Anēmija, sakarā ar deficītu, piemēram, darbības glikozes-6-fosfāta dehidrogenāzes

Deficīta aktivitātes glikozes-6-fosfatdegidrogenazы (G-6-FD) - Vai visbiežāk ģenētiska patoloģija sarkano asins šūnu, rezultātā hemolītisko krīzes, kas saistītas ar ņemot vairākus narkotiku līdzeklis. Ārpus krīzēm vairākumam Pacientiem stāvokli kopējā kompensāciju, Lai gan cilvēkam ir pastāvīga vieta hemolītisko anēmiju.

Pirmais apraksts deficīts aktivitāte no G-6-PD tika veikts 1956 g. in personām, ņemot profilaktisko pretmalārijas zāļu primaquine. Neatkarīgi no šiem pētījumiem 1957 g. Tā tika atklāta deficītu G-6-PD eritrocītos pacienta, kas periodiski novērots hemolītiski krīzi, neveicot narkotikas.

Pašlaik aprakstīts vairāk 250 mutantnyh atšķirīgs forma G-6-FD. Tie atšķiras viens no otra ar elektroforēzi mobilitāti enzīma, ego saistīts ar nesēju - glikozes-6-fosfātu un nikotinamidadenindinukleotidfosfatu (NADf) Nosacījuma sekas samazinātās afinitāti ir nepietiekams fermentu aktivitāti, kad koncentrācija substrātu ir stingri saistīts ar likmi to veidošanās iepriekšējā reakcijā. Par aktivitātes trūkums nav, vairumā gadījumu nozīmē zaudējumu fermenta par tādām, pat ja tur var būt arī gadījumos,. Visbiežāk, neesamība vai samazināšana fermentu aktivitātes - rezultāts klātbūtni viņa pacienta patoloģiskā veidā neaktīvs.

Strukturālā gēnu un gēnu kontrole, obuslovlivaûŝie sintēze G-6-FD, kas atrodas uz X hromosomā, Tomēr mantojuma deficīts šā fermenta aktivitāti eritrocītu vienmēr nodarbojas ar X-hromosomu.

Ir divi galvenie veidi mutants, kurā aminoskābju substitūcijas nav saistīti ar aktīvo centru, un tādēļ abi plaši izplatīta mutācijas ir normāli. Tie atšķiras ar elektroforēzi mobilitātes, Tomēr, radniecība ar pamatni tie ir vienlīdz. Mūsdienu nomenklatūrā, viens no šo formu, izplatīts Eiropā, BB sauc forma, un otrs, sastopams Āfrikā - Form. Šobrīd mēs aprakstīts un citi mutants veidi, kurš arī neatšķiras no otra ar kinemātiskās parametriem, bet ir atšķirīga elektroforēze mobilitāti.

Sajūga ferments grīdas dod ievērojamu pārsvaru vīriešu personām ar simptomātisku slimību vidū. Tas ir novērots homozigotas vīriešiem, šī patoloģija mantojis no mātes ar savu X-hromosomu, homozigotas sievietes (iedzimta slimība no abiem vecākiem) un daļa no heterozigotu sievietēm, mantojumu slimības no vecākiem ar izteikto mutantu fenotipa.

Bieži deficīts aktivitāte G-6-PD notiek Eiropā, atrodas Vidusjūras piekrastē, Grieķija, Itālija, kā arī dažās Latīņamerikas valstīs, Āfrika, uc.

Var Būt, ka ļoti liela uzkrāšanās patoloģiska gēna vairākās apmetnes veicina paražas consanguineous laulību, kas noved pie uzkrāšanos populācijā homozigotas sieviešu, sniedzot smagas klīniskās slimības izpausmes bieži, nekā heterozigotu pārvadātāji, un palielina iespējamību dzimšanas homozigotas vīriešiem, un arī plaši izmanto agrāk šajās vietās falciparum malārijas.

Saskaņā ar pašreizējo hipotēzi, persona, ar deficītu G-6-PD, vieglāk paciest tropu malāriju un reti mirst no šīs slimības. Par labu šai hipotēzei ir fakts nevienlīdzīgas izplatības parazīta sieviešu heterozigotiem sarkano asins šūnu vidū. Ir noskaidrots,, normālos šūnas, kas satur daudz lielāku daudzumu parazīts, nekā netrūkst. Ir divi izskaidrojumi apgalvoto faktu. Pirmais no šiem: eritrocītu deficīts G-6-PD nespēj izturēt ietekmi parazītu un uzreiz sadalās fagocītiskajās makrofāgos, kur viņš nogalināja Plasmodium. Vēl viens skats iesaka neobhodmost attīstībai parazīta samazināts glutationa, daudzums, kas tiek samazināta eritrocītiem nepilnīga G-6-PD.

Etioloģija un patoģenēze

Pirmais posms zāļu iedarbību - tā konversijas organismā, Pāreja uz aktīvā formā, kas var izraisīt izmaiņas struktūrā membrānai eritrocītu. Aktīvā zāļu veidā reaģē ar oxyhemoglobin. Tas rada zināmu ūdeņraža peroksīda.

Samazināta glutationa peroksidāzes sistēma izmanto neitralizē kādu daļu peroksīdu, reducējošs reakcija oksidē glutations.

Veseliem cilvēkiem, akūts hemolītisko krīze attīstās ar lielu daudzumu narkotiku ieviešanu (toksicheskaya deva). Krīze var rasties, ja, kad sistēma reducētā glutationa nespēj tikt galā ar pārsniedz kompleksa veidojas un oksidēts glutationa. Pēc glikozes-6-fosfātdehidrogenāzes deficītu un NADP traucētu piedziņu, neskatoties uz normālu darbību glutationa reduktāzes, pārkāptas viņa atveseļošanos, jo nav normāli ūdeņradis avots. Samazināta glutations nevar pretoties oksidatīvo rīcību parasto terapeitisko devu narkotiku. Tas noved pie oksidēšanas hemoglobīna, no hēma zaudējumi no hemoglobīna molekulas, izgulsnēšana globin ķēžu. Liesas šūnās no sarkanās asins šūnas izdala Heinz. Tajā pašā laikā tas zaudēts daļu virsmas sarkano asins šūnu, kas noved pie nāves.

Patoģenēzē hemolītisko anēmiju, saistīta ar ieņemšanas faba pupu, daudz vairāk neskaidra. Primahinovaya anēmija (favizm) Tas attīsta tikai daži indivīdi nepietiekama aktivitāte G-6-PD. Droši vien, par manifestācijas anēmijas prasa apvienot divas enzīmu defektu. Var Būt, ka tas ir trūkums neitralizējošo kādu individuālu toksiska viela, ietverts faba pupiņas, vai no veidošanos metabolīta, izraisot traucēkļiem sulfhidril- grupās sarkano asins šūnu. Veseliem indivīdiem nelielu zirgu pupas saņemšanas izraisa smagu hemolītisko anēmiju, kopš klātbūtnē reducētā glutationa eritrocītus ir spēj novērst toksisko iedarbību metabolītu. Mantojuma šā deficīta, acīmredzot, autosomāli dominējošs. Kombinācija ar neparastu transformācijas toksiskās vielas organismā, ietverts faba pupiņas, nepilnīga aktivitāte G-6-PD klīniskās pazīmes favism.

Klīniskās izpausmes

PVO eksperti dalās variantus G-6-PD saskaņā ar klīniskajām izpausmēm pacientiem ar homozigotiska un aktivitātes līmeni šajā eritrocītu četrās klasēs,.

Pirmklasīgs - Iespējas, kopā ar hronisku hemolītisko anēmiju.

