepnięcia w osoczu cytrynianowym dodając do niej standardowego aktywności trombiny, Jest ważnym testem dla oceny końcowej fazie krzepnięcia krwi. Włączenie tego wskaźnika jest ważne dla prawidłowej interpretacji wszystkich innych testów krzepnięcia, Za naruszenie końcowej fazie krzepnięcia krwi musi nieuchronnie prowadzić do wydłużenia czasu krzepnięcia w każdym z powyższych metod.

W większości przypadków, w teście tym stężenie trombiny używane roztworu trombiny, które po zmieszaniu z równą objętością koagulacji osocza do otrzymywania 12- 18 z, ale w uznając disfibrinogenemy używane i słabsze stężenia (co prowadzi do zmniejszenia 30-35 z).

Czas trombiny - Ważny wskaźnik diagnostyczny, naruszenie jego obserwowano wrodzone, i kiedy uzyskał powszechne (wtórny) gipoprotrombinemii, w większości disfibrinogenemy, a także pod wpływem heparyny, Fibrynolizy wyrobów (PDF) i inne inhibitory samodzielnego montażu i antytrombin monomerów fibryny. Z racji tego czasu trombinowego w pierwszym miejscu i bardziej podzielone w ostrych i podostrych DIC, który odgrywa ważną rolę w szybkiej diagnozy tej patologii.

Test Autokoagulyatsionny

Test Autokoagulyatsionny (Pozwolenie) - Bardzo wrażliwe dwuetapowy, Opisuje proces krzepnięcia krwi, kiedy to się zaczęło wewnętrzny mechanizm. Jak APTT, Test nie jest wrażliwy na niedobór czynnika VII, ale w tym samym czasie jego świadectwo nie zależy od zawartości fibrynogenu (фактора I) w badanej surowicy, czym różni się od wszystkich innych próbek orientacyjnych krzepnięcia.

Kolejna zaleta polega na ACT, że badane rozcieńczona krew, co znacząco zwiększa czułość testu niedoboru czynników krzepliwości oraz, Oprócz, Realizacja ACP nie wymaga użycia kaolin kephaline, od standaryzacji aktywacji styku fosfolipidów i osiągnąć własne Hemolizat badane czerwonych krwinek.

PODSUMOWANIE AKP jest, w tym 2 ml roztworu hipotonicznego (0,222 %) Chlorku wapnia jest dodawana 0,1 ml badania krwi.

W tym hemolizatu wapniowym mieszanina powstaje trombina i protrombinazy, Aktywność określa się przez kolejne dodawanie 0,2 ml tej mieszaniny do 0,2 ml osocza Test (każdy 2 min podczas pierwszej 10 m, a następnie - po każdym 10 min 1 nie).

Osocza jest źródłem fibrynogenu badane, które testowano aktywność trombiny wytworzonej w mieszaninie. Jak pokazano w licznych badaniach, może być zastąpiona osoczu krwi zdrowych ludzi lub roztworu fibrynogenu. W tym przypadku, pacjent na przepływ krwi jest zmniejszony do 0.1-0,2 ml (Może to być zrobione z palca!), co przekształca autokoagulyatsionny test w mikrokoagulyatsionny (MKT) a to sprawia, że ​​bardzo wygodne do stosowania w pediatrii, w tym badanie hemostazy u noworodków.

Aktywność krzepnięcia w ustawie i MKT początkowo zwiększa u zdrowych ludzi, zwykle osiąga maksymalnie 10 minut, inkubacji mieszaniny krew-wapniowego (KKS), Gdy występuje podłoże krzepnięcia osocza w temperaturze 10 ± 1. Następnie aktywność krzepnięcia zaczyna spadać KKS, To wskazuje, że inaktywacja trombiny w nim utworzone. Na hemofilię, działanie heparyny i innych aktywności krzepnięcia krzepnięcia KKS znacznie się zmniejszyły, i maksymalne porusza się od 10 minut w późniejszym terminie. Jeżeli istnieje nadkrzepliwości wcześniej i znaczny wzrost aktywności trombiny CCS.

Podczas przeprowadzania testu, w jednej probówce (Definicja zaledwie 10 minut KKS inkubacji) może on być stosowany do monitorowania leczenia heparyną. Zaletą tej metody badania na czas częściowej tromboplastyny ​​jest, że wyrównał wpływ na różnicę w czasie różnych kefalina krzepnięcia heparyny.

W oparciu AKP (MKT) Rozwinął się prostą i dokładną metodę diagnostyki różnicowej hemophilias.

Z pozycji cytowanych w konwersji wskazań stoły ACT (MKT) może być wyrażony w procentach i wykreślono - autokoagulogrammy.

Aby oszacować liczbę ogólnych parametrów są szeroko stosowane krzepliwość krwi i instrumentalne metody dochodzenia, głównie za pomocą różnych koagulografov i tromboelastografii.

Tromboelastografia nie tylko daje pojęcie o parametrach czasowych krzepliwości krwi lub osocza, ale również od struktury i właściwości mechaniczne skrzepów tworzą. W ostatnich latach, sprzęt i metody rejestracji wprowadzono standaryzację i fosfolipidów aktywacji styku koagulacji. Krzepnięcia stworzył także do masowej realizacji wspólnych badań krzepnięcia - APTT, protrombiny, trombiny i innych automatyczny zapis wyników.

Metody różnicowania różnych niedoborem czynników krzepnięcia i ich ilościowe oznaczanie

Poniższa tabela przedstawia dane, że wstępna analiza krzepnięcia krwi za pomocą trzech podstawowych testów pozwala na różne grupy deficytu rozróżnienie czynników krzepnięcia w osoczu. Więc, zwalnia tylko w teście krzepnięcia protrombiny (I тип нарушения) W normalnych odczytów wszystkich inne właściwości wrodzonym niedoborem czynnika VII lub zmniejszenie poziomu tego czynnika w początkowej fazie rozwoju żółtaczką lub w pierwszych 1-2 dniach leczenia antykoagulantami działania pośredniej, Gdy stłumienie syntezy czynnika VII jest do przodu w jego redukcji rozwoju innych czynników krzepnięcia K-vitaminozavisimyh.

Naruszenie tylko wewnętrznego mechanizmu koagulacji, t. to jest. Czas częściowej tromboplastyny ​​po aktywacji i AKP (II тип), istnieje niedobór czynnika XII, XI, IX, VIII, Villeʙranda (Nie we wszystkich formach), prekalikreiny i kininogen VM. Spośród tych, co wad dziedzicznych braki XII czynnika krzepnięcia, prekalikreiny i kininogen WM jest bardzo rzadkie i nie jest związane z krwawieniem, natomiast niedoboru czynnika VIII (Hemofilia), IX (Hemofilia B) i czynnik von Willebranda jest bardzo często (jest większy niż 96 % krwawienie Zaburzenia dziedziczne wszystkie) i towarzyszy ciężkim krwawieniem. Pomiędzy nimi w pierwszej kolejności, a do prowadzenia dalszej diagnostyki różnicowej.

Niedobór czynnika XI stosunkowo rzadko (o 0,5-1,0 % Wszystkie hemophilias), Wpływy z bardzo łagodnego krwawienia (najczęściej po urazach i operacjach) i zajmuje położenie pośrednie pomiędzy pierwszym podgrupy zaburzeń bezobjawowych i hemofilii i choroby von Willebranda.

Inny rodzaj chorób charakteryzuje się wydłużeniem jako czas częściowej tromboplastyny ​​i AKP, i czas protrombinowy. Jest to charakterystyczne dla niedoboru czynników krzepnięcia V, X lub II lub o złożonym niedoborem współczynnik k vitaminozavisimyh (VII, X, IX, II), które obserwuje się w żółtaczką i innymi formami niedoborem witaminy K, podczas odbierania leki przeciwzakrzepowe i pośrednie.

I w końcu, jak widać z tabeli, możliwe naruszenie zeznań trzech testów (IV тип), które obserwuje się w dziedzicznej i nabytej hipoglikemii- i disfibrinogenemiyah (nie wszyscy), podczas przyjmowania leków przeciwzakrzepowych bezpośredniego działania (geparina, geparinoidov, hirudyny et al.), leczenie aktywatory fibrynolizy i defibriniruyuschimi leków (streptokinaza, urokinaza et al.), pojawia się w krwi i substancji patologiczne antytrombin, Połączenie zapobiegania (montaż) fibryny-monomerov - paraproteinov, kryohlobulynov, Kompleksy immunologiczne, jak również zaawansowanych krzepnięcia, spowodowany DIC. Tak więc czas jest często trombiny przeszkadzał w większym stopniu, a nieco wcześniej, niż w innych badaniach.

Biorąc pod uwagę czas trwania choroby i możliwości dziedzicznych pochodzenia lub drugorzędnym z innymi chorobami i leków lub innych efektów, Obecność lub brak krwawienia i jego typ nie może poprawnie zidentyfikować genezę tych zaburzeń krzepnięcia krwi głębokości.

Wszystko Testy różnicujących w oparciu o zasady korekcji, t. to jest. określania, Stopień do którego ujawniła się lub eliminuje zaburzenia krwawienia, odwrotnie, To utrzymuje próbki osocza krwi lub produktów krwiopochodnych uzyskanych sztucznie wyraźnie znany niedobór czynnika krzepliwości krwi.

W tym celu, wyspecjalizowane laboratoria, aby stworzyć zbiór faktorodefitsitnyh osocza, się je od pacjentów ze znanym zestawem głębokiego (mniej 1 %) Niedobór każdego czynnika i przechowywać je w małych opakowaniach (przez 0,5 ml) w temperaturze - 30 ° C. W razie potrzeby, te próbki rozmraża się i stosuje się w testach diagnostycznych.

Osocze, był przypadkowo lub rozmrażania pozostaje niewykorzystana, ponowne zamrażanie nie podlega. Korekcyjnych badania nie powinny być stosowane immunologicznych osoczu inhibitorów czynnika. Zestawy diagnostyczne wielu firm zawiera próbki liofilizowane osocza krwi zidentyfikowanych czynników krzepnięcia niedoborem (Podłoże w osoczu). Jednak wielu zaburzeń krwawienia rzadko spotykane w praktyce klinicznej, dotyczące wykorzystania sztucznie przygotowane składniki krwi normalne niedobór niektórych czynników krzepnięcia, plazmowe i niejednorodna (kurczaki, kaczki i inne.).

Poniższa tabela zawiera informacje o zawartości czynników krzepnięcia w składników krwi, wykorzystane do korekcji testów koagulacji, w zależności od warunków ich przechowywania. Korzystanie z tej tabeli, łatwe do rozszyfrowania dowody jednego z trzech głównych testów krzepnięcia. Techniki naprawcze stosowane tego typu testów, standaryzowany przez kontakt i aktywować fosfolipidów, t. to jest. kaolin kefalinovыe lub primeneniem gemolizata (ACT).

Próby mieszania osocza krwi pacjentów z osocza, z pewnością wiadomo, niedobór czynnika

Określić czas częściowej tromboplastyny ​​w osoczu badanego, Normalny plazmowe (kontrola) i osocza wyraźnie znanym czynnikiem niedobór VIII (pacjentów z hemofilią typu A,), IX (hemofilii B), XI и XII. Następnie mieszaninę cytrynianowych próbek osocza zbadano (7/10 Objętość) i kolejno z każdą z próbek osocza z niedoborem (3/10 Objętość), od niedoboru czynnika VIII i IX (Najczęstszymi formami patologii!).

Do mieszaniny dodano kaolin i kefalin, oraz 2 min poddano uwapnienia (w temperaturze 37 ° C). Do mieszaniny, gdzie czas częściowej tromboplastyny ​​po aktywacji nie jest znormalizowany, Jest to ten sam defekt krzepnięcia.

Więc, Jeżeli pacjent badanego czas częściowej tromboplastyny ​​jest normalizowana przez dodanie osocza krwi pacjentów z rozpoznaną znany niedobór czynnika VIII, jednak rozwiązany w osoczu krwi u pacjentów z niedoborem czynnika IX, to ma Hemofilia.

Podobnie, ale na podstawie testu kompleksu protrombiny protrombiny odróżnić deficytu (X, V, VII и II).

Test generacji tromboplastyny

Dla rozróżnienia naruszenia wewnętrznego mechanizmu krzepnięcia krwi jest najczęściej używany klasyczny Test generacji tromboplastyny Wymiana elementu płytkowego, przygotowanie, które wymaga znacznych nakładów czasu i krwi, Kefalonia niekorzyść Test tromboplastyny ​​generacji są jego masywności, konieczność przygotowania dużej ilości reagentów, Czas na znaczny jego realizacji.

Test naprawcze, oparte na podstawie testu autokoagulyatsionnogo.

Szybka diagnoza problemów jest zupełnie różne odpowiedzi Test naprawcze, w oparciu o drugi korekcji, te same elementy normalnej krwi oparte testu autokoagulyatsionnogo.

Ten test jest bardzo niezawodny, szybkość i łatwość wdrożenia i wymaga trochę (nie więcej 0,5 ml) ilość badania krwi, może być stosowany u pacjentów pediatrii.

W nim, w przypadku testu generacji tromboplastyny, zostaje on wykorzystany do korekcji osocza i surowicy zaadsorbowanej starego, które ponownie odwirowano przed badaniem. W trzech fiolek nalał 2 ml 0,222 % Roztwór chlorku wapniowego, a dwa z nich zostały dodane 0,1 ml normalnego osocza adsorbowane (1-I fiolkę) i 0,1 ml surowicy stary normalne (2-I fiolkę). Pozostałe trzy rury powodują 0,2 ml z normalnego osocza z cytrynianem. Następnie do każdej probówki z roztworem chlorku wapnia dodano 0,1 ml krwi z cytrynianem testu.

Dokładnie 4 min inkubacji mieszaniny jego aktywności krzepnięcia badano normalnego osocza.

Gwałtowny spadek aktywności krzepnięcia tylko w pierwszej probówce (normalne BaSO₄-osocze) Wskazuje to na obecność pacjenta niedoboru czynnika IX (Hemofilia B), Dopiero w drugiej rurze (Serum od starego) - O braku czynnika VIII (Hemofilia); Jeśli nastąpi korekta w obu rurach (równie silne), następnie, oczywiście, istnieje niedobór czynnika XI lub XII (cm. Stół. 14).

Ten test jest bardzo wrażliwa, jako badanie jest prowadzone w rozwiedli 20 Czas krwi współczynnika kompensacji 3 Hemolizat płytek. Tylko substrat reakcji stosuje się - hipotoniczny roztwór chlorku wapniowego, co próbki publicznego.

Równie łatwe jest metoda prób korekcji, przeprowadza się w oparciu o badanie na niedobór protrombiny czynnik różnicowania II, V и VII , X (na stole).

W celu oddzielenia niedoboru czynnika VII i X, Przeprowadzone dodatkowe badania krzepnięcia z dodatkiem osocza krwi badanej jadu węża żmija rozwiązanie - leki lebetoks (dobrane tak, stężenie trucizny, która w obecności chlorku wapnia i kephaline powoduje koagulację 20-25 z; Wszystkie składniki są podejmowane w ilości 0,1 ml i mix) (Poniższa tabela).

Z tego samego celu jest stosowany preparat Russell viper jad, mieszkania w Indiach (przygotowanie stipven).

Diagnostyka różnicowa jest zakończona, jeśli to konieczne ilościowego rzadkich czynników lub specyficznych inhibitorów układu odpornościowego, Dlaczego są bardzo czułe, specjalne metody standaryzowane. Te techniki konstrukcyjne zastosowane krzywe rozcieńczeniu zmieszanych próbek normalnego osocza krwi z niedoborem czynników korekcji, Dodatkowo do testu. Krzywe te określenia aktywności czynnika badanego w osoczu pacjentów.

Szczególnie ważne określenie ilościowe stężenia czynnika VIII i IX, i po ich inhibitorów u pacjentów z hemofilią A i B (szczególnie przed i podczas operacji i intensywnej terapii zastępczej), a także przyszłych okresów, obfite krwotoku poporodowego, gdy jest to konieczne dla rozróżnienia DIC i rzadką chorobą - pojawienie się odporny inhibitor czynnika VIII (wciąż znacznie mniej - czynnika V).

Z głębokim niedoborem czynnika XIII (bardzo rzadkie dziedziczne patologia) wszystkie badania krzepnięcia są normalne, rozpuszczają skrzepy w, ale i 7M mocznika 5M.

To pomaga odróżnić różne niedobór czynników krzepnięcia również stanowi w zakresie i, szczególnie, Warunki testów odczytów normalizujące do pacjentów po dożylnym podaniu produktów z krwi, t. to jest. Skorygowany na żywo Metodą A. 3. Barkagan.

Technika ta jest szczególnie efektywna, gdy duża różnica w długości życia w obiegu czynnika różniczkowalnej. Więc, połowę czasu trwania życia zespół protrombiny waha się od kilku godzin (фактор VII) do kilku dni (фактор II). Pośrednie położenie między nimi przytrzymać X Factor (2-2,5 Dni) i V (12-18).

Dlatego po masywnych przetoczeń indeksu jet protrombiny w osoczu wzrasta z niedoborem czynnika VII jest bardzo krótki, Niedobór czynnika V - nieco dłużej (około 4-6 razy), Niedobór czynnika X i, szczególnie, II na okres dłuższy (w ciągu 1-2 dni). Jest to istotne w tym względzie, a także wpływu leku na indeksie protrombiny PPSB (koncentratu czynnika VII, IX, X и II). On również krótko normalizuje niedobór czasu protrombinowego czynnika VII i dłużej (wiele razy!) Niedobór czynnika X i II. Ponieważ lek ten nie jest czynnik V, Niedobór ten nie jest je skorygować.

Podobna różnica objawia się w transfuzji terapii substytucyjnej i czynniki krzepnięcia mechanizm wewnętrzny (XII, XI, IX и VIII), który zarejestrował próbę częściowej tromboplastyny ​​aktywowany.

Szczególnie interesujące jest współczynnik korekcji poziomu głośników odczyty VIII i APTT, gdy leczenie hemofilii A przetoczenie z chorobą von Willebranda oraz. Pierwszy z tych warunków nie jest wykrywany natychmiast maksymalnej poprawy krwawienie po przetoczeniu (rozpylać, szybko!) Antihemophilic krioprecypitat osoczu lub w administracji, następuje dość szybki (przez 10-18 h) stały spadek, vWF, podczas gdy obserwuje się pewien wzrost aktywności krzepnięcia w ciągu kilku godzin, po przetoczeniu, a następnie jej spadek - o wiele wolniej, niż. W związku z tym w leczeniu choroby von Willebranda jest rzadko stosowany więcej transfuzji podstawienia, niż w hemofilii A.

Badanie aktywności funkcjonalnej czynników krzepnięcia i składników kalikreina-kininy i systemów fibrynolizy wykorzystaniem chromogennego substratu

Metody te opierają się na badaniu aktywności proteolitycznych enzymów oraz ich inhibitorów, udział w koagulacji krwi, fibrynolizy oraz kinin formacja, intensywności i szybkości dekoltu szczególnie wrażliwe na te enzymy peptydów, który jest uwalniany w czasie degradacji barwnika (b-нитроанилин).

Stopień zabarwienia mieszaniny reakcyjnej metodą spektrofotometryczną, a jej intensywność jest oceniana na aktywność odpowiednich enzymów (czynnik krzepnięcia, kallikreina, plazmina i innych.), i procesu hamowania - aktywność inhibitorów enzymu.

Więc, np, działania antytrombiny III oraz heparyny można ocenić rozszczepiania substratów chromogennych osłabienia czynnika Xa lub trombiny, i aktywności α₂-antiplasmin - dla redukcji odpowiedniego chromogennego substratu plazminy. Podłoża chromogeniczne lub mieć oznaczenie numeryczne (np, s-2222), lub odnoszą się do skróconego hromozinami prefiksu, oznaczającą enzym, do której wrażliwy substrat (np, Chromozym PL - субстрат плазмина, Chromozym TH - субстрат тромбина, Chromozym PK - prekalikreiny podłoże / kalikreina, etc.. d.).

Podłoża chromogeniczne poszerzyć możliwości badawczych układu krzepnięcia, ale nie ma wystarczającej ilości w wielu laboratoriach. Niektóre badania, wykonane przy ich pomocy, Mają zalety w stosunku do konwencjonalnych testów krzepnięcia i dać im wyniki ogłoszeń; w innych przypadkach, ich stosowanie ułatwia i przyspiesza badania, To sprawia, że ​​bardziej dokładne; w trzecim - techniki te mają niezależne znaczenie i nie można zastąpić testy krzepnięcia, (np, określenie prekalikreiny).

Immunologiczne oznaczanie składników układu hemostatycznego

Immunologiczne oznaczanie składników układu hemostatycznego prowadzi się według metod:

• Immunoprecipitacii;
• Immunoelektroforeza;
• Radioimmunologiczne i druga z odpowiednim antysurowice

W tym samym czasie na działanie substancji w osoczu krwi antygenu czynnika krzepnięcia (lub jego fragmenty), Nie aktywność funkcjonalna, która może być znacznie zmniejszona w normalnym antygenu w osoczu. Sytuacja ta jest charakterystyczna dla wszystkich przypadkach, Gdy syntetyzowany w organizmie nieprawidłowego (funkcjonalnie uszkodzony) Czynniki, zachowaniu jego antygeniczność, ale brakuje zdolności do uczestniczenia w hemostazy.

Pozwala to na rozróżnienie pomiędzy całkowitym zaprzestaniu syntezy odpowiednich czynników i tworzenia nieprawidłowych form.

Jednakże, kilka składników układu hemostatycznego może być określona tylko immunologicznie.

Grupa ta obejmuje tak ważnych badań, jak określenie następujących składników:

• b-тромбоглобулина;
• a2-макроглобулина;
• протеинов C и S;
• Czynnik VIII antygenów:C и VIII:R_pamięć;
• Fibrynolizy wyrobów (PDF);
• neoantigenov kompleksov trombiny - antytrombiny III i plazmina - antyplazmina;
• szereg innych testów.

Dlatego immunologiczna badania znacznie uzupełnienie funkcjonalne oceny różnych składników układu hemostazy.

Badania diagnostyczne, oparte na zastosowaniu leków reagentami z jadów węży

Od dawna ustalone, że wiele jady węży zawierają wysoce aktywne enzymy proteolityczne, powodując krzepnięcie krwi i wpływ na różne linki kaskady krzepnięcia. W związku z tym, jady węży i ​​izolowane koagulazo je szeroko stosowane do wykrywania zaburzeń hemostatycznych, Ilościowe określenie czynników krzepnięcia, wykrywanie i ilościowe oznaczanie rozpuszczalnych kompleksów monomerów fibryny (RFMK) i wiele innych badaniach.

Próbki jadu węża jest często o wiele łatwiejsze i bardziej terminowe diagnozy zaburzeń hemostazy.

W tabeli przedstawiono dane dotyczące mechanizmu działania trucizn na krzepnięcie krwi i możliwości wykorzystania diagnostyki każdego.

Te możliwości dalszego rozszerzenia jednoczesne korzystanie z kilku prostych testów trucizn i wspólne krzepnięcia. Więc, np, jednoczesne korzystanie z testów krzepnięcia jadu żmii i z sprawia, że ​​łatwo odróżnić niedobór czynnika VII efy, Х II-V и (W poniższej tabeli), oraz dodatkową korektą sączy normalnego osocza (współczynnik mocy V i II) -defitsit czynniki X i V.

Określenie podstawowych antykoagulantów fizjologicznych

Najważniejsze jest określenie aktywności głównych leków przeciwzakrzepowych fizjologicznych - antytrombiny III, Spadek co można ustalić genetycznie (Pierwotne trombofilii) lub wtórny powodu intensywnego zużycia (DIC, Masywna zakrzepica) lub przyspieszony metabolizm (Leczenie heparyną, L-аспарагиназой, syntetyczne środki antykoncepcyjne) oraz blokada kompleksów immunologicznych, paraproteinami, fiʙronektinom, Białka ostrej fazy.

W każdym przypadku, ograniczenie aktywności antytrombiny III poniżej 60-65 % Obsługuje krzepnięcie wewnątrznaczyniowe, Co jest mniej wyraźny przeciwzakrzepowe wpływu heparyny. Jednak bardzo często pomiędzy poziomem antytrombiny III i zmniejszona wrażliwość na nie heparyny zgodności prawa.

Jest to zazwyczaj osłabienie działania przeciwzakrzepowe heparyny znacznie przeważa nad stopniem spadku aktywności antytrombiny III. Udowodnione, że deficyty w różnych formach jego antytrombiny III powinowactwa heparyna może być różna w różnych stopniach. Oprócz, różne frakcje heparyny, stosunek, który bardzo zmienne w lekach, również mieć różne powinowactwo do antytrombiny III. Dlatego też, w praktyce ważne jest, aby zbadać zarówno rzeczywistej aktywności antytrombiny III, i jego zdolność do kolei pod wpływem szybko działający przeciwkrzepliwego heparyną.

Aktywność przeciwzakrzepową antytrombiny III

Aktywność przeciwzakrzepową antytrombiny III Jest ona określona przez pojemność osocza badanego (rozwiedziony - Metoda Copley Winterstein lub defibrinated denaturacji termicznej w temperaturze 56 ° C - Metody Loligera, Abildgaarda et al.) inaktywacji przez pewien okres wejścia z zewnątrz trombiny. Aktywność trombiny resztkowego w plazmie mogą być określone dla jego aktywności krzepnięcia (z fibrinogene, Zaadsorbowaną plazmowy siarczan baru) lub rozszczepiania chromogennego substratu, wrażliwe na trombinę lub czynnik Xa (jak antytrombiny III i unieszkodliwia czynnik).

Heparyna-kofaktornaya aktivnosti

Kofaktor heparyny aktywności antytrombiny w osoczu zawarte w III dłuższy okres czasu określony przez test tolerancji osoczu heparyny, które mogą być uważane za wskazujące, ponieważ daje bardzo dużą zmienność wartości normalnych i reprodukowania tyle.

Znacznie bardziej dokładne testy Biegać izvodimy, badających wpływ różnych stężeń heparyny trombiny plazmy Czas badania, zawierający niewielką ilość płytek. Porównanie przeprowadza się z wydłużeniem czasu trombiny normalnej kontroli osocza, do której dodaje się same próbki heparyny.

Więc, trombiny heparyna testu do badania osocza krwi dodaje się do ilości heparyny, które wydłużają czas z kontroli trombiny 15 do 32-35 z (niskie stężenie) i do 95-110 (wysokie stężenie heparyny). Z tych danych oblicza się wskaźnik aktywności antytrombin plazmy (AAP) plazmowe i rezerwy przeciwzakrzepowe (CBA).

Jest także szeroko stosowany podobnych technik oszacowania stopnia inaktywacji trombiny w testach koagulacji, Podłoża i chromogeniczne.

Immunologiczne wykrywanie antygenu antytrombiny III

Immunologiczne wykrywanie antygenu antytrombiny III To pozwala na rozróżnienie pomiędzy różnymi rodzajami trombofilii:

• z niewystarczającą syntezę antytrombiny III (zmniejszone stężenie znacznika antygenowego odpowiednio zmniejszoną aktywność);
• z zachowaną syntezy nienormalnych i funkcjonalnie wadliwych formach (Poziom znacznika antygenowego, jest znacznie większa, Aktywność niż).

Białka C i S, тромбомодулин и₂-makroglobulina określona metodami immunoenzymatycznych.