Diagnostyka niepłodności spowodowanej immunologicznie

Podczas długo poślubił życia bez stosowania środków antykoncepcyjnych, w obecności mikroregionalne błon śluzowych narządów płciowych może pojawić się stopniowo zauważyć antygeny szczepień plemników. Fizyczne Egzamin z małżonków, polegające na jałowe małżeństwo, nie można ustalić przyczyny niepłodności u 10-15 % przypadki. To właśnie w tej grupie niepłodnych małżonków przy zastosowaniu specjalnych metod dochodzenia tajnego kanału szyjki, są często wykrywane w osoczu nasienia i plemników w surowicy przeciwciała (AspAT), Używa jakościowe i ilościowe badania badań immunologicznych.

Test Postkoytalnыy (FCT)

Test Postkoytalnыy (FCT) Odnosi się to do testu immunologicznego jakościowej. Negatywny wynik testu wskazuje na brak plemników w kanale szyjki macicy tajemnicy, ale nie można określić przyczyny ich nieobecności.

Metoda. Liczbą ruchliwych plemników w kanale szyjki macicy tajemnicy, uzyskane po kopulacji, ustalenie stopnia naruszenia ich zdolność przenikliwego z niepłodnością lub odporności na nich śluz z kanału szyjki macicy.

FCT jest niezbędne do wykonywania następujących warunków: Badanie powinno być przeprowadzone w okresie owulacji, które ujawniły colpocytologic lub w inny sposób, po poprzednich małżonków abstynencji w ciągu 2-3 dni.

Metodologia. Po zwykłej kopulacji dla kobiety 30 Protokół powinien leżeć na plecach, zginanie kolana. Douching i czyszczenia zabronione, Wystarczy tylko podpaski, który jest usuwany w trakcie wykonywania do badania śluzu z kanału szyjki. Po 2-4 godzinach, dopuszczalne i po 6-10 godzin (czas, jaki upłynął do badania, wskazano w analizie) po stosunku szyjki macicy narażona Cuzco za pomocą lustra i śluz szyjki wolnossący lub tuberkulinowej strzykawki (bez igły), pipeta z gumowym, lub cewnik polietylenowy.

Podczas mycia urządzenia nie powinny być stosowane środki dezynfekcyjne, jak wpływają one na ruchliwość plemników. Jedną kroplę otrzymanej śluzowej kanału szyjki przeniesiono do ogrzewanej szkiełku, powlekany szkiełko, Terytorium smarowane płynnej parafiny do wycieku. Formułowanie natychmiast mikroskopiruyut (Okular 7X, Celem 40X), ustalenie liczby i charakteru ruchliwości plemników. Lek może być wykryty czynny postępowego ruchliwości plemników, ruch oscylacyjny (zjawisko huśtawce) i stałe.

Akceptowane dostarczyć pięć typów wnioski FCT.

• Doskonały (odpowiednie normy): w pięciu pól widzenia do 15-20 z aktywnych plemników postępowej ruchliwości i więcej. Plemników z zjawiska oscylacji jest mniejsza niż 25 %.
• Zaspokojenie: w pięciu pól widzenia w górę 10 aktywnych plemników postępująca mobilność i mniej 25 % plemniki ze zjawiskiem huśtawce.
• Słabe: mniej 5 Plemniki z pięciu pól widzenia.
• Minus: brak plemników.
• Wątpliwy: w pięciu dziedzinach zobacz więcej 5 aktywną ruchliwych plemników i więcej 25 % zjawisko huśtawce.

Gdy piąty typ FCT często obserwowano niezgodności immunologicznej między małżonkami, Dlatego też konieczne jest określenie ACAT. Aby zidentyfikować ACAT tajnego kanału szyjki macicy, osocza, surowicy krwi lub nasienia i wyświetlać (aglutynacji lub unieruchomione) To wymaga powołania immunologicznych ilościowych.

Negatywny PBC Studia rozpoczynają się od definicji przenikliwe (penetracja) zdolność plemników poprzez penetracją testu (Pt) i skłonność do wydzielania plemników z kanału szyjki macicy za pomocą kontaktu testowej spermy i śluzu szyjkowego (TKSTSS).

Test Penetracionnyj (TP)

Cienka Długość kapilary 10 Zobacz wpisane podczas owulacji śluz kanału szyjki macicy. Z wolnym końcem kapilary zamyka gliny, i drugi umieszcza się w probówce o testowej świeżej spermy (nie więcej 3 godzin po wytrysku). Gliną w kapilarze jest przymocowany do pionowej rury. Próbkę poddaje się inkubacji w termostacie, w temperaturze 37 ° C. 1 nie. Na jakość ejakulatu jest oceniana przez głębokość penetracji nasienia w śluzie kanału szyjki. Istnieją trzy rodzaje gazów cieplarnianych.