Otrā klase - Iespējas ar līmenī G-6-PD eritrocītu 0- 10 % no normas, pārvadājums kas izraisa hemolītisko anēmiju nav krīze, un krīzes, saistīta ar narkotiku lietošanu vai dzeramo horsebean.

Trešā klase - Varianti ar aktivitātes līmeni eritrocītu 10-60 % no normas, , kurā gaismu var novērot klīniskās izpausmes, saistīta ar ieplūdes narkotiku.

Ceturtā pakāpe - Iespējas normālā vai pie normālas darbības līmeņa, nepapildināja klīnisko patoloģiju.

Dzimšanas brīdī, kad bērns ir hemolītisko anēmiju, Kas saistīti ar pirmo, un otrā klase trūkums no G-6-PD.

Par darbības G-6-PD līmenis sarkanajās asins šūnās ne vienmēr korelē ar smagumu klīniskās izpausmes. Daudzos izgudrojuma realizācijas variantos pirmais klasi nosaka 20-30 % līmenis fermentu aktivitātes. No otras puses, pie nulles līmeņa aktivitātes dažiem pacientiem neuzrāda klīniskās pazīmes. Tas ir saistīts, Vispirms, ar īpašībām fermentu lutantnyh, otrkārt, visticamāk, ar ātrumu neitralizācijas medikamenti aparātu aknu citohroma pacientam.

Visbiežākās deficīts darbības G-6-PD nesniedz klīniskās izpausmes bez īpašas provokācijas hemolītisko krīzi. Vairumā gadījumu, hemolītisko krīze sākas pēc saņemšanas sulfonamīdiem (norsulfazola, streptotsid, sulьfadimetoksina, nātrija sulfatsil, etazola, biseptola), pretmalārijas (primaquine, xinina, akrihina), nitrofurānu narkotikas (furazolidona, furadonina, furagina, 5-NOK, nevigramona), narkotikas izonikotīnskābes (tuʙazida, ftivazida), PAS-nātrija, un nitroglicerīns.

No pretmalārijas deficītu aktivitātes G-6-PD var piešķirt delagil, no sēru - ftalazol. Vairāki narkotiku skaits, lielās devās izraisa hemolītiski krīzi, mazās devās, var izmantot, pie deficīta aktivitāti G-6-PD. Tie ietver acetilsalicilskābe, amidopirin, fenatsitin, levomicetin, Streptomicīns, pretdiabēta sēru zāles.

Visas narkotikas, var izraisīt hemolītiski krīzi, denaturēšana hemoglobīna katalizē oksidēšanās ar molekulāro skābekli.

Klīniskie slimības izpausmes var parādīties otrajā vai trešajā dienā no sākuma zāles. Pirmkārt, pastāv neliela dzelte no sklēras, tumšs urīns. Izbeidzot narkotiku šajā periodā smagas hemolītisko krīzes neattīsta. Ja ārstēšana turpinās, 4-5-th diena hemolītisko krīze var notikt ar atbrīvošanu no urīna melnu vai brūnu dažreiz, kas ir saistīta ar intravaskulāra erythrocytolysis. Hemoglobīns var samazināt par 2-3 %.

Smagu slimību ķermeņa temperatūras paaugstināšanās, parādīties asas galvassāpes, sāpes ekstremitātēs, vemšana, dažreiz - caureja. Ir elpas trūkums, samazināts asinsspiediens. Bieži vien palielināta liesa, dažreiz - aknas.

Retos gadījumos, nieru mazspēja attīstās, sakarā ar strauju nieru filtrācijas un nieru kanāliņu obstrukcija trombi.

Laboratorijas rezultāti

Pēc asins analīzes atklāja anēmiju ar paaugstinātu retikulocītu. Ir bijis skaits leikocītu pieaugums ar pāreju uz myelocytes. Dažiem pacientiem,, it īpaši bērniem, balto asins šūnu skaits dažreiz var izraisīt ievērojamu cipariem (100 T 1 l un vairāk). Par trombocītu skaits nemainīsies. Kad krāso ar kristāla violetu sarkano asins šūnu smagu hemolītisko krīzes laikā atklājās daudz Heinca.

