Mikroskoopilisel uurimisel tserebrospinaalvedelikust

Tsütoosi määramine

Tserebrospinaalvedeliku tervete üksikisikute sisaldas väga väike hulk rakke. Kliiniline tähtsus on peamiselt leukotsüüdid (lümfotsüütide). Et loota valgete vereliblede ei häiri erütrotsüütide, Nad hävitada neid, lisades lahjendamata seljaajuvedelik 1/10 osades äädikhape fuksiin. Magenta värvid tuumadega rakkude punane. Värvimiseks leukotsüütide reaktiivi Samson (segatud 30 ml jää-äädikhapet, 2 ml veeldatud fenooli, 2 ml alkohoolsete lahendus fuksiini 1 : 10 ja ülaosaga 100 ml destilleeritud vesi). Resistentne reaktiiv, värvib rakke hästi ja hoiab neid tsütolüüsi eest mitu tundi.

Kasutatakse ka lahendust, mis hõlmab 5 ml 10 % äädikhappe lahus ja 0,1 g metüülvioletti. See on vähem püsiv, värvib rakke siniseks.

Tserebrospinaalvedeliku tsütolüütiliste omaduste tõttu tuleks rakkude arv kohe pärast selle võtmist lugeda.. Vedelikku mõõdetakse katseklaasi tilkade või mikropipetiga proportsionaalselt 10 tserebrospinaalvedeliku osad ja 1 osa värvilahusest ja jäta 10-25 minutiks rakkude värvimiseks. Lahjendamiseks võite kasutada leukotsüütide segisti. Tserebrospinaalvedeliku rakud kinnituvad toruseintele väga kiiresti, seega vedel, in vitro, enne uurimist on vaja hoolikalt segada peopesade vaheliste pöörlevate liikumistega.

Tsütoosi loendamiseks kasutage Fuchs-Rosenthali kaamera. Loendamine toimub kogu ruudustikus läbi 5 min pärast kambri täitmist. Lahtrite arv 1 μl määratakse valemiga

X =(A * 11)/(3.2*10)

kus X on lahtrite arv 1 l; A - lahtrite arv, loetakse võre pinnale; 3,2 - kambri maht; 11/10 - lahjendusmäär.

Loendamistulemuste registreerimine murdosa kujul on lubatud, nt 14/3, Kus on 14 - loendatavate rakkude arv kambris, 3 - kambri mahu ümardatud number. Suure hulga lahtrite korral piisab, kui lugeda need ruudustiku poolde ja saadud arv kahekordistada. Koos väljendunud pleotsütoosiga (rakkude arvu märkimisväärne suurenemine) on lubatud rakke sisse lugeda 16 väikeste ruutudega ja korrutage saadud arv 16.

Fuchs-Rosenthali kaamera puudumisel saate seda kasutada Gorjajevi loenduskamber oluliselt väiksema mahutavusega, seetõttu loendatakse selles rakke vähemalt kolmes ruudus, arvutage aritmeetiline keskmine ja korrutage see 1,2. Faktor 1,2 saada valemist

X =(A * 11)/(0.9*10)

kus 0,9 on kambri maht, 11/10 - lahjendusmäär.

Lahjendamata tserebrospinaalvedelikus olevate rakkude loendamisel langeb üks esimestest tilgadest, mis tulenevad torkenõelast, paigutatakse Fuchs-Rosenthali kambrisse ja määratakse rakkude arv, nagu eespool öeldud.

Normaalne rakkude arv (lümfotsüütide) sisse 1 μl tserebrospinaalvedelikku aju vatsakestest ja väikeaju tsisternist on 0-1, ja vedelas olekus, saadud nimme punktsiooniga - 2-4.

Alla kolme kuu vanustel lastel 1 μl tserebrospinaalvedelikku tuvastatakse kuni 20–23 rakku, kuni üks aasta - 14.-15, kuni kaks aastat - 11.-14, kahest kuni viie aastani - 10.-12, viiest kuni seitsmeni - 8.-10, seitsmest kümneni - 6.-8, üle kümne aasta vanused - 4.-5.

