Anemia, viallisesta aktiivisuudesta johtuen glukoosi-6-fosfaattidehydrogenaasin

Viallisesta aktiivisuudesta glukoosi-6-fosfatdegidrogenazы (G 6 PD) - on yleisin perinnöllinen poikkeavuus punasoluja, mikä hemolyyttis kriisissä, vastaanottamiseen useita lääkkeitä välineet. Beyond kriisit suurimmalla osalla potilaista on edellytys täyteen korvaukseen, Vaikka on vakinainen paikka anemia.

Ensimmäinen kuvaus puutos aktiivisuuden G-6-PD tehtiin 1956 g. henkilöillä, ottaen ennalta ehkäisevää malarialääkkeenä primakiiniin. Riippumatta näistä tutkimuksista 1957 g. puutos löydettiin G-6-PD punasoluja potilaan, jotka ajoittain havaita hemolyyttis kriisien ottamatta mitään lääkkeitä.

Nykyisin kuvataan 250 eri mutanttimuodot G-6-PD. Ne eroavat toisistaan ​​elektroforeettisen liikkuvuuden entsyymin, sen affiniteetti substraateille - glukoosi-6-fosfaatti ja nikotiiniamidiadeniinidinukleotidifosfaatin (NADf) Seurauksena on vähentynyt affiniteetti on riittämätön entsyymin aktiivisuus, kun pitoisuus substraattien tiukasti rajoittaa nopeus, niiden muodostumisen edeltävissä reaktioissa. Aktiivisuuden puuttuminen ei tarkoita useimmat menetys entsyymin sellaisenaan, vaikka ne voivat esiintyä, ja tällaiset tapaukset ovat. Useimmissa tapauksissa, puuttuminen tai väheneminen entsyymiaktiivisuuden - tulos sen läsnäolo potilaan patologinen inaktiivinen muoto.

Rakenteellinen geeni ja geeni-säädin, edellytyksenä synteesi G-6-PD, joka sijaitsee X-kromosomissa, Näin ollen, perivät tämän entsyymin aktiivisuuden puute punasoluja on aina liittynyt X-kromosomin.

On olemassa kaksi päämuotoa mutantti, jossa aminohapposubstituutioita eivät liity aktiivisia kohtia, ja niin nämä molemmat laajaa mutaatiot ovat normaaleja. Ne eroavat toisistaan ​​elektroforeettisen liikkuvuuden, Kuitenkin, affiniteetti substraattiin ne ovat yhtä. Mukaan moderni nimikkeistön, Yksi näistä muodoista, yleinen Euroopassa, Sitä kutsutaan muodossa BB, ja muut, löytyy Afrikasta - muotoinen. Tällä hetkellä, joka on kuvattu ja muut mutanttimuotojen, joka myös eivät eronneet toisistaan ​​kinemaattisen parametrit, mutta niillä on eri elektroforeettinen liikkuvuus.

Kietoutuminen entsyymin lattiaan antaa merkittävän vallitsevana miehiä henkilöiden oireista tautia. Se on havaittu homotsygoottinen miehillä, tämä patologia äidiltä perimä hänen X-kromosomi, homotsygoottinen naiset (perinnöllinen sairaus molemmilta vanhemmilta) ja joissakin heterotsygoottisia naisia, perimässä taudin vanhemman kanssa ilmaistuna mutanttifenotyyppi.

Yleisin puute aktiivisuuden G-6-PD löytyy Euroopassa, sijaitsee Välimeren rannikolla, Kreikka, Italia, sekä joissakin Latinalaisen Amerikan maissa, Afrikka jne.

Ehkä, että erittäin korkea kertyminen epänormaali geenin useita asutuksen edistää säilynyt tavan verisukulaisperheistä avioliittoja, joka johtaa kertyminen väestön naisten homotsygoottisten, antaa vaikeita kliinisiä oireita taudin usein, kuin heterotsygoottinen kantajia, ja lisää todennäköisyyttä homotsygoottisten uros syntymäpäivä, sekä laajaa aiemmin näissä paikoissa -malarialle.