• Potwierdzam - Głębokość penetracji (największa odległość w centymetrach, udał się co najmniej jednego plemnika) powyżej 5 cm; liczby plemników w punkcie maksymalnej penetracji więcej 5 w zasięgu wzroku, a ilość ruchliwych plemników w górnej trzeciej części jest większy niż kapilary 50 %.
• Wątpliwy - Głębokość penetracji w górę do 5 Zobacz mniejszą liczbę plemników 5, ich mobilność w górnej trzeciej biegu kapilarnych 50%.
• Minus - Głębokość penetracji biegu spermy 1 cm.

Zdolność plemników do penetracji To zależy od fazy cyklu menstruacyjnego. Ona zaczyna się wyłaniać z 9. dnia cyklu miesiączkowego,, stopniowo aktywacji, osiąga maksimum ekspresji w ciągu owulacji, odbywają się na tym poziomie przez dwa dni, a następnie zmniejsza się stopniowo.

Nasienie kontaktowe testy i śluzu szyjkowego (TKSTSS)

Na slajdzie jest umieścić kroplę śluzu z kanału szyjki macicy, zaczerpnięte z kobiet podczas owulacji, i ilość samego wielkość kropli spermy. Oba krople szkła pokryta pokrywą, która jest lekko wciśnięty przez, przyłączony do spadku. Lek umieszcza się w komorze wilgotnej (Petriego z wilgotną wacikiem) i inkubowano w termostacie w temperaturze 37 ° C. 1 nie.

W tych warunkach normalnych plemników przeniknąć tajemnicę normalnego kanału szyjki, jak to można zobaczyć pod mikroskopem przy powiększeniu 200X. Aby uwzględnić reakcji, w pobliżu granicy między dwoma mediami zlicza liczbę penetracji tajemnicę szyjki kanał plemników w dwóch sąsiadujących ze sobą pól widzenia.

Dzięki doskonałej TKSTSS w dwóch dziedzinach Widok ujawnia więcej 25 aktywnie ruchliwych plemników w zjawisku huśtawka mniej 25 %. Jeśli zadowalające TKSTSS w dwóch pól widzenia ujawnił więcej 15 aktywnie ruchliwych plemników, TKSTSS w niska - mniej niż 15. Negatywny nieobecne TKSTSS penetracja, w przypadku wątpliwości - zjawisko oscylacji przekracza 25 %.

W tym badaniu, jak podano w PCT, zjawisko huśtawce, przekraczając 25 %, prawdopodobnie, To wskazuje na obecność ACAT i wymaga powołania immunologicznych ilościowych.

Z użyciem nasienia i wydzieliny kanału szyjki macicy i niepłodnych mężczyzn w płodne różnych ilościach do korzystania TKSTSS identyfikacji niepłodny męża.

• Przykład 1. Zrobione tajnego kanału szyjki macicy u kobiet niepłodnych par i kontrola ejakulacie zdrowych mężczyzn. Doskonała TKSTSS wskazuje na słabą zdolność penetracji plemników męża i podatność normalnego wydzielania kanału szyjki.
• Przykład 2. Zrobione pełne sekret zdrowego kanału szyjki macicy kobiety i jej mąż ejakulat parom bezpłodnym. Bad TKSTSS wskazuje na słabą penetrację plemników.
• Przykład 3. Podjęte tajne szyjki macicy kobiety niepłodne pary i kontrola ejakulacie zdrowych mężczyzn. Bad TKSTSS oznacza niższości tajny kanał szyjki macicy, co oczywiście nie przenikają normalne plemników.

Ilościowe badania immunologiczne

Mikroagglyutinatsionny Test Friberg

Mikroagglyutinatsionny Test Friberg (TF) wystarczająco czułe i jest dostępny dla klinicznych laboratoriów diagnostycznych. Korzystanie z TF może określić obecność ACAT i miana aglutynacji w różnych materiałach (ejakulat plazmowe, Ekstrakty śluzu z kanałem szyjki i w surowicy zarówno małżonka).

Odczynniki:

1. Buforowana fosforanem sól fizjologiczna (FSB) 0,01 М pH 7,2-7,4.

2. Olej Vazelinovoe.

Sprzęt: mikroskop, tuberkulinowej strzykawki, mikroagglyutinatsionnye pipetter 1 ml, Pojemność mikropipeta 0,1 ml.

