Par asinsvadu-trombocītu hemostāzi pētījums

Pārkāpumi šajā līmenī hemostāzi var notikt ar tendenci asinsizplūdums vai trombozes, atkarībā no tā, kādas metodes tiek izvēlētas pētījumu. Turklāt, Visa pētījumu metodes trombocītu Hemostāzi iedalīt primārā un sekundārā, vai otrā sērija testi, kas piemērojami tikai tādā gadījumā,, Ja izmanto pārbaudes atklājās nekādus pārkāpumus. Galvenais (bazïsnım) Tālāk ir testi.

Paraugus pretestību (trauslums) kapilāri - aproces, Burka, angiorezistometriya

No šiem testiem, visvairāk pieejamu un vēl pietiekami informatīvi Sample Konchalovsky-Tiller-LEED.

Novērtējumu veic, skaitu un lielumu asiņošana, veidojas uz augšu no plaukstu virsmas apakšdelma (pa apli, kura diametrs 5 cm) Pēc 5 minūtēm kompresijas pie spiediena aproces pleca 12-13,3 kPa (90-100 Mm Hg. Art.). Rezultāti tiek ņemti vērā, izmantojot 5 min noņemot aproci. Numurs petehijas vairāk 10 norāda uz pieaugošo trauslumu microvessels, kas bieži ir saistīta ar trombocitopēniju vai traucēta trombocītu funkcija angiotroficheskoy. Ņem vērā arī to rašanos asiņošana, un tieši zem apkakles.

Banochnaya paraugs tiek veikta tajā pašā apgabalā ādas negatīvo spiedienu veidotos līmeņos - no 20 kPa (150 mm Hg. Art.) un zemākas. Izvērtējot rezultātus, petehijas, parādījās bankām.

Paraugus ilgumu un apjomu kapilārās asiņošanas

Klasiskā Duke izmēģinājums zemākas veltnis earlobe pēc gaismas sasilšanu viņai sadursta dziļumā 3,5-4 mm. Šajā pētījumā asiņošana parasti nepārsniedz 4 m, piliens asiņu uz filtrpapīra ir salīdzinoši zema, un sāk strauji samazināties, jo aptuveni 1-1,5 minūtes pēc punkciju. Kad izteikta trombocitopēnija (mazāk 20 T 1 l) trombocītu disfunkcija un smaga asiņošana laiks palielināts līdz 20-40 minūtēm, asins traipi ir daudz lielāks, un ilgtermiņa samazināšanās vai samazināt viļņi, tad atkal pieaugs. Duke paraugs nav pietiekami jutīgi, uz 2/3 pacienti ar thrombocytopathies tas dod normālus rezultātus.

Jutīgāki testi, kurā asiņošanas laiks ir izpētīta uz fona mākslīgi radīts venozo stāzi, attiecībā uz kuriem plecu ir novietots uz aproces mērīšanas iekārtas asinsspiedienu un ilgumu, pētījuma atbalstīta spiedienu, vienāds 5,3 kPa (40 mm Hg. Art.). Ņemot vērā šādu stāzi, kas Borchgrevink paraugu Vaaler uz plaukstu virsmas augšējās trešdaļas apakšdelma Lancet piemēroti šķērsvirziena griezumu dziļumu 1 mm un garums ir 8-10 mm (likme asiņošanas laika - up 10 m), un nogaršot Ivey et al. tas pats attiecas uz apakšdelma Lancet izdarīt asinis no pirksta dūriena dziļumā trīs šķērsvirzienā 3 mm (likme asiņošanas laika - up 7 m).

Ņemot vērā to pašu venozo stāzi veikto Pētījums par. NO. Shitikova, kuru galējos falangas piemēro iedurt dziļums 3 mm, tad gals pirksta iemērc tasi 5 ml izotoniska nātrija hlorīda šķīduma un saskaita asiņošanas laiks gaismā (ja šķīdums tiek intensīvi iekrāso ar asinīm, pēcpārbaude ar pirkstu tiek pārvietots uz citu kauss). Asins daudzums, zaudēts nosaka ar šķidruma tilpums bļodiņu pieaugumu (likme asiņošanas laika - up 4 m, apjoms asiņu zaudēts - no 0,01 līdz 0,4 ml).

Šajā testā T. N. Shushkevich zaudēts asins daudzums tiek noteikts ar krāsu amonjaka (0,04 %) , kas ir iegremdētas papīru ar asins traipiem, ar kolorimetriju par medicīnas kolorimetru.

Indikācijas testi ilguma asiņošanas, Nenormāls, pierādījumi par ļaunprātīgu izteikts trombocītu-asinsvadu hemostāzi, Tomēr normālos rezultātiem šiem paraugiem neizslēdz klātbūtni vieglas izteikta thrombocytopathy.

Skaitītu asins trombocītu

Skaitītu asins trombocītu (Goryaeva kādā skaitīšanas kamerā zem fāzu kontrasta vai toni, vai ar palīdzību daļiņu skaitītāji) - Vissvarīgākais veids, kā diagnosticēt trombocitopēnija un thrombocytopathy, plūstošs pastāvīgu vai periodisku skaita samazināšanos uz šīm šūnām (anomālija Bernard-SOULIER, Meia Hegglina un citi.).

Skaitīšanas skaits trombocītu arī ierosina, vai ir iespējams veikt to tālāku funkcionālo pētījumus un kādā veidā tas jādara (ar preconcentration trombocītu vai bez, fotometriski vai mikroskopu, uc. d.).

Pētījumā no lieluma trombocītu asins uztriepes – trombotsitometriya

Pētījumā no lieluma trombocītu asins uztriepes (trombotsitometriya) Tas ļauj jums veikt iepriekšēju spriedumu par dažādām populācijām šūnu asinīs testu un saņemt informāciju par vairākiem anomāliju, kā arī piesātinājuma trombocītu granulu.

Dažās thrombocytopathy (Viskota-Aldrich sindroms) Trombocītu dominē ļoti mazs (līdz 2 mikroniem), bet citi - milzu forma (anomālija Bernard-SOULIER, Meah-Hegglina) - Lai 8 m vai vairāk. Vairākās šajās šūnās ir nabadzīgi thrombocytopathy granulas (cm. zemāk), bet citi - centralizācija lauzto krelles trombocītu izplatīšanās uz stikla, kas veido pārkāpumu reakcijas un atbrīvošanu granulas tie satur vielas, nepieciešamas, lai īstenotu hemostāzi. Visas šīs īpašības, un spēja trombocītu to izplatības un veidošanās procesos, novērtējums struktūras šajās šūnās var pētīt izmantojot parasto un skenēšanas elektronu mikroskopiju, un pēc iejaukšanās Nomarski optika.

Par asins receklis ievilkšana regulāri pārkāpis ar smagu trombocitopēniju (T mazāk nekā 30-40 1 l) un dažās kvalitatīvā nepilnvērtību trombocītu formās, visbiežāk - kad trombotsitoastenii Glancmaņa, urēmiskais thrombocytopathy uc.

Research līmi-apkopošana trombocītu (AAFT)

Research līmi-apkopošana trombocītu (AAFT) - Svarīgākais elements laboratoriskajai diagnostikai visvairāk thrombocytopathy. Pašlaik vairāki viegli īstenojamiem un publiski pieejamu izpētes metodēm, tostarp vizuālā, mikroskopiskā un aparatūra (aggregometry, mikrofiltri un citi.) Šī reģistrācija funkciju var liecināt ietvert šādas metodes.

Metodes saglabāšanu trombocītu stikla (vai filtri)

Trombocītu skaits tika veikti ar venozo asiņu pirms un pēc tam, kad tā nodošanu standarta ātruma cauri kolonnai ar stikla lodītēm vai stikla šķiedras izvadu; trombocītu no asinīm zaudējumi tiek vērtēti pēc pakāpes adhesiveness.