Mukaan nykyinen hypoteesin, henkilö, vaje oli G-6-PD, helpompi sietää trooppisia malarian ja harvoin kuolee tähän tautiin. Hyväksi Tätä hypoteesia siitä eriarvoinen leviämisen loisen joukossa punasoluja heterotsygoottisten naisia. Todettiin, että normaalit solut sisältävät paljon suurempi määrä loisen, kuin niukat. On kaksi selitystä väitetty seikka. Ensimmäinen näistä: punasolujen vaje G-6-PD ei kestä vaikutuksia loinen ja välittömästi rikkoo järjestelmä fagosyyttisten makrofaagien, jossa hän tappoi Plasmodium. Toinen näkymä ehdottaa neobhodmost kehittämiseen loinen pelkistettyä glutationia, jonka määrä on vähentynyt erytrosyyttien puutteellinen G-6-PD.

Etiologia ja patogeneesi

Ensimmäinen vaihe lääkkeelle altistamisen - sen muuntamisen kehossa, siirtymä aktiiviseen muotoon, jotka voivat aiheuttaa rakenteen muutokset kalvon punasolujen. Aktiivisen muodon lääkkeen reagoi oxyhemoglobin. Tämä luo tietyn määrän vetyperoksidia.

Alennettu glutationiperoksidaasi- käyttäen järjestelmän neutraloi joitakin peroksidia, Reaktion aikana hapetetaan pelkistetyn glutationin.

Terveillä ihmisillä, akuutti hemolyyttinen kriisi kehittyy käyttöönoton huomattava määrä lääkettä (toksinen annos). Kriisi voi syntyä, kun, Kun glutationi talteenottojärjestelmät eivät pysty selviytymään ylimäärä muodostuneen kompleksin ja hapetettua glutationia. On puute glukoosi-6-fosfaattidehydrogenaasia ja NADP palauttaa häiriintynyt, huolimatta normaalin toiminnan glutationireduktaasin, rikkonut hänen perintää, koska ei ole lähde normaalia vedyn. Pelkistettyä glutationia ei kestä hapettava vaikutus tavanomaisia ​​terapeuttisia annoksia lääkkeitä. Tämä johtaa hapettumista hemoglobiinin, menetys hemin hemoglobiinin molekyylien, saostuminen globiinin ketjujen. Perna vapauttaa punasoluja Heinz soluista. Kun tämä osa on menetetty punasolujen pinnalla, joka johtaa heidän kuolemaansa.

Patogeneesin anemia, liittyvä kulutus Härkäpavut, vielä monia epäselviä. Primahinovaya anemia (favizm) Se kehittää vain tietyille yksilöille puutos aktiivisuuden G-6-PD. Luultavasti, näytteille tämä anemia edellyttää kahden entsyymin vikoja. Ehkä, että puhumme puutteesta neutralointi jonkin myrkyllisen aineen henkilöiden, sisältämät härkäpavun, tai muodostumista metaboliitin, aiheuttaa häiriöitä sulfhydryyliryhmät punasoluja. Terveillä vapaaehtoisilla pieni määrä härkäpavun ei aiheuta vakavia hemolyyttinen anemia, koska läsnä pelkistetyn glutationin punasoluissa kykenevät vastustamaan myrkkyvaikutus metaboliitin. Periytyminen tämän puutteen, ilmeisesti, autosomnoe hallitseva. Kun yhdistetään epätavallinen transformaation kehon myrkyllisten aineiden, sisältämät härkäpavun, viallisesta aktiivisuudesta G-6-PD ilmeisiä kliinisiä oireita favism.

Kliiniset oireet

WHO asiantuntijat jakautuvat versioita G-6-PD mukaisesti kliiniset oireet homotsygoottisessa ja toiminnan tasoilla punasolujen neljään luokkaan.

ykkösluokan - vaihtoehdot, joihin liittyy krooninen anemia.

toisen luokan - vaihtoehtoja aktiivisuuden taso G-6-PD punasolujen 0- 10 % normi, mikä johtaa siihen, ettei kantaja on hemolyyttinen anemia kriisi, ja kriisien, liittyvät saanti huumeiden tai käytön horsebean.

kolmannen luokan - varianttien aktiivisuuden tasojen punasolujen 10-60 % normi, jossa lievä kliiniset oireet saattavat ilmetä, liittyvät huumeiden ottamisesta.

neljännellä luokalla - vaihtoehtoja normaali tai lähes normaaliaktiivisten, ei liity kliinisen patologian.

Syntyessään lapsella on anemia, liittyvät sekä ensimmäiseen, ja toisen luokan puutteen G-6-PD.

Aktiivisuuden taso G-6-PD punasolujen ei aina korreloi vakavuuden kanssa kliinisiä oireita. Monissa suoritusmuodoissa ensimmäinen luokka määritetään 20-30 % entsyymiaktiivisuuden taso. Toisaalta, nolla toiminnan taso joillakin potilailla eivät osoita mitään kliinisiä oireita. Tämä johtuu, Ensin, entsyymit, joiden ominaisuudet lutantnyh, toiseksi, kaiken todennäköisyyden mukaan, nopeudella deaktivointi lääkeaineiden laitteen potilaan maksan sytokromi.

Yleisin puute aktiivisuuden G-6-PD ei tarjoa kliinisiä oireita ilman erityistä provokaatiota hemolyyttis kriisi. Useimmissa tapauksissa hemolyyttis kriisi alkaa saatuaan sulfonamidit (norsulfazola, stryeptotsida, sulfadimetoksina, natrium sulfatsil, etazola, biseptola), malarialääkkeet (primakiiniin, xinina, quinacrine), nitrofuraanin lääkkeet (furazolidona, furadonina, furagina, 5-NOK, nevigramona), huumeita isonikotiinihappo (tuʙazida, ftivazida), PAS-natrium, sekä nitroglyseriini.

Alkaen malarialääkkeet on puute aktiivisuuden G-6-PD voidaan osoittaa delagil, of sulla - ftalazol. Monien lääkkeiden, aiheuttaa suuria annoksia hemolyyttis kriisi, pieninä annoksina voidaan käyttää vaje aktiivisuuden G-6-PD. Näitä ovat aspiriini, amidopirin, fenacitin, levomicetin, Streptomysiini, diabeteslääkkeiden sulfalääkkeitä.

kaikki huumeet, voi aiheuttaa hemolyyttis kriisejä, hemoglobiinin denaturoitumisen hapetuksella molekulaarisen hapen.

Kliinisiä oireita taudin voi esiintyä toisena tai kolmantena päivänä alusta lääkityksen. Aluksi on olemassa pieni keltaisuus kovakalvon, tumma virtsa. Irtisanomisen lääkkeen tänä aikana vakavan hemolyyttinen kriisi ei kehity. Jos hoitoa jatketaan, 4-5-päivänä voi olla hemolyyttis kriisin vapauttaa virtsan musta tai joskus ruskea, johtuen suonensisäisen erythrocytolysis. hemoglobiini voidaan vähentää 2-3 %.

Vaikeissa tauti lisääntynyt kehon lämpötila, on terävä päänsärky, kipu raajoissa, oksentelu, joskus - ripuli. on hengenahdistus, laskee verenpainetta. Lisääntyy usein perna, joskus - maksa.

Harvinaisissa tapauksissa munuaisten vajaatoiminnan kehittyy, koska jyrkkään laskuun munuaisten suodattamalla ja munuaistiehyeiden tukos verihyytymien.

Laboratoriolöydökset

Veressä tutkimus paljasti anemia lisääntyneisiin retikulosyyttien. Lisääntyminen leukosyyttien kanssa siirtyminen myelosyyttejä. Joillakin potilailla,, etenkin lapsille, leukosyyttien lukumäärä voi joskus nousta merkittävä määrä (100 T 1 l ja lisää). Verihiutaleiden lukumäärä ennallaan. Kun värjättiin kristallivioletilla punasolujen vakavissa hemolyyttis kriisien paljasti useita Heinzin-.

Paljasti terävä stimulaatio punainen luuytimen. Kohonnut seerumin pitoisuus vapaan hemoglobiinin, usein kohonnut bilirubiini vuoksi epäsuora. Kanssa bentsidiini näyte paljasti, että läsnä hemoglobiinin virtsaan ilman punasoluja, joskus havaittu hemosiderin.

Joissakin muodoissa puutos glukoosi-6-fosfaattidehydrogenaasia havaittu turvalaitteen hemolyysi, t. se on. hemolyyttis kriisi taukoja, huolimatta, että potilas jatkaa lääkkeen ottamista, joka aiheutti hemolyyttis kriisi. Kyky itse rajoittaa hemolyysin aiheuttama lisääntynyt lähes normaaleihin arvoihin tason entsyymiaktiivisuuden retikulosyyttien. Useimmissa muodoissa vähenee huomattavasti.

Lapsilla vakava hemolyyttinen kriisit esiintyä useammin, kuin aikuisilla. On huomattavasti puute aktiivisuuden G-6-PD joskus esiintyä välittömästi syntymän jälkeen. Tämä vastasyntyneen hemolyyttinen tauti, ei liity immunologisia konfliktien. Se voi tapahtua yhtä vaikea, kuten anemia, rezusnesovmestimostyu johtuen äidille ja sikiölle. Ehkä läsnä kernikterus kanssa vakavia neurologisia oireita.

Patogeneesin näiden kriisien ei ole tutkittu. Ei vielä löydetty, Ovatko nämä kriisit tapahtuvat spontaanisti, koska fysiologinen puutos entsyymin glutationiperoksidaasiaktiivisuuden syntymän tai aiheuttaa niitä tiettyjen antiseptisiä hoidossa napanuoran lapsen. Ehkä, joskus kriisejä vastaanottamiseen tiettyjen lääkeaineiden äiti.

Joissakin tapauksissa hemolyyttinen kriisin vaje aktiivisuuden G-6-PD syntyy tartuntatauteja vastaan: Flunssa, salmonelleza, virushepatiitti. Kriisit voidaan provosoi myös asidoosia diabetesta tai munuaisten vajaatoimintaa.

Pieni osa potilaista puutos aktiivisuuden G-6-PD havaittu vakio hemolyyttinen anemia, liittyy lääkkeiden saanti. Näissä tapauksissa on hienoisia laajentuminen perna, kohtalainen normochromic anemia pitoisuuden kasvaessa retikulosyyttien, erythrokaryocytes luuytimessä ja bilirubiini. Sairauden paheneminen on mahdollista joko ottamisen jälkeen edellä huumeita, tai taustalla infektioiden.

Diagnostiikka

Perusta diagnoosi tämän taudin on määrittää punasolujen entsyymin aktiivisuuden G-6-PD proband ja hänen perheensä. Laadullisia menetelmiä, käyttää tähän tarkoitukseen, Sen pitäisi suositella kaksi kaikkein yksinkertaisin menetelmin.

Menetelmä Bernstein Se mahdollistaa paitsi diagnosoida puute aktiivisuuden G-6-PD lainkaan hemitsygoottisia miehet, naiset homotsygoottinen, mutta jotkut arvioida, missä määrin entsyymin puutos heterotsygoottisia naisia. Tämä menetelmä on mahdollista tunnistaa joitakin 50 % heterotsygoottinen naaraat. Etuna tässä menetelmässä on sen sopivuus käytettäväksi massan seulonta väestöstä kenttäolosuhteissa.

Menetelmä perustuu värinpoisto väriaine 2,6-dikloorifenoli ja kun se on saatettu. Kun läsnä on G-6-PD hapettaa glukoosi-6-fosfaatti ja NADP käyttövalmiiksi muodostamiseksi NADP-H. Tämä aine palauttaa toksifenatsiinimetosulfaatti, joka puolestaan ​​palauttaa 2,6-dikloorifenoli. Fenatsiinimetosulfaatti reaktiossa toimii erittäin aktiivinen kuljettaja elektronien NADPH väriaineen. Ilman fenatsiinimetosulfaatti reaktio kestää muutaman tunnin, ja kun läsnä on fenatsiinimetosulfaatti värjäytymistä esiintyy 15- 30 m.