Metoda. Badanie krwi surowicę inaktywowano przez inkubację w inkubatorze w 56 ° C. 30 m. Ejakulat, uzyskane przez masturbacji, Natychmiast tak rozcieńczony, że FSB, stężenie plemników 40 milion. w 1 ml.

Ze względu na materiały (ejakulat plazmowe, wydobyć sekret kanału szyjki lub surowicy) przygotowuje się serię rozcieńczeń 1:4 do 1:128 przy użyciu, jako płynu do FSB rozcieńczenia. W studni z mikroagglyutinatsionnyh oleju parafinowego broki tuberkulinowej strzykawki wprowadza igłę (pod vazelinovoe oleju) Małe krople każdego rozcieńczenia badanego materiału. Po każdej próbki przemywa się cztery razy strzykawki. W każdym rozcieńczeniu dodano do 5 razy mniejszy spadek ejakulatu, oraz 4 h w temperaturze pokojowej wykrywane zlepków. Ostatni hodowla, przy czym pod mikroskopem przy powiększeniu 100x wykrytego 3 zlepiać w ramach przeglądu i więcej, aglutynacji miana odpowiada ACAT.

Spermoimmobilizuyuschy Test Izodzhima (SIT).

Miano unieruchomienie ACAT surowicy, osocza lub semen ekstraktu tajny kanał szyjki ustala ilości ruchliwych plemników w obecności antygenów (sperma).

Składniki.

1. Ejakulat, który jest wytwarzany i przygotowany w podobny, TF wykorzystaniem FSB; ruchliwość przekroczyć 70 %.

2. Komplementsoderzhaschaya surowicy świnki morskiej.

3. Immunologiczną surowicy ludzkiej (IChS), dając w obecności dopełniacza przez 1 h inkubacji unieruchomienie 90 % sperma.

4. Normalną surowicę ludzką (NCHS), inaktywuje się przez ogrzewanie w temperaturze 56 ° C. 30 m.

5. Test inaktywowanej surowicy, plazmowe i nasienie wyodrębnić tajny kanał szyjki macicy.

Metoda. Aby ocenić aktywność dopełniacza unieruchomienie 1st rurkę wprowadza 0,5 ml izotonicznego roztworu chlorku sodowego, określenie zmian w ruchliwości plemników bez ASAT 2. probówki - 0,5 ml NHS, Kontrola unieruchomienie trzeciej rury - 0,5 ml z ICHS i określenia ACAT unieruchomienie rury 4. - 0,5 ml surowicy, Plazma ejakulatu, Wyciąg lub wydzieliny szyjki macicy.

Następnie, każda z rur jest wprowadzona 0,1 ml uzupełnieniem. Ostatnią rzeczą do wszystkich probówek dodaje 0,05 ml zawiesiny plemników o stężeniu 40 milion. w 1 ml. Rury statyw umieszczano w inkubatorze w temperaturze 37 ° C 1 nie. Rurki są usuwane z pieca i ostrożnie wytrząsano w celu odzwierciedlenia osiadły aglutynacji nasienia.

Aby ocenić wyniki pod dużym powiększeniem mikroskopu (400X) obliczono procent ruchliwych plemników w kropli probówki, osadza się na szkiełku mikroskopowym i pokryta osłoną. Podobnie ustala procent ruchliwych plemników w kropelkach probówek z NHS i ICHS. Wynikiem reakcji pod uwagę wzór

SIT = K / A

gdzie: K - liczba ruchliwych plemników w kontroli z ICHS i NHS;

O - liczba ruchliwych plemników w probówce (Badanie surowicy, Plazma ejakulatu, lub sekret kanału szyjki).

Przy średniej SIT<2 test jest negatywny (liczba ruchliwych plemników w kontroli oraz w probówkach w przybliżeniu taka sama), Jeśli indeks CTI>2 - Test jest dodatni, t. to jest. w materiale (surowica, osocza lub nasienia wyodrębnić tajny kanał szyjki macicy) są unieruchomione ACAT.

• Przykład 1. Kontrola naziemna do ICHS - 10 % ruchliwych plemników. Druga kontrola z NHS - 80% ruchliwych plemników. Dwie kontrole razem - 90 % ruchliwych plemników. W probówce - 80 % ruchliwych plemników.

SIT = R / D = 90/80 = 1,1

Test jest negatywny, unieruchomiony ACAT nieobecny.

• Przykład 2. W probówce - 40 % ruchliwych plemników, Jednakże, w grupie kontrolnej, w Przykładzie 1.

KN = 90/40 = 2,2

Test pozytywny. Jest unieruchomionego przeciwciała (AspAT), przez które ruchliwość plemników znacznie ograniczone.