Paroksizmālā nakts hemoglobīnūrija – Slimība Marchiafava Michele

Paroksizmālā nakts hemoglobīnūrija samērā reti tiek atrasts iegūtās veidlapas hemolytic anēmija, savienots ar eritrocītiem struktūras izmaiņu, Neutrophil granulocyte un trombocītu. Plūsmas ar intravaskulāru hemolysis pazīmes, kur ir hemoglobinuria, gemosiderinuriya, plazma bezmaksas hemoglobīna līmeņa pieaugumu. Slimības ir bieži sarežģī perifēro vēnu un asinsvadu tromboze iekšējie orgāni.

Etioloģija un patoģenēzi paroxysmal nakts gemoglobinurii

Pirmajā slimības apraksts dots 1882 g. Tas bija aprakstīts detalizētāk 1928 g.

Bieži slimības nosaukums ir paroxysmal naksnīgajā hemoglobinuria (APG), Taču tas patiešām atbilst maz slimības, tāpēc, ka nav klāt paroxysmal hemoglobinuria novērojama ne vienmēr.

Intravaskulāru hemolysis ar gemosiderinuriej papildus APG novērojama daudzās formās autoimmune hemolytic anēmija kā siltuma, un ar aukstu antivielas, jo īpaši, kad veidlapas ar siltuma gemolizinami, kā arī dažas formas iedzimtām hemolytic anēmija, kas attiecas uz pārkāpuma eritrocītu membrānas struktūras.

Slimību Markiafavy-Micheli novērotas dažādos vecumos. Palielināts sarkano asins šūnu iznīcināšanu iemesls ir eritrocītiem, paši defekts.

Pacientiem ar PNH sarkano asins šūnu, kā norādīts iepriekš, komplementom ērti sakļaut, veidojot optimālus apstākļus tā derīgumu, vai kad paskābināšanās serums, vai tad, kad jūs palielināt koncentrācijas papildina ap eritrocītu, radot zema koncentrācija joni saharoznoj Trešdiena. Sarkano asinsķermenīšu pacientiem ar PNH ir paaugstināta jutība pret antivielas sekas kā aglutīnu, un, sevišķi, hemolysins.

Kad PNG skar ne tikai sarkano asins šūnu, bet leikocītu un trombocītu pacienta. Trombocītu un pacientiem ar PNH leikocītu paaugstināta jutība pret papildinājumu, kā sekas ir paskābināšanās serums, un trešdien ar saharozes zemu jonu stiprums. Tie ir daudzkārt jutīgāki pret izoagglûtininov sekas, par donoriem trombocītu un leikocītu. Tādā veidā, trombocītu un balto asins šūnu membrānas ir viens un tas pats defekts, kas un sarkano asins šūnu.

Noteiktu antivielas, sarkano asins šūnu virsmas, leikocītu un trombocītu un tādējādi pierādīt dalību APG autoagressivnyh slimību grupa, nevar būt visjutīgākās metodes.

Ir pārliecinošs pierādījums tam, ka pastāv divas atšķirīgas populācijas APG, eritrocīti. Vesels cilvēks visvairāk izturīgs šūnās ir visvairāk nestabils reticulocyte APG. Tas norāda, ka, patoloģiskās sarkano asins šūnu populācijā nav vienkārši izdzīvot uz nogatavināšanas, un vecāki nobriedušus eritrocītus, kas attiecas uz veseliem vai gandrīz veseliem iedzīvotājiem.

IN 1970 Šajā pētījumā eritrocītu Latina, ietekmēto PNG, Tas tika atklāts, lai tajos būtu, tāpat kā ar veselīgu mulati sievietēm, elektroforēzes variantus divas normālas Mr 6-FD; Variants, izplatīta starp cilvēkiem Āfrikā, un opcijas, tipiska Eiropas iedzīvotāju daļa. Pēc izdevumu hemolysis pagriezās, patoloģiska sarkanās asins šūnas satur tikai vienu opciju Mr 6-FD, un normālās sarkanās asins šūnas — gan klājamās variantiem g-6-PD. Tātad, lysed iedobju ar sarkanajiem asinsķermenīšiem saturs ir cēlusies no vienas šūnas.

