Penentuan ciri kuantitatif dan kualitatif spermatozoa

Penentuan motilitas sperma

Penentuan motilitas sperma adalah parameter yang paling penting, mencirikan kualiti ejakulasi. Sperma, subur, mempunyai mobiliti - melakukan gerakan translasi linear dengan kelajuan 50 µm/s. Boleh didapati dalam ejakulasi spermatozoa dengan motilitas terjejas - dyskinospermia dalam bentuk ayunan, arena dan jenis pergerakan lain, yang tidak biasa.

Motilitas sperma dinilai dalam penyediaan ejakulasi asli. dengan bidang pandangan yang terhad (menggunakan tetingkap Fonio), menggunakan kanta mata 7X dan objektif 40X, dengan pemeluwap separa terbuka. mengira sehingga 100 sel, perhatikan bilangan telefon bimbit di antara mereka, spermatozoa sedentari dan tidak bergerak. Biasanya, spermatozoa motil aktif adalah 80-90 %, tidak aktif - 10-12, tidak bergerak - 6 - 10 %. Hanya spermatozoa yang bergerak aktif dan tidak aktif diambil kira, yang bergerak ke hadapan.

Anda boleh menggunakan skala penilaian lima mata yang lebih terperinci:

• "4" - mobiliti yang sangat baik (semua spermatozoa mempunyai motilitas translasi rectilinear dengan kelajuan yang agak tinggi);
• "3" - mobiliti yang baik (agak berkurangan);
• "2" - mobiliti sederhana (banyak spermatozoa yang tidak bergerak, tetapi dengan ekor yang bergetar);
• "1" - mobiliti yang lemah (tiada pergerakan ke hadapan, motilitas ekor sperma sahaja);
• "0" - tiada pergerakan sperma.

ejakulasi kesuburan bergantung pada tempoh pergerakan sperma, oleh itu, adalah perlu untuk menentukan mobiliti spermatozoa dalam dinamik (kinesisgram dinamik).

Setitis ejakulasi disapu pada slip penutup, terbalikkan dan letakkan pada slaid kaca dengan lubang untuk titisan tergantung dengan cara ini, supaya titisan berada di tengah-tengah ceruk. Tepi penutup penutup dilincirkan dengan parafin cecair dan peratusan sel bergerak aktif ditentukan di bawah mikroskop., spermatozoa sedentari dan tidak bergerak melalui 1, 3, 6, 12 dan 24 jam selepas ejakulasi. Kajian dijalankan pada suhu bilik. Biasanya, bilangan spermatozoa yang bergerak aktif berkurangan setiap 2-3 jam 20 % ,

• Nota kaki. Pemeriksaan mikroskopik ejakulasi hendaklah dijalankan di makmal oleh seorang, dengan pengalaman yang mencukupi dalam bidang diagnostik makmal ini, kerana hasil penentuan motilitas sperma oleh penyelidik berbeza berbeza-beza sehingga ±40 % dan sebahagian besarnya bergantung pada pengalaman dengan ejakulasi.

Ujian untuk "revitalisasi" spermatozoa

Ujian untuk "revitalisasi" spermatozoa berdasarkan pemulihan mobiliti normal yang tidak bergerak, tetapi spermatozoa hidup dengan larutan yang merangsang:

1) Penyelesaian Becker (glukosa - 3 g, NA₂HPO₄ - 0,6 g, NaCl - 0,2 g, KH₂SELEPAS₄ -0.01 tahun, air suling ke 100 ml; pH — 7,8);

2) 0,1 % larutan kafein (hanya tidak dalam ampul!) - 10 % daripada jumlah ejakulasi;

3) 0,1 M larutan arginin.

Kaedah. Kapasiti pipet volumetrik 1 ml disedut 0,1 ml ejakulasi (sebati) dan dengan pipet yang sama mereka kumpulkan 0,9 ml larutan perangsang. Kandungan pipet ditiup ke kaca jam tangan., gaul rata dengan menghisap dan meniup cecair berulang kali ke kaca jam, dan kemudian sediakan persediaan gantung gantung. Dalam 5— 10 min tetap, tetapi sperma hidup mula bergerak.

Peratusan spermatozoa motil ditentukan serta-merta selepas pemulihan mobiliti dan selepas 3, 6, 12 dan 24 tidak. Untuk mendapatkan keputusan yang lebih dipercayai, ujian selari dijalankan dengan dua penyelesaian merangsang.. Hanya di bawah syarat bahawa mustahil untuk "menghidupkan semula" spermatozoa yang tidak bergerak boleh kita bercakap tentang necrospermia.

Pengenalpastian spermatozoa hidup di kalangan yang tidak bergerak

Prinsip kaedah adalah berdasarkan, bahawa enzim sperma hidup menyahwarna eosin. Digunakan sebagai reagen 5 % larutan akueus kalium eosin dan 10 % larutan akueus nigrosin.

Kaedah. Setitis kecil ejakulasi diletakkan pada slaid kaca, letakkan titisan besar berganda di sebelahnya 5 % larutan kalium eosin dan setitik 10 % larutan nigrosin, yang juga dua kali lebih besar daripada setitik kalium eosin. Pertama, ejakulasi bercampur dengan potassium eosin, tunggu beberapa saat, dan kemudian dicampur dengan setitik nigrosin, sekali lagi tunggu beberapa saat dan buat sapuan nipis dengan slaid kaca tanah.

Menggunakan sistem rendaman mikroskop, dalam smear dikira sekurang-kurangnya 200 sperma, menonjolkan hidup (tak berwarna) dan orang mati (diwarnakan merah dengan eosin). Bilangan spermatozoa hidup dan mati dinyatakan sebagai peratusan. Sekiranya tiada nigrosin, setitik ejakulasi dicampur dengan setitik 5 % larutan kalium eosin dan sediakan smear nipis untuk mikroskop. Nigrosine hanya mengotorkan latar belakang dadah, di mana spermatozoa menonjol lebih kontras. Biasanya, spermatozoa hidup adalah 80-90 % daripada jumlah keseluruhan mereka.

Jumlah sperma masuk 1 ml dan dalam keseluruhan isipadu ejakulasi

Bilangan spermatozoa dalam 1 ml dan dalam keseluruhan ejakulasi dikira dalam ruang pengiraan Goryaev.

Bilangan spermatozoa dalam keseluruhan ejakulasi ditentukan dengan mendarabkan bilangan spermatozoa dalam 1 ml setiap jumlah ejakulasi (dalam mililiter).

• Nota kaki. Dalam ruang pengiraan, anda juga boleh menentukan bilangan spermatozoa motil, yang mana ejakulasi harus dicairkan dengan larutan isotonik hangat natrium klorida dan bilangan spermatozoa yang tidak bergerak harus dikira., dan kemudian tolak mereka daripada jumlah.

Biasanya, dalam 1 ml ejakulasi mengandungi 60-120 juta. sperma, dengan hiperspermia - lebih banyak lagi 120 juta, dalam oligospermia - daripada 30 kepada 60 juta, yang, sebagai peraturan, menjadikan persenyawaan mustahil. Walau bagaimanapun, kes telah diterangkan, apabila persenyawaan berlaku dan apabila disimpan 1 ml ejakulasi ot 5 kepada 30 juta. sperma.

Bagaimanapun apabila oligospermia dikesan 2-3 kiraan kawalan bilangan spermatozoa diperlukan pada selang 3-4 minggu untuk menentukan bilangan maksimum mereka. Dalam lelaki yang sama, bilangan spermatozoa tertakluk kepada turun naik fisiologi yang ketara..

Biasanya, keseluruhan pancutan mengandungi lebih daripada 150 juta. sperma.

Kiraan sperma

Spermatogram ialah peratusan pelbagai bentuk morfologi spermatozoa dan sel spermatogenesis.

Dalam calitan, diwarnai dengan hematoxylineosin atau Pappenheim, dikira sekurang-kurangnya 200 sperma, manakala bilangan bentuk normal dan patologi, serta sel spermatogenesis dinyatakan sebagai peratusan. Pengiraan dilakukan menggunakan sistem rendaman mikroskop dan mesin mengira leukogram dengan nama kunci yang telah diubah suai..

Dalam ejakulasi biasa, bentuk normal spermatozoa adalah 80-85 %, kadang-kadang 100 %, Ini termasuk fisiologi, yang dicirikan oleh atau luar biasa sempit, atau dikurangkan, atau pembesaran kepala.

Muda, atau tidak matang, bentuk spermatozoa mempunyai sisa sitoplasma di sekeliling kepala dan leher ("kolar"), diperhatikan dengan hubungan seksual yang kerap dan tidak mampu persenyawaan.

Bentuk lama spermatozoa (hiperkromia, achromia, vakuolisasi kepala) muncul dalam ejakulasi selepas pantang seksual yang berpanjangan dan tidak sesuai untuk persenyawaan.

Bentuk patologi termasuk spermatozoa dengan ubah bentuk kepala: megalospermozoid (gigantospermatozoa), makro-, mikrospermatozoa, berbentuk kon, spermatozoa berkepala dua dengan satu leher dan satu ekor, tanpa leher dengan satu atau lebih ekor, tanpa ekor, dengan ekor tanpa kepala, dsb..

Pada lelaki yang sihat, bentuk spermatozoa yang tidak normal biasanya tidak ditemui dalam ejakulasi normal., tetapi kadang-kadang bilangan mereka dengan keupayaan membaja normal ejakulasi boleh mencapai 20 %, yang kira-kira 15 % membentuk patologi kepala, 3-5 % - badan, 2-5 % - ekor.

Dengan spermatogenesis patologi, bentuk rembesan ketidaksuburan, spermatozoa dengan patologi kepala dan leher dikesan. patologi ekor biasanya berasal dari perkumuhan, berlaku apabila sel sperma melalui vas deferens.

Dalam persediaan bernoda, sel-sel germinal yang terletak berasingan pada peringkat pembezaan dan pematangan yang berbeza juga boleh dilihat dengan jelas., apa yang penting untuk membezakan aspermia dan azoospermia.

spermatogonia mempunyai bulat, kadang-kadang bujur, diameternya ialah 5-12 mikron. Nukleus menduduki kira-kira satu pertiga daripada sel, gelap- atau berwarna terang, dengan 1—2—3 nukleo- llama, selalunya terletak berhampiran karyolemma (shell nuklear), struktur kromatin berbutir halus. The uzkaya sitoplasma, basophilic, gomogennaya. Spermatogonia membahagi secara mitosis beberapa kali. Terdapat sel dengan peringkat mitosis yang jelas.

Sebahagian daripada sel, terbentuk akibat mitosis, dibezakan kepada spermatosit I, dan kemudian pesanan kedua. Spermatosit dari urutan pertama - sel bulat atau poligon dengan diameter 17-19 mikron dengan nukleus bulat besar dan sitoplasma berbutir halus ringan. Dalam persediaan bernoda, zon perinuklear yang jelas kelihatan..

Susunan Spermatosit II terbentuk akibat meiosis. Mereka lebih kecil, daripada spermatosit urutan pertama (diameter 15 m), tetapi secara morfologi hampir sama. Lebih kerap berlaku dalam ejakulasi, daripada spermatosit urutan pertama, tetapi lebih kurang kerap, daripada spermatid.

Spermatids - kecil, sel bulat atau memanjang dengan diameter 12-15 mikron dengan nukleus hiperkromik bulat, terletak secara berpusat atau eksentrik. Kemungkinan spermatid berinti banyak. Sitoplasma Pale, basofilik, sering vacuolated.

Spermatid bertukar menjadi spermatozoa.

Sel-sel spermatogenesis dalam spermatogram biasa tidak lebih daripada 2 %. Sebilangan besar daripada mereka diperhatikan dalam ketidaksuburan yang bersifat rahsia..

Untuk mikroskopi kontras fasa ejakulasi dicairkan dengan larutan natrium klorida isotonik dengan penambahan sedikit 1 % larutan akueus rivanol atau asid karbolik untuk mengurangkan motilitas sperma.

Dengan mikroskop pendarfluor satu titis ejakulasi dan satu titis oren akridin yang dicairkan disapu pada slaid kaca 1:20000. Titisan dicampur dan ditutup dengan penutup.. Untuk mikroskop, kanta mata 7X dan objektif 40X digunakan.. Spermatozoa hidup bertukar menjadi hijau, yang mati berwarna oren. Bentuk normal dan patologi spermatozoa mudah dibezakan kerana ciri morfologinya..

Peraturan untuk bekerja pada kontras fasa dan mikroskop bercahaya diterangkan dalam arahan untuk peranti ini.. Apabila menggunakan kontras fasa dan mikroskop luminescence, spermatogram dikira mengikut peraturan am.

Berdasarkan pemeriksaan mikroskopik ejakulasi, pelbagai keadaan patologi boleh dikesan..

• Aspermia - ketiadaan sel spermatozoa dan spermatogenesis dalam ejakulasi.
• Azoospermia - ketiadaan spermatozoa dengan kehadiran sel spermatogenesis.
• Astenospermia - pengurangan bilangan sel motil dan peningkatan bilangan bentuk patologi dengan jumlah kiraan sperma yang normal.
• Oligoasthenospermia - pengurangan bilangan spermatozoa dan bentuk mudah alih mereka dan peningkatan bilangan bentuk patologi.
• Necrospermia – imobilitas semua spermatozoa dalam penyediaan walaupun selepas "kebangkitan semula".
• Akinospermia - negeri, di mana, tidak seperti nekrospermia, spermatozoa yang tidak bergerak sebelum ini, selepas "kebangkitan semula", mula bergerak secara aktif.