Παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία – Νόσος Marchiafava Michele

Παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία - Μάλλον μια σπάνια επίκτητη μορφή αιμολυτικής αναιμίας, που σχετίζονται με την αλλαγή στη δομή των ερυθρών αιμοσφαιρίων, ουδετερόφιλα κοκκιοκύτταρα και αιμοπετάλια. Τα έσοδα από τα συμπτώματα της ενδαγγειακής αιμόλυσης, στην οποία υπάρχει αιμοσφαιρινουρία, gemosiderinuriya, αύξηση του επιπέδου της αιμοσφαιρίνης στο πλάσμα δωρεάν. Η νόσος συχνά περιπλέκεται από θρόμβωση των περιφερικών φλεβών και των αιμοφόρων αγγείων των εσωτερικών οργάνων.

Αιτιολογία και παθογένεση των παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία

Η πρώτη περιγραφή της ασθένειας δόθηκε σε 1882 ζ. Με περισσότερες λεπτομέρειες, έχει περιγραφεί στο 1928 ζ.

Κοινή ονομασία της νόσου - παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία (PNG), αλλά είναι μικρό αντιστοιχεί στην ουσία της νόσου, δεδομένου ότι δεν υπάρχει καμία πραγματική παροξυσμών και δεν τηρείται πάντοτε αιμοσφαιρινουρία.

Ενδοαγγειακή αιμόλυση με gemosiderinuriey εκτός APG παρατηρείται σε πολλές μορφές αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία τόσο με θερμική, και με κρύο αντισώματα, ειδικά έντυπα με θερμική αιμολυσίνη, καθώς και σε ορισμένες μορφές κληρονομικής αιμολυτική αναιμία, που σχετίζονται με την διάσπαση της δομής του ερυθροκυττάρων μεμβρανών.

Νόσος Marchiafava Michele παρατηρούνται σε διαφορετικές ηλικίες. Ο λόγος για την αυξημένη καταστροφή των ερυθρών κυττάρων του αίματος είναι ίδιοι ελαττωματικό ερυθρά αιμοσφαίρια.

Ερυθρά αιμοσφαίρια των ασθενών με APG, όπως υποδεικνύεται παραπάνω, Είναι εύκολα καταστρέφεται από το συμπλήρωμα για τη δημιουργία βέλτιστων συνθηκών για τις πράξεις του, ή με οξίνιση του ορού, είτε με αύξηση της συγκέντρωσης του ερυθροκυττάρου συμπληρώνουν γύρω δημιουργώντας μια χαμηλή συγκέντρωση ιόντων στο μέσο σακχαρόζη. Ερυθρά αιμοσφαίρια των ασθενών με σχετίζεται αέριο έχουν αυξημένη ευαισθησία στις επιδράσεις των αντισωμάτων ως συγκολλητίνη, και, ειδικά, αιμολυσίνες.

Όταν APG δεν επηρεάζει μόνο τα ερυθρά αιμοσφαίρια, αλλά και τα λευκοκύτταρα και αιμοπετάλια. Τα αιμοπετάλια και λευκοκύτταρα των ασθενών με APG έχουν αυξημένη ευαισθησία στις επιδράσεις του συμπληρώματος όπως στο τυρόγαλο οξίνισης, και σε ένα μέσο με χαμηλή ιοντική ισχύ σακχαρόζη. Είναι πολλές φορές πιο ευαίσθητα στη δράση της idioagglutinin, από αιμοπετάλια και λευκοκύτταρα του δότη. Έτσι, αιμοπετάλια και λευκά αιμοσφαίρια έχουν την ίδια μεμβράνη ελάττωμα, ως ερυθροκύτταρα.

Ανακαλύψτε ανοσοσφαιρίνες στην επιφάνεια των ερυθρών αιμοσφαιρίων, λευκοκύτταρα και αιμοπετάλια, και ως εκ τούτου να αποδείξετε την κυριότητα του APG στην ομάδα δεν μπορεί να είναι αυτο-επιθετική ασθένειες πιο ευαίσθητες μεθόδους.

Υπάρχουν ισχυρές ενδείξεις που σχετίζονται αερίου σε δύο διακριτές πληθυσμοί των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Οι πιο ανθεκτικά κύτταρα σε ένα υγιές άτομο - δικτυοερυθροκύτταρα είναι τα πιο εύθραυστα της APG. Αυτό δείχνει ότι, ανώμαλη πληθυσμός των ερυθρών αιμοσφαιρίων που απλά δεν επιβιώνουν μέχρι τη λήξη, ενώ μεγάλα ώριμα ερυθρά αιμοσφαίρια είναι υγιείς ή σχεδόν υγιή πληθυσμό.

ΣΕ 1970 Η μελέτη των μιγάδων ερυθροκυττάρων, stradaûŝej PNG, βρέθηκαν, περιέχουν, όπως σε υγιή μιγάς, δύο κανονικά ηλεκτροφορητική παραλλαγές του G-6-PD; Επιλογή Α, διαδεδομένη μεταξύ του πληθυσμού της Αφρικής, και η επιλογή Β, προσιδιάζει στον πληθυσμό της Ευρώπης. Μετά την αιμόλυση εμφανίστηκε, παθολογική ερυθροκύτταρα περιέχουν μόνο μία πραγματοποίηση της G-6-PD, και φυσιολογικά ερυθρά αιμοσφαίρια - δυο ηλεκτροφορητική παραλλαγές G-6-PD. Ως εκ τούτου,, Τα αιμολυμένο ερυθρά αιμοσφαίρια κατέβηκε από ένα μόνο κύτταρο.