Atklāja asu iekaisumu red izaugsmes smadzenes. Palielināt saturu bezmaksas hemoglobīna Serum, bieži Paaugstināts bilirubīna dēļ netieša. Ar Benzidīna parauga atklāja klātbūtni hemoglobīna urīnā bez sarkano asins šūnu, dažreiz atrodami hemosiderin.

Dažās deficīta glikozes-6-fosfāta dehidrogenāzes formām hemolīze novērota balsti, t. tas ir. hemolītiskiem krīzes pārtraukumiem, neskatoties, ka pacients turpina veikt narkotiku, kas izraisīja hemolītiskiem krīze. Spēja sevis ierobežošanu hemolysis ko izraisa aizvien lielāku skaitu līdz gandrīz normālu līmeni fermentu aktivitāti retikulocītu. Jo lielākā daļa no tā formām ir ievērojami samazināts.

Bērniem, smagas hemolītisko krīzes biežāk, nekā pieaugušajiem. Krasā deficītu darbības G-6-PD reizēm tās notiek tūlīt pēc piedzimšanas. Šis hemolītisko slimība jaundzimušo, kas nav saistītas ar imunoloģisko konfliktā. Tas var notikt tikpat grūti, kā hemolītisko anēmiju, rezusnesovmestimostyu dēļ mātei un auglim. Varbūt par kernicterus klātbūtne ar smagiem neiroloģiskiem simptomiem.

Šo krīžu patoģenēze nav pētīta. Tas nav atrasts, vai šīs krīzes rasties spontāni trūkuma dēļ fizioloģisko aktivitāti fermentu glutationa peroksidāzes dzimšanas brīdī vai radīt viņiem ir izmantot dažu antiseptiķi apstrādē nabassaites bērna. Var Būt, ka dažreiz krīzes saistīta ar lietojat dažas zāles māti.

Dažos gadījumos hemolītisko krīze deficīts aktivitātes G-6-PD rasties fona infekcijas slimību: Gripa, salmoneloze, Vīrushepatīts. Krīzes var uzsākt kā acidoze ar cukura diabētu vai nieru mazspēju.

Neliela daļa pacientu ar deficītu aktivitātes G-6-PD novēroja nemainīgu hemolītisko anēmiju, saistīta ar narkotiku lietošanu. Šādos gadījumos ir neliels pieaugums liesa, mērens normochromic anēmija ar augsto saturu retikulocītu, erythrokaryocytes kaulu smadzenēs un bilirubīna. Pasliktināšanās slimības ir iespējams vai nu, ņemot vērā iepriekš minētās narkotikas, vai uz fona infekciju.

Diagnostika

Par diagnosticēt šo slimību pamatā ir noteikšana sarkano asins šūnu fermentu aktivitāti G-6-PD ar proband un viņa ģimenei. Kvalitatīvās metodes, izmantot šim nolūkam, vajadzētu ieteikt divus no visvairāk vienkāršas metodes.

Metode Bernšteins Tas ļauj ne tikai diagnosticēt trūkumu darbības G-6-PD visos hemizygous vīriešiem, Sievietes homozigotas, bet daži novērtēt pakāpi deficītu šā fermentu heterozigotu sievietēm. Šī metode ir iespējams identificēt daži 50 % heterozigotas sievietes. Šīs metodes priekšrocība ir tā piemērotību izmantošanai masu populācijas skrīnings lauka apstākļos.