Meningiidi korral, abstsess ja ajukasvajad, suureneb tserebrospinaalvedelikus rakkude arv.

Mõnel juhul hemorraagilise tserebrospinaalvedeliku uurimisel on vaja kindlaks teha selle tõeline tsütoos. Sel eesmärgil kasutatakse Friedmani meetod: hemorraagiline vedelik kogutakse Simsoni reaktiiviga tsütoosi määramiseks ja isotooniline naatriumkloriidi lahus erütrotsüütide arvu 1 μl tserebrospinaalvedelikku.

Näiteks, lahtrite arv 1 μl - 20, erütrotsüütide arv - 3600. Erütrotsüütide ja leukotsüütide arv patsiendi veres määratakse üldanalüüsi põhjal, teostatakse enne nimme punktsiooni. Näiteks, sisse 1 l vere 4 200 000 erütrotsüüt, 7000 leukotsüüdid. Seega moodustab üks leukotsüüt 4200000/7000 = 600 erütrotsüüti.

Tõelise tsütoosi väärtuse saamiseks moodustage võrrand:

edasi 600 erütrotsüüdid - 1 leukotsüüt;

edasi 3600 erütrotsüüdid - X leukotsüüdid, Järelikult,

X = 3600/600 = 6 leukotsüüdi.

Tserebrospinaalvedeliku tõeline tsütoos 20-6 = 14 rakku per 1 l.

Selle meetodi rakendamine on piiratud, kuna tserebrospinaalvedelik koos olulise vereseguga ei sobi selliseks uuringuks.

Erütrotsüütide arvu määramine tserebrospinaalvedelikus on oluline patsiendi seisundi raskusastme tuvastamiseks koljusisese hemorraagia korral.

In juuresolekul 1 μl 2000-5000 erütrotsüüti, tserebrospinaalvedelik muutub roosaks, 900- 1000 erütrotsüüdi - ainult veidi opalestseeruvad. Värvitu vedelikus võib leida madalamat punaste vereliblede sisaldust. Erütrotsüütide taseme tõus dünaamikas on kliiniliselt oluline..

Tserebrospinaalvedeliku rakkude diferentseerumine viiakse läbi loenduskambris kohalikul ja värvilisel kujul.

Suure zoomi (okulaar 10X või 15X, 40X objektiiv) loenduskambris pöörake tähelepanu lahtrite suurusele, vorm, tuumade asukoht ja suurus, inklusioonide olemasolu tsütoplasmas. Lümfotsüüdid eristuvad kergesti, neutrofiilsed granulotsüüdid, makrofaagid. Tavaliselt sisaldab tserebrospinaalvedelik ainult lümfotsüüte.

Tserebrospinaalvedeliku rakulise koostise täieliku iseloomustuse saamiseks uuritakse värvunud preparaate. Vedelad rakud värvuvad halvemini, kui vererakud. Värvimiseks on mitu võimalust: Rosinal, Vanker, Papanikolau, Aleksejev, Mai-Grunwald, Pappenheim.

Pleotsütoosi olemuse määramine luminestsentsmikroskoopia abil

Rasvavabale klaasiklaasile kantakse tserebrospinaalvedeliku tilk ja segatakse fluorokroomvärviga (lahjendatud akridiinoranži ja rodamiini vee-soolalahuste segu 1:20000). Valmistatud preparaati uuritakse fluorestsentsmikroskoobi ML-2 all nähtavas spektris sinakasviolettkiirtes, ergastusfiltrite kombinatsiooni rakendamisega: FS 1—4, SZS 14—4, BS 8-2 ja JS-1 lukustusfilter sukeldumisobjektiiviga. Dimetüülftalaati kasutatakse uurimiseks fluorestseerimata keelekümblusõlina. (ortoftaalhappe dimetüülester).

Vaatevälja tumedal taustal on polünukleaarrakud ja lümfotsüüdid tsütoplasma rohelise kuma abil hõlpsasti tuvastatavad. Loe järjest 100 rakk, arvestades lümfotsüütide ja neutrofiilsete granulotsüütide arvu.