Αυτό το γεγονός με υψηλή εμπιστοσύνη δείχνει την παρουσία δύο πληθυσμών των ερυθρών αιμοσφαιρίων, διαφέρουν όχι μόνο λειτουργική, ως, π.χ., όταν microspherocytosis, αλλά η προέλευσή: με άλλα λόγια, επιβεβαιώνει την παρουσία της ανώμαλης κυτταρικό κλώνο, t. Αυτό είναι. σωματική μετάλλαξη. Η ταυτότητα των βλαβών της μεμβράνης των ερυθροκυττάρων, ουδετερόφιλα και αιμοπετάλια προτείνει, ότι παθολογικές πληροφορίες που ενδέχεται να έλαβαν κυττάρων, μετά την στέλεχος, t. Αυτό είναι. μυελοποίηση πρόδρομο κύτταρο. Νεοπλασματική ανάπτυξη δεν είναι τυπική για PNG. Θα περιγράψουμε μερικές μόνο περιπτώσεις λευχαιμίας στο φόντο της ταχείας APG. Παρ 'όλα αυτά, Μπορούμε να υποθέσουμε, ότι APG - μια παραλλαγή ενός καλοήθους όγκου του συστήματος του αίματος, μεγάλο χρονικό διάστημα δεν δίνει τον πολλαπλασιασμό των όγκων, χαρακτηριστική για άλλες μορφές λευχαιμίας.

Ο μηχανισμός της komplementchuvstvitelnosti στο APG είναι ασαφής.

Ουσιαστικές αλλαγές στην δραστικότητα των ενζύμων της γλυκόλυσης και του κύκλου φωσφορικής πεντόζης-απουσιάζουν.

Όταν APG μειώνει τη δραστηριότητα του ερυθροκυττάρων ακετυλοχολινεστεράσης, πιθανότατα λόγω της διακοπής της δομής της μεμβράνης των ερυθρών αιμοσφαιρίων, δεδομένου ότι το ένζυμο είναι στην επιφάνεια της μεμβράνης και εύκολα να σπάσει κατά τη διάρκεια της ήττα. Γνωστός, ότι οι αναστολείς της ακετυλοχολινεστεράσης δεν είχε καμία επίδραση στην επιβίωση των ερυθροκυττάρων. Ωστόσο, η μείωση της δραστηριότητας ακετυλοχολινεστεράσης παρατηρήθηκε με άλλες μορφές αιμολυτική αναιμία, Ως εκ τούτου, δεν μπορεί να εξηγήσει το φαινόμενο της αυξημένης komplementchuvstvi- σεις το.

Υπάρχουν ενδείξεις, παρουσιάζοντας αύξηση στην ποσότητα των ακόρεστων λιπαρών οξέων, μέλη των φωσφολιπιδίων, μεμβράνη των ερυθροκυττάρων. Είναι δυνατόν, ότι οι αλλαγές στα λιπίδια - αυτό είναι μόνο η αντανάκλαση της τυχόν άλλες αλλαγές στη δομή της μεμβράνης των ερυθροκυττάρων. Στο APG πρωτεΐνη ασθενείς της μελέτης της μεμβράνης των ερυθροκυττάρων με ηλεκτροφόρηση πηκτής πολυακρυλαμιδίου σε δωδεκυλ θειικό νάτριο-σετ, ότι ένας αριθμός των κλασμάτων της περιεκτικότητας σε πρωτεΐνη ήταν σημαντικά διαφορετική από τον έλεγχο.

Το κύριο ρόλο στην παθογένεση των θρομβωτικών επιπλοκών της ενδοαγγειακής APG αποδίδεται αποσύνθεση των ερυθρών αιμοσφαιρίων και παράγοντες πήξης διέγερση, απελευθερώνεται από τα ερυθρά κύτταρα του αίματος κατά τη διάρκεια της αποσύνθεσης τους. Όταν APG καταστράφηκαν κυρίως δικτυοκύτταρα, μπορεί, και είναι απαραίτητο για να εξηγήσει την συχνότητα των θρομβωτικών επιπλοκών της νόσου αυτής, σε αντίθεση με άλλες μορφές αιμολυτική αναιμία, συνοδευόμενη από σοβαρή ενδοαγγειακή αιμόλυση.

Οι κλινικές εκδηλώσεις της παροξυσμικής νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία

Η νόσος συχνά αρχίζει σταδιακά. Οι ασθενείς παραπονούνται για αδυναμία, αδιαθεσία, ζάλη. Μερικές φορές υπάρχει subikterichnost σκληρό χιτώνα. Συχνά, οι πρώτες καταγγελίες είναι πονοκέφαλος, κοιλιακό άλγος διαφορετικού εντοπισμού. Η τάση για αυξημένη θρόμβωση προκαλεί στον ασθενή για να δείτε ένα γιατρό. Αιμοσφαιρινουρία είναι αρκετά σπάνιο είναι το πρώτο σύμπτωμα της νόσου, και μερικοί ασθενείς μπορεί να απουσιάζει στο APG. Σε ορισμένες περιπτώσεις, φαίνεται τα πρώτα 2-3 χρόνια, και ακόμα και μετά 10 έτη μετά την έναρξη.

Ένα από τα χαρακτηριστικά γνωρίσματα της APG - εξάρσεις του κοιλιακού πόνου. Εντοπισμός μπορεί να είναι πολύ διαφορετική. Έξω από την περίοδο της κρίσης πόνο στην κοιλιακή χώρα, συνήθως, Δεν παρατηρήθηκαν. Συχνά ενώνει εμετό. Πιθανότατα, κοιλιακό άλγος σε ασθενείς με APG που σχετίζεται με αγγειακή θρόμβωση μεσεντερίων.

