Paroksizminė naktinė hemoglobinurija – Ligos Marchiafava Michele

Paroksizminė naktinė hemoglobinurija palyginti retai rasti įgytos formos hemolizinė anemija, susijusių su kaita konstrukcijos eritrocitų, Neutrofilų granulocitų ir trombocitų. Srautų požymių intravaskulinės hemolizės, kur yra hemoglobinurija, gemosiderinuriya, padidėjimas plazmoje nemokamai hemoglobino lygis. Ligą dažnai apsunkina periferinių venų ir kraujagyslių trombozė vidaus organų.

Etiologija ir patogenezė Paroksizminis naktinis gemoglobinurii

Buvo priimtas pirmasis ligos Aprašymas 1882 g. Ji buvo apibūdinama išsamiau 1928 g.

Bendrinis pavadinimas ligos Paroksizminis naktinis hemoglobinurija (APG), Tačiau, jis iš tiesų atitinka mažai ligos, nes nėra jokių šio Paroksizminis hemoglobinurija pastebima ne visada.

Intravaskulinės hemolizės su gemosiderinuriej be to APG pastebima daugelyje formų autoimuninė hemolizinė anemija kaip su šilumos, ir su šaltu antikūnų, ypač kai formų su šiluma gemolizinami, taip pat kai kurių formų paveldimas hemolizinė anemija, susiję su pažeidžiant eritrocitų membranos struktūra.

Ligos Markiafavy-Micheli laikomasi skirtingų amžiaus grupių. Padidėjęs raudonųjų kraujo kūnelių sunaikinimas yra patys eritrocitų defektas.

Raudonųjų kraujo kūnelių pacientams, sergantiems PNH, kaip jau buvo minėta, komplementom lengvai suspausti kai optimalių sąlygų galiojimo, Ar kada rūgštėjimo serumas, arba kai papildo aplink eritrocitų koncentracija padidėja sukurti mažos koncentracijos jonai saharoznoj trečiadienis. Raudonųjų kraujo kūnelių pacientams, sergantiems PNH turite padidėjusį jautrumą antikūnų poveikį kaip agliutininų, ir, ypač, hemolysins.

Kada PNG turi įtakos ne tik raudonųjų kraujo kūnelių, bet leukocitų ir trombocitų paciento. Trombocitų ir leukocitų pacientams, sergantiems PNH yra padidėjęs jautrumas poveikiui papildo kaip kada rūgštėjimo serumas, ir trečiadienį su sacharozės mažai Joninės jėgos. Jie yra daug kartų jautresni izoagglûtininov poveikį, nei donoro trombocitų ir leukocitų. Taip, trombocitų ir baltųjų kraujo kūnelių turi tokį patį trūkumą membrana, kad ir raudonųjų kraujo kūnelių.

Aptikti antikūnus raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje, leukocitų ir trombocitų ir tokiu būdu įrodyti narystės APG autoagressivnyh ligų grupė, negali būti jautriausia metodai.

Yra įtikinamų įrodymų, kad egzistuoja dvi skirtingos gyventojų, APG eritrocitų. Sveikas žmogus labiausiai atsparių langeliai yra reticulocyte APG yra labiausiai pažeidžiama. Tai rodo, kad, patologinių raudonųjų kraujo ląstelių populiacijos tiesiog buvo ne išgyventi iki brendimo, ir vyresnio amžiaus eritrocitų siejasi su sveikais ar beveik sveika gyventojų.

Į 1970 eritrocitų Latina tyrimas, įtakos PNG, Jis buvo atrastas, kad jie yra, kaip ir sveikas mulatas moterų, elektroforezės variantai du normalus p. 6-FD; Variantas a, paplitusi tarp žmonių, Afrikos, ir galimybė, tipiškas Europos gyventojų. Praleidus hemolizės pasuko, kad nenormalus Raudonieji kraujo kūneliai yra tik vienas variantas p. 6-FD, ir normalus raudonųjų kraujo kūnelių — tiek elektroforezės variantų g-6-PD. Taigi, lizuotas eritrocitai yra kilusi iš vieno langelio.

Tai labai tiksliai rodo, kad dviejų populiacijų eritrocitų, skiriasi ne tik funkciškai, kaip, pvz, ne mikrosferocitoze, bet taip pat iš kilmės: kitaip tariant, Tai patvirtina patologinių klonas kūnelių kiekiui, T. tai yra. somatinių mutacijų. Tapatybės eritrocitų membranos pakitimų, neutrofilų ir trombocitų rodo, kad, kad patologinių informacija greičiausiai gauna narvo, šalia stiebo, T. tai yra. pirmtakas ląstelių mielopoèza. Blastomnyj augimo PNG nėra konkrečiai. Apibūdinti tik pavieniais atvejais dėl spartaus jų vystymosi leukemija fone PNG. Tačiau, Mes galime manyti,, kad PNG yra gerybinis auglys, kraujo sistemos variantas, ilgą laiką, gamybos nėra vėžinių ląstelių proliferaciją, būdinga kitų rūšių leukemijos.

Komplementčuvstvitel′nosti plėtros mechanizmo PNG nors neaišku.

Reikšmingų pokyčių fermentų Glikolizė ir pentozno-fosfatas ciklo veiklai ne.

Kada PNG sumažintas veiklos acetylcholinesterase eritrocitų, greičiausiai dėl to sutrikdymo raudonųjų kraujo ląstelių membranų struktūros, nes dėl fermentų yra ant membranos paviršiaus ir lengvai atsilaiko kai jos pralaimėjimas. Žinomas, kad acetylcholinesterase inhibitoriai naudojimas neturi jokios įtakos išgyvenimo eritrocitų. Tačiau rudenį, acetylcholinesterase veikla taip pat pastebima kitose formose hemolizinė anemija, todėl negali paaiškinti reiškinio padidėjęs komplementčuvstvi- Klau•.

Yra įrodymų,, įrodymų, kad daugėja nesočiųjų riebalų rūgščių, fosfolipidų struktūrą, eritrocitų membranos. Yra galimybė, kuri pakeičia lipidų — yra tik atspindys raudonųjų kraujo ląstelių membranų struktūros pokyčius. Tyrime baltymo eritrocitų membranos ligonių su PNH poliakrilamido gelyje esant natrio dodecilsulfata nustatyti, kad, frakcijos baltymų kiekio skaičius žymiai skiriasi nuo kontrolės.

Pagrindinis vaidmuo – trombozinių komplikacijų APG patogenezė liks vnutrisosudistomu suskirstymas raudonųjų kraujo kūnelių ir krešėjimo veiksnių stimuliacija, atleista nuo eritrocitų per jų padalijimas. Kada APG sunaikinti daugiausia reticulocyte, Jis gali būti, Tai turi būti paaiškinta šios ligos, skirtingai nuo kitų formų hemolizinė anemias trombozinių komplikacijų dažnis, kartu su ryškus intravaskulinės hemolizės.

Klinikiniai požymiai Paroksizminis naktinis gemoglobinurii

Liga dažnai prasideda verkšlenimas. Pacientai skundžiasi silpnumu, bendras negalavimas, svaigulys. Kartais pažymi, subicteric skler. Dažnai pirmasis skundus galvos skausmas, pilvas įvairios lokalizacijos. Padidėjęs trombų formavimosi tendencija sukelia paciento kreiptis į gydytoją. Hemoglobinurija gana retas yra pirmasis simptomas ligos ir kai kuriems pacientams, APG gali nebūti visai. Kai kuriais atvejais atrodo, pirmą kartą per 2-3 metus ir net per 10 metai po to ligos.

Vienas iš būdingiausias PNG-priepuolinis pilvo skausmas. Lokalizacijos, ji gali būti labai skirtingi. Už laikotarpį, kriza pilvo skausmas, paprastai, nepastebėta. Dažnai prisijungia vėmimas. Tikriausiai, pilvo skausmas pacientams, sergantiems PNH yra susijęs su GVT žarnų pasaito laivų.

Periferinių kraujagyslių trombozė (dažniau nei ne-viršutinių ir apatinių galūnių venų, mažiausiai-inkstų laivų) taip pat būdingas simptomas Paroksizminis naktinis gemoglobinurii. Į 12 % APG pacientams pastebėtų throm. Thromboembolic komplikacijų yra dažniausia priežastis, dėl mirties šios ligos.

