Kvantitatiivsed ja kvalitatiivsed omadused seemnerakkude määratlus

Sperma motoorika määramine

Sperma liikuvuse määramine on kõige olulisem parameeter, kvaliteeti iseloomustav sperma. Sperma, võimeline viljastamise, on liikuvus - sooritada lineaarset translatsioonilist liikumist kiirusega 50 µm/s. Võib leida ejakulaadist Motiilsuse häiretega spermatosoidid - düskinospermia võnkuva kujul, areen ja muud liikumisviisid, mis tavaliselt ei ole.

Sperma motoorikat hinnatakse natiivse ejakulaadi preparaadiga. piiratud vaateväljaga (kasutades Fonio akent), kasutades 7X okulaari ja 40X objektiivi, poolavatud kondensaatoriga. üles lugedes 100 rakk, märkige nende hulgas mobiiltelefonide arv, istuvad ja liikumatud spermatosoidid. Tavaliselt on aktiivse liikumisega spermatosoidid 80–90 %, istuv - 10-12, liikumatu - 6 - 10 %. Arvesse võetakse ainult aktiivselt liikuvaid ja mitteaktiivseid spermatosoide, mis liiguvad edasi.

Võite kasutada üksikasjalikumat viiepallilist hindamisskaalat:

• "4" - suurepärane liikuvus (kõigil spermatosoididel on märkimisväärse kiirusega sirgjooneline translatsiooniline liikuvus);
• "3" - hea liikuvus (mõnevõrra vähenenud);
• "2" - keskpärane liikuvus (palju liikumatuid spermatosoide, aga vibreerivate sabadega);
• "1" - halb liikuvus (ei mingit edasiliikumist, ainult spermatosoidide sabade liikuvus);
• "0" - spermatosoidide liikumist pole.

ejakulaadi viljakus sõltub spermatosoidide liikuvuse kestusest, seetõttu on vaja määrata spermatosoidide liikuvus dünaamikas (dünaamiline kinesisgramm).

Katteklaasile kantakse tilk ejakulaadi, keerake see ümber ja asetage sel viisil rippuva tilga jaoks avaga klaasslaidile, nii, et tilk oleks süvendi keskel. Katteklaasi servad määritakse vedela parafiiniga ja määratakse mikroskoobi all aktiivselt liikuvate rakkude protsent., istuvad ja liikumatud spermatosoidid läbi 1, 3, 6, 12 ja 24 tundi pärast ejakulatsiooni. Uuring viiakse läbi toatemperatuuril. Tavaliselt väheneb aktiivselt liikuvate spermatosoidide arv iga 2-3 tunni järel 20 % ,

• Märkus. Ejakulaadi mikroskoopilist uurimist peaks laboris läbi viima üks inimene, omab piisavat kogemust selles laboridiagnostika valdkonnas, kuna erinevate teadlaste spermatosoidide liikuvuse määramise tulemused varieeruvad kuni ±40 % ja sõltuvad suuresti ejakulaadiga seotud kogemustest.

Spermatosoidide "taaselustamise" test

Spermatosoidide "taaselustamise" test mis põhineb liikumatu inimese normaalse liikuvuse taastamisel, kuid elusad spermatosoidid koos stimuleerivate lahustega:

1) Beckeri lahendus (glükoos - 3 g, Edasi₂HPO₄ - 0,6 g, NaCl - 0,2 g, KH₂PÄRAST₄ -0,01 aastat, destilleeritud vett 100 ml; pH- 7,8);

2) 0,1 % kofeiini lahus (ainult mitte ampullides!) - 10 % ejakulaadi mahust;

3) 0,1 M arginiini lahust.

Meetod. Pipeti mahutavus 1 ml imetud 0,1 ml ejakulaati (hästi segatud) ja sama pipetiga nad koguvad 0,9 ml stimuleerivat lahust. Pipeti sisu puhutakse kellaklaasile., sega korralikult läbi, imedes ja puhudes vedelikku korduvalt kellaklaasile, ja seejärel valmistada rippuvad tilgapreparaadid. Aastal 5- 10 min fikseeritud, aga elusad spermatosoidid hakkavad liikuma.

Motiilsete spermatosoidide protsent määratakse kohe pärast liikuvuse taastamist ja pärast seda 3, 6, 12 ja 24 ei. Usaldusväärsemate tulemuste saamiseks viiakse paralleelkatse läbi kahe stimuleeriva lahusega.. Ainult tingimusel, et liikumatuid spermatosoide on võimatu "elustada" saab rääkida nekrospermiast.