Η περιφερική αγγειακή θρόμβωση (πιο συχνά - φλεβών άνω και κάτω άκρων, Σπάνια - νεφρικών αγγείων) ως ένα χαρακτηριστικό σύμπτωμα της παροξυσμικής νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία. Σε 12 % APG ασθενείς παρατηρήθηκε θρομβοφλεβίτιδα. Οι θρομβωτικές επιπλοκές είναι η πιο συχνή αιτία θανάτου σε αυτή τη νόσο.

Μια αντικειμενική μελέτη του ασθενούς συχνά προσελκύει την προσοχή ωχρότητα ελαφρώς ίκτερο. Συχνά υπάρχει πρήξιμο του προσώπου, μερικές φορές η υπερβολική πληρότητα. Μια μικρή αύξηση στη σπλήνα και το συκώτι, αν και δεν είναι χαρακτηριστικό για PNG.

Για παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία χαρακτηριστικά σημάδια της ενδαγγειακής αιμόλυσης, η σημαντικότερη εκ των οποίων - η αύξηση της αιμοσφαιρίνης του πλάσματος δωρεάν. Αυτό το χαρακτηριστικό παρατηρούνται περιοδικά σε σχεδόν όλοι οι ασθενείς APG. Ωστόσο, η ποσότητα της αύξησης σε ελεύθερη αιμοσφαιρίνη του πλάσματος ποικίλλει και εξαρτάται από το, σε οποιαδήποτε περίοδο της ασθένειας που συμμετείχαν στην έρευνα. Κατά την περίοδο της κρίσης, το ποσοστό αυτό αυξάνει σημαντικά, Υπήρξε επίσης μια αύξηση του αριθμού των metalbumina πλάσμα.

Το επίπεδο της ελεύθερης αιμοσφαιρίνης στο πλάσμα εξαρτάται από το βαθμό της αιμόλυσης στην πραγματικότητα, το περιεχόμενο της απτοσφαιρίνης, βαθμός διήθησης της αιμοσφαιρίνης στα ούρα και την ταχύτητα της καταστροφής συμπλόκου της αιμοσφαιρίνης - απτοσφαιρίνης. Στην περίπτωση ενός μικρού βαθμού αιμόλυσης του επιπέδου της ελεύθερης αιμοσφαιρίνης στο πλάσμα θα ήταν ανεπαρκής για τη διήθηση του μέσω του φίλτρου νεφρό. Έτσι αιμοσφαιρινουρία δεν είναι υποχρεωτική σύμπτωμα. Όταν διέρχεται από τα σωληνάρια νεφρώνες διατεθεί αιμοσφαιρίνης καταστράφηκε μερικώς και έχουν κατατεθεί σε σωληνοειδή επιθήλιο. Είναι η αιτία της ουρικής έκκρισης του αιμοσιδιρίνη.

Αιμοσιδιρίνη απεκκρίνεται στα ούρα, στη συντριπτική πλειοψηφία των ασθενών με παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία. Μερικές φορές δεν εμφανίζεται αμέσως gemosiderinuriya. Αυτό είναι ένα σημαντικό, αλλά όχι συγκεκριμένα για τα σημάδια της νόσου APG.

Εργαστηριακά ευρήματα στην παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία

Η περιεκτικότητα της αιμοσφαιρίνης σε ασθενείς APG κυμαίνεται από 1,86- 3,1 mmol / l (30-50 G / l) και ακόμη χαμηλότερα σε φυσιολογικά σε ύφεση.

Ο αριθμός των ερυθρών αιμοσφαιρίων σε ασθενείς με APG μειώνεται ανάλογα με το επίπεδο της αιμοσφαιρίνης μείωσης. Χρώμα δείκτη μεγάλο χρονικό διάστημα παραμένει κοντά στη μονάδα. Που, εάν ο ασθενής χάνει ένα σημαντικό ποσό του σιδήρου στα ούρα ως αιμοσιδιρίνη και αιμοσφαιρίνη, το επίπεδο του σιδήρου μειώνεται σταδιακά. Χαμηλός δείκτης χρώματος παρατηρείται σε περίπου το ήμισυ των ασθενών. Μερικά από αυτά έχουν αυξημένα επίπεδα αιμοσφαιρίνης P, ιδιαίτερα κατά την περίοδο έξαρσης.

Ένα σημαντικό ποσοστό των ασθενών δικτυοερυθροκυττάρων αυξήθηκε, αλλά συγκριτικά χαμηλό (2- 4 %). Ο αριθμός των λευκοκυττάρων στο APG, στις περισσότερες περιπτώσεις μειώνεται. Σε πολλούς ασθενείς, είναι 1.5-3 F σε 1 l, αλλά μερικές φορές μειώνεται σε 0,7-0,8 F σε 1 l. Λευκοπενία, συνήθως, εκεί με τη μείωση του αριθμού των ουδετερόφιλων κοκκιοκυττάρων. Μερικές φορές λευκοκυττάρων μετράνε σε APG κανονική ή υψηλή - έως και 10-11 T 1 l.

Όταν APG μειωμένη δράση φαγοκυτταρώσεως των ουδετερόφιλων.

Θρομβοπενία Επίσης, συχνά παρατηρείται σε APG, Ωστόσο, η λειτουργική κατάσταση των αιμοπεταλίων με την κανονική. Πιθανώς, Αυτό εξηγεί την σπανιότητα του αιμορραγικές επιπλοκές σε αυτή τη νόσο, αν και ο αριθμός των αιμοπεταλίων είναι μερικές φορές μειώνεται σε μεγάλο βαθμό - 10-20 G 1 l. Συνήθως οι περισσότεροι ασθενείς σε αιμοπετάλια Τ 50-100 1 l. Κανονική αριθμός των αιμοπεταλίων δεν αποκλείει τη διάγνωση της παροξυσμικής νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία.