Lümfotsüüdid erinevad neutrofiilsetest granulotsüütidest tuuma olemuse poolest (tükiline struktuur oranžide lisustega) ja erkroheline fluorestsents.

Neutrofiilsed granulotsüüdid on selge struktuuriga, nende tuumade kromatiin hõõgub hajusalt, ühtlane helge- rohelises. Kollane tsütoplasma- roheline, selles on hajutatud tellispunaseid graanuleid.

Väiksema tsütoosi korral tsentrifuugitakse looduslikku tserebrospinaalvedelikku ja uuritakse setet.

Tserebrospinaalvedeliku luminestsentsmikroskoopiline uurimine muudab neutrofiilse vedeliku kohta järelduste tegemise lihtsaks, pleotsütoosi lümfotsütaarne või polümorfne-rakuline olemus.

Tserebrospinaalvedeliku rakkude morfoloogilised omadused

Lümfotsüüdid

Tervete inimeste tserebrospinaalvedelik sisaldab väikesed ja keskmised lümfotsüüdid (1-2 tolli 1 l) suurus 4-6 mikronit. Need on ümara kujuga rakud, millel on suur blokeeritud tuum ja väga kitsas tsütoplasma..

Lümfoidse pleotsütoosiga (tuberkuloossete meningiit, tsüstitserkoos) koos väikeste ja keskmiste ilmuvad suured lümfotsüüdid (8-9 M), otsese tuumajaotusega lümfotsüüte võib harva leida.

Lümfotsüütide arv (koos teiste lahtritega) tserebrospinaalvedeliku suurenemine ajukasvajate korral, meningiidi krooniline kulg. Neurokirurgiliste haiguste korral toimub lümfotsüütide arvu suurenemine operatsioonijärgsel perioodil pärast neutrofiilsete granulotsüütide arvu kasvu ja näitab soodsat tulemust.

Plazmaticheskie rakud

Tserebrospinaalvedelikus võib plasmarakke leida ainult pikaajaliste põletikuliste protsessidega ajukoes ja meninges. Plasmarakkude morfoloogia on sama, nagu vere- või luuüdi punktsioonis.

Need on ümmarguse kujuga, ekstsentriliselt paikneva tuumaga ja intensiivse värvusega rakud, Basofiilset tsütoplasma. Mõnel juhul võib nende arv ulatuda 26%. Plasmarakke leidub ka postoperatiivsel perioodil ja ajutraumade reparatiivsete protsesside aeglane kulg.

Gistiocitы

Tavalises tserebrospinaalvedelikus leidub neid mõnikord üksikute isenditena.

Värvitud preparaatides on histiotsüütidel suur tuum ja suhteliselt kitsas tsütoplasma.. Lahtri suurus alates 7 kuni 10 m, ümmargune või ebakorrapärane kuju. Oakujuline või ebakorrapärase labaraga tuum, normokroomne. Nukleoolid on faasikontrastmikroskoopiaga natiivsetes preparaatides nähtavad.

Tuberkuloosse meningiidi korral leitakse tserebrospinaalvedelikust suur hulk histiotsüüte, eraldatud ja rühmitatud, nende tsütoplasma on basofiilne, värvitud intensiivsemalt.

Olemasolevate andmete kohaselt, teatud tüüpi neurogliate rakud võivad muutuda histiotsüütideks. Patsientidel leitakse suur hulk tserebrospinaalvedelikus olevaid histiotsüüte, tehti aju või seljaaju operatsioon (mis näitab kudede aktiivset reaktsiooni ja haava normaalset paranemist), ja üksikisikute, kannatab tuberkuloosse meningiidi ja tsüstitserkoosi all, mille põletikuline protsess kulgeb aeglaselt. Ajukasvajate korral, mis tungivad subarahnoidaalsesse ruumi või ventrikulaarsetesse seintesse, võivad tserebrospinaalvedelikus koos makrofaagide ja muutunud rakkudega ilmneda histiotsüüdid, mis on tüüpiline kasvaja ümber oleva reaktiivse tsooni ilmnemisele.