Vairāk pieejams, lai gan nedaudz mazāk precīzs, metode, lai noteiktu skaitu trombocītu asinīs pirms un pēc saskares ar to konkrēta perioda laikā ar iekšējo virsmu kolbas, pagriežot noteiktā ātrumā. Precīzāku metode kavēšanos trombocītu MILLIPORE filtrus (poru diametrs - 15-20 mikroni). Šajos testos, novērtēšanu var veikt no pieauguma spiediena gradienta virs un zem filtra (aizsērējusi poras un trombocītu rādītāji noved pie šī indeksa pieaugumu).

Metodes pētot apkopošanu trombocītu

Hemolysate-apkopošana tests balstās uz spēju haemolysate mazgā eritrocītus, pētītas audzēšanas 10^-2 un 10^-6, maisot izraisīt apkopošanu savā plazmā, ieguva lielu skaitu trombocītu (apjoma attiecība citrāta plazmas un hemolysate - 1,0:0,2). Ņemot vērā laiku rašanās apkopojuma (ātrums, ar augstu koncentrāciju ar hemolysate-11-17, zems - 40-54 ar) un tās smagums. No procesu un tā intensitātes dinamika var novērtēt kā fotometrijas (Medicīnas kolorimetrs, green filtru, satraucošs) un jebkurš dizains agregografe.

Kad grafiskais ieraksts izmantošanas augstā atšķaidījuma haemolysate (10^-6) Tas nodrošina divu viļņu agregatogrammu, kur otrais vilnis ir saistīta ar atbrīvošanu endogēno trombocītu agregācijas stimulatorus - ADP, kateholamīnu, tromboksāna uc. Šis otrais vilnis raksturo reakcijā atbrīvošanu, tas nav novērota, ja nav trombocītu blīvu granulu (uzglabāšanas baseins slimība) vai pārkāpjot reakciju atbrīvot (aspirīns līdzīgs sindroms un citi.).

Hemolysate-apkopošana tests ir pieejams veikt jebkurā laboratorijā, Tā nav nepieciešama īpaša reaģentus.

Visual micromethod noteikšana trombocītu agregācijas

Tās būtība slēpjas faktā, kas iegūta saskaņā silikonirovaniya venozo asiņu stabilizējusies dubultu apjomu 3,8 % nātrija citrāts (proporcija 2,4:0,6 ml), tā centrifugē 6 minūtes 100 v / / min, un tā rezultātā trombocītu-bagātu plazmas tiek piemērota, 0,02 ml uz stikla slaidi un jāizturas ar tādu pašu tilpumu pievilināšanas aģentu - ADP, Trombīns, Kolagēna, noradrenalīns vai ristomycin. Noslēguma koncentrācija pievilināšanas aģentu testā plazmā vajadzētu būt:

• ADF 0,5*10^-4 mmol / l;
• noradrenalīns - 0,015%;
• trombīns - 0,125 V / ml (ir izvēlēts empīriski koncentrācija kolagēna).

Varbūt tests kā zemāks, un augstākas koncentrācijas pievilināšanas aģentu. Atlase no koncentrācijas, var mainīties atkarībā no darbības ar preparātu dažādu nevienmērīgu ražošanu un darbību paraugu atšķirīgs, saistībā ar kuru iepriekš ietilptu koncentrāciju katra līdzekļa uz normālu plazmu.

Maisījums trombocītu bagātu plazmas pievilināšanas līdzekli, tiek sajaukts ar šūpojot slaidu, uz tumša fona ar palielināmo stiklu ieraksta laiku izskatu vienības kā "sniega vētra". Izvērtējot skaitot trombocītu skaits plazmā. Tik, ADP laika summēšana, palielinās no 27-37 sekundes 400 T 1 l trombocītu līdz 62-75 sekundes 50 T 1 l, un trombīna-apkopošana - attiecīgi 40-52 līdz 79- 106 no.

Grafiskais reģistrācija apkopošana

Graphic reģistrācija apkopojuma reibumā pašiem apkopojot aģentiem - ļoti informatīva metode funkcionālo trombocītu studiju. Veic uz vai agregografah.

