Μέθοδοι για την ανίχνευση της Leishmania στο επίχρισμα της διείσδυσης του δέρματος

Για την ανίχνευση της Leishmania, εξετάζεται ένα σταθερό και λεκιασμένο επίχρισμα του περιεχομένου του διηθήματος.

Αντιδραστήρια

• Μεθυλική αλκοόλη, ή απόλυτη αιθυλική αλκοόλη, ή ένα μείγμα από Nikiforov (μείγμα ίσων ποσοτήτων θειικού эфира и абсолютного этилового спирта).
• Фосфатный буфер pH 6,9-7,1, για την παρασκευή των οποίων αναμιγνύεται 40 ml KH₂RO₄ (9,078 g ξηράς ύλης ΚΗ₂RO₄ σε 1 λίτρο διαλύματος) και 60 ml Na₂PHO₄ (11,876 g ξηράς ύλης 1 λίτρο διαλύματος).
• Azureozin Romanovsky.

Методика обнаружения лейшманий в мазке из инфильтрата кожи

Материал для исследования берут из бугорка (на ранней стадии развития процесса) или из краевого инфильтрата язвы (на более поздней стадии), несколько отступив от ее края.

Протерев ватой со спиртом бугорок или выбранный участок инфильтрата, сдавливают его двумя пальцами для обескровливания и, не ослабляя давления пальцев, концом острого скальпеля (желательно глазного) делают поверхностный надрез кожи. При появлении крови ее следует удалить марлевым тампоном. Со дна и краев надреза делают этим же скальпелем соскоб пораженной ткани и быстро размазывают содержимое соскоба тонким слоем на предметном стекле.

Готовят несколько мазков. Мазки высушивают на воздухе, фиксируют и окрашивают по Романовскому.

Оценка результатов обнаружения лейшманий в мазке из инфильтрата кожи

В препарате должны быть хорошо различимы макрофаги, ενδοθηλιακών, плазматические и лимфоидные клетки, фибробласты и небольшая примесь клеток периферической крови.

Наличие в препарате эпителиоцитов, а также бесструктурных глыбок, окрашенных в равномерно-сиреневый цвет, μέσα, что соскоб был взят слишком поверхностно и его следует повторить. В мазке не должно быть слишком много крови, а также гноя и бактерий.

Лейшмании L. tropica обнаруживаются в макрофагах, а также вне клеток в виде округлых, овальных или удлиненных телец размером 3— 5 m. При окраске по Романовскому цитоплазма лейшманий приобретает светло-голубой или сиреневый цвет, ядро становится красно-фиолетовым.

Хорошо виден кинетопласт, окрашенный интенсивнее, από τον πυρήνα.

На начальных стадиях изъязвления лейшмании легко выявляются в бугорках и в краевом инфильтрате язвы. В гнойном отделяемом язвы могут быть найдены лишь деформированные и разрушающиеся лейшмании, которые трудно дифференцировать. На стадии заживления в пораженных тканях лейшмании выявляются редко.