Εξέταση του μυελού των οστών ασυμπτωματική, γενικά χαρακτηριστικά του αιμολυτική αναιμία - μια βαρετή κόκκινο μικρόβιο αιμοποίηση σε φυσιολογική ποσότητα μυελοκαριοκύτταρα. Ένας αριθμός των ασθενών που υπάρχει μια μικρή μείωση στον αριθμό των μεγακαρυοκυττάρων.

Το επίπεδο του σιδήρου του ορού σε APG Εξαρτάται από το στάδιο της νόσου, ενδαγγειακή αιμόλυση και βαθμού δραστικότητας της αιμοποίησης. Που, Αν οι ασθενείς έχουν επίμονα ή συχνές αιμοσφαιρινουρία, καθώς και τη συνεχή gemosiderinuriya, η περιεκτικότητα του σιδήρου στο σώμα, και ως εκ τούτου, και μειώσεις στον ορό, μερικές φορές είναι πολύ σημαντικά. Μερικές φορές APG αρχίζει με τα σημάδια της υποπλασία. Τα αποθέματα σιδήρου στο σώμα του ασθενούς εξαρτάται από το APG, μια πλευρά, της απώλειας σιδήρου στα ούρα, και από την άλλη η ένταση της ερυθροποίησης. Ως εκ τούτου, η ανεπάρκεια σιδήρου δεν μπορεί να θεωρηθεί διαγνωστική της παροξυσμικής νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία.

Το επίπεδο της χολερυθρίνης στον ορό σε APG στις περισσότερες περιπτώσεις, φυσιολογικά ή αυξημένα nerezko, οφείλεται κυρίως στην έμμεση. Κατά μέσο όρο, η χολερυθρίνη είναι 22-28 mmol / l. Θα πρέπει να ληφθεί υπόψη, ότι η φθορά της ενδαγγειακής αιμοσφαιρίνης σχηματίζεται σύμπλοκο αιμοσφαιρίνης-gaptoglobinovy, και οι οποίες επίσης αποσυντίθεται τελικά με το σχηματισμό της χολερυθρίνης.

Σε μερικούς ασθενείς η νόσος αρχίζει με την εικόνα PNG απλαστική αναιμία.

Διάγνωση της παροξυσμικής νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία

Όταν παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία διαταράσσεται η δομή των μεμβρανών των ερυθροκυττάρων, η οποία εκδηλώνεται με αυξημένη ευαισθησία στις επιδράσεις του συμπληρώματος του. Αυτή η αυξημένη ευαισθησία ανιχνεύεται χρησιμοποιώντας έναν ανιχνευτή Hema, σακχαρόζη ή περισσότερες ευαίσθητες δοκιμές. Ωστόσο, σε ορισμένες περιπτώσεις,, ιδιαίτερα υπό τη μορφή του αιμολυσίνης αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία, δείγμα της σακχαρόζης μπορεί να δώσει ψευδώς θετικό αποτέλεσμα. Αιμολυσίνη στερεώνονται στην επιφάνεια της δικής τους ερυθρών αιμοσφαιρίων και με την παρουσία του συμπληρώματος στο μέσο σακχαρόζη τους καταστρέψουν, ενώ τυπικά APG καταστροφή συμπληρώματος των κυττάρων χωρίς έκθεση σε αντίσωμα.

Για την εξάλειψη αιμολυσίνης καλούπι αυτοάνοση αιμολυτική μελέτη αιμολυσίνες αναιμία που συνιστάται από την παραπάνω μέθοδο και χρησιμοποιώντας διασταυρούμενη σακχαρόζης με δείγματα ορού του ασθενούς και των ερυθρών αιμοσφαιρίων του δότη odnogruppnoy, και όχι το αντίστροφο, όπως συνηθίζεται. Όταν το APG άμεση δοκιμασία είναι θετική, και cross - αρνητικών. Όταν μορφή αιμολυσίνη ΑΙΗΑ μπορεί να θεωρηθεί ως ένα θετικό, και ένα αρνητικό δείγμα εγκάρσια. Σε αυτές τις περιπτώσεις είναι σκόπιμο να χρησιμοποιηθεί μια τρίτη πραγματοποίηση των δοκιμών σακχαρόζης - με τη χρήση τόσο του ορού, και των ερυθρών αιμοσφαιρίων του ασθενούς. Ο βαθμός αιμόλυσης σε αυτήν την υλοποίηση, το ελάχιστο και το μέγιστο στο APG με τη μορφή AIHA αιμολυσίνης. Για να εξηγήσουμε ένα τέτοιο αποτέλεσμα μπορεί να είναι μόνο πολύ συγκεκριμένα αντισώματα στον ορό του ασθενούς μορφής αιμολυτική αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία για το αντιγόνο, αφθονούν στα ερυθροκύτταρα του ασθενούς, από δότη ερυθρά αιμοσφαίρια. Άμεση δείγμα σακχαρόζη είναι θετική σε αυτούς τους ασθενείς συσχετίζεται, πιθανώς, με την παρουσία αντισωμάτων καθορίζεται με ερυθροκύτταρα.

Προσδιορίστε αιμολυσίνες από agregatgemagglyutinatsii και άλλοι βοηθήσει να γίνει η σωστή διάγνωση. Δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως δότης ορού ασθενούς, όπως στην περίπτωση των περιεχομένων σ 'αυτό αιμολυσίνης αποτέλεσμα μπορεί να είναι ψευδώς θετικά. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα μπορεί να συμβεί, εάν χρησιμοποιούνται ως πηγή ορού συμπλήρωμα του APG ασθενούς ή στον ορό των ασθενών με κίρρωση του ήπατος, revmatoidnыm poliartritom, συστηματικό ερυθηματώδη λύκο και άλλες ασθένειες, στην οποία το μειωμένο επίπεδο του συμπληρώματος. Σακχαρόζη δείγμα και το δείγμα Χέμα γίνει λιγότερο έντονη, Εάν η σύλληψη του αίματος του ασθενούς χρησιμοποιείται ως αντιπηκτικό, ηπαρίνη, αντί του κιτρικού νατρίου. Μετά αιμολυτική κρίση η ένταση του δείγματος Hema και σακχαρόζη μειωμένο δείγμα, αλλά δεν καταστεί αρνητική.

Προσδιορισμός του πλάσματος ελεύθερης αιμοσφαιρίνης από το Bing στην τροποποίηση και Derviz Byalko όταν παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία

Η μέθοδος βασίζεται στην ικανότητα της αιμοσφαιρίνης να αντιδράσει με βενζιδίνη σε όξινο μέσο με την παρουσία του υπεροξειδίου του υδρογόνου για να σχηματίσει ένα πράσινο χρώμα, περνώντας πρώτα μέσα στο μπλε, τότε κοκκινωπό-μωβ. Η ένταση του χρώματος είναι ανάλογη προς την ποσότητα της αιμοσφαιρίνης.

Αντιδραστήρια.

1. Οξικού ρυθμιστικού 0,1 Μ, pH 4,6: 27,22 g οξικού νατρίου διαλύονται σε 1 L νερού (0,2 Μ διάλυμα); σε άλλη φιάλη παρασκευάζεται 1 l 0,2 Μ διάλυμα οξικού οξέος; μικτός 480 Αριθμός ml 1 και 520 Αριθμός ml 2.
2. Το υπεροξείδιο του υδρογόνου 0,3 % λύση (παρασκευάζεται πριν από τη χρήση με αραίωση σε perhydrol 100 ώρα).
3. Υδροχλωρική Βενζιδίνη 0,1 % λύση: 50 mg υδροχλωρικού βενζιδίνη διαλύονται σε 35 έως 40 ml ρυθμιστικού διαλύματος οξικού, το διάλυμα θερμαίνεται σε 80 Υδατόλουτρο ° C και μετά από ψύξη ρυθμίζεται σε ρυθμιστικό οξικού 50 ml.

Διηθείται το σκοτεινό φιάλη και αποθηκεύεται σε θερμοκρασία δωματίου όχι περισσότερο από 7 ημέρα. Pozheltevshiy αντιδραστήριο ακατάλληλοι, με την ταχεία συσκότιση πρέπει να ανακρυσταλλώνεται από βενζιδίνη αλκοόλ.

Μέθοδος.

Ελήφθησαν δείγματα αίματος από μία φλέβα στο στεγνό βελόνα με σιλικόνη σωλήνα, περιέχει οποιοδήποτε αντιπηκτικό. Αντιπηκτικό αίμα υποβλήθηκε σε φυγοκέντρηση σε πιο 10 λεπτών σε 1500 / Min. Μετά τον διαχωρισμό του πλάσματος πάλι σε φυγοκέντρηση 10 λεπτών σε 8000 rev / min για να σφαιροποιηθούν τα λευκά αιμοσφαίρια.

Το ρίχνουμε σωλήνα 4 ρυθμιστικού ml οξικού, 2 ml υπεροξειδίου του υδρογόνου, 2 ml και βενζιδίνη 0,04 ml ορού δοκιμής αναμίχθηκε και αφέθηκε να σταθεί 3 m, έπειτα χύνεται σε ένα μήκος διαδρομής κυψελίδα 1 cm και φωτομετρική κατά της λύσης αποζημίωσης σε ένα πράσινο φίλτρο. Η ένταση του μπλε χρώματος αυξάνεται κατά τη διάρκεια 4-5 λεπτά, έτσι ώστε η μέτρηση επαναλαμβάνεται 3-5 φορές στη σειρά και να καταγράφει τη μέγιστη ανάγνωση. Μετά από 5-6 λεπτά, ο χρωματισμός του ορού γίνεται μωβ-καφέ απόχρωση, και η οπτική πυκνότητα αρχίζει να μειώνεται. Από τις δύο εντοπίστηκαν τα καλύτερα αποτελέσματα διαρκεί κατά μέσο όρο οπτική πυκνότητα.

Αποζημίωση λύση, που αποτελείται από 6 ρυθμιστικού ml οξικού, 8 ml υπεροξειδίου του υδρογόνου, 3 ml βενζιδίνη και 0,06 ml ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου, παρασκευάζονται ταυτόχρονα με το δείγμα.

Η έξοδος καμπύλη βαθμονόμησης του διαλύματος αιμοσφαιρίνης. Στο αίμα, που λαμβάνονται για την παρασκευή ενός διαλύματος αιμοσφαιρίνης, μετρούμενο από το περιεχόμενό της (χρωματόμετρου στην ιατρική ή την ιατρική διαθλασίμετρο). Ένα διάλυμα αιμοσφαιρίνης με συγκέντρωση 1 g / l, Ένα διάλυμα με χαμηλότερη συγκέντρωση: 0,005,0,025, 0,05, 0,1 και 0,2 g / l. Από κάθε μία από το προκύπτον διάλυμα προστίθεται 0,04 ml από ένα μίγμα 4 ρυθμιστικού ml οξικού, 2 ml βενζιδίνη και 2 ml υπεροξειδίου του υδρογόνου.

