Αναιμία, οφείλεται σε ανεπάρκεια της δραστηριότητας της αφυδρογονάσης της γλυκόζης-6-φωσφορικής

Ελλειμματικών δραστηριοτήτων της γλυκόζης-6-fosfatdegidrogenazы (G-6-FD) - Είναι η πιο κοινή γενετική διαταραχή των ερυθρών αιμοσφαιρίων του αίματος, με αποτέλεσμα αιμολυτική κρίση, που συνδέονται με τη λήψη ενός αριθμού φαρμάκων μέσα. Έξω από τα κρίσεις στην πλειονότητα των ασθενών που εμφάνισαν μια κατάσταση της συνολικής αποζημίωσης, αν το άτομο έχει μια μόνιμη θέση αιμολυτική αναιμία.

Η πρώτη περιγραφή δραστηριότητας έλλειμμα G-6-PD έγινε στο 1956 ζ. σε πρόσωπα, λαμβάνοντας προφυλακτικό φάρμακο κατά της ελονοσίας πριμακίνης. Ανεξάρτητα από αυτές τις μελέτες 1957 ζ. Ανακαλύφθηκε ανεπάρκεια της G-6-PD στα ερυθρά κύτταρα του αίματος του ασθενούς, οι οποίες παρατηρούνται περιοδικά αιμολυτική κρίση χωρίς τη λήψη τυχόν φάρμακα.

Επί του παρόντος, περιγράφεται περισσότερο 250 mutantnyh διαφορετική μορφή G-6-FD. Διαφέρουν μεταξύ τους στην ηλεκτροφορητική κινητικότητα του ενζύμου, ΕΓΩ που σχετίζονται με τα μέσα μαζικής ενημέρωσης - γλυκόζης-6-φωσφορικής και nikotinamidadenindinukleotidfosfatu (NADf) Μια συνέπεια της μειωμένης συνάφειας είναι ανεπαρκής δραστικότητα του ενζύμου σε ένα, όταν η συγκέντρωση των υποστρωμάτων περιορίζεται αυστηρά από το ρυθμό σχηματισμού τους στην προηγούμενη αντίδραση. Η έλλειψη δραστηριότητας δεν είναι, στις περισσότερες περιπτώσεις σημαίνει την απώλεια του ενζύμου ως τέτοια, ακόμη και αν μπορεί να υπάρχουν επίσης περιπτώσεις. Τις περισσότερες φορές, η απουσία ή μείωση της δραστικότητας του ενζύμου - το αποτέλεσμα της παρουσίας του ασθενούς του σε μια παθολογική μορφή των ανενεργών.

Δομικό γονίδιο και ελέγχου γονιδίου, obuslovlivaûŝie σύνθεση του G-6-FD, που βρίσκεται στο χρωμόσωμα Χ, Ωστόσο, η έλλειψη κληρονομικότητας του ενζύμου αυτού δραστηριότητας σε ερυθροκύτταρα πάντα ασχολούνται με Χ-χρωμόσωμα.

Υπάρχουν δύο κύριες μορφές των μεταλλαγμένων, στην οποία υποκαταστάσεις αμινοξέων δεν σχετίζονται με τα ενεργά κέντρα, και ως εκ τούτου και οι δύο εκτεταμένες μεταλλάξεις είναι φυσιολογικό. Διαφέρουν στην ηλεκτροφορητική κινητικότητα, Ωστόσο, η συγγένεια με το υπόστρωμα είναι εξίσου. Στη σύγχρονη ονοματολογία, μία από αυτές τις μορφές, κοινά στην Ευρώπη, BB ονομάζεται μορφή, και το άλλο, βρέθηκε στην Αφρική - Έντυπο A. Αυτή τη στιγμή δεν περιγράφονται και άλλες μεταλλαγμένες μορφές του, ο οποίος επίσης δεν διέφερε από το άλλο με κινηματική παραμέτρους, αλλά έχουν διαφορετικές ηλεκτροφορητική κινητικότητα.

