Badanie hemostazy naczyniowej-płytek

Łamanie na tym poziomie hemostazę może wystąpić tendencja do krwotoku i zakrzepicy, w zależności od wybrane metody badawcze. Oprócz, Wszystkie metody badań płytek Hemostazy podzielić na pierwotne i wtórne, Testy lub drugi rząd, które mają zastosowanie jedynie w przypadku,, Jeśli używasz testy wykazały żadnych naruszeń. Główny (bazïsnım) Testy są następujące.

Próbki do oporu (kruchość) naczynka - mankiet, Słoik, angiorezistometriya

Z tych badań, najbardziej dostępne i jeszcze wystarczająco pouczające Przykładowe Konczałowski-Tiller-LEED.

Estymacja dokonywana jest na ilości i wielkości krwotoku, utworzone na górnej powierzchni dłoniowej części przedramienia (w okrąg o średnicy 5 cm) Po 5 minutach kompresji na ramieniu mankiet ciśnienie 12-13,3 kPa (90-100 Mm Hg. Art.). Wyniki są brane pod uwagę w ramach 5 min po usunięciu mankietu. Ilość wybroczyny więcej 10 wskazuje na zwiększoną kruchość naczyń włosowatych, które jest często związane z małopłytkowością lub naruszenie funkcja płytek angiotroficheskoy. Uwzględnia również wystąpienie krwotoku, a tuż pod kołnierzem.

Banochnaya próbka przeprowadza się w tym samym obszarze skóry w podciśnieniu buduje się warstw - z 20 kPa (150 mm Hg. Art.) i dolny. Oceniając wyniki liczone wybroczyn, wyglądał w bankach.

Próbki od czasu trwania i wielkości krwawienia kapilarnej

W klasycznej Duke próby niższe earlobe rolki po lekkim jej przebili ocieplenia do głębokości 3,5-4 mm. Krwawienie w tym badaniu zwykle nie przekracza 4 m, Kropla krwi na bibule filtracyjnej są stosunkowo niskie i zaczynają zmniejszać się gwałtownie od około 1-1,5 minut po nakłuciu. Gdy wyrażona małopłytkowość (mniej 20 T w 1 l) ciężkie zaburzenia czynności płytek krwi i krwawienia w czasie 20-40 minut wzrosła do, plamy krwi są znacznie większe, a spadek długoterminowych lub osłabić fale, ponownie zwiększyć. Duke próbki nie są wystarczająco czułe,, w 2/3 Pacjenci z thrombocytopathies daje prawidłowe wyniki.

Bardziej czułe testy, w którym czas krwawienia jest badana na tle sztucznie utworzone zastoju żylnego, dla których ramię jest nałożony na urządzeniu mankietu do pomiaru ciśnienia krwi i do badania wspierane ciśnienie, równy 5,3 kPa (40 mm Hg. Art.). Na tle takiego zastoju w Borchgrevink próbka-Vaaler na powierzchni dłoniowej górnej trzeciej części lancetu przedramienia zastosować poprzeczne głębokość nacinania 1 mm i długości 8-10 mm, (wskaźnik czasu krwawienia - w górę 10 m), i próbki Ivey i inni. to samo stosuje się do przedramienia lancet do krwi z nakłucia palca głębokości trzech poprzecznych 3 mm (wskaźnik czasu krwawienia - w górę 7 m).

Na tle tego samego zastoju żylnego w wykonaniu Badania na. Z. Shitikova, przy czym w paliczków terminali stosowane kutas głębokość 3 mm, Następnie końcówka palca zanurzone w filiżance 5 ml izotonicznego roztworu chlorku sodowego i zlicza czas krwawienia w świetle przechodzącym (Jeśli roztwór jest intensywnie zabarwione krwi, dalsze działania na palcu jest przeniesiony do innego kubka). Ilość krwi utracony jest określona przez zwiększenie objętości płynu w miseczkach (wskaźnik czasu krwawienia - w górę 4 m, objętość utraconej krwi - od 0,01 do 0,4 ml).

W teście na T. N. Sushkevich utraconą objętość krwi określa się przez kolor amoniaku (0,04 %) , które są zanurzone papieru z plamy krwi, kolorymetrycznie na kolorymetru medycznej.

Wskazania do badania na czas trwania krwawienia, Nienormalny, dowody nadużyć wyrażone płytek-naczyniowego hemostazy, Jednakże w normalnych wyniki tych prób nie wyklucza obecności łagodnego wyrażone thrombocytopathy.

Zliczanie liczby płytek krwi

Zliczanie liczby płytek krwi (Goryaeva w komorze do liczenia pod kontrastem fazowym lub barwniki, lub za pomocą cząstek) - Najważniejszą metodą diagnozowania małopłytkowość i thrombocytopathy, przepływający stały lub okresowy spadek liczby tych komórkach (Anomalia Bernard-Soulier, Meia Hegglina i inni.).

Liczenie liczba płytek krwi sugeruje również, czy możliwe jest przeprowadzenie ich dalsze badanie funkcjonalne i w jaki sposób powinny być zrobione (z płytek wzbogacania lub bez, fotometrycznie lub mikroskopowo, etc.. d.).

Badanie wielkości płytek w rozmazach krwi – trombotsitometriya

Badanie wielkości płytek w rozmazach krwi (trombotsitometriya) To pozwala na dokonanie wstępnej oceny na różnych populacjach komórek we krwi badania i uzyskać informacje na temat szeregu anomalii, oraz nasycenie granulatu płytek.

W pewnym thrombocytopathy (Zespół Viskotta-Aldrich) Płytki krwi są zdominowane przez bardzo małe (do 2 mikronów), podczas gdy inne - gigantyczna forma (Anomalia Bernard-Soulier, Mea-Hegglina) - Do 8 m lub więcej. W wielu z tych komórek są słabymi granulki thrombocytopathy (cm. poniżej), podczas gdy inni - centralizacja połamane koraliki w rozprzestrzenianiu się płytek krwi na szybie, że stanowi naruszenie reakcji i uwolnienia granulki zawierają substancje, niezbędne do realizacji hemostazy. Wszystkie te cechy, oraz zdolność płytek krwi do rozprowadzania i procesów formacyjnych, Ocena struktury tych komórek można badać stosując konwencjonalne i skaningowego mikroskopu, i przez zakłócenia optyki Nomarskiego.

Wycofanie się zakrzepów krwi regularnie naruszane z ciężką trombocytopenią (T w mniej niż 30-40 1 l) w niektórych postaciach niższości jakościowych płytek, najczęściej - przy trombotsitoastenii Glanzmann, mocznicowy thrombocytopathy itp.

Badania adhezyjnie agregacji płytek (AAFT)

Badania adhezyjnie agregacji płytek (AAFT) - Najważniejszym elementem diagnostyki laboratoryjnej w większości thrombocytopathy. Obecnie, wiele łatwo wykonalne i publicznie dostępnych metod badawczych, w tym wizualne, mikroskopowe i sprzętu (metody agregacji, mikrofiltry i inne.) Funkcja rejestracji może wskazywać na to następujące metody.

Sposoby utrzymywania płytek w szkle (lub filtry)

Liczba płytek krwi przeprowadzono we krwi żylnej przed i po przejściu go do poziomu prędkości przez kolumnę z perełek szklanych lub z włókien szklanych warkocz; Utrata płytkach z krwią są oceniane na podstawie stopnia kleistości.

Więcej dostępne, choć nieco mniej dokładne, Sposób określania liczby trombocytów we krwi przed i po zetknięciu się z nią w ciągu pewnego okresu w wewnętrznej powierzchni kolby, obraca się z pewną prędkością. Bardziej dokładna metoda określania opóźnienia płytek filtry Millipore (średnica porów - 15-20 mikronów). W tych badaniach, oceny mogą być prowadzone ze wzrostu gradientu ciśnienia powyżej i poniżej filtra (zatkane pory i agregaty płytek prowadzi do zwiększenia tego wskaźnika).

Metody badania agregacji płytek krwi

Test Hemolizat agregacji na podstawie haemolysate zdolność myte erytrocytów, badane w hodowli 10^-2 i 10^-6, podczas mieszania powoduje agregację we własnym osoczu, wygrał znaczną liczbę płytek (Stosunek objętości cytrynianowego osocza i hemolizatu - 1,0:0,2). Biorąc pod uwagę czas wystąpienia agregacji (tempo, w wysokim stężeniu z hemolizacie-11-17, niskie - 40-54 z) i jej nasilenia. Dynamika procesu i jego intensywność może być określona jako fotometrii (Kolorymetr medyczne, Filtr zielony, mieszanie) i każdy agregografe projekt.

Gdy graficzna rejestracja zastosowaniu wysokiej haemolysate rozcieńczenia (10^-6) Zapewnia agregatogrammu dwie fale, przy czym druga fala jest związana z uwalnianiem endogennych pobudzających agregacji płytek - ADP, katecholamin, tromboksanu, etc.. Ta druga fala charakteryzuje się reakcji uwalnianie, nie obserwuje się w przypadku braku płytek zwartych granulek (basen choroba magazynowania) lub z naruszeniem reakcji zwolnić (Zespół jak aspirynę i inne.).

Test Hemolizat agregacji jest dostępna do wykonania w każdym laboratorium, Nie wymaga specjalnych odczynników.

Określenie wizualne mikrometoda agregacji płytek krwi

Jego istota polega na tym,, że uzyskane na podstawie silikonirovaniya krwi żylnej stabilizowany podwójną objętość 3,8 % cytrynian sodowy (stosunek 2,4:0,6 ml), to wiruje 6 minut w 100 v / / min, i uzyskany w osoczu bogatym w płytki krwi nanosi 0,02 ml na szkiełkach i poddano działaniu takiej samej objętości czynników agregujących - ADP, trombinom, Kolagen, noradrenalinom lub ristomitsinom. Końcowe stężenia czynników agregujących w osoczu badanego powinno:

• ADF 0,5*10^-4 mmol / l;
• noradrenalina - 0,015%;
• trombiny - 0,125 U / ml (Stężenie kolagenu wybrany empirycznie).

Być może test jako niższa, i wyższe stężenia środków agregujących. Dobór stężenia mogą się wahać w zależności od aktywności preparatów o różnych nierównomiernego produkcji i aktywności próbek o różnej, w związku z którym wstępnie dopasować zawartość każdego agenta na normalnego osocza.

Mieszanina agregację płytek krwi w osoczu czynnika bogate miesza przez kołysanie slajd, na ciemnym tle z lupy rejestrowane czasu pojawienia się jednostki jako "burzy śnieżnej". Przy ocenie liczony liczbę trombocytów w osoczu. Więc, Czas ADP agregacji, zwiększa się od 27-37 sekund 400 T w 1 l płytek krwi do 62-75 sekund na 50 T w 1 l, i trombinę agregację - odpowiednio, 40-52 do 79- 106 z.

Graficzny agregacji Rejestracja

Graficzna rejestracja agregacji pod wpływem samych czynniki agregujące - metoda bardzo informative funkcjonalnych badań płytek. Wykonywane na lub agregografah.

Gdy grafiki rejestru określenie nie tylko początek agregacji, ale jego intensywność (krzywa odchylenia i największy obszar agregatogrammy), obecność pierwszej i drugiej fali agregacji - przy użyciu niskich stężeń epinefryny i ADP (Opisuje reakcję drugiej fali wyzwolenia), i patologiczne dezagregacji.

Lub wizualna Badanie agregacji płytek krwi graficzny pod wpływem ristomycin

Niezwykle Ważne jest, wizualne lub grafikę agregacji płytek krwi badania pod wpływem ristomycin. Naruszone tego rodzaju agregacji (ristomycin końcowym stężeniu 0,8-1,0 mg / ml) na jednym z najczęstszych skazą krwotoczną - angiohemophilia (Choroba von Willebranda), jak również zaburzenia płytek Bernard-soulier i niektóre nabyte formy syntezy ucisku czynnika von Willebranda (mocznica, hamowanie odporności, a więc. d.).

Oznaczanie ilościowe czynnika von Willebranda w osoczu krwi

Oznaczanie ilościowe czynnika von Willebranda w osoczu krwi jest prowadzona ristomycin aglutynacji formalinized zawiesiny normalnych płytek krwi w różnych rozcieńczeniach bestrombotsitarnoy osoczu testy.

Metoda jest ważne dla diagnozy i wtórnym hamowania syntezy angiogemofnlii tego czynnika, oraz oceny nasilenia śródbłonka (zapalenie naczyń, miażdżycy tętnic i innych.) i skłonności do zakrzepicy, w którym zawartość czynnika von Willebranda we krwi często zwiększa znacznie.

Poziom czynnika von Willebranda Wskazuje na zdolność komórek śródbłonka do jej syntezy (zmniejszone, gdy aigiogemofilii) oraz zakres klęsce naczyń śródbłonka, miażdżycy tętnic i innych chorób, przystąpieniem klęsce wewnętrznej wyściółki naczyń krwionośnych.

Stałych normalnych płytkach do bogatego w płytki plazmie zdrowych osób są dodawane sekwencyjnie 0,2 % EDTA (0,5 ml 5 ml osocza) oraz 2 min - rozwiązanie mocowania (20 ml 40 % formalina 1000 bufor fosforanowy ml 0,2 g EDTA, pH 6,4).

Mieszaninę utrzymywano w temperaturze + 4 ° C przez co najmniej 1 nie, po czym poddaje się wirowaniu, supernatant usunięto, i płytek osad przemywa roztwór dwukrotnie zawieszające (Jedna objętość 3,8 % cytrynian sodu, i pięć objętości izotonicznym roztworze chlorku sodu; pH doprowadza się do 7,4). Przygotowany zawieszenie normalnych płytek zapakowany w formalinized 1 ml i przechowywano w temperaturze -20 ° C,. Krzywa kalibracji jest wykonana za pomocą rozcieńczeń normalnej bestrombotsitarnoy plazmowego, Próbki, które są mieszane formalinized płytki krwi. Co więcej, mieszanina jest określana ristomycin aglutynacji. Krzywa kalibracji jest określona przez ilość czynnika von Willebranda w osoczu badanego. Stałe płytki lepiej zachowana dodając roztwór konserwujący w małej ilości azydku sodowego.

Testy, odzwierciedlające spontanicznej agregacji płytek

W badaniu z udziałem pacjentów z zakrzepicy żylnej lub zwiększona skłonność do zakrzepicy i niedokrwienia techniki podstawowych obejmują testy, odzwierciedlające spontanicznej agregacji płytek, t. to jest. występujące w pełnej krwi lub osoczu bez dodatku czynników agregujących.

Do identyfikacji tego zjawiska z rozmazu krwi wskazuje na stosunek liczby płytek leżących oddzielnie i ich agregatów, 3-5 składa się z płytek i więcej. Zjawisko to jest najbardziej ujawnił podczas przeglądania szlamu, w wyniku ciężkiej tseitrifu- doping płytek krwi osocza bogatego w (20Minut w temperaturze -30 6000 / Min), stabilizowany cytrynian lub EDTA, cytrynian sodowy. Jednak bardziej stabilne wyniki podać następujące metody określania spontanicznej agregacji.

Метод Wu-Hoak

Sposób Wu-Hoak oparciu o, krew z żyły jest wpisany w dwóch probówek, W roztworze zawierającym EDTA, a w drugim - w mieszaninie z tego samego roztworu EDTA 4 % roztworu formaliny. Po wymieszaniu zawartości fiolek osiada 30 min w temperaturze pokojowej.

Podczas agregaty rozstrzyganiu osiedlić, i poszczególne płytki pozostały w supernatancie. Po osadzeniu, to liczy ilość płytek w supernatancie w każdej z rur. Zwykle różnica w ilości płytek krwi w zawartości obydwu rur nie przekracza 10-15 %, w podwyższonej spontanicznej agregacji, zwiększa.

Metoda H. I. Tarasova

W metodzie H. I. Tarasova (1984) Zmniejszenie liczby płytek krwi w całej krwi cytrynianem agregatów liczono po 3 minutach mieszania na wytrząsarce jego AVC-1 z prędkością 90-100 razy 1 m.

Rura 0,5 ml krwi, poddano wytrząsania, wprowadzone 1 ml 1 % roztwór formaliny w izotonicznym roztworze chlorku sodu. Druga rura nie jest poddawana kontroli wytrząsania, i krew zawarta w nim za pomocą tego samego testu 3 Ming wprowadziła również roztworze formaliny.

Krew w obu rur opowiada 30 m, po czym supernatant liczy liczby płytek. Zwykle różnica w płytkach nie liczy przekraczającej 20 %, w podwyższonej skłonności do agregacji, zwiększa.

W przypadku naruszenia w stosowaniu podstawowych testów, charakteryzując płytek hemostazy, wykonać jak potrzebne są dalsze badania. Wśród nich najważniejsze są następujące.

Dodatkowe badania w celu ustalenia płytek hemostazy

Zbadania liczby megakariocytów w szpiku kostnym i myelogram trepanate do zbadania morfologii tych komórkach

Znaczne zwiększenie liczby megakariocytów w szpiku kostnego sekcji, zazwyczaj w połączeniu z bardziej lub mniej wyraźny wzrost liczby płytek krwi, obserwowano w eritremii, krwotoczną i istotne trombocytoza i inne choroby mieloproliferacyjne. Średni megakariotsitoz, w połączeniu z małopłytkowością, charakterystyczne plamicy (idiopatyczna plamica małopłytkowa).

Gdy aplazja i hipoplazji szpiku kości różnego pochodzenia zmniejszyła się zawartość megakariocytów w szpiku kostnego sekcji, i liczby płytek we krwi obwodowej.

Częściowa amegakariotsitoz zaobserwować niedobór trombotsitopoetina (rzadka postać wrodzona małopłytkowość), pojawienie się przeciwciał u antimegakariotsitarnyh krwi, эssentsialynoy partsialynoy aplazja megakariotsitov (może poprzedzać rozwoju białaczki).

Morfologiczne i cytochemiczne zmiany megakariocytów obserwowane w wielu thrombocytopathy.

Mikroskopu elektronowego badanie ultrastrukturę płytek

Mikroskopia elektronowa badanie ultrastruktury płytek krwi jest ważny dla rozpoznania kilku thrombocytopathy, w którym brakuje lub znacznie zmniejszając ilość granulek niebiałkowych o wysokiej gęstości optycznej (zawierający ADP, Serotonina, katecholamin, wapnia i inne.), lub α-granulki białkowe, co jest charakterystyczne dla szeregu thrombocytopathy, zjednoczone w grupie chorób basenie przechowywania, brak choroby lub granulek.

Mogą być wykrywane defekty w urządzeniu skurczu (Systemy mikrotruboček) lizosomy i płytek krwi.

Podczas skanowania mikroskopii elektronowej badania płytek lub za pomocą ingerencji optyki można wykryć Nomarskiego wad mocowania płytek na obcej powierzchni, ich jej rozprzestrzeniania, kiełkowanie, Wydzielanie centralizacja i granulat, co jest charakterystyczne dla wielu rodzajów thrombocytopathy.

Oznaczanie przeciwpłytkowych przeciwciał przez immunoflyuorestsent- Badania tion w zawieszeniu płytek immunoglobuliny, związane z tymi komórkami – Metoda Dixon

Kompleks metoda pozwala odróżnić małopłytkowość immunologiczną i nie odpornościowy.

Jednakże, najbardziej widoczne form choroby z ostrą trombocytopenię jest niedopuszczalne, do oznaczania związanej immunoglobuliny wymagane jest wystarczająco duża (40-50 T w 1 l) liczba płytek.

Definiowanie autologicznych życiu oznaczone płytki krwi

Definiowanie oznaczone życie autologiczne płytek krwi małopłytkowość pozwala odróżnić normalnego żywotność płytek krwi w obiegu (o 9 Noce) form choroby i skrócenie żywotności tych komórkach.

Pierwszym z nich jest najczęściej związane ze zmniejszoną produkcję płytek krwi w szpiku kostnym, Drugi - z ich przyspieszonej śmierci, lub z efektem przeciwpłytkowych przeciwciał (autoimmunologiczna trombocytopenia Platelet trwałość jest zmniejszona do kilku godzin), lub intensywne zmniejszenie komórek w agregatach i skrzepliny w rozsianego wykrzepiania wewnątrznaczyniowego lub zakrzepicy masywnej (Zużycie małopłytkowość).

Ilościowe oznaczenie zawartości w osoczu krwi przed i po czynników agregacji płytek

Ilościowe oznaczenie zawartości w osoczu krwi przed i po agregacji płytek czynników: - czynnik fosfolipid membrana 3, Zawartość alfa-granulki (Współczynnik antigeparinovogo 4, b-тромбоглобулина, Współczynnik mitogenna płytek) i granulki niebiałkowym optyczny o wysokiej gęstości elektronowej (Serotonina, katecholamin, ADF), i hydrolazy kwasu.

Badania te dają wyobrażenie o zawartości w płytkach krwi odpowiednich struktur i elementów, ich uwalnianie do plazmy podczas agregacji, jak również vnutriso- sudistoy aktywacji płytek krwi, towarzyszy wydajność płytek osocza wraz ze wzrostem stężenia składników w końcowej gęste i a-granulki (Współczynnik antigeparinovogo 4, P-tromboglobuliny i innych.).

Metody badań ilościowych czynników płytek są ważne dla identyfikacji pewnej liczby thrombocytopathy (Zaburzenia granulki konserwujące i ich części, niedowład reakcji uwalniania tych składników, Wzrost zawartości osocza krwi ze względu na intensywny wewnątrz- adhezji naczyniowej i agregacji płytek krwi i inne.). Kilka trombotsitopaty charakteryzuje się spadkiem zawartości czynnika płytkowego membran 3 każde naruszenie jego dostępności do udziału w krzepnięciu krwi.

Badanie właściwości biochemiczne, płytek krwi i ich poszczególnych struktur

Badanie biochemicznych cech płytek i ich poszczególnych struktur - w zrąb, granulki, Mitochondria i t. d. pozwala na dokument połączenia różnych rodzajów patologii i zaburzeń płytek z pewnymi typami niedoboru enzymu (Niedobór COX, tromboksanu itp), z naruszeniem struktury lipoprotein membranowych, potrzebne do komunikowania się z czynników agregujących, i T. d.

Podobne badania są dostępne tylko dobrze wyposażone laboratoria badawcze, a zatem nie mają zastosowania ogólnej praktyki.