Το βασικό διάλυμα αιμόλυσης (1 g / l) για την καμπύλη βαθμονόμησης πρέπει να αποθηκεύονται στο κρύο, και διαλύματα εργασίας του χαμηλότερης συγκέντρωσης θα πρέπει να παρασκευάζεται αμέσως πριν από τη δοκιμή.

Κανονικά, στην 1 l πλάσμα του αίματος περιέχει 0,0005 mmol / l (0,01-0,04 G) Αιμοσφαιρίνη.

Προσδιορισμός των αιμοσιδιρίνη ούρων με παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία

Στην αποσύνθεση αιμοσφαιρίνης σιδήρου απορροφά το επιθήλιο των νεφρικών σωληναρίων και είναι μέρος της αιμοσιδιρίνη. Απολέπιση των επιθηλιακών κυττάρων των νεφρικών σωληναρίων σε αυτές τις περιπτώσεις περιλαμβάνει έναν κόκκο αιμοσιδιρίνη.

Μια προσεκτική μελέτη των ούρων ιζήματος μετά από φυγοκέντρηση του αιμοσιδιρίνη σιτηρών δει χωρίς ειδικές χρώσεις. Ωστόσο, ξεχωρίζουν με μεγαλύτερη σαφήνεια στο χρώμα του Μέθοδος Perls.

Μέθοδος.

Μετά από φυγοκέντρηση των ούρων ανώτερο στρώμα του αναρροφήθηκε, στο υπόλειμμα προστέθηκε ένα πρόσφατα παρασκευασμένο διάλυμα από 1 % φερροκυανιδίου και 1 % Υδροχλωρικό οξύ (αναμίξτε ίσους όγκους 2 % υδροχλωρικό οξύ και σιδηροκυανιούχο). Μετά 10 λεπτά μετά ανάδευση, το μίγμα φυγοκεντρήθηκε και το ίζημα περιήγηση. Σιτηρά αιμοσιδιρίνη βάφονται μπλε.

Προσδιορισμός φασματοφωτομετρία methemalbumin πλάσμα

Αντιδραστήρια.

1. Φωσφορικό ρυθμιστικό ισοσμωτικό (pH 7,4): μικτός 18 ml 0.15 Μ διαλύματος δισόξινου φωσφορικού νατρίου (24,4 δ της ЫaN2R04 1 L νερού) και 82 ml 0,15 Μ διάλυμα όξινου φωσφορικού δινατρίου (21,3 г Ν &₂ΜΕΤΑ₄ επί 1 L νερού).
2. Υδροθειώδες νάτριο.
3. Υδροξείδιο του νατρίου 1 Μ.
4. Ένα διάλυμα αλβουμίνης ανθρώπινου ορού (40 g / l).
5. Το διάλυμα αιμίνης (5 mg / 100ml); Παρασκευάζεται αιμίνη αμέσως με διάλυση σε μικρή ποσότητα υδροξειδίου του νατρίου, και μετά: φέρνοντάς την σε όγκο με ένα διάλυμα αλβουμίνης ορού.

Μέθοδος.

Κ 2 ml ορού ή πλάσματος προστίθεται 1 ml διάλυμα zabuferernogo ισοοσμωτικό, pH 7,4. Το μίγμα φυγοκεντρήθηκε 30 σε 1200-1500 m / min. Προσδιορίζεται η οπτική πυκνότητα σε 569 nm. Στη συνέχεια, το αραιωμένο πλάσμα τοποθετήθηκε σε ένα φιαλίδιο και προστέθηκε σε περίπου 5 mg ξηρού όξινου θειικού νατρίου. Μέσα 5 min εκ νέου μέτρηση της απορροφητικότητας στο ίδιο μήκος κύματος. Η διαφορά μεταξύ των δύο τιμών της οπτικής πυκνότητος αντιστοιχεί στην πυκνότητα methemalbumin οπτικό. Methemalbumin συγκέντρωση προσδιορίζεται από την καμπύλη βαθμονόμησης.

Η καμπύλη βαθμονόμησης προκύπτει ως εξής. Διάλυμα αιμίνη με αλβουμίνη μεταφέρθηκε σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα σε ποσότητα 0,01 να 0,1 g / l (από 0,2 να 2 ml). Σε αυτές τις σωλήνες, όπου η ποσότητα του άλατος είναι μικρότερη 2 ml, προστίθενται σε 2 ml λευκωματίνη διάλυμα. Στη συνέχεια προστίθεται 1 ml φωσφορικού ρυθμιστικού διαλύματος ισοοσμωτικό. Το μίγμα υποβλήθηκε σε φυγοκέντρηση σε 1500 / Min, και στη συνέχεια η οπτική πυκνότητα μετράται. Η διαφορά μεταξύ των μετρήσεων χαράσσεται σύμφωνα με τον αριθμό των αιμίνη.

Κανονικά gemalbumin συνδεδεμένος στο πλάσμα. Εμφανίζεται στην περίπτωση ενδοαγγειακής αιμόλυσης, π.χ., όταν παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία αιμολυσινών μορφή ή αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία, και απουσία απτοσφαιρίνης, όταν αίμη συνδέεται με τη λευκωματίνη.

Χέμα Δείγμα όταν παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία

Δείγμα Hema βασίζονται σε ερυθροκύτταρα των ασθενών με μειωμένη αντίσταση APG μείωση του ρΗ του μέσου με την παρουσία φρέσκου ορού συμπληρώματος.

Αντιδραστήρια.

1. Ένα διάλυμα υδροχλωρικού οξέος 0,2 n.
2. Διάλυμα αμμωνίας 0,04 %.

Μέθοδος.

Από τη Βιέννη λάβει 5- 6 ml αίματος. Όπως χρησιμοποιείται αντιπηκτικό κιτρικό νάτριο ή οξαλικό. Ταυτόχρονα 15-20 ml αίματος ελήφθησαν από ένα δότη της ίδιας ομάδας. Διαχωρίστε το πλάσμα από τα ερυθρά αιμοσφαίρια στο αίμα του ασθενούς και του δότη.

Ορός δότη χύνεται 0,5 Έξι ml σωλήνες, δύο από αυτούς είχαν διατεθεί στην 20 λεπτά σε ένα λουτρό νερού σε 56 ° C dlya αδρανοποίηση sыvorotki συμπλήρωμα, Τέσσερις σωλήνες αφέθηκαν να ξεκουραστούν σε θερμοκρασία δωματίου. Ερυθρά αιμοσφαίρια του ασθενούς πλύθηκε δύο φορές με ένα ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου, τότε αναστέλλεται στο ίδιο διάλυμα σε αναλογία 1:1.

Ο σχεδιασμός της μελέτης παρουσιάζονται στον Πίνακα.

Τα περιεχόμενα του κάθε σωλήνα αναμίχθηκαν, που διατίθενται στην 1 ώρες σε φούρνο στους 37 ° C, και κατόπιν φυγοκεντρήθηκε.

Για το κενό του 0,05 m των ερυθρών αιμοσφαιρίων του αίματος του ασθενούς και του δότη προστίθεται χωριστά στην 0,55 ml ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου.

Μετά από φυγοκέντρηση, ο βαθμός αιμόλυσης μπορεί να εκτιμηθεί με το μάτι. Για την ποσοτικοποίηση του βαθμού αιμόλυσης σε κάθε σωλήνα 4,7 ml 0,04 % προστίθενται διάλυμα αμμωνίας 0,3 ml του επιφανειακού στρώματος, και κενά σωλήνα - 0,3 ml αρχικού ορού.

Για τον προσδιορισμό 100 % για αιμόλυση 4,7 ml διαλύματος αμμωνίας προστέθηκε 0,3 ml εναιωρήματος ερυθρών αιμοσφαιρίων (0,05 ml ερυθρών αιμοσφαιρίων στον ασθενή 0,55 ml ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου).

Η οπτική πυκνότητα του διαλύματος μετράται στα ιατρικά αναγνώσεις χρωματόμετρο και σε σύγκριση με την οπτική πυκνότητα του διαλύματος χωρίς ερυθροκύτταρα αμμωνίας:

% gemoliza =((IS₁-IS₂)/IS₃)*100;

όπου E₁ - Οπτική πυκνότητα ενός δείγματος δοκιμής; IS₂- Οπτική πυκνότητα του τυφλού; IS₃- Απορρόφηση 100 % gemolizata.

Κανονικά, όχι περισσότερο από αιμολυμένους 5 % ερυθροκυττάρων.

Χέμα δείγμα θεωρείται θετικό εάν, Αν Αιμολύθηκαν περισσότερα 6 % ερυθροκυττάρων.

Όταν παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία μορφή αιμολυσίνη και αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία αιμολυμένους μερικές φορές έως 50-80 % ερυθροκυττάρων. Για εκείνες τις ασθένειες που χαρακτηρίζονται από την παρουσία αιμόλυσης μόνο neinaktivirovannoy ορού (Αριθμός σωλήνων 2). Εάν η αδρανοποίηση του ορού δεν εμποδίζει αιμόλυση (Αριθμός σωλήνων 3), Μπορείτε να υποθέσετε την ύπαρξη άλλων μορφών αιμολυτικής αναιμίας, ή ένα λάθος στη ρύθμιση της έρευνας.

Για την καταστροφή των ερυθρών αιμοσφαιρίων των ασθενών με παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία στο ρΗ του μέσου 6,5 Απαιτεί την υποχρεωτική παρουσία του συμπληρώματος, που περιέχονται στο φρέσκο ​​ορό.

Σακχαρόζη δείγμα σε παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία

Σακχαρόζη δείγμα βασίζεται στην, ότι ερυθροκύτταρα των ασθενών με παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία και μορφή αιμολυσίνη αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία καταστρέφονται σε διαλύματα χαμηλής ιοντικής ισχύος παρουσία συμπληρώματος.

Αντιδραστήρια.

1. Σακχαρόζη: 9,42 Σακχαρόζη διαλύθηκε σε 0,005 Μ φωσφορικό ρυθμιστικό διάλυμα; pH 6,2 (91 ml 0,005 М Ν &₂ΜΕΤΑ₄ και 9 ml 0,005 M Na₂HPO₄).
2. Ένα αντιδραστήριο για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης της αιμοσφαιρίνης: 200 mg άλατος κόκκινο του αίματος διαλύεται σε 1 l αποσταγμένο νερό, προστέθηκε σ'αυτό 0,5 ml ακετόνης κυανοϋδρίνης.

Μέθοδος.

Αίμα λαμβάνεται από φλέβα του ασθενούς σε δύο δοκιμαστικούς σωλήνες - ξηρό (8-10 Κ.εκ.) και με ένα αντιπηκτικό (2- 3 ml). Η χρήση ως αντιπηκτικό κιτρικό νάτριο. Ερυθρά αιμοσφαίρια από αντιπηκτικά σωληνάρια πλύθηκαν δύο φορές με διάλυμα χλωριούχου νατρίου ισοτονικό. Μετά από πλύση και αναρρόφηση του υπερκείμενου σε 0,4 ml των ερυθρών αιμοσφαιρίων προστίθενται 0,25 ml ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου.