Συμπλέκτη ένζυμο δάπεδο δίνει μια σημαντική υπεροχή των ανδρών μεταξύ των ατόμων με συμπτώματα της νόσου. Έχει παρατηρηθεί σε ομόζυγη αρσενικά, Αυτή η παθολογία που κληρονόμησε από τη μητέρα με το χρωμόσωμα Χ της, ομόζυγες γυναίκες (κληρονόμησε την ασθένεια από τους δύο γονείς) και μέρος των ετερόζυγων γυναικών, κληρονομεί την ασθένεια από έναν γονέα με την εκφρασμένη μεταλλαγμένο φαινότυπο.

Συχνά έλλειμμα δραστικότητα της G-6-PD συμβαίνει στην Ευρώπη, που βρίσκεται στις ακτές της Μεσογείου, Ελλάδα, Ιταλία, καθώς και σε ορισμένες χώρες της Λατινικής Αμερικής, Αφρική, κ.λπ..

Ίσως, ότι η εξαιρετικά υψηλή συσσώρευση ενός μη φυσιολογικού γονιδίου σε ένα πλήθος οικισμών συμβάλλει με το έθιμο της ομομίκτες γάμων, η οποία οδηγεί στη συσσώρευση ενός πληθυσμού ομόζυγων γυναικών, δίνοντας σοβαρή κλινικές εκδηλώσεις της νόσου συχνά, από ετερόζυγοι φορείς, και αυξάνει την πιθανότητα της γέννησης αρσενικών ομόζυγων, και επίσης χρησιμοποιείται ευρέως στο παρελθόν σε αυτά τα μέρη falciparum ελονοσίας.

Σύμφωνα με την τρέχουσα υπόθεση, πρόσωπο, imeûŝie έλλειμμα G-6-FD, ευκολότερο να ανέχεται τροπική ελονοσία και σπάνια πεθαίνουν από την ασθένεια. Υπέρ αυτής της υπόθεσης είναι το γεγονός της άνισης εξάπλωση του παρασίτου στις γυναίκες ετερόζυγο ερυθρών αιμοσφαιρίων. Διαπιστώθηκε, σε φυσιολογικά κύτταρα που περιέχουν πολύ μεγαλύτερη ποσότητα του παρασίτου, από ανεπάρκεια. Υπάρχουν δύο εξηγήσεις για αυτό το υποτιθέμενο γεγονός. Το πρώτο από αυτά: έλλειμμα ερυθροκυττάρων του G-6-PD δεν είναι σε θέση να αντέξει τις επιπτώσεις του παρασίτου και αμέσως χωρίζει στα φαγοκυτταρικά μακροφάγα, όπου σκότωσε Plasmodium. Μια άλλη άποψη προτείνει neobhodmost για την ανάπτυξη του παρασίτου ανηγμένης γλουταθειόνης, το ύψος της οποίας μειώνεται σε ερυθροκύτταρα ανεπάρκεια G-6-PD.

Αιτιολογία και παθογένεση

Το πρώτο στάδιο της έκθεσης στο φάρμακο - μετατροπή του στο σώμα, μετάβαση στην ενεργό μορφή, η οποία μπορεί να προκαλέσει αλλαγές στην δομή της μεμβράνης του ερυθροκυττάρου. Η δραστική μορφή του φαρμάκου αντιδρά με οξυαιμοσφαιρίνης. Αυτό παράγει μια ορισμένη ποσότητα του υπεροξειδίου του υδρογόνου.

Μειωμένη σύστημα υπεροξειδάσης της γλουταθειόνης χρησιμοποιώντας εξουδετερώνει κάποια υπεροξείδιο του τμήματος, ένα αναγωγικό αντίδραση οξειδωμένη γλουταθειόνη.

Σε υγιείς ανθρώπους, η οξεία αιμολυτική κρίση αναπτύσσεται με την εισαγωγή σημαντικών ποσοτήτων του φαρμάκου (toksicheskaya δόση). Μπορεί να συμβεί όταν η κρίση, όταν το σύστημα ανηγμένης γλουταθειόνης δεν είναι σε θέση να αντιμετωπίσει την περίσσεια του συμπλόκου που σχηματίζεται και οξειδωμένη γλουταθειόνη. Σε ανεπάρκεια γλυκόζης-6-φωσφορικής αφυδρογονάσης και NADP εξασθενημένη ανάκτηση, παρά την κανονική δραστηριότητα αναγωγάσης γλουταθειόνης, παραβίασε την ανάκτηση του, επειδή δεν υπάρχει κανονικό πηγή υδρογόνου. Μειωμένη γλουταθειόνης δεν μπορεί να αντισταθεί στην οξειδωτική δράση των συμβατικών θεραπευτικών δόσεων των φαρμάκων. Αυτό οδηγεί στην οξείδωση της αιμοσφαιρίνης, απώλεια της αίμης από το μόριο της αιμοσφαιρίνης, κατακρήμνιση των αλυσίδων σφαιρίνης. Σπληνικά κύτταρα από τα ερυθρά αιμοσφαίρια απελευθερώνει Heinz. Ταυτόχρονα χάσει μέρος της επιφανείας των ερυθρών αιμοσφαιρίων, η οποία οδηγεί στο θάνατο τους.