Elusate spermatosoidide tuvastamine liikumatute seas

Meetodi põhimõte põhineb, et elusad spermatosoidid muudavad eosiini värvituks. Kasutatakse reaktiividena 5 % kaaliumeosiini vesilahus ja 10 % nigrosiini vesilahus.

Meetod. Väike tilk ejakulaati asetatakse slaidile, asetage selle kõrvale topelt suur tilk 5 % eosiini kaaliumi lahus ja tilk 10 % nigrosiini lahus, mis on samuti kaks korda suurem kui tilk kaaliumeosiini. Esiteks segatakse ejakulaat kaaliumeosiiniga, oodake mõni sekund, ja seejärel segatakse tilga nigrosiiniga, jälle oodake mõni sekund ja tehke lihvslaidiga õhukesi liigutusi.

Mikroskoobi keelekümblussüsteemi kasutamine, määrides vähemalt 200 sperma, elamise eristamine (Värvitu) ja surnud (eosiiniga punaseks peitsitud). Elusate ja surnud spermatosoidide arv on väljendatud protsentides. Nigrosiini puudumisel segatakse tilk ejakulaadi tilgaga 5 % kaaliumeosiini lahusega ja valmistage mikroskoopia jaoks õhukesed määrded. Nigrosiin määrib ainult ravimi tausta, milles spermatosoidid paistavad kontrastsemalt silma. Tavaliselt on elusate spermatosoidide arv 80–90 % nende koguarvust.

Spermade arv sisse 1 ml ja kogu ejakulaadi mahus

Spermatosoidide arv 1 ml ja kogu ejakulaadis loetakse Gorjajevi loenduskambris.

Spermatosoidide arv kogu ejakulaadis määratakse spermatosoidide arvu korrutamisega 1 ml ejakulaadi koguse kohta (milliliitrites).

• Märkus. Loenduskambris saate määrata ka liikuvate spermatosoidide arvu, mille puhul tuleks ejakulaat lahjendada sooja isotoonilise naatriumkloriidi lahusega ja loendada liikumatute spermatosoidide arv, ja seejärel lahutage need kogusummast.

Tavaliselt on 1 ml ejakulaadi sisaldab 60-120 miljonit. sperma, hüperspermiaga - rohkem 120 miljonit, oligospermia korral - alates 30 kuni 60 miljonit, mida, tavaliselt, muudab viljastamise võimatuks. Siiski on juhtumeid kirjeldatud, millal viljastumine toimub ja kui sees hoitakse 1 ml ejakulaadi ot 5 kuni 30 miljon. sperma.

Igatahes kui tuvastatakse oligospermia Nende maksimaalse arvu kindlaksmääramiseks on vaja 2–3 spermatosoidide arvu kontrollloendust 3–4 nädalaste intervallidega. Samal mehel on spermatosoidide arv allutatud olulistele füsioloogilistele kõikumistele..

Tavaliselt sisaldab kogu ejakulaat rohkem kui 150 miljon. sperma.

Spermade arv

Spermatogramm on spermatosoidide ja spermatogeneesirakkude erinevate morfoloogiliste vormide protsent.

Määruses, värvitud hematoksülineosiini või Pappenheimiga, vähemalt arvutatud 200 sperma, samas normaalsete ja patoloogiliste vormide arv, samuti protsentides väljendatud spermatogeneesirakud. Loendamine toimub mikroskoobi sukeldumissüsteemi ja eelnevalt muudetud võtmenimedega leukogrammide loendusmasina abil.

Normaalses ejakulaadis on spermatosoidide normaalsed vormid 80-85 %, mõnikord 100 %, Nende hulka kuuluvad füsioloogilised, millele on iseloomulikud või ebatavaliselt kitsendatud, või vähendatud, või laienenud pea.

Noor, või ebaküps, spermatosoidide vormidel on pea ja kaela ümber tsütoplasma jäänused ("krae"), mida täheldatakse sagedaste seksuaalvahekordade korral ja nad ei ole viljastumisvõimelised.

Vanad spermatosoidide vormid (hüperkroomia, akroomia, pea vakuoliseerimine) ilmuvad ejakulaadis pärast pikaajalist seksuaalset karskust ja ei sobi viljastamiseks.

Patoloogiliste vormide hulka kuuluvad pea deformatsiooniga spermatosoidid: megalospermatozoidid (hiiglaslikud spermatosoidid), makro-, mikrospermatosoidid, Kooniline, kahepealised ühe kaela ja ühe sabaga spermatosoidid, kaelatu ühe või mitme sabaga, ilma sabata, ilma peata sabaga jne..