Šo faktu ar lielu precizitāti norāda divas populācijas eritrocītu klātbūtni, atšķiras ne tikai funkcionāli, kā, piemēram,, pie mikrosferocitoze, bet arī pēc izcelsmes: citiem vārdiem sakot, Ziņojums apstiprina to patoloģiskā klons šūnu klātbūtne, t. tas ir. somatiskās mutācijas. Identitātes eritrocītu membrānu bojājumus, neitrofilu un trombocītu liek domāt, ka, ka patoloģiskā informācija visticamāk saņem būris, blakus uz stumbra, t. tas ir. priekšteča šūnu mielopoèza. Blastomnyj izaugsmi PNG nav īpaši. Aprakstīt tikai retos gadījumos leikēmijas straujā attīstība uz fona PNG. Tomēr, Mēs varam pieņemt,, PNG ir labdabīgs audzējs asins sistēmas variants, uz ilgu laiku, ražo ne audzēja šūnu proliferāciju, raksturīga cita veida leikēmija.

Komplementčuvstvitel′nosti attīstības mehānisms PNG, kamēr nav skaidrs.

Nozīmīgi maina Glycolysis un pentozno fosfātu cikla enzīmu aktivitāte nav.

Kad PNG samazināta aktivitāte eritrocītu acetylcholinesterase, visticamāk, sakarā ar sarkano asins šūnu membrānas struktūras traucējumus, jo enzīma atrodas membrānas virspusē un viegli pārrauta, kad savu sakāvi. Zināms, ka acetylcholinesterase inhibitoru lietošanu neietekmē eritrocītu izdzīvošanas. Tomēr acetylcholinesterase aktivitātes kritums novērojama arī citās formās hemolytic anēmija, Tādēļ nevar izskaidrot parādību pieaugumu komplementčuvstvi- Problēmām.

Ir pierādījumi,, pierādījumi par nepiesātināto taukskābju skaita pieaugums, iekļauti fosfolipīdi struktūra, eritrocītu membrānas. Pastāv iespēja, lai izmaiņas lipīdu — ir tikai pārdomas par jebkādām izmaiņām, sarkano asins šūnu membrānas struktūras. Pētījums par olbaltumvielu eritrocītu membrānas no pacientiem ar PNH poliakrilamīda gēla elektroforēzi klātbūtnē nātrija dodecilsulfata kopā, to, ka vairākas frakcijas olbaltumvielu saturs ievērojami atšķiras no vadības.

Galvenā loma thrombotic komplikācijas APG patoģenēzi relegated vnutrisosudistomu iedalījums sarkano asins šūnu un recē anas faktori stimulācija, atbrīvots no eritrocītiem laikā to sabrukuma. Ja APG iznīcina galvenokārt reticulocyte, var būt, Tas un jāpaskaidro thrombotic sarežģījumiem šo slimību, atšķirībā no cita veida hemolytic anemias frekvence, kopā ar klaju intravaskulāru hemolysis.

Klīniskās izpausmes paroxysmal nakts gemoglobinurii

Slimība parasti sākas ar pinkšķēšana. Pacienti sūdzas par vājumu, vārgums, reibonis. Dažreiz atzīmē, subicteric skler. Bieži vien vispirms sūdzībām galvassāpes, dažādas lokalizācijas vēders. Tendence palielināt trombu veidošanos izraisa pacienta medicīniskās konsultācijas. Hemoglobinuria diezgan reti ir pirmais simptoms slimības un dažiem pacientiem APG var būt klāt visos. Dažos gadījumos šķiet, pirmo reizi pa 2-3 gadus un pat cauri 10 gadus pēc slimības pazīmju parādīšanās.

Viens no PNG-bouts vēdera sāpes raksturīgās iezīmes. Lokalizācija no tā var būt ļoti dažādas. Ārpus kriza kuņģa sāpes perioda, parasti, nav novērota. Bieži vien pievienojas vemšana. Visticamāk, vēdera sāpes, pacientiem ar PNH ir saistīta ar DVT apzarņa kuģiem.