Kad grafikas reģistrā nosaka ne tikai sākums apkopojuma, bet tās intensitāte (lielākā novirze līkne un platība agregatogrammy), klātbūtne pirmā un otrā viļņa summēšanas - ja izmanto zemas koncentrācijas epinefrīnu un ADP (Tas raksturo reakciju otrā viļņa atbrīvi), un patoloģiskā sadalījums.

Vizuālais vai grafiskos pētījums trombocītu agregācijas reibumā ristomycin

Ļoti svarīgs ir vizuālais vai grafiskā pētījums trombocītu agregācijas reibumā ristomycin. Pārkāpis šāda veida apkopojuma (ristomycin galīgo koncentrāciju no 0.8-1.0 mg / ml) vienā no visbiežāk hemorāģisko diatēzi - angiohemophilia (Villebranda slimība), kā arī novirzes no trombocītu Bernard-SOULIER un dažas iegūtās formas apspiešanu sintēzes von Villebranda faktora (uremia, imūnās kavēšana, un tā tas. d.).

Kvantitatīvā noteikšana von Villebranda faktora asins plazmā

Kvantitatīvā noteikšana von Villebranda faktora asins plazmā tiek veikta ristomycin aglutinācijas formalinized apturēšanu normālu trombocītu dažādos atšķaidījuma testa plazmas bestrombotsitarnoy.

Šī metode ir svarīgs gan diagnostikai un sekundāro angiogemofnlii sintēzes inhibīciju šī faktora, un, lai novērtētu smagumu endotēlija (vaskulīts, ateroskleroze un citi.) un tendences uz trombozes, kurā saturs no fon Villebranda faktora asinīs bieži ievērojami palielina.

Par von Villebranda faktora līmenis Tas norāda uz spēju endotēlija sintezēt to (samazinātas kad aigiogemofilii) un apmērs sakāvi endotēlija vaskulīts, ateroskleroze un citām slimībām, turpinot ar sakāvi iekšējās gļotādas asinsvadus.

Par fiksēto normālu trombocītu līdz trombocītu bagāts plazmā veseliem indivīdiem, tiek atjaunots secīgi 0,2 % EDTA (0,5 ml 5 ml plazmas) un ar 2 min - nosakot risinājums (20 ml 40 % formalīns 1000 ml fosfāta bufera 0,2 g EDTA, pH 6,4).

Maisījums tika turēta + 4 ° C temperatūrā vismaz 1 nē, pēc tam tā tika pakļauts centrifugēšanai, supernatants tika izņemta, un trombocītu granulu tika mazgāti divreiz aptur risinājumu (Viens tilpums 3,8 % nātrija citrāts, un pieci apjomi izotoniska nātrija hlorīda šķīduma; pH noregulē uz 7,4). Sagatavotais apturēšana normālas trombocītu iesaiņo formalinized 1 ml un uzglabā -20 ° C temperatūrā. Kalibrēšanas līkni konstruē, izmantojot atšķaidījumus normālas plazmas bestrombotsitarnoy, īpatņiem, kas ir jauktas formalinized trombocītu. Turklāt, pēc tam maisījumu noteikts ristomycin Aglutinācijas. Kalibrēšanas līkne nosaka summu von Villebranda faktora testa plazmā. Fiksētie trombocītu labāk konservēti, pievienojot konservantu šķīdums nelielā apmērā nātrija azīds.

Testi, atspoguļojot spontānu apkopošanu trombocītu

Pētījumā pacientiem ar venozas trombembolijas vai palielināta tendence trombozes un išēmija no galvenajiem paņēmieniem ietvert testus, atspoguļojot spontānu apkopošanu trombocītu, t. tas ir. notiek visā asinīm vai plazmas nepievienojot pievilināšanas aģentu.

Lai identificētu šo fenomenu ar uztriepes asins vērš uzmanību uz attiecību trombocītu skaita guļ atsevišķi un to agregātiem, 3-5 sastāvā trombocītu un vairāk. Šī parādība ir vislabāk atklājas, skatot dūņas, rezultātā smago tseitrifu- dopinga trombocītu bagātu plazmu (20Minūtes pie -30 6000 / Min), stabilizēts ar citrātu vai EDTA, nātrija citrāta. Tomēr vairāk stabilie rezultāti sniedz šādas metodes, lai noteiktu spontānu apkopošanu.

Метод Wu-Hoak

Wu-Hoak metode, kas balstās uz, asinis no vēnas tiek drukāti divās mēģenēs, šķīdumā, kas satur EDTA, un otrā - maisījuma vienā šķīdumā ar EDTA 4 % formalīna šķīdumā. Pēc sajaukšanas saturu no flakona apmetas 30 min istabas temperatūrā.

Laikā risināt agregāti nokārtot, un individuālie trombocītu paliek centrifugātā. Pēc nostādināšanas, tas saskaita trombocītu centrifugāta katrā no caurulītēm. Parasti atšķirība trombocītu skaits saturu divu cauruļu nepārsniedz 10-15 %, paaugstinātā spontānā apkopojuma, tas palielina.

Metode H. UN. Tarasova

Saskaņā ar metodi, H. UN. Tarasova (1984) samazinājums trombocītu no visas asinis citrated agregātiem skaitot pēc 3 minūtēm uzbudinājuma uz kratītājā tā AVC-1 ar ātrumu 90-100 reižu 1 m.

Caurule 0,5 ml asiņu, bijis pakļauts kratot, ieviesa 1 ml 1 % formalīna šķīdums izotonisku nātrija hlorīda. Otrais caurule netiek pakļauta kontrolei kratīšanas, un asinis tajās esošo izmantojot to pašu testa 3 Ming arī ieviesa formalīna šķīdumā.

Asinis abos cauruļu atbalsta 30 m, pēc kura supernatants tiek ieskaitītas trombocītu skaits. Parasti atšķirība trombocītu skaita nepārsniedz 20 %, pie paaugstinātas tendenci uz agregāciju, tas palielina.

Gadījumā, ja pārkāpumi, piemērojot pamata testu, raksturojot trombocītu hemostāzi, veikt, kā ir vajadzīgs vairāk pētniecības. No tiem svarīgākais ir šādi.

Papildu pētījumi, lai noteiktu, trombocītu hemostāzi

Pētījums megakariocītu skaita uz myelogram un kaulu smadzeņu trepanate studēt morfoloģija šo šūnu

Būtisks skaita pieaugums megakariocītu kaulu smadzenēs sadaļās, parasti ir apvienota ar vairāk vai mazāk atzīmēta skaita pieaugumu trombocītu līmenis asinīs, novērota eritremii, hemorāģisko un būtiski trombocitoze un citi mieloproliferatīvās slimības. Mērens megakariotsitoz, apvienojumā ar trombocitopēniju, raksturīga trombocitopēnisko purpuru (idiopātiska trombocitopēniskā purpura).

Kad aplāzija un hipoplāzija kaulu smadzeņu jebkuras izcelsmes samazinājās par saturu megakariocītu kaulu smadzenēs sadaļās, un trombocītu skaits ir perifērās asinīs.

Daļēja amegakariotsitoz vērojams deficīts trombotsitopoetina (reta iedzimta trombocitopēnija), izskatu antivielu asinīs antimegakariotsitarnyh, būtiska daļēja aplāzija megakariocītu (var pirms attīstību leikēmijas).

Morfoloģiskās un cytochemical izmaiņas megakariocītu novērotas daudzās thrombocytopathy.

Elektronu mikroskopiskā izpēte ultrastructure trombocītu

Elektronu mikroskopiskā izpēte ultrastructure trombocītu ir svarīgi diagnosticēt vairāku thrombocytopathy, kurā trūkst vai ievērojami samazinot non-proteīnu granulas ar augstu optisko blīvumu (satur ADF, Serotonīna, kateholamīnu, kalcija un citi.), vai olbaltumvielas α-granulas, kas ir raksturīgi vairāku thrombocytopathy, apvienoti vienā grupā no uzglabāšanas baseinu slimību, neesamība slimības vai granulas.