Tervetel meestel normaalses ejakulaadis spermatosoidide ebanormaalseid vorme tavaliselt ei leidu., kuid mõnikord võib nende arv normaalse ejakulaadi viljastamisvõimega ulatuda 20 %, millest ligikaudu 15 % kujutab endast pea patoloogiat, 3-5 % — kehad, 2-5 % - saba.

Patoloogilise spermatogeneesiga, viljatuse sekretoorne vorm, tuvastatakse pea ja kaela patoloogiaga spermatosoidid. saba patoloogia tavaliselt ekskretoorse päritoluga, tekib siis, kui seemnerakk läbib veresoone.

Värvitud preparaatides on selgelt näha ka eraldi asetsevad sugurakud erinevatel diferentseerumise ja küpsemise etappidel., mis on oluline aspermia ja azoospermia eristamiseks.

spermatogoonia on ümardatud, mõnikord ovaalne, nende läbimõõt on 5-12 mikronit. Tuum hõivab ligikaudu kolmandiku rakust, tume- või heledat värvi, 1—2—3 tuumaga- laamad, asub sageli karyolemma lähedal (tuumaümbrise), peeneteraline kromatiini struktuur. Tsütoplasma uzkaya, basofiilset, Homogeenne. Spermatogoonia jaguneb mitootiliselt mitu korda. On rakke, millel on täpselt määratletud mitoosi staadiumid.

Osa rakkudest, tekkis mitoosi tulemusena, diferentseeruvad spermatotsüütideks I, ja siis teine ​​järjekord. I järgu spermatsüüdid - ümmargused või hulknurksed rakud läbimõõduga 17-19 mikronit suure ümara tuuma ja kerge peeneteralise tsütoplasmaga. Värvitud preparaatides on nähtav selge perinukleaarne tsoon..

Spermatotsüüdid II järk tekkis meioosi tagajärjel. Need on väiksemad, kui esimest järku spermatsüüdid (läbimõõt 15 m), kuid morfoloogiliselt peaaegu identsed. Sagedamini ejakulaadis, kui esimest järku spermatsüüdid, aga palju harvemini, kui spermatiidid.

Spermatydы - väike, ümarad või piklikud rakud läbimõõduga 12-15 mikronit ümarate hüperkroomsete tuumadega, asub tsentraalselt või ekstsentriliselt. Võimalik, et mitmetuumalised spermatiidid. Pale tsütoplasmas, basofiilne, Sageli vakuoliseeritud.

Spermatiidid muutuvad spermatosoidideks.

Spermatogeneesirakud normaalses spermatogrammis ei ole rohkem kui 2 %. Suurt hulka neist täheldatakse sekretoorse iseloomuga viljatuse korral..

Faaskontrastmikroskoopia jaoks ejakulaat lahjendatakse isotoonilise naatriumkloriidi lahusega, lisades sellele väikese koguse 1 % rivanooli või karboolhappe vesilahus spermatosoidide liikuvuse vähendamiseks.

Fluorestsentsmikroskoopiaga üks tilk ejakulaati ja üks tilk lahjendatud akridiinapelsini kantakse alusklaasile 1:20000. Tilgad segatakse ja kaetakse katteklaasiga.. Mikroskoopia jaoks kasutatakse 7-kordset okulaari ja 40-kordset objektiivi.. Elus spermatosoidid muutuvad roheliseks, surnud on oranžis. Spermatosoidide normaalseid ja patoloogilisi vorme on nende morfoloogiliste tunnuste tõttu lihtne eristada..

Faaskontrast- ja luminestsentsmikroskoopidega töötamise reegleid kirjeldatakse nende seadmete juhistes.. Faaskontrast- ja luminestsentsmikroskoopia kasutamisel loetakse spermatogramm üldreeglite järgi.

Ejakulaadi mikroskoopilise uurimise põhjal saab tuvastada mitmesuguseid patoloogilisi seisundeid..

• Aspermia - spermatosoidide ja spermatogeneesirakkude puudumine ejakulaadis.
• Azoospermia - spermatosoidide puudumine spermatogeneesirakkude juuresolekul.
• Astenospermia - liikuvate rakkude arvu vähenemine ja normaalse spermatosoidide üldarvuga patoloogiliste vormide arvu suurenemine.
• Oligoastenospermia - spermatosoidide ja nende liikuvate vormide arvu vähenemine ning patoloogiliste vormide arvu suurenemine.
• Nekrospermia – kõigi preparaadis olevate spermatosoidide liikumatus isegi pärast taaselustamist.
• Akinospermia - seisund, kus erinevalt nekrospermiast hakkavad varem liikumatud spermatosoidid pärast "elustamist" aktiivselt liikuma.