Perifēro asinsvadu tromboze (biežāk nekā nav — augšējo un apakšējo ekstremitāšu vēnu, vismaz-nieru kuģu) arī raksturīgs simptoms paroxysmal nakts gemoglobinurii. Uz 12 % APG pacientiem novērota throm. Thromboembolic komplikācijas ir visbiežāk šo slimību nāves cēlonis.

Kad objektīvu pētījumu par pacienta bieži ievērības cienīgs paleness ar vieglu pieskārienu želtušnym. Bieži vien ir sejas pietūkumu, dažkārt pārlieku pilnība. Varbūt nelielu pieaugumu aknas un liesa, Kamēr tas nav tipiski APG.

Paroxysmal nakts gemoglobinurii raksturojas ar zīmēm intravaskulāru hemolysis, svarīgākais no tiem ir palielināts plazma bezmaksas hemoglobīns. Šis temats periodiski gandrīz visiem pacientiem APG. Tomēr pieaugumu plazmā bez hemoglobīna pakāpe ir dažāds un ir atkarīgs, kādas slimības periodā studiju. Šīs krīzes laikā proporcionāli pieaug ievērojami, Ir arī metal′bumina plazmas skaita palielināšanās.

Plazma bezmaksas hemoglobīna līmenis atkarīgs hemolysis pakāpi šajā brīdī, satura gaptoglobina, filtrācijas hemoglobīna daudzumu urīnā un iznīcināšanas kompleksa hemoglobīns ātruma pakāpi — haptoglobin. Attiecībā uz mazo hemolysis pakāpi bezmaksas hemoglobīna līmeni plazmā, nebūs pietiekams, lai izfiltrēt to caur nierēm filtru. Tādēļ hemoglobinuria nav obligāta simptoms slimības. Kad iet caur canaliculi nefronov izdala hemoglobīns ir daļēji iznīcināts un deponēti cauruļveida epitēlijs. Tas ir iemesls, kāpēc urīna hemosiderin.

Nodrošināti ar urīnu hemosiderin lielākā daļa pacientu ar paroxysmal naksnīgajā hemoglobinuria. Gemosiderinuriâ reizēm neparādās uzreiz. Tas ir svarīgi, bet nav raksturīgas slimības pazīmes PNG.

Paroxizmalna nakts gemoglobinurii laboratorijas parametri

Hemoglobīns, pacientiem ar PNH svārstās no 1.86- 3,1 mmol / l (30-50 G / l) un vēl mazs normālā laikā remisijas.

Pacientiem ar PNH eritrocītu skaitu hemoglobīna samazināšanas līmenis samazinās. Indikatora krāsa ilgāku laiku paliek tuvu bloks. Kur, Ja pacients zaudē ievērojamas summas dzelzs ar urīnu formā un hemosiderin hemoglobīns, dzelzs līmenis pakāpeniski samazinās. Aptuveni puse no pacientiem ir novērojama zema krāsu indikators. Dažas no tām ir paaugstināts hemoglobīna līmeni (P), īpaši laikā palielinājās.

Lielai daļai pacientu lielāku satura reticulocyte, taču relatīvi zems (2— 4 %). Leikocītu PNG samazināts vairumā gadījumu skaits. Daudzi pacienti ir 1,5-3 grami 1 l, bet dažkārt samazinātas līdz 0,7-0,8 g 1 l. Leikopēnija, parasti, Tur ir, samazinot Neutrophil granulocītu skaits. Dažreiz asins APG normālā vai augsta — līdz 10-11 g 1 l.

Ja APG samazina neutrophil fagocitozes granulocītu aktivitātes.

Trombocitopēnija arī bieži manīts PNG, Tomēr, trombocītu ar parastajiem funkcionālā stāvokļa. Droši vien, Tas izskaidro asiņošanas komplikācijas retums kad šī slimība, Lai gan trombocītu skaita dažkārt ievērojami samazinās — līdz 10 – 20 g 1 l. Parasti ir lielākā daļa pacientu trombocītu 50 – 100 g 1 l. Normāli trombocītu skaita neizslēdz diagnozi paroxysmal nakts gemoglobinurii.

Pētījums par kaulu smadzenes atklāti simptomi, galvenokārt raksturīgi hemolytic anēmija ir sarkans kairinājumu dīglis hematopoiesis parastā numura mielokariocitov. Dažiem pacientiem ir nelielas Megakaryocyte skaita samazināšanās.

Līmeni serumā dzelzs PNG Tas ir atkarīgs no slimības stadijas, intravaskulāru hemolysis un asins aktivitātes pakāpe. Kur, Ja pacientiem ir pastāvīga vai biežas hemoglobinuria, kā arī pastāvīga gemosiderinuriâ, saturu no dzelzs organismā, un līdz ar to, un samazinās serumā, dažreiz ļoti būtiski. Dažreiz PNG sākas ar hypoplastic pazīmes. APG ir atkarīga pacienta ķermeņa veikali dzelzs, viena puse, no dzelzs zaudējumu urīnā, un, no otras puses, erythropoiesis intensitāte. Tāpēc jūs nevarat veikt dzelzs deficīts diagnostikas pazīmes paroxysmal nakts gemoglobinurii.

PNG seruma bilirubīna līmeni lielākajā daļā gadījumu nepareizā gaismā, palielināta vai parasto, galvenokārt caur netiešajām. Bilirubīna vidējais saturs ir 22-28 μmol/l. Jāņem vērā,, kad hemoglobīns hemoglobīns veidojas sabrukšanas vnutrisosudistom gaptoglobinovyj komplekss, kas un galu galā arī salūst ar bilirubīna veidošanos.

Dažiem pacientiem ar PNH slimība sākas ar gleznām aplastiska anēmija.

Paroxysmal nakts gemoglobinurii diagnoze

Ja eritrocītu paroxysmal nakts gemoglobinurii čaulas struktūra ir bojāta, kā atspoguļots augstu jutību pret viņas papildina sekas. Šajā paaugstināta jutība tiek noteikta, izmantojot vai nu Hema paraugi, vai jūtīgākus saharoznoj paraugi. Tomēr dažos gadījumos, jo īpaši formā gemolizinovoj autoimmune hemolytic anēmija, saharoznaâ parauga kļūdainus pozitīvus rezultātus var dot. Gemoliziny fiksējas uz virsmas savas sarkanās asins šūnas un klātesot papildina saharoznoj Trešdiena, iznīcināja viņu, Lai gan PNG raksturojas ar iznīcināšanu, šūnu komplementom, bez iedarbības antivielas.

Izslēgt gemolizinovoj autoimmune hemolytic anēmija pētījums ieteica hemolysins, kā aprakstīts iepriekš, un krusta saharoznoj, izmantojot seruma paraugus no pacienta un donora odnogruppnogo eritrocītiem, un nevis vice versa, kā tas ir ierasts. Kad ir pozitīvs APG tiešai paraugu, un pāri negatīvu. Kad gemolizinovoj formu AIGA var rasties kā pozitīvs, un negatīvo krusta paraugu. Šajos gadījumos ir ieteicams izmantot trešo opciju saharoznoj paraugi — izmantojot gan serumu, un sarkano asins šūnu pacienta. Hemolysis šis variants minimālo pakāpi, kad PNG un maksimālais gemolizinovoj AIGA veidlapas. Paskaidro, ka šāds rezultāts var būt tikai ļoti specifiskās antivielas pacienta gemolizinovoj veidā autoimmune hemolytic anēmija antigēna seruma, pieejams lielos daudzumos eritrocītiem, slimības, nekā ar donora eritrocītu. Tiešu pozitīvu paraugu saharoznaâ šiem pacientiem ir saistīta, droši vien, ar eritrocītiem noteiktu antivielu klātbūtni.

Hemolysins metodi agregatgemagglûtinacii noteikšana un citiem palīdz nodot pareizo diagnozi. Nevar izmantot kā donors seruma pacientu, tāpat kā gemolizina satura rezultāts var nebūt ložnopoložitel′nym. Negatīvs rezultāts var rasties, Ja avota izmanto pacienta serums komplementa APG vai pacienta serums aknu ciroze, Reimatoīdais artrīts, Sistēmiska sarkanā vilkēde un citām slimībām, ar kuru papildina samazinās. Paraugs, un parauga Hema kļūst mazāk izteikts Saharoznaâ, Ja jūs lietojat asinis no pacienta tiek izmantots antikoagulanta heparīns, nevis Nātrija citrāts. Pēc hemolytic krīzes intensitāte tiek samazināta paraugus Hema un saharoznoj paraugu, bet tie nav kļuvis negatīvs.

Bezmaksas plazmas hemoglobīns Bing Derviz modifikācijas metodi un Bâlko ar nakts paroxysmal gemoglobinurii noteikšana

Metode pamatojas uz hemoglobīna spēju reaģēt ar skābi Benzidīns trešdien klātbūtnē ūdeņraža peroksīda veidošanās zaļš krāsojums ar, pirmo reizi ritošā zilā krāsā, un tad sarkanīgi purpursarkanā. Intensitāte ir proporcionāls skaits hemoglobīns.

Reaģenti.

1. Acetāts buferis 0,1 M, pH 4,6: 27,22 g nātrija acetātu izšķīdina 1 l ūdens (0,2 M šķīdums); ar citu mērīšanas spuldzes Cook 1 l 0,2 Uksousnokisloy skābe M šķīdums; sajaukts 480 ml Nr. 1 un 520 ml Nr. 2.
2. Ūdeņraža peroksīds 0,3 % šķīdums (pirms lietošanas sagatavo vaislas risinājumu 100 laiks).
3. Solânokislyj Benzidīns 0,1 % šķīdums: 50 35-40 ml acetāta buferšķīdums izšķīdina mg solânokislogo Benzidīns, karsē šķīdumu līdz 80 ° C ūdens vannā un pēc atdzesēšanas dot acetatnym buferis 50 ml.

Filtrēšanas kolbu un uzglabāt istabas temperatūrā tumsā ne vairāk kā 7 dienas. Dzeltenos reaģents ir nederīgi, Ātri potemnenii, jābūt perekristallizovat′ Benzidīns no alkohola.

Metode.

Blood izmeklējumiem ņemti no vēnas sauso adatu silikonirovannuû caurule, satur visus antikoagulanta. Asinis ar antikoagulantu centrifugē ne vairāk 10 minūtes 1500 / Min. Pēc atdalīšanās no tās plazmas centrifugē vēlreiz 10 minūtes 8000 TCU nogulsnēšanos leikocītu.

Test tube tiek aizpildīts 4 ml acetāta, 2 ml ūdeņraža peroksīda, 2 ml Benzidīns un 0,04 ml testa seruma sajauc un atstāj nostāvēties 3 m, tad ieliet optiskā ceļa garums kiveti 1 redzēt un fotometriruût pret kompensāciju risinājums par zaļo sejsegu. Zilās krāsvielas intensitāte palielinās 4-5 minūšu laikā, Tāpēc mērīšana jāatkārto 3 - 5 reizes pēc kārtas un maksimāli nolasījumi jāpieraksta. Pēc 5-6 minūtēm krāsošana seruma kļūst violeti brūns tonis, un sāk samazināties optiskā blīvuma vērtību. Divi identificēto maksimâlu rezultâtu tiek ņemta vidējā optiskais blīvums.

Kompensācijas risinājums, kas sastāv no 6 ml acetāta, 8 ml ūdeņraža peroksīda, 3 ml Benzidīns un 0,06 ml izotoniska nātrija hlorīda šķīduma, jāsagatavo vienlaikus ar.

Kalibrēšanas līknes uzrādīšanai Hemoglobīna šķīdums. Asinīs, veikti Hemoglobīna šķīdums, novērtēt tās saturu (medicīnas kolorimetre vai medicīnas refraktometre). Sagatavo šķīdumu hemoglobīna koncentrācijas 1 g / l, to pagatavo šķīdumus, zemākas koncentrācijas: 0,005,0,025, 0,05, 0,1 un 0,2 g / l. Katra iegūtā šķīduma pievienošana 0,04 ml maisījuma 4 ml acetāta, 2 ml Benzidīns un 2 ml ūdeņraža peroksīda.

Galvenās risinājuma gemolizata (1 g / l) kalibrēšanas līknes jāuzglabā aukstumā, un jāsagatavo tieši pirms pārbaudes darba risinājumiem zemākas koncentrācijas.

Parasti, jo 1 litri asins plazmu, kas satur 0,0005 mmol / l (0,01-0.04 g) Hemoglobīns.

Hemosiderin urīna ar nakts paroxysmal gemoglobinurii noteikšana

Hemoglobīna degradācijas dzelzs to adsorbēts nieru cauruļveida epitēlijs un ir daļa no hemosiderin. Sluŝennye šūnās nieru cauruļveida epitēlija šajos gadījumos ir graudi hemosiderin.

Rūpīga izpēte urīna nogulšņu pēc centrifugēšanas graudu hemosiderin redzamu un bez īpašas krāsošana. Tomēr viņi skaidrāks, krāsošanai Perlsa metodi.

Metode.

Pēc centrifugēšanas urīna virskārta iesūc pie, iegrime pievienot svejeprigotovlenny risinājums 1 % Dzeltens asins sāli un 1 % Sālsskābe (Sajauc vienādās 2 % sālsskābes un dzelteno asins sāls šķīdums). Pēc 10 minūtes pēc samaisīšanas maisījumu centrifugē un nogulsnes, kas skatās. Graudu hemosiderin krāsošanas zils.

Plazmas metgemal′bumina spektrofotometriska metode noteikšana

Reaģenti.

1. Fosfāta buferšķīdums izoosmotičeskij (pH 7,4): sajaukts 18 ml 0.15 M šķīdums nātrija digidrofosfata (24,4 g YaN2R04 1 l ūdens) un 82 ml 0,15 M šķīdums nātrija ūdeņraža (21,3 g NaH₂PĒC₄ uz 1 l ūdens).
2. Nātrija bisulfite.
3. Nātrija hidroksīds 1 M.
4. Serums cilvēka albumīna šķīdums (40 g / l).
5. Risinājumu gemina (5 mg / 100 ml); sagatavo nekavējoties, izšķīdinot gemina nelielos daudzumos kodīgo nātriju, un tad: lai panāktu, ka nepieciešamā apjomā serums albumīns šķīdums.

Metode.

K 2 ml seruma vai asins plazmā tiek pievienots 1 ml zabuferernogo izoosmotičeskogo risinājums, pH 7,4. Maisījumu centrifugē 30 minūtes ar 1200-1500 apgr. /min.. Nosaka optisko blīvumu pie 569 nm. Ja atšķaidīta plazma ievieto mēģenē un pievieno aptuveni 5 mg žāvēta hidratētās nātrija sulfāts. Caur 5 min vairākas reizes mēra optisko blīvumu pie paša viļņu garuma. Starpība starp divām vērtībām optiskais blīvums atbilst optisko blīvumu metgemal′bumina. Metgemal′bumina koncentrāciju nosaka pēc kalibrēšanas grafiks.

Kalibrēšanas grafiks displeja šādi. Risinājumu gemina albuminom pārnes daudzumu no caurules 0,01 līdz 0,1 g / l (no 0,2 līdz 2 ml). Šīs caurules, Ja risinājums mazāku apjomu 2 ml, pievienot līdz pat 2 ml albumīns. Pēc tam pievienot 1 ml fosfāta buferšķīduma izoosmotičeskogo. Centrifugē maisījumu pie 1500 / Min, un pēc tam izmēra optisko blīvumu. Atšķirība starp dimensijām tiek pielietots diagrammai, attiecīgi skaits gemina.

Normālas asins plazmas gemal′bumin trūkst. Šķiet, šajā gadījumā intravaskulāru hemolysis, piemēram,, Ja paroxysmal nakts gemoglobinurii vai gemolizinovoj formā autoimmune hemolytic anēmija, kā arī gaptoglobina trūkums, Kad heme saistās ar albumīnu.

Hema izmēģinājuma paroxizmalna nakts gemoglobinurii

Hema izmēģinājumu pamatā samazinot pretestību sarkano asinsķermenīšu pacientiem ar PNH zemāks pH trešdien komplementa svaiga seruma klātbūtnē.

Reaģenti.

1. A sālsskābes šķīdums 0,2 n.
2. Amonjaka šķīdums 0,04 %.

Metode.

No Vīnes veikt 5- 6 ml asiņu. Kā antikoagulantu izmanto nātrija citrāta vai oksalāts. Tajā pašā laikā ņem 15-20 ml asiņu no tās pašas grupas donoru. Sarkano asinsķermenīšu atsevišķi no pacienta un donora asiņu plazmas.

Donora serums tiek liets 0,5 ml sešu caurules, divi no viņiem likts uz 20 min ūdens vannā ar temperatūru 56 º C, lai inaktivētu seruma Papildinājums, pārējās četras mēģenes palikuši istabas temperatūrā. Sarkano asins šūnu pacientam divreiz mazgā izotoniceski nātrija hlorīda šķīdumā, tad suspenziruût pašā šķīdumā attiecība 1:1.

Tabulā ir atspoguļoti pētījuma shēmu.

Katrai mēģenei saturu samaisa, likts uz jūsu 1 h temperatūrā termostatā 37 ° C, un pēc tam centrifugē.

Par dīkstāvi izlasē 0,05 m sarkano asinsķermenīšu pacienta un donora tiek pievienots atsevišķi, lai 0,55 ml izotoniska nātrija hlorīda šķīduma.

Pēc centrifugēšanas hemolysis pakāpi var novērtēt ar aci. Hemolysis katrā mēģenē, lai mērā noteiksiet 4,7 ml 0,04 % Pievieno amonjaka šķīdumu 0,3 ml virsējais slānis, bet šajā mēģenē ar tukšgaitas starplaikos — 0,3 standartserums ml.

Lai identificētu 100 % hemolysis uz 4,7 ml amonjaka šķīduma pievienošana 0,3 mL suspensija eritrocītu (0,05 ml eritrocītu pacientam 0,55 ml izotoniska nātrija hlorīda šķīduma).

Šķīduma optisko blīvumu mēra pie ārsta kolorimetre un salīdzināt lasījumos ar amonjaka šķīduma optisko blīvumu bez sarkanās asins šūnas:

% hemolysis =((IS₁-IS₂)/IS₃)*100;

kur E₁ -optiskais blīvums analizējot zonde; IS₂-optisko blīvumu tukšā parauga; IS₃-optiskais blīvums 100 % gemolizata.

Parasti ne vairāk kā gemoliziruetsâ 5 % eritrocītu.

Paraugu uzskata par pozitīvu gadījumam, Hema, Ja gemoliziruetsâ vairāk 6 % eritrocītu.

Paroxizmalna nakts gemoglobinurii un gemolizinovoj veidā autoimmune hemolytic anēmija gemoliziruetsâ dažreiz līdz pat 50-80 % eritrocītu. Attiecībā uz šīm slimībām ir raksturīgs hemolysis tikai klātesot seruma neinaktivirovannoj (-Nr. 2). Ja seruma inaktivācijas neliedz hemolysis (-Nr. 3), Mēs varam pieņemt uz pastāvošām cita veida hemolytic anēmiju vai kļūda, nosakot pētniecības.

Sarkano asinsķermenīšu pacientiem ar paroxysmal naksnīgajā hemoglobinuria iznīcināšanai trešdien pie pH 6,5 prasa obligātu klātbūtni Papildinājums, atrodas svaiga seruma.

Saharoznaâ mēģinājums ar paroxysmal nakts gemoglobinurii

Saharoznaâ parauga pamatā ir, ka sarkanās asins šūnas ar paroxysmal naksnīgajā hemoglobinuria un gemolizinovoj formu autoimmune hemolytic anēmiju pacientiem tiek iznīcināti risinājumi zema jonu spēka klātbūtnē Papildinājums.

Reaģenti.

1. Saharozes šķīdumu: 9,42 saharoze, izšķīdināts 0,005 M fosfatnom buferis; pH 6,2 (91 ml 0,005 M NaH₂PĒC₄ un 9 ml 0,005 M Na₂HPO₄).
2. Hemoglobīna koncentrācijas noteikšanas reaģents: 200 mg sarkano asins sāli izšķīdina 1 l destilēta ūdens, Šeit pievienot 0,5 ml atsetontsiangidrina.

Metode.

Asinis, ņemot no Vīnes uz divām caurulēm, pacientam ir sauss (8-10 ml) un ar antikoagulantu (2— 3 ml). Antikoagulantu arī lietot Nātrija citrāts. Asiņu savākšanas caurules ar antikoagulantu eritrocītu divreiz legalizētu izotoniceski nātrija hlorīda šķīdumā. Nelikumīgi iegūtu līdzekļu legalizēšanas novēršanu un centrifugātu ieguve, lai pēc 0,4 ml eritrocītu pievienot 0,25 ml izotoniska nātrija hlorīda šķīduma.

Tajā pašā laikā ņemot asinis no donora asins divas caurules pašas grupas — ar antikoagulantu (2-3 ml), Tas tiek apstrādāts tādā pašā veidā, kā pacienta asins, un sauss (8— 10 ml) lai iegūtu seruma. Pēc donora seruma atdalīšana 0,5 to novieto ūdens vannas temperatūrā, ml 56 ° C 30 min inaktivācijas Papildinājums. Donora seruma vajadzētu veikt ikdienas pieredzi un saglabāt auksti. Mācību shēmas ir norādītas tabulā.

Caurules tiek ievietots termostats 30 minūtes 37 ° C, un pēc tam centrifugē 10 minūtes 2000 apgr. /min. un novērtētu hemolysis pakāpi.

Lai to izdarītu, mēģenē ielej 3,4 hemoglobīna koncentrācijas noteikšanai ml reaģenta un 0,6 ml- nogulumi no katras mēģenes. Caur 10 min mēģenēs ar šķīduma optisko blīvumu mēra 540 NM uz veselības refraktometre (Spektrofotometrs) vai medicīnas kolorimetre (DEC fotokolorimetre-m) Kad ir zaļa sejsegu, salīdzinot datus, kas iegūti ar optisko blīvumu šķīdumu hemoglobīna noteikšana. Ņem divus nolasījumu vidējā vērtība katra pieredze. Aprēķins tiek veikts saskaņā ar formulu:

% hemolysis in vitro =((IS₁-IS₅)/(IS₈-IS₅))*100

kur E₁ -testa šķīduma optisko blīvumu ģeneratora Nr. 1; IS₅ -testa šķīduma optisko blīvumu ģeneratora Nr. 5, jāizslēdz krāsošana serums; IS₈ -testa šķīduma optisko blīvumu ģeneratora Nr. 8, Ja 100 % hemolysis.

Krusta saharoznoj paraugiem (-Nr. 2) 100%-in vitro th hemolysis izmeklē Nr. 7.

Rezultātu izvērtēšana.

Normāli in vitro Nr. 1, satur eritrocīti zonde pacientam, hemolysis nepārsniedz 2-3 %.

Paroxizmalna nakts gemoglobinurii un gemolizinovoj formā autoimmune hemolytic anēmija (AIGA) Šajā in vitro hemolysis pārsniedz 6 % Mēģenes Nr. 4, kas satur asinis pacienta un donora seruma inaktivirovannuû, Test tube # 5, kas satur eritrocītiem un seruma donors, un numurs 6, kas satur serumu izotoniskā nātrija hlorīda šķīduma vietā — hemolysis nevajadzētu pārsniegt 1-2 %.

Cross-saharoznaâ izmēģinājuma versija (-Nr. 2) Kad gemolizinovoj AIGA veidlapas parasti pozitīva (hemolysins seruma klātbūtnē), bet tas var būt negatīva. In vitro Nr. 3 (sarkano asins šūnu un pacienta serums) hemolysis kā novērots APG, un gemolizinovoj veidā, AIGA. Paroxizmalna nakts gemoglobinurii maksimālais hemolysis tiek konstatēta parasto saharoznoj paraugs (-Nr. 1), mazāk izteikts — ar savu paraugu šūnu pacientam (-Nr. 3); Krusta saharoznoj paraugā nav hemolysis (-Nr. 2).

Kad gemolizinovoj AIGA veidlapas visvairāk izrunā hemolysis tiek noteikta parauga ar asins seruma un eritrocītu slimības (-Nr. 3), nedaudz mazāk izteikts — in vitro Nr. 1. In vitro Nr. 2 bieži novēro hemolīzes, bet trūkums neizslēdz formu gemolizinovuû AIGA.