Μέθοδοι για την ανίχνευση της Leishmania στο ξύσιμο των προσβεβλημένων ιστών από απομόνωση καθαρής καλλιέργειας

Όταν σπορά ξύνοντας το προσβεβλημένο ιστό του ασθενούς σε ένα συγκεκριμένο θρεπτικό μέσο Leishmania πολλαπλασιάζονται και μπορούν να ανιχνευθούν με το μικροσκόπιο.

Αντιδραστήριο

Среда W.W.W. για την καλλιέργεια της Leishmania (14 g άγαρ, 6 g χλωριούχου νατρίου, σχετικά με 150 ml του απινιδωμένου αίμα κουνελιού, λαμβάνεται απευθείας από την καρδιά πριν από την παρασκευή ενός μέσου, 900 ml αποσταγμένου νερού). Σε αποσταγμένο νερό προστέθηκε χλωριούχο νάτριο και άγαρ. Η φιάλη που περιέχει το μέσο θερμαίνεται μέχρι την πλήρη τήξη του άγαρ, και 20-30 λεπτά αποστειρώνονται σε αποστειρωτή ατμού σε 147,1 kPa (15 στο).

Ψύχεται σε 56 ° C άγαρ προστίθεται αποστειρωμένο απινωδογονωμένο αίμα κουνελιού, αναδεύεται με περιστροφή της φιάλης και τοποθετείται σε αποστειρωμένο σιφώνιο 4 ml σωλήνες. Φιάλη άγαρ αίματος κατά τη διάρκεια της διανομής είναι ένα λουτρό νερού σε θερμοκρασία 58 ° C. Οι σωλήνες με τις άκρες μέσο.

Μετά τη στερεοποίηση του άγαρ, που τοποθετούνται σε έναν επωαστήρα για μια μέρα στο 37 ° C για έλεγχο στειρότητας και λαμβάνει το υγρό συμπύκνωμα. Εάν παράγεται δεν είναι αρκετή, πριν από τη σπορά σε αποστειρωμένα φιαλίδια, μπορείτε να προσθέσετε για 1 Ένα ml από τα παρακάτω διαλύματα: 0,85 % χλωριούχο νάτριο, 1 % διάλυμα πεπτόνης, Διάλυμα Hanks, λακταλβουμίνη προϊόν υδρόλυσης ή άλλα θρεπτικά μέσα σε ισοτονικό συγκεντρώσεις.

Μέθοδοι ανίχνευσης Leishmania σε αποξεσμένα των προσβεβλημένων ιστών με απομόνωση καθαρής καλλιέργειας

Όταν επιλέγετε μια κουλτούρα ακολουθήστε προσεκτικά τους κανόνες της στειρότητας. Η περιοχή δοκιμής του δέρματος σκουπίζεται με μια μπατονέτα, υγραίνεται 70 % αλκοόλ.

Μετά την εξάτμιση της αλκοόλης, το αιχμηρό άκρο ενός στείρου οφθαλμικού νυστέρι τομή του φύματος μήκος 2-3 χιλιοστά. Από το κάτω μέρος της τομής με αποστειρωμένο σιφώνιο Pasteur μην απόξεση ιστού. Η προκύπτουσα σταγόνα ορώδες-αιματηρό υγρό μεταφέρθηκε σε ένα δοκιμαστικό σωλήνα με το περιβάλλον. Χειραγώγηση εκτελείται αρκετές φορές, σπορά υλικό κάθε φορά που ένα νέο σωλήνα. Ωτοασπίδες ενσωματωμένα σε παραφίνη ή να τους φέρουν ελαστικά καπάκια και τοποθετήθηκαν σε μια συσκευή επώασης στους 22-24 ° C.

Αξιολόγηση των αποτελεσμάτων

Οι καλλιέργειες εξετάζονται κάτω από ένα μικροσκόπιο σε καθημερινή βάση για την αναγνώριση του αιτιολογικού παράγοντα. Εξερευνήστε μητρική φάρμακα, παρασκευάστηκε με τη μέθοδο του θρυμματισμένου σταγόνες, ο φακός 40×40. Τα αποτελέσματα θεωρούνται αρνητικά σπορά, αν σε 40 ημέρα παθογόνο δεν βρέθηκε. Οι καλλιέργειες επιμήκη Leishmania (10-12 Μικρά με καλωδίωση).

Εφαρμογή της μεθόδου καλλιέργειας είναι πιο χρήσιμη όταν tuberculoid μορφή της λεϊσμανίασης, Διάγνωση ότι άλλες μέθοδοι μπορεί να είναι λιγότερο αποτελεσματική.