Kada objektyviai tyrimas pacientui dažnai pažymėti blyškumas su šiek tiek želtušnym. Dažnai yra veido paburkimą, kartais pernelyg pilnatvę. Galbūt šiek tiek padidėjo blužnis ir kepenys, Nors tai nėra būdinga APG.

Už Paroksizminis naktinis gemoglobinurii yra būdingas intravaskulinės hemolizės požymiai, iš kurių svarbiausi yra padidėjęs plazmos Laisvas hemoglobinas. Šioje temoje periodiškai beveik visi pacientai, APG. Tačiau padidėjimas plazmoje nemokamai hemoglobino lygis skiriasi ir priklauso nuo, Kas ligos tyrimas. Šios krizės metu dalį padidėja žymiai, Taip pat buvo metal′bumina plazmos skaičiaus padidėjimas.

Plazmos nemokamai hemoglobino kiekis priklauso nuo hemolizės metu, turinio gaptoglobina, filtravimo hemoglobino šlapime ir sunaikinimo kompleksas hemoglobino greitis — haptoglobin. Atveju šiek tiek hemolizės Laisvas hemoglobinas plazmoje nebus pakankamas, kad filtruojamas per inkstų filtras. Todėl hemoglobinurija nėra privalomas simptomas ligos. Kada kerta sekretuoja hemoglobino canaliculi nefronov yra iš dalies sunaikinti ir sudėti į kanalėlių epitelio. Tai yra priežastis, šlapimo hemosiderin.

Su šlapimo hemosiderin – dauguma pacientų su Paroksizminis naktinis hemoglobinurija. Gemosiderinuriâ kartais atrodo iš karto. Tai yra svarbus, bet nėra būdinga tik ligos požymių PNG.

Laboratorinius parametrus paroxizmalna naktį gemoglobinurii

Hemoglobino pacientams, sergantiems PNH svyruoja nuo 1.86 dalis — 3,1 mmol / l (30-50 G / l) ir dar maža, kad įprastas remisijos metu.

Eritrocitai, pacientams, sergantiems PNH skaičius mažėja, sumažinti hemoglobino lygį. Spalvos rodiklis ilgiau išlieka artimas vienetui. Kur, Jei pacientas praranda nemažai geležies su šlapimu, kurį sudaro hemosiderin ir hemoglobino, geležies koncentracijos palaipsniui mažėja. Mažos spalvų indikatorius pastebima maždaug pusė pacientų. Kai kurie iš jų yra padidėjęs hemoglobino lygis (P), ypač per kartus padidėjo.

Didelė dalis pacientų turinio padidėjęs reticulocyte, bet gana mažai (2- 4 %). Leukocitų PNG dažniausiai sumažintas skaičius. Daugeliui pacientų tai 1,5-3 g 1 L, bet kartais sumažintas iki 0,7-0,8 g 1 L. Leukopenija, paprastai, Yra mažinant neutrofilų granuliocitų skaičius. Kartais kraujo APG normalus ar aukštos-iki 10-11 g 1 L.

Kada APG mažina neutrofilų granuliocitų Phagocytic veikla.

Trombocitopenija taip pat paprastai vertinamas PNG, Tačiau, funkcinė būsena trombocitų įprastu. Tikriausiai, Tai paaiškina retenybė kraujavimo komplikacijų kai šios ligos, Nors trombocitų skaičius kartais ženkliai sumažinta-iki 10-20 g 1 L. Paprastai, dauguma pacientų trombocitų 50-100 g 1 L. Normalus trombocitų neatmeta Paroksizminis naktinis gemoglobinurii diagnozė.

Kaulų čiulpų tyrimas aptikti simptomai, daugiausia būdingas hemolizinė anemija yra raudona dirginimas gemalo hematopoiesis normalus numeris mielokariocitov. Kai kuriems pacientams yra šiek tiek sumažinti Megakaryocyte skaičius.

