Наследственный пиропойкилоцитоз
Наследственный пиропойкилоцитоз — своеобразная, редко встречающаяся наследственная гемолитическая анемия, связанная с нарушением структуры белка мембраны эритроцитов. Характеризуется выраженным внутриклеточным гемолизом и пониженной резистентностью эритроцитов к изменению температуры.
Этиология и патогенез пиропойкилоцитоза
У больных пиропойкилоцитозом обнаружен дефект структуры спектрина. Белок нестабилен, имеет тенденцию к повышенной агрегации. Количество спектрина при пиропойкилоцитозе уменьшено.
Клинические проявления и лабораторные показатели пиропойкилоцитоза
У детей раннего возраста выявляются резко выраженная желтушность, значительное увеличение селезенки и увеличение печени. Содержание гемоглобина снижается до 3,1—3,41 ммоль/л (50—55 г/л), количество ретикулоцитов повышается до 30 %, в периферической крови обнаруживается значительное количество эритрокариоцитов. В мазках крови выявляются микросфероциты, отмечают ся выраженный анизоцитоз, poikilocytosis buvo, фрагментация эритроцитов, значительно выраженная базофильная пунктация эритроцитов. Осмотическая резистентность их понижена. Обнаруживается значительный аутогемолиз с частичной коррекцией глюкозой. Активность исследованных ферментов нормальная, патологии структуры гемоглобина не выявлено.
Характерной особенностью заболевания является повышенная чувствительность эритроцитов к небольшому нагреванию. При повышении температуры до 48 °С эритроциты резко деформируются. Появляется выраженная фрагментация пойкилоцитов. В норме такая деформация наступает при 52—55 °С. При пиропойкилоцитозе в эритроцитах выявляется большое количество ионов кальция, отмечается их повышенное проникновение внутрь эритроцитов и замедленное выведение.
Метод определения осмотической резистентности эритроцитов до и после суточной инкубации
Определение осмотической резистентности может производиться как свежих эритроцитов, так и эритроцитов, инкубированных в течение суток при температуре 37 °С в стерильных условиях.
Reagentai.
1. Основной раствор, осмотически соответствующий 10 % раствору хлорида натрия.
2. Apie2HPO4 - 27,31 g.
3. NaH2PO4 - 4,86 g.
4. NaCl - 180 g. Все реактивы растворяют в 2 l vandens; pH полученного раствора должен быть 7,4. Раствор может храниться в закрытой посуде в холодильнике в течение нескольких месяцев. Из него готовят 1% sprendimas, из которого приготавливают все остальные: 0,85; 0,75; 0,65; 0,55; 0,5; 0,45; 0,4; 0,35; 0,3; 0,25 ir 0,1 %. Можно приготовить сразу по 100 мл рабочих растворов разных концентраций и хранить их в течение 2 недель в холодильнике.
Metodas. В две стерильные пробирки, содержащие по 2 капли гепарина, наливают по 1,5 ml kraujo.
Одну пробирку помещают на сутки в термостат, кровь во второй исследуют в день взятия.
Iki 5 мл раствора хлорида натрия (1 %) и всех рабочих растворов разливают в центрифужные пробирки. К каждой пробирке пипеткой от гемометра добавляют по 0,02 мл перемешанной крови. Пробирки оставляют при комнатной температуре на 30 m,, затем центрифугируют при 2000 об/мин в течение 5 m,. Сливают верхний слой из каждой пробирки и колориметрируют на медицинском колориметре при зеленом светофильтре в кювете с длиной оптического пути 1 см против надосадочного слоя пробирки, yra 1 % natrio chloridas.
Už 100 % гемолиз принимают оптическую плотность в надосадочном слое пробирки, yra 0,1 % natrio chloridas (в таблице).
Показатели нормальной осмотической резистентности эритроцитов | ||
Концентрация раствора хлорида натрия | Gemoliz, % | |
в свежей крови | kraujyje, инкубированной в течение суток | |
0,2 | 98– 100 | 95– 100 |
0,3 | 97– 100 | 85– 100 |
0,35 | 90– 100 | 75– 100 |
0,4 | 50– 100 | 65– 100 |
0,45 | 5—45 | 55-95 |
0,5 | 0-6 | 40– 85 |
0,55 | 0 | 15-70 |
0,6 | 0 | 0-40 |
0,65 | 0 | 0-10 |
0,7 | 0 | 0-5 |
0,75 | 0 | 0 |
0,8 | 0 | 0 |
0,85 | 0 | 0 |
Pavyzdys.
Į 0,1 % растворе хлорида натрия оптическая плотность равна 0,65, į 0,4 % - 0,22.
0,65 - 100 % gemoliz
0,22 — x
x=(0,22*100)/0,65=34%
Вторую пробирку, помещенную в термостат, извлекают через 24 ч и исследование повторяют.
Диагностическое значение
При микросфероцитарной гемолитической анемии наблюдается понижение осмотической резистентности эритроцитов. Гемолиз наблюдается уже в 0,7—0,65 % растворах хлорида натрия У некоторых больных микросфероцитозом выявить понижение осмотической резистентности эритроцитов в свежей крови не удается, однако в инкубированной крови она резко понижается. Гемолиз может начаться в концентрации раствора хлорида натрия 0,85 %.
При талассемии, а также при некоторых видах несфероцитарной гемолитической анемии осмотическая резистентность эритроцитов повышается. Гемолиз может начаться в 0,35 arba 0,3 % natrio chloridas.
Определение осмотической резистентности эритроцитов необходимо проводить во всех случаях наличия внутриклеточного гемолиза. Желательно исследовать осмотическую резистентность не только свежей крови, но и инкубированной в течение суток.