Metode pamatojas uz balināšanai krāsvielas 2,6-dichlorophenolindophenol un kad izšķīdinātā. Klātbūtnē G-6-PD oksidējot glikozes 6-fosfātu un NADP izšķīdināšanas, lai veidotu NADP-H. Šī viela atjauno phenazine methosulfate, kas, savukārt, atjauno 2,6-dichlorophenolindophenol. Phenazine methosulfate darbojas reakcijā kā ļoti aktīvas pārvadātāja elektroni no NADPH uz krāsu. Bez phenazine methosulfate reakcija notiek vairākas stundas, un klātbūtnē phenazine methosulfate krāsas maiņa notiek starp 15 30 m.

Reaģenti.

1. Risinājums NADP: 23 mg NADP izšķīdina 10 ml ūdens.
2. A glikozes-6-fosfāta šķīdums (G-6-F): 152 mg nātrija sāls, glikozes-6-fosfāta izšķīdina 10 ml ūdens. Bārija sāls no glikozes-6-fosfāta ir iepriekš pārvērsts nātrija sāls,. Lai to nosver 265 mg bārija sāls no glikozes-6-fosfāta, izšķīdina 5 ml ūdens, pievienot 0,5 ml 0,01 M sālsskābes šķīdumu un 1 mg sausā nātrija sulfātu. Nogulsnes centrifugē. Supernatants tika neitralizēta 0,01 M nātrija hidroksīda šķīdumu un koriģēts ar destilētu ūdeni līdz 10 ml.
3. Phenazine methosulfate risinājums: 2 mg phenazine methosulfate izšķīdina 100 ml Tris-buferis 0,74 M; pH 8,0.
4. Krāsvielas risinājums 2,6-dihlorfenolam (natrievoy sāļi): 14,5 mg krāsvielas tika izšķīdināta 100 ml buferšķīdums Tris-sālsskābes (0,74 M; pH 8,0). Bufera šķīdums tiek gatavots no 1,48 M Tris gidroksimetilaminometana (42,27 d of 250 ml ūdens) un 1,43 M sālsskābes šķīdums (2 ampulas fiksanala, satur 0,1 eq, koriģēts ar ūdeni 135 ml). K 230 ml Tris gidroksimetilaminometala pievienotās 110 ml sālsskābes, pH noregulē uz 8,0 un ar ūdeni 460 ml.

Pirms pieteikuma, maisījums reaģentu: 1 nē. NADP risinājums (1), 1 nē. šķīdums G-6-P (2), 2 nē. phenazine methosulfate risinājums (3) un 16 nē. šķīdums 2,6-dihlorfenolinodofenola (4).

Metode.

Caurule, satur 1 ml destilēta ūdens, sekmēt 0,02 ml asiņu.

Pēc sākums hemolysis pievienotās 0,5 ml reaģenti. Rezultāti tiek ņemti vērā, izmantojot 30 m. Reakcija tiek uzskatīta par normālu, ar pilnu balināšanai krāsu. Kur, ja nav krāsas izmaiņas no krāsu (Tas ir intensīvi zili-zaļā krāsā I), atbilde tiek vērtēta kā strauji pozitīvs. Ja krāsas intensitāte samazinās, bet zili-zaļā krāsa ir, reakcija tiek uzskatīta polo-pozitīvs. Kur, ja ir acīmredzams krāsas, bet, salīdzinot ar kontroles grupu palika zaļgani, reakcija vērā kā plus mīnus.

Rezkopolozhitelnye pozitīva reakcija sastopami hemizygous vīriešiem un sievietēm homozigotas. Dažreiz heterozigotas sievietes dotu pozitīvu reakciju, bet lielākā daļa plus-mīnus. Turklāt, plus vai mīnus reakcijas dažkārt novēro pilnīgi veseliem cilvēkiem ar kādu enzīmu aktivitātes samazināšanos uz fona slimības vai medikamentu. Plus-mīnus reakcijas jāņem vērā, un pārbaudīt aktivitāti fermentu kvantitatīvo metodi tikai tad, ja jums ir aizdomas klātbūtni hemolītisko anēmiju sievietēm, sakarā ar deficītu, piemēram, darbības glikozes-6-fosfāta dehidrogenāzes. Tas nav jāņem vērā, plus-mīnus reakcijas masu skrīningu.