Serumo geležies PNG lygis priklauso nuo ligos stadijos, intravaskulinės hemolizės ir kraujo, veikla. Kur, Jei pacientai turi nuolat arba dažnai hemoglobinurija, taip pat nuolat gemosiderinuriâ, geležies organizme turinys, ir todėl, ir mažėja serume, kartais labai smarkiai. Kartais PNG prasideda požymių, hypoplastic. Geležies saugo kūno APG priklauso nuo paciento, viena pusė, nuo geležies netekimo su šlapimu, ir, kita vertus, eritropoezę intensyvumas. Todėl negali būti geležies trūkumas diagnostikos ženklas Paroksizminis naktinis gemoglobinurii.

Lygio serumo bilirubino PNG daugeliu atvejų, iš dėmesio plačiau arba normalus, daugiausia per netiesioginį. Vidutinis bilirubino kiekis yra 22-28 μmol/l. Reikėtų atsižvelgti į, kad kai hemoglobino hemoglobino suformuota irimo vnutrisosudistom-gaptoglobinovyj kompleksas, kurie ir galų gale taip pat sulūžta su bilirubino susidarymo.

Kai kuriems pacientams su PNH liga prasideda paveikslų aplastinė anemija.

Diagnozė Paroksizminis naktinis gemoglobinurii

Jei Paroksizminis naktinis gemoglobinurii korpuso struktūra eritrocitų neveikia, kaip tai atsispindi didelį poveikį jos papildo jautrumas. Šio padidėjusio jautrumo aptinkamas arba Hema pavyzdžių, arba jautresni saharoznoj pavyzdžių. Kai kuriais atvejais, tačiau, visų pirma, gemolizinovoj sudaro autoimuninė hemolizinė anemija, saharoznaâ mėginys gali duoti neteisingus teigiamus rezultatus. Gemoliziny yra nustatomos paviršiuje savo raudonųjų kraujo kūnelių, dalyvaujant papildo, saharoznoj trečiadienis sunaikinta jų, O PNG yra būdingas ląstelių komplementom be poveikio antikūnų naikinimas.

Reikia išbraukti gemolizinovoj autoimuninė hemolizinė anemija tyrime rekomenduojama hemolysins pirmiau aprašytas ir naudojant cross-saharoznoj su serumo mėginius iš paciento ir donoro odnogruppnogo eritrocitų, o ne atvirkščiai, kaip yra įprasta. Kada APG tiesiogiai mėginys yra teigiamas, ir kryžius-neigiamas. Kada gemolizinovoj formos AIGA gali būti teigiamas, ir neigiamas įvairių imčių. Tokiais atvejais patartina naudoti trečiųjų variantas saharoznoj pavyzdžių — naudojant tiek serumas, ir raudonųjų kraujo kūnelių, paciento. Hemolizės šis variantas minimalus laipsnis kai PNG ir didžiausias gemolizinovoj AIGA forma. Paaiškinti tokį rezultatą galima tik labai specifinių antikūnų serumo autoimuninė hemolizinė anemija antigeną, pacientų gemolizinovoj formos, dideli kiekiai eritrocitų išgyvena ligonių, nei į donoro eritrocitai. Tiesioginis teigiamas mėginys saharoznaâ šių pacientų yra susijęs, tikriausiai, su eritrocitų nustatyti antikūnai.

Nustatymas hemolysins metodu agregatgemagglûtinacii ir kiti padeda įgyvendinti teisingą diagnozę. Negali būti naudojamas kaip donorų serumo pacientų, kaip ir gemolizina turinio rezultatas negali būti ložnopoložitel′nym. Neigiamas rezultatas gali atsirasti, Jei šaltinio naudoja pacientų serumą papildo APG ar pacientų serumą kepenų ciroze, Reumatoidinis artritas, Sisteminė raudonoji vilkligė ir kitų ligų, kuris prekiaujančiose mažėja. Saharoznaâ mėginio ir mėginio Hema tampa mažesni, Jeigu vartojate kraujo iš paciento kaip antikoagulianto heparino yra naudojami, o natrio citratas. Po hemolitine krizės intensyvumas sumažinamas mėginių Hema ir saharoznoj mėginiai, bet jie netaptų neigiamos.

Nemokamai plazmos hemoglobino Bing Derviz Modifikacijos būdas ir Bâlko su Paroksizminis naktinis gemoglobinurii apibrėžimas

Metodas yra pagrįstas hemoglobino gebėjimą reaguoti su rūgšties-benzidinas trečiadienį esant vandenilio peroksidas su žalia spalva, sukti pirmą kartą mėlynai, ir tada rausvai violetinė. Intensyvumas yra proporcingas hemoglobino skaičius.

Reagentai.

1. Acetatinis buferis 0,1 M, pH vertė 4,6: 27,22 g natrio acetato ištirpintas 1 l vandens (0,2 M tirpalas); į kitą matavimo lemputė Cook 1 L 0,2 Uksousnokisloy rūgšties tirpalo M; mišrus 480 ml Nr. 1 ir 520 ml Nr. 2.
2. Vandenilio peroksidas 0,3 % sprendimas (paruošiamas prieš pat naudojimą veisimo tirpale 100 laikas).
3. Solânokislyj benzidinas 0,1 % sprendimas: 50 mg solânokislogo benzidinas ištirpinto 35-40 ml acetatinio buferio, tirpalas kaitinamas iki 80 ° C vandens vonioje ir atvėsus, duoti acetatnym buferis 50 ml.

Filtravimo kolbą ir laikyti tamsoje, kambario temperatūroje ne daugiau kaip 7 dienos. Pożółkły reagentas yra netinkami, Greitai potemnenii jūs turite perekristallizovat′ benzidinas nuo alkoholio.

Metodas.

Kraujo tyrimams paimti iš venų sausa adata silikonirovannuû vamzdis, yra bet antikoaguliantas. Kraujo kuriuose laikomas antikoagulianto tirpalas centrifuguojamas ne daugiau 10 minučių 1500 / Min. Po jos plazmos vėl centrifuguojama atskyrimas 10 minučių 8000 RPM nusodinimui leukocitų.

Mėgintuvėlyje yra užpildytas 4 ml acetatinis buferis, 2 ml vandenilio peroksido, 2 ml benzidinas ir 0,04 ml tiriamojo serumo yra sumaišyti ir paliekama stovėti 3 m,, po to supilkite į Kiuvetės optinio kelio ilgis 1 sosto ir fotometriruût kompensacijos tirpalu ne žalia skydelis. Mėlynos spalvos intensyvumas padidėja 4-5 minutes, Todėl matavimas kartoti 3 - 5 kartus iš eilės ir didžiausias rodmenis užregistruoti. Po 5-6 minučių dažymas serume tampa violetinė-rudą atspalvį, ir optinio tankio vertė pradeda mažėti. Du nustatytų maksimalių rezultatų optinis tankis terpės priimamas.

Kompensacijos tirpalas, susideda iš 6 ml acetatinis buferis, 8 ml vandenilio peroksido, 3 ml benzidinas ir 0,06 ml izotoninio natrio chlorido tirpalo, parengti kartu su.

Kalibravimo kreivė ekrane hemoglobino tirpalas. Kraujyje, imtis, kad hemoglobino tirpalas, įvertinti jo turinį (medicinos kolorimetre ar medicinos refraktometre). Paruošiamas tirpalas, hemoglobino koncentracija 1 g / l,, iš jo paruošti mažesnės koncentracijos tirpalai: 0,005,0,025, 0,05, 0,1 ir 0,2 g / l,. Kiekvieno gauto tirpalo pridėti 0,04 ml mišinio 4 ml acetatinis buferis, 2 ml benzidinas ir 2 ml vandenilio peroksido.

Pagrindinis tirpalas gemolizata (1 g / l,) kalibravimo kreivė turi būti laikomi esant šaltam orui, ir darbo sprendimai mažesnės koncentracijos turi būti ruošiamas prieš tyrimo.

Paprastai, į 1 litrų kraujo plazmoje yra 0,0005 mmol / l (0,01-0.04 g) Hemoglobinas.