Ταυτόχρονα, λαμβάνεται αίμα από ένα δότη της ίδιας ομάδας αίματος σε δύο σωλήνες - με ένα αντιπηκτικό (2-3 Ml), αντιμετωπίζεται με τον ίδιο, το αίμα του ασθενούς, και ξηρό (8- 10 ml) για ορό. Μετά το διαχωρισμό του δότη ορού 0,5 ml τοποθετείται σε ένα λουτρό νερού σε θερμοκρασία 56 ° C 30 min DLYa συμπληρώνουν αδρανοποίηση. Ο ορός του δότη πρέπει να λαμβάνεται αίμα από την ημέρα της εμπειρίας και κατάστημα στο κρύο. Ο σχεδιασμός της μελέτης παρουσιάζεται στον πίνακα.

Οι σωλήνες τοποθετήθηκαν σε έναν επωαστήρα στους 30 λεπτών σε 37 ° C, και κατόπιν φυγοκεντρήθηκε για 10 λεπτά 2000 στροφές / λεπτό, και να αξιολογήσει το βαθμό αιμόλυσης.

Σε αυτό χύνεται μέσα σε φιαλίδια για 3,4 ml του αντιδραστηρίου για τον προσδιορισμό της συγκέντρωσης της αιμοσφαιρίνης και 0,6 ml για- στρώμα ιζήματος από κάθε σωλήνα. Μέσα 10 min μετρούμενη απορρόφηση του διαλύματος σε δοκιμαστικούς σωλήνες με 540 nm ιατρική διαθλασίμετρα (φασματοφωτόμετρο) ή ιατρική χρωματόμετρο (Photocolorimeters FЭK-M) όταν ένα πράσινο φίλτρο, Συγκρίνοντας τα δεδομένα που ελήφθησαν με την οπτική πυκνότητα του διαλύματος για τον προσδιορισμό της αιμοσφαιρίνης. Παίρνει το μέσο όρο των δύο αναγνώσεων του κάθε πειράματος. Ο υπολογισμός γίνεται με τον τύπο:

% αιμόλυση in vitro =((IS₁-IS₅)/(IS₈-IS₅))*100

όπου E₁ - Οπτική πυκνότητα του διαλύματος του αριθμού δοκιμαστικό σωλήνα 1; IS₅ - Οπτική πυκνότητα του διαλύματος του αριθμού δοκιμαστικό σωλήνα 5, αναγκαία προκειμένου να αποφευχθεί η χρώση του ορού; IS₈ - Οπτική πυκνότητα του διαλύματος του αριθμού δοκιμαστικό σωλήνα 8, όπου υπήρχε αιμόλυση 100%.

Για το δείγμα cross-σακχαρόζης (Αριθμός σωλήνων 2) 100%-Πρώτα μελετήθηκε in vitro αριθμό αιμόλυση 7.

Αξιολόγηση των αποτελεσμάτων.

Κανονικά, ο αριθμός των in vitro 1, που περιέχουν ερυθρά αιμοσφαίρια των ασθενών που μελετήθηκαν, Η αιμόλυση δεν υπερβαίνει τα 2-3 %.

Όταν παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία μορφή αιμολυσίνη και αυτοάνοση αιμολυτική αναιμία (AIGA) Αυτό in vitro αιμόλυση υπερβαίνει 6 % Οι δοκιμαστικοί σωλήνες - № 4, που περιέχει ερυθρά κύτταρα του αίματος του ασθενούς και ο δότης ορό απενεργοποιημένο, Αριθμός σωλήνων 5, που περιέχουν ερυθρά αιμοσφαίρια του δότη και του ορού, και αριθμός 6, που περιέχει ορό αντί του ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου - αιμόλυσης δεν πρέπει να υπερβαίνει 1 - 2 %.

Σταυρός δείγμα σακχαρόζη (Αριθμός σωλήνων 2) όταν το έντυπο αιμολυσίνη ΑΙΗΑ συνήθως θετικές (με την παρουσία του αιμολυσίνης στον ορό), αλλά μπορεί επίσης να είναι αρνητική. In vitro αριθμός 3 (ερυθρών αιμοσφαιρίων και ορό ασθενών) αιμόλυση παρατηρείται τόσο σε APG, και με τη μορφή της ΑΙΗΑ αιμολυσίνης. Όταν παροξυσμική νυκτερινή αιμοσφαιρινουρία μέγιστη αιμόλυση ανιχνεύεται στο συμβατικό δείγμα σακχαρόζη (Αριθμός σωλήνων 1), λιγότερο έντονη - σε ένα δείγμα των ιδίων ερυθρών αιμοσφαιρίων του ασθενούς (Αριθμός σωλήνων 3); Δεν αιμόλυση στο σταυρό δείγμα σακχαρόζη (Αριθμός σωλήνων 2).

Όταν μορφή αιμολυσίνη ΑΙΗΑ πιο έντονη αιμόλυση ανιχνεύεται σε ένα δείγμα με τη δική του ορού του αίματος και των ερυθρών αιμοσφαιρίων του ασθενούς (Αριθμός σωλήνων 3), μια κάπως λιγότερο έντονη - σε έναν αριθμό δοκιμαστικό σωλήνα 1. In vitro αριθμός 2 αιμόλυση παρατηρούνται συχνά, αλλά η απουσία του δεν αποκλείει την μορφή αιμολυσίνη ΑΙΗΑ.