Var noteikt kā defektiem saraušanās aparāta (sistēma mikrotubuļu) lizosomas un trombocītu.

Skenējot elektronu mikroskopijas pētījumu trombocītu vai izmantojot iejaukšanos Nomarski optiku var atklāt defektus trombocītu fiksāciju uz ārvalstu virsmas, viņai to izplatīšanās, dīgšana, centralizācija un granulu sekrēcija, kas ir tipisks daudzu veidu thrombocytopathy.

Noteikšana pret trombocītu antivielu immunoflyuorestsent- cijas studijas trombocītu suspensija imūnglobulīna, saistīta ar šīm šūnām – Dixon metode

Šis komplekss metode ļauj atšķirt imūno trombocitopēnija un nav imūns.

Tomēr Visvairāk formas slimības ar asu trombocitopēniju tas ir nepieņemami, lai noteiktu saistošās imūnglobulīnu, ir nepieciešams pietiekami liels (40-50 T 1 l) trombocītu skaits.

Definēšana dzīves iezīmēta autologas trombocītus

Definēšana dzīves iezīmēta autologās trombocītu trombocitopēnija ļauj atšķirt normālu darba mūžs ir trombocītu apgrozībā (par 9 Nights) slimības forma un saīsināt mūža ilgums no šīm šūnām.

Pirmais ir visbiežāk saistīta ar samazinātu trombocītu ražošanu kaulu smadzenēs, Otrais - ar savu paātrināto nāvi, vai ar ietekmi prettrombocītu antivielu (autoimūna trombocitopēnija Trombocītu mūžs ir samazināts līdz dažām stundām), vai intensīva samazināšanās no šūnu agregātiem un trombu in izplatītās intravazālo koagulāciju vai trombozes masveida (trombocitopēnija patēriņš).

Kvantitatīva noteikšana saturu asins plazmā pirms un pēc tam, kad trombocītu agregācijas faktoriem

Kvantitatīva noteikšana saturu asins plazmā pirms un pēc tam, kad trombocītu agregācijas vairākiem faktoriem - membrānas fosfolipīdu faktora 3, saturs alfa-granulu (antigeparinovogo faktors 4, b-тромбоглобулина, mitogēno faktors trombocītu) un nonprotein granulas augsta elektronu optiskais blīvums (Serotonīna, kateholamīnu, ADF), un skābes hidrolāzes.

Šie pētījumi sniedz priekšstatu par satura trombocītu piemērotām struktūrām un komponentu, to izlaišana plazmas apkopošanas laikā, kā arī vnutriso- sudistoy trombocītu aktivizācijas, pievieno ražu trombocītu asins plazmas, palielinot koncentrāciju sastāvdaļu gala blīva un alfa-granulas (antigeparinovogo faktors 4, b-тромбоглобулина и др.).

Metodes kvantitatīvo pētījumu trombocītu faktori ir svarīgi, lai identificētu vairāku thrombocytopathy (traucējumi saglabāšanas granulas un to sastāvdaļas, parēze reakcijas atbrīvošanu no šiem komponentiem, palielināt saturā asins plazmā sakarā ar intensīvu iekšpusē- asinsvadu saķere un trombocītu agregāciju, un citi.). Vairāki trombotsitopaty raksturīga samazināta saturā faktoru trombocītu skaita membrānas 3 jebkurš pārkāpums tās pieejamību piedalīties asins recēšanu.

Pētījums par trombocītu bioķīmisko raksturojumu un to individuālo struktūru

Pētījums par trombocītu bioķīmisko raksturojumu un to individuālo struktūru - stroma, granulas, mitohondrijos un t. d. ļauj dokumentēt dažāda veida patoloģiju pieslēgumu un disfunkciju trombocītu ar dažu veidu fermentu trūkumu (COX trūkums, tromboksāna uc), pārkāpjot struktūru membrānas lipoproteīnu, vajadzīgs, lai sazinātos ar pievilināšanas aģentiem, un t. d.

Līdzīgi pētījumi ir pieejami tikai labi aprīkoti pētniecības laboratorijas un tādēļ neattiecas vispārējo praksi.