Hemosiderin šlapimo su Paroksizminis naktinis gemoglobinurii apibrėžimas

Hemoglobino skilimo geležies it adsorbuotos inkstų kanalėlių epitelio ir yra dalis hemosiderin. Sluŝennye langeliuose inkstų kanalėlių epitelio šiais atvejais yra grūdai, hemosiderin.

Kruopštaus tyrimo šlapimo nuosėdų po centrifugavimo grūdų hemosiderin, matomos ir be specialųjį spalvinimą. Tačiau, jie stovi daugiau aiškiai kai spalvos Perlsa metodas.

Metodas.

Po centrifugavimo šlapimo viršutinis sluoksnis čiulpti išjungti, grimzlės pridėti svejeprigotovlenny tirpalas 1 % Geltona kraujo druska ir 1 % druskos rūgštis (Sumaišykite lygiomis dalimis 2 % druskos rūgšties ir geltona kraujo druskos tirpalo). Po 10 minučių po maišyti, mišinys centrifuguojamas ir nuosėdos ieško. Grūdų hemosiderin nusidažymas mėlyna.

Plazmos metgemal′bumina spektrofotometrinis metodas nustatymas

Reagentai.

1. Fosfatinis buferis izoosmotičeskij (pH vertė 7,4): mišrus 18 ml 0.15 M tirpalas natrio digidrofosfata (24,4 g YaN2R04 1 l vandens) ir 82 ml 0,15 M tirpalas Natrio vandenilio (21,3 g NaH₂PO₄ apie 1 l vandens).
2. Natrio bisulfite.
3. Natrio hidroksido 1 M.
4. Žmogaus serumo albumino tirpalo (40 g / l,).
5. Sprendimas gemina (5 mg / 100ml); rengia iš karto tirpinant gemina nedideliais kiekiais kaustinės sodos, ir tada: suderinti ją iki reikiamą sumą serumo albumino tirpalo.

Metodas.

K 2 įrašoma ml serumo arba kraujo plazmos 1 ml zabuferernogo izoosmotičeskogo tirpalo, pH vertė 7,4. Mišinys centrifuguojamas 30 minučių 1200-1500 RPM. Nustatyti optinį tankį, esant 569 nm,. Tada, jei praskiestų plazmoje yra dedamas į mėgintuvėlį, įpilama maždaug 5 mg džiovintų hydrous sulfatas, natrio. Per 5 min kelis kartus išmatuojamas optinis tankis esant tokiam pačiam bangos. Skirtumas tarp dviejų verčių optinis tankis atitiktų optinį tankį, metgemal′bumina. Metgemal′bumina koncentracija nustatoma kalibravimo grafikas.

Kalibravimo grafikas ekranas taip. Sprendimas gemina albuminom perdavimo į mėgintuvėlius į kiekį, iš 0,01 į 0,1 g / l, (nuo 0,2 į 2 ml). Šių vamzdžių, kur mažiau tirpalo kiekis 2 ml, pridėti iki 2 ml albuminas. Tada pridėti 1 ml fosfato buferinio tirpalo izoosmotičeskogo. Ne mišinys centrifuguojamas 1500 / Min, ir tada išmatuojamas optinis tankis. Skirtumas tarp matmenys yra taikomas diagramos, atitinkamai skaičius gemina.

Normalus kraujo plazmoje gemal′bumin trūksta. Atrodo, jei tai yra intravaskulinės hemolizės, pvz, Jei Paroksizminis naktinis gemoglobinurii arba gemolizinovoj formos autoimuninė hemolizinė anemija, taip pat gaptoglobina nebuvimas, Kada temą jungiasi prie albuminas.

Hema teismą paroxizmalna naktį gemoglobinurii

Hema teismą pagal sumažinti atsparumo raudonųjų kraujo kūnelių pacientams, sergantiems PNH mažesnis pH trečiadienį dalyvaujant papildo serumo.

Reagentai.

1. A druskos rūgšties tirpalo 0,2 N.
2. Amoniako tirpalas 0,04 %.

Metodas.

Nuo vienos imtis 5- 6 ml kraujo. Kaip antikoagulianto naudojamas natrio citratas arba oksalato. Tuo pačiu metu priimti 15-20 ml kraujo donoro tos pačios grupės. Atskirti raudonųjų kraujo kūnelių kraujo plazmos donorų ir pacientas.