Reagenssit.

1. Liuosta, jossa NADP: 23 mg NADP liuotettuna 10 ml vettä.
2. Liuosta, jossa glukoosi-6-fosfaatti (G-6-F): 152 mg natriumsuolaa glukoosi-6-fosfaattia liuotetaan 10 ml vettä. Bariumsuola glukoosi-6-fosfaatti on aiemmin muunnetaan natriumsuolaksi. Tähän punnitaan 265 mg barievoy suoloja glukoosi-6-fosfaatti, liuotetaan 5 ml vettä, lisätä 0,5 ml 0,01 M suolahappoliuoksella ja 1 mg kuivaa natriumsulfaatilla. Sakkaa sentrifugoitiin. Supernatantti neutraloitiin 0,01 M natriumhydroksidiliuosta ja säädettiin tislattua vettä 10 ml.
3. fenatsiinimetosulfaatti liuos: 2 mg fenatsiinimetosulfaatti liuotettuna 100 ml Tris-puskuria 0,74 M; pH 8,0.
4. Väriliuosta 2,6-dikloorifenoli (natrievoy suolat): 14,5 mg väriaine liuotettiin 100 ml puskuriliuosta, jossa oli tris-suolahappoa (0,74 M; pH 8,0). Puskuriliuos valmistetaan 1,48 M tris-hydroksimetyyliaminometaani ratkaisu (42,27 d 250 ml vettä) ja 1,43 M liuosta, jossa oli suolahappoa (2 ampullit fiksanala, sisältää 0,1 ekv, vesi säädettiin 135 ml). K 230 ml tris-hydroksimetyyliaminometaani lisättiin 110 ml suolahappoa, pH säädettiin arvoon 8,0 ja vettä lisättiin 460 ml.

Ennen kuin seos valmistettiin reagenssit: 1 ei. NADPH ratkaisu (1), 1 ei. liuos F-6-P: (2), 2 ei. fenatsiinimetosulfaatti liuos (3) ja 16 ei. Liuos, jossa oli 2,6-dihlorfenolinodofenola (4).

Menetelmä.

Koeputkessa, sisältää 1 ml: aan tislattua vettä, edistää 0,02 ml verta.

Alkamisen jälkeen hemolyysin lisättyä 0,5 ml Reagenssi. lukea 30 m. Reaktio pidetään normaali täydellä valkaisu väriaine. Missä, kun väriaine värimuutoksia ei tapahdu (Se on edelleen kovaa sinivihreä väri I), vaste on arvioitu voimakkaasti positiivinen. Jos värin intensiteetti vähenee, mutta sini-vihreä väri on, reaktio katsotaan polo-positiivisia. Missä, kun on ilmeistä värjäytyminen, mutta verrattuna kontrolliryhmään pysyi vihertävä, reaktio pitävät plus-miinus.

Rezkopolozhitelnye positiivinen reaktio esiintyy hemizygous miehillä ja homotsygoottiset naiset. Joskus heterotsygoottiset naiset annettava positiivinen, mutta useimmat plus-miinus. Lisäksi, plus tai miinus Joskus reaktio on havaittu täysin terveitä ihmisiä joidenkin lasku entsyymin aktiivisuuden taustalla sairaus tai lääkitys. Plus-miinus reaktiot olisi otettava huomioon, ja tarkistaa entsyymin määrällisellä menetelmällä vain, jos epäilet läsnäolo hemolyyttinen anemia naisilla, viallisesta aktiivisuudesta johtuen glukoosi-6-fosfaattidehydrogenaasin. Sitä ei voida ottaa huomioon plus miinus reaktio Joukkotarkastustoiminnan.