Viltus pozitīvas reakcijas To var izteikt pacientiem ar anēmiju, sakarā ar to,, ko 0,02 ml asiņu, ievada caurulē, Tās satur nelielu daudzumu eritrocītu un, Tātad, neliels daudzums fermenta. Šajā gadījumā, caurule, kas satur destilētu ūdeni jāpievieno divas vai trīs pipeti (līdz 0,02 ml) asinis, uz krāsu caurules pirms tam krāsviela nav atšķiras no kontroles.

No dienasgaismas plankumu metode Beitlers un Mičels Tā balstās uz konkrētu fluorescences samazināts NADP ilgākā viļņu garuma ultravioleto gaismu (440— 470 nm), novērtēta vizuāli fiksēto izteiksmē.

Reaģenti.

1. Tris-HCl buffer 0,5 M; pH 8,0: 60,55 izšķīdina Tris 800 ml destilēta ūdens, pievienot 20 ml koncentrētas HCl, pH koriģēts ar 8,0 via 2 M HCl un papildināta ar ūdeni 1 ml; risinājums, lai uzglabātu 36 dienas 4 ° C temperatūrā.
2. A glikozes-6-fosfāta šķīdums 20 M: 6 mg dinātrija glikozes-6-fosfātu izšķīdina 1 ml destilēta ūdens; ēst 2 dienas 4 ° C temperatūrā.
3. Risinājums NADP 10 M: 8 mg NADP izšķīdina 1 ml destilēta ūdens; ēst 10 dienas temperatūrā 4 ° C.
4. Ūdens šķīdums, saponīnu 1 % ēst 20 dienas temperatūrā 4 ° C.
5. Par oksidēts glutationa risinājums (10 ml): 2,4 mg glutationa tika izšķīdināta 1 ml destilēta ūdens; ēst 10 dienas 4 ° C temperatūrā.

Metode.

Pirms noteikti gatavs inkubācijas maisījuma, sajaukšana 1 nē. šķīdums no glikozes-6-fosfāta, 1 nē. OVER-F risinājums, 2 nē. saponīnu risinājums, 5 nē. buferis 1 nē. vienkārši nozīmē glutations. Asinis (0,01 ml) ieviesa flakonos vai šūnu hemaglutinīna kuģa un pievienot 0,2 ml inkubācijas maisījums. Caur 15 min mikropipete izvēlēts viens piliens inkubācijas maisījumu (0,02 ml) no katra parauga un attiecībā uz to ir uz hromatogrāfijas papīra formā spot diametrs ir 10-12 mm. Plankumi tika žāvēti gaisā istabas temperatūrā, un pārlūkojot ultravioleto gaismu, lai novērtētu fluorescenci. Kontrole ir paraugi ar zināmu normālu asins. Kvalitātes kontrole reaģents nesatur asinis.

Rezultātu izvērtēšana.

Trūkums Fluorescences atbilst aktivitātes trūkums, klātbūtne fluorescenci (intensīvas blue svelme) - Par darbības klātbūtne, vāju svelme - starpposma reakcija. Ievērojot nosacījumus eksperimenta metode nesniedz viltus negatīvus rezultātus. Par viltus pozitīvu diagnozi avots var aptaujāti no smagas anēmijas, bet daudz mazākā mērā, nekā metodi Berstein. Pat ar smagu anēmiju novēroja starpposma reakciju, nav trūkums fluorescences.

Izmantojot kvantitatīvo metodi, lai noteiktu aktivitāti G-6-PD ļauj identificēt samazināšanos aktivitātes ne tikai hemizygous un homozigotas pacientiem, bet starp sievietēm heterozigotu. Jo, ka par retikulocītu un krāsa detaļas ietekmi skaits līmenis fermentu aktivitātes, ieteicams grozīt rezultātus, ņemot vērā šos rādītājus.