Donoro serumas yra pilamas ant 0,5 ml – šeši mėgintuvėliai, du iš jų ant 20 min. vandens vonelėje su temperatūra 56 ° C nukenksmina serumo papildo, kiti keturi mėgintuvėliai paliekami kambario temperatūroje. Raudonųjų kraujo kūnelių pacientas du kartus plauti natrio chlorido tirpalas izotoniceski, tada suspenziruût to paties tirpalo santykio 1:1.

Tyrimo schema pateikiama lentelėje.

Kiekvienam mėgintuvėliui turinį sumaišykite, ant savo 1 h temperatūros termostatas 37 ° C,, ir tada centrifuguojamas.

Dėl prastovos atrinktų 0,05 m raudonųjų kraujo kūnelių, paciento ir donoro pridedamas atskirai į į 0,55 ml izotoninio natrio chlorido tirpalo.

Po centrifugavimo hemolizės laipsnį galima apskaičiuoti iš akių. Įgalinančias nustatyti, kiek hemolizės į kiekvieną mėgintuvėlį su 4,7 ml 0,04 % Įpilama amoniako tirpalo 0,3 ml paviršinio sluoksnio, bet į mėgintuvėlį su tuščiosios eigos breakout — 0,3 ml pamatinio serumo.

Nustatyti 100 % hemolizės į 4,7 ml amoniako tirpalo pridėti 0,3 mL suspensijos eritrocitų (0,05 ml eritrocitų paciento 0,55 ml izotoninio natrio chlorido tirpalo).

Tirpalo optinis tankis matuojamas esant medicinos kolorimetre ir palyginti rodmenys su optinio tankio amoniako tirpalas be raudonųjų kraujo kūnelių:

% hemolizės =((IS₁-IS₂)/IS₃)*100;

kai E₁ -optinis tankis, analizuojant zondas; IS₂-optinis tankis tuščiojo mėginio; IS₃-optinis tankis 100 % gemolizata.

Paprastai, ne daugiau kaip gemoliziruetsâ 5 % eritrocitas.

Mėginys laikomas teigiamu atveju Hema, Jei gemoliziruetsâ daugiau 6 % eritrocitas.

Paroxizmalna naktį gemoglobinurii ir gemolizinovoj formos, autoimuninė hemolizinė anemija gemoliziruetsâ kartais iki 50-80 % eritrocitas. Šių ligų, yra būdingas hemolizės tik dalyvaujant serumas neinaktivirovannoj (-Nr. 2). Jei nukenksminimo serumo netrukdo hemolizė (-Nr. 3), Galime manyti, hemolizinė anemija arba klaida nustatant mokslinių tyrimų egzistavimas.

Pacientams, sergantiems Paroksizminis naktinis hemoglobinurija raudonųjų kraujo ląstelių naikinimo trečiadienį pH 6,5 reikia privaloma tikrinti komplemento, esančius šviežio serumo.

Saharoznaâ bandymas su Paroksizminis naktinis gemoglobinurii

Saharoznaâ mėginys yra pagrįstas,, kad raudonųjų kraujo kūnelių pacientams, sergantiems Paroksizminis naktinis hemoglobinurija ir gemolizinovoj forma autoimuninė hemolizinė anemija yra sunaikinami tirpalais mažą jonų koncentraciją esant papildo.

Reagentai.

1. Sacharozės tirpalas: 9,42 sacharozės ištirpintas 0,005 M fosfatnom buferis; pH vertė 6,2 (91 ml 0,005 M NaH₂PO₄ ir 9 ml 0,005 M Na₂HPO₄).
2. Reagentai hemoglobino koncentracijos nustatymo: 200 mg raudonųjų kraujo Druska ištirpinama 1 l distiliuoto vandens, Ten pridėti 0,5 ml atsetontsiangidrina.

Metodas.