Väärät positiiviset reaktiot Se voi olla, joilla on vaikea anemia, koska, mitä 0,02 ml verta, lisätään putkeen, Ne sisältävät pienen määrän punasolujen ja, Siis, pieni määrä entsyymiä. Tässä tapauksessa putkeen, joka sisälsi tislattua vettä tulisi lisätä kaksi tai kolme pipetin (mennessä 0,02 ml) veri, on väriaineen väri putken ennen sen lisäämistä ei eronnut kontrollista.

fluoresoiva tahra menetelmä Beutler и Mitchell joka perustuu spesifinen fluoresenssi alentuneen NADP pitkän ultraviolettivalolla (440- 470 nm), arvioitiin visuaalisesti kiinteän suhteen.

Reagenssit.

1. Tris-HCl-puskuria 0,5 M; pH 8,0: 60,55 Tris liuotettiin 800 ml: aan tislattua vettä, lisätä 20 ml väkevää HCI:, pH säädettiin arvoon 8,0 kautta 2 M HCl-liuosta ja täytetään vedellä 1 ml; Liuosta säilytetään ylös 36 päivää 4 ° C: ssa.
2. Liuosta, jossa glukoosi-6-fosfaatti 20 M: 6 mg dinatriumsuola glukoosi-6-fosfaattia liuotetaan 1 ml: aan tislattua vettä; kyllästynyt 2 päivää 4 ° C: ssa.
3. Liuosta, jossa NADP 10 M: 8 mg NADP liuotettuna 1 ml: aan tislattua vettä; kyllästynyt 10 päivää lämpötilassa 4 ° C.
4. Vesipitoinen saponiini liuos 1 % kyllästynyt 20 päivää lämpötilassa 4 ° C.
5. Liuokseen, jossa oli hapetettua glutationia (10 ml): 2,4 mg glutationia liuotetaan 1 ml: aan tislattua vettä; kyllästynyt 10 päivää 4 ° C: ssa.

Menetelmä.

Ennen määrittämiseksi inkuboimalla seos valmistettiin, sekoittaminen 1 ei. Liuosta, jossa glukoosi-6-fosfaatti, 1 ei. NAD-F ratkaisu, 2 ei. saponiinia ratkaisu, 5 ei. puskuria ja 1 ei. käsittää yksinkertaisesti glutationi. Veri (0,01 ml) syötetään putken tai solun hemagglutinaatiota ja plakin lisättiin 0,2 ml inkubointiseoksen. Kautta 15 min mikropipetin valitaan yksi tippa inkubointiseokseen (0,02 ml) kustakin näytteestä ja soveltaa niitä kromatografiseen paperin muodossa paikka, jonka halkaisija on 10-12 mm. Täplät kuivattiin ilmassa huoneenlämpötilassa ja lukemassa ultraviolettivalolle fluoresenssin arviointi. Ohjaus näytteet ovat selvästi normaaleja veren. Laatua valvotaan reagenssien ei sisällä verta.

Tulosten arviointi.

Koska fluoresenssi vastaa aktiivisuuden puutetta, fluoresenssi nalïçïe (sinistä hehku) - on aktiivinen, heikko valo - reaktiovälituote. Edellytyksin kokeen menetelmä ei anna vääriä negatiivisia tuloksia. Lähde vääriä positiivisia diagnoosi voi olla vaikea anemian tutkituista, mutta paljon vähäisemmässä määrin, kuin Berstein menetelmä. Vaikka vaikea anemia havaittu reaktiovälituote, ei puute fluoresenssin.

Käyttämällä kvantitatiivinen menetelmä aktiivisuuden määrittämiseksi G-6-PD tekee mahdolliseksi tunnistaa Aktiivisuuden väheneminen ei vain hemitsygoottisia ja homotsygoottisten potilaiden, mutta naisilla heterotsygoottinen. Koska, että määrä retikulosyyttien ja väri-indeksi vaikuttaa entsyymin aktiivisuuden taso, on suositeltavaa muuttaa perustuvia tuloksia näistä indikaattoreista.