Makrofaagid

Makrofaagid moodustuvad ühest- ja mitmetuumalised arahnoidsed endoteelirakud ja monotsüüdid. Arahhnoidse endoteeli elemendid eraldatakse süntsüütiumist ja muutuvad ümarateks rakkudeks, omades amööbitaolist liikumist ja tungides tserebrospinaalvedelikku.

Makrofaagid absorbeerivad ja seedivad aktiivselt rakke ja muid elemente, tserebrospinaalvedelikku sisenemine patoloogiliste protsesside ajal, aidates seda puhastada. Makrofaagide tsütoplasmas sisalduvad kanded on kambris ja värvitud preparaatides kergesti diferentseeritavad.

Makrofaagid fagotsütoosivad erütrotsüüte, hävinud või muutmata neutrofiilsed granulotsüüdid, rasvatilkadega, hematoidiini jt kristallid. Sageli on makrofaagi tsütoplasmas mitmesuguse suurusega vakuoole või üks suur vakuool, mis hõivab peaaegu kogu tsütoplasma, tuum nihutatakse perifeeriasse. Sellistel juhtudel näeb rakk välja nagu rõngas - krikoidne makrofaag.

Tavaliselt tserebrospinaalvedelikus makrofaagid puuduvad. Nende välimus normaalse tsütoosiga näitab verejooksu või kesknärvisüsteemi põletikulist protsessi.. Operatsioonijärgsel perioodil suur arv tserebrospinaalvedelikus olevaid makrofaage näitab aktiivset eemaldamist. (positiivne prognoos). Väike arv makrofaage või nende puudumine raske pleotsütoosiga on ebasoodne prognostiline märk.

Teralised pallid – vahtrakkudes

Teralised pallid (vahtrakkudes) on suured makrofaagid, millel on tsütoplasmas rasvatilkade mitmekordne lisamine.

Need on kõige sagedamini ümarad rakud., tumepruun värvus magenta. Tserebrospinaalvedeliku ravimisel Sudaan III-ga muutuvad teralised pallid oranžikaspunaseks.

Leitakse tserebrospinaalvedelikus, kui sellesse satub erineva etioloogiaga tsüstidest pärinev vedelik, ajukoe lagunemisega (koos rasvatilkadega), mõnikord operatsioonijärgsel perioodil, mõne ajukasvajaga (kraniofarüngioma, ependümoom jne.). Kui kasvaja asub aju vatsakeste lähedal, siis avastatakse vatsakestest tserebrospinaalvedelikus kõige sagedamini teralised pallid. Mikrogliotsüüdid on granuleeritud pallide allikas, samuti oligodendrotsüüdid, veresoonte välise membraani ja arahnoidaalse membraani rakud.

Neutrofiilsed granulotsüüdid

Neutrofiilsed granulotsüüdid tserebrospinaalvedelikus sarnane neutrofiilsete vere granulopsidega, nende tsütoplasma (loenduskambris ja kohalikes preparaatides) sageli piklikud või väljaulatuvad (pseudopoodiad). Seda rakuvormide mitmekesisust täheldatakse esimese 10–15 minuti jooksul pärast tserebrospinaalvedeliku võtmist ja see näitab neutrofiilsete- mi granulotsüütide liikumisvõime. Iseloomulik on segmenteeritud südamik, segmentide arv, milles see jääb vahemikku kaks kuni viis; torkivad neutrofiilsed granulotsüüdid on haruldased.

Tserebrospinaalvedeliku säilitamisel muutuvad neutrofiilsed granulotsüüdid varem, kui muud lahtrid. Neutrofiilsete granulotsüütide tuumad võib lüüs või segmendid ümarduda, selgete kontuuridega, ühendatud õhukese hüppajaga; hiljem on need eraldi graanulite kujul. Neutrofiilne granulotsüüt, mis säilitab ainult ühe ümmarguse kujuga tuumasegmendi, näeb välja nagu normoblast. Vastavad paistes neutrofiilsed granulotsüüdid, millel on ebaselged segmendi piirjooned, hõivates peaaegu kogu tsütoplasma. Värvitud preparaatides võib täheldada neutrofiilsete granulotsüütide lagunemise kõiki etappe - alates tuuma tursest kuni raku struktuuri täieliku hävitamiseni., kui tsütoplasma kontuurid pole nähtavad, ja tuuma segmendid muutuvad vormituks, koosneb õrnast kromatiinvõrgust. Nende rakkude kuulumist neutrofiilsetesse granulotsüütidesse saab kindlaks teha ainult peroksüdaasile reageerimise teel: rohekaskollaste või pruunide graanulite olemasolu hävitatud tsütoplasmas.

Mõnikord on tserebrospinaalvedelikus ebaregulaarse kujuga hüperkromiliste tükkidena neutrofiilsed granulotsüüdid, millel on püknootiline tuum..

Tserebrospinaalvedelikus ilmuvad neutrofiilsed granulotsüüdid verevalumitega subaraknoidses ruumis, närvisüsteemi põletikulised haigused, pärast neurokirurgilisi operatsioone. Verega neutrofiilsete granulotsüütide esinemine tserebrospinaalvedelikus näitab ajukelme põletikku.

Muutumatute neutrofiilsete granulotsüütide ülekaal näitab ägedat põletikulist protsessi.

Ootamatu neutrofiilse pleotsütoosi ilmnemine täheldatud, kui ajukelme all puhkeb abstsess.

Abstsessiga, sügaval ajukoes, tavaliselt täheldatakse kerge pleotsütoos koos lümfotsüütide ülekaaluga.

Tserebrospinaalvedeliku põletikulise protsessi nõrgenemisega ilmnevad neutrofiilsete granulotsüütide degenereerunud vormid.

Muutunud ja muutmata neutrofiilsete granulotsüütide olemasolu on iseloomulik käimasolevale põletikulisele protsessile. Tuleb arvestada, et värske vere lisamisel ilmnevad tserebrospinaalvedelikus muutumatud neutrofiilsed granulotsüüdid, sellistel juhtudel on vajalik tsütoosi korrigeeriv määramine.

Eosinofiilne granulotsüüdid

Tserebrospinaalvedeliku natiivsetes preparaatides sisalduvad eosinofiilsed granulotsüüdid eristuvad teiste rakkudega iseloomuliku läikiva suure granulaarsuse olemasolu tõttu, tsütoplasma täitmine. Kahesagara tuumaga rakke on harva, Kõige sagedamini täheldatakse ühetuumalisi vorme. Värvitud preparaadis on eosinofiilsete granulotsüütide morfoloogia sama, nagu veres. Tserebrospinaalvedelikus leitakse kõige sagedamini hävinud eosinofiilseid granulotsüüte.

Tsüstitserkoosiga tserebrospinaalvedelikus on eosinofiilsete granulotsüütide sisaldus vahemikus 1 kuni 46%.

Meningiidi tekkega tsüstitserkoosse arahnoidiidi komplikatsioonina kaasneb neutrofiilse pleotsütoosi ilmnemine ja eosinofiilsete granulotsüütide arvu vähenemine.. Ehhinokoki põie abstsessi moodustumiseks ajus on iseloomulik neutrofiilsete ja eosinofiilsete granulotsüütide olemasolu selle sisus, mis toimib abimärgina selle abstsessiga eristamisel. Mõnikord võib aju ja seljaaju kasvajate tsüstide sisus leida palju eosinofiilseid granulotsüüte (nevrinome, kraniofarüngioma, ependümoom, vähi metastaasid ajus). Pärast vatsakeste tsisternoskoopiat võib täheldada tserebrospinaalvedelikus eosinofiilsete granulotsüütide arvu märkimisväärset suurenemist.

Pärast ajukasvaja eemaldamist operatsioonijärgse haava aktiivse paranemisega suureneb eosinofiilsete granulotsüütide arv, mida võib pidada ajukelme lokaalseks allergiliseks reaktsiooniks kudede lagunemissaaduste vigastusele ja imendumisele.

Muudetud rakud ja rakuvarjud

Tserebrospinaalvedeliku tsütolüütiliste omaduste tõttu rakud, viibides selles pikka aega, säilitavad ainult tsütoplasma kontuurid ja tuumajäägid. Nende morfoloogilist kuuluvust pole võimalik kindlaks teha. Kõige sagedamini läbivad sellised muutused neutrofiilsed granulotsüüdid., mõnikord on need pahaloomuliste kasvajate rakud. Arahnoidse membraani rakud ja aju vatsakeste ependüümid on kergesti tsütoliseeritud.

Kudede basofiilid leitakse tserebrospinaalvedelikust pärast neurokirurgilisi sekkumisi.

Arahnoidsed rakud tserebrospinaalvedelikus

Arahnoidsed rakud (arahnoendoteel) - need on ühekihilise epiteeli rakud, neid saab eristada nagu tsütoosi loendamisel kambris, ja värvitud, valmistatud tserebrospinaalvedeliku settest. Need on üsna suured ebakorrapärase kujuga või suhteliselt väikese ümmarguse või ovaalse tuumaga ümarad rakud., asub keskuses.

Rakutuumad värvitakse hüpokroomiliselt, ja tsütoplasma on kahvatu- või hallikas sinine värv, sellel on siiski ebakorrapärased kontuurid ja see sisaldab sageli fagotsütoositud osakeste lisandeid (rasvatilgad, raku elementi, vakuole). Sageli hävitatakse arahnoidsete ajukelme rakkude tsütoplasma, sellistel juhtudel leitakse iseloomulikud tsütoplasma tuumad ja sissekanded. Tuumade kromatiin on peene aasaga või teralise struktuuriga, mõnikord on nähtav üks sinine tuum. Tuumade suurus alates 5 kuni 19 m.

Üksikute arahnoidsete rakkude olemasolu tserebrospinaalvedelikus ei näita veel patoloogiat, kuna need rakud asuvad subarahnoidaalses ruumis ja, maha, siseneda tserebrospinaalvedelikku. Arahnoidiidi korral täheldatakse arahnoidsete rakkude arvu suurenemist, aju tsüstitserkoos. Arahnoidse tsüsti sisus leiduvad eraldi paiknevad arahnoidse membraani rakud ja nende sümplastid erineva suuruse ja värvi intensiivsusega tuumarühmade kujul., ümbritsetud kahvatu tsütoplasmaga, ilma et rakkude vahel oleks selgeid piire.

Koroidpõimiku rakud

Vatsakeste koroidpõimikust tserebrospinaalvedelikku, hulknurkne, kumer, mõnikord silindrikujuline (15-19 mikronit) rakk. Väike (4-5 mikronit) keskmes või ekstsentriliselt paiknevad tuumad, hüperkromatoosse, tsütoplasma eosinofiilne, intensiivselt värviline. Koroidpõimiku rakkude tsütoplasmas on granulaarsus, mõnikord tükkide ja kandetena, suurus 1-3 mikronit, ümmargune või ebaregulaarne, rohekas või sinakasvärv. Mõnes rakus võivad olla vakuoolid või hõivatud punased verelibled.

Koroidpõimiku rakke leidub kõige sagedamini aju vatsakeste vedelikus.

Ventrikulaarsed ependümaalsed rakud tserebrospinaalvedelikus

Ventrikulaarsed ependümaalsed rakud tserebrospinaalvedelikus, saadud nimme punktsiooniga, valmistamise ja värvimise ajal kergesti hävivad. Värvitud määrdunud kujul näevad nad välja nagu moodustised, koosneb õrna struktuuriga ovaalse kujuga tuumadest. Mõnes rakus ümbritseb säilinud tsütoplasma tuuma kitsa piiri kujul.

Aju vatsakestest pärinevas vedelikus leitakse kõige sagedamini säilinud struktuuriga ependüümarakke, morfoloogiliselt meenutavad arahhnoidseid rakke, kuid nende tuumad on kahvatumad ja õrnemad, homogeenne kromatiini jaotumine. Ependüümi ovaalsete rakkude poolused on sageli teravad, tsütoplasmas on hallikas varjund. Seal on eraldi lahtrid ja suured klastrid, milles üksikute rakkude piire ei pruugi määrata.