Pacientui atsižvelgiant iš vienos į du mėgintuvėlius kraujo yra sausa (8-10 ml) ir su antikoaguliantas (2- 3 ml). Kaip antikoagulianto naudoti natrio citratas. Eritrocitų kraujo surinkimo vamzdžių su antikoagulianto du kartus plauti natrio chlorido tirpalas izotoniceski. Po plovimo ir virš nuosėdų išskyrimo į 0,4 ml eritrocitų pridėti 0,25 ml izotoninio natrio chlorido tirpalo.

Tuo pačiu metu atsižvelgiant kraujo donorų tos pačios grupės kraujo į du mėgintuvėlius, kuriuose laikomas antikoagulianto tirpalas (2-3 ml), Ji yra traktuojama taip pat, kaip pacientas kraujas, ir sausa (8- 10 ml) siekiant nustatyti serumo. Po santuokos nutraukimo donoro serumo 0,5 jis dedamas į vandens vonią esant didesnei ml 56 ° C, 30 nukenksminimo komplemento min.. Donoro serumo turėtų imtis kasdienės patirties ir laikyti šaltyje. Schema studijų pateiktas lentelėje.

Vamzdžiai yra ant termostatas 30 minučių 37 ° C,, Centrifuguojama 10 min greičiu 2000 RPM ir įvertinti dėl hemolizės.

Norėdami tai padaryti, mėgintuvėlyje yra pilamas ant 3,4 ml reagento hemoglobino koncentracijos nustatymo ir 0,6 ml- nuosėdos nuo kiekvieno mėgintuvėliai. Per 10 min vamzdžiai su tirpalo optinis tankis matuojamas 540 Sveikatos refraktometre NM (Spektrofotometras) ar medicinos kolorimetre (Gruodis fotokolorimetre-m) Kada žalia skydelio, lyginant su optinio tankio tirpalo hemoglobino nustatymui. Mano du rodmenų vidurkis kiekviena patirtis. Yra apskaičiuotas pagal formulę:

% hemolizės Vietovė vitro =((IS₁-IS₅)/(IS₈-IS₅))*100

kai E₁ -bandymo tirpalo optinis tankis vamzdžio Nr. 1; IS₅ -bandymo tirpalo optinis tankis vamzdžio Nr. 5, būtina pašalinti spalvos serumas; IS₈ -bandymo tirpalo optinis tankis vamzdžio Nr. 8, kur 100 % hemolizė.

Cross-saharoznoj mėginių (-Nr. 2) 100%-Th hemolizės Vietovė vitro ištirti Nr. 7.

Rezultatų įvertinimas.

Normalus in vitro Nr. 1, yra Raudonųjų kūnelių tyrinėjo pacientas, hemolizės neviršija 2-3 %.

Paroxizmalna naktį gemoglobinurii ir gemolizinovoj formos autoimuninė hemolizinė anemija (AIGA) Šis vitro hemolizės viršija 6 % Į mėgintuvėlius-Nr. 4, kurių sudėtyje yra kraujo pacientui ir donoro serumas inaktivirovannuû, mėgintuvėlį # 5, eritrocitų ir serumo donoro, ir numeris 6, turintis serumo vietoje izotoninio natrio chlorido tirpalo — hemolizės neturėtų viršyti 1-2 %.

Cross-saharoznaâ tyrimas (-Nr. 2) Kai gemolizinovoj AIGA forma paprastai teigiamas (esant hemolysins serume), Tačiau ji gali būti neigiama. In vitro Nr. 3 (raudonųjų kraujo kūnelių ir paciento serumo) hemolizės kaip APG, ir gemolizinovoj AIGA forma. Paroxizmalna naktį gemoglobinurii didžiausias hemolizės yra aptikta normalus saharoznoj mėginys (-Nr. 1), mažiau ryškūs – su savo mėginio ląstelių pacientas (-Nr. 3); Nėra hemolizės cross-saharoznoj imtyje (-Nr. 2).

Kai gemolizinovoj AIGA forma labiausiai ryškus hemolizės aptinkama aibės su savo kraujo serumo ir eritrocitų ligonių (-Nr. 3), mažiau ryškus — Vietovė vitro Nr. 1. In vitro Nr. 2 hemolizės pastebima dažnai, Tačiau jo nebuvimas neatmeta forma gemolizinovuû AIGA.