Στην παθογένεση της αιμολυτικής αναιμίας, που συνδέονται με την κατάποση faba φασολιών, eshte πολλά neyasnogo. Primahinovaya αναιμία (favizm) Αναπτύσσει μόνο μερικά άτομα ελλειμματική δραστηριότητα της G-6-PD. Πιθανώς, για την εκδήλωση της αναιμίας απαιτεί ένα συνδυασμό δύο ενζυματικών ελαττωμάτων. Ίσως, ότι είναι η έλλειψη εξουδετέρωσης κάποια επιμέρους τοξική ουσία, περιέχεται στα φασόλια faba, ή του σχηματισμού ενός μεταβολίτη, προκαλώντας διαταραχές στις ομάδες σουλφυδρυλίου των ερυθρών αιμοσφαιρίων. Σε υγιή άτομα που λαμβάνουν μικρά ποσά του αλόγου φασολιών προκαλεί σοβαρή αιμολυτική αναιμία, επειδή με την παρουσία της μειωμένης ερυθροκυττάρων γλουταθειόνης είναι σε θέση να εξουδετερώσει την τοξική επίδραση των μεταβολιτών. Κληρονομικότητα του ελλείμματος αυτού, προφανώς, autosomnoe κυριαρχία. Με το συνδυασμό των ασυνήθιστων μετασχηματισμού της τοξικής ουσίας στον οργανισμό, περιέχεται στα φασόλια faba, ελλειμματική δραστηριότητα της G-6-PD παρουσιάζουν κλινικά συμπτώματα favism.

Οι κλινικές εκδηλώσεις

ΠΟΥ εμπειρογνώμονες χωρίζονται παραλλαγές του G-6-PD σύμφωνα με τις κλινικές εκδηλώσεις σε ασθενείς με ομόζυγο και το επίπεδο δραστηριότητας στα ερυθροκύτταρα σε τέσσερις κατηγορίες,.

Πρώτης τάξης - Επιλογές, συνοδεύεται από χρόνια αιμολυτική αναιμία.

Η δεύτερη κατηγορία - Επιλογές με το επίπεδο της G-6-PD των ερυθρών αιμοσφαιρίων 0- 10 % από τον κανόνα, μεταφοράς, η οποία προκαλεί αιμολυτική αναιμία είναι η έλλειψη κρίσης, και κρίσεις, που συνδέονται με τη λήψη φαρμάκων ή πόσιμου horsebean.

Τρίτης κατηγορίας - Παραλλαγές με τα επίπεδα δραστηριότητας στα ερυθροκύτταρα 10-60 % από τον κανόνα, στον οποίο το φως μπορεί να παρατηρηθεί κλινικές εκδηλώσεις, που συνδέονται με την πρόσληψη των φαρμάκων.

Τέταρτη Βαθμός - Επιλογές για μια φυσιολογική ή σχεδόν φυσιολογικό επίπεδο δραστηριότητας, δεν συνοδεύεται από κλινική παθολογία.

Κατά τη γέννηση, το παιδί έχει αιμολυτική αναιμία, Σχετικά με το πρώτο, και η δεύτερη κατηγορία ανεπάρκεια του G-6-PD.

Το επίπεδο της δραστικότητας της G-6-PD σε ερυθρά αιμοσφαίρια δεν συσχετίζονται πάντα με τη σοβαρότητα των κλινικών εκδηλώσεων. Σε πολλές εφαρμογές, η πρώτη κατηγορία προσδιορίζεται 20-30 % επίπεδο της δραστικότητας του ενζύμου. Από την άλλη, σε μηