Metodes Leishmania ar kasīšanas skarto audu ar izolāciju tīrkultūru
Sējot kasīšanas skarto audu pacienta uz konkrētu uzturvielu vidējā Leishmania vairoties un tos var noteikt ar mikroskopu.
Reaģents
Среда W.W.W. audzēšanai Leishmania (14 g agara, 6 g nātrija hlorīds, par 150 ml defibrinated trušu asins, ņemts tieši no sirds pirms gatavojot barotni, 900 ml destilēta ūdens). Destilētā ūdenī tika pievienots nātrija hlorīda un agaru. Kolbā, kurā vidējā tika uzkarsēts līdz pilnīgai kušanas agara, un 20-30 min sterilizēt tvaika sterilizer at 147,1 kPa (15 pie).
Atdzisis līdz 56 ° C agar pievienot sterilu defibrinated trušu asinis, maisīt ar kolbu pagriežot un iepilda sterilu pipeti 4 ml caurules. Kolba asins agara izsniegšanas laikā ir ūdens vannas temperatūrā 58 ° C. Caurules ar vidējiem padomiem.
Pēc sacietēšanas no agara, tie ir ievietoti inkubatorā par dienu 37 ° C sterilitātes kontrolei un saņem šķidro kondensātu. Ja tas ir ražots nepietiek, pirms sējas sterilos flakonos, jūs varat pievienot par 1 Viens ml šādiem risinājumiem: 0,85 % nātrija hlorīds, 1 % peptona šķīdumu, Hanks risinājums, laktoalbumīns hidrolizāts vai citu barotnes izotoniskā koncentrāciju.
Metodes atklāšanā Leishmania in nokasījumus cietušajās audos, izolāciju tīrkultūru
Atlasot kultūru rūpīgi ievēro noteikumus sterilitāti. Testa ādas apvidū ir jānoslauka ar vates tamponu, samitrinātu 70 % alkohols.
Pēc iztvaicēšanas spirta asas beigas sterila oftalmoloģijas skalpelis iegriezuma paugura garumu 2-3 mm. No apakšas griezuma ar sterilu Pastēra pipeti do nokasīšana audus. Rezultātā kritums serozs-asiņainu šķidrumu tika nodota mēģenē ar vidi. Manipulācijas veic vairākas reizes, sējas materiāls katru reizi jauna caurule. Ausu aizbāžņi iestrādātās parafīna vai nodot tos gumijas vāciņi un ievieto inkubatorā pie 22-24 ° C temperatūrā.
Rezultātu izvērtēšana
Kultūras ir mikroskopā katru dienu, lai identificētu izraisītājvielas. Izpētīt dzimtā narkotikas, ar metodi saskaņā ar izspiestu pilieni sagatavots, objektīvs 40×40. Rezultātus uzskata par negatīvu sēja, ja 40 dienas patogēns netika atrasts. Kultūras garena Leishmania (10-12 Mikroni ar vadu).
Piemērošana kultūras metode ir ļoti noderīga, ja tuberculoid forma leišmaniozes, diagnostika, ka citas metodes var būt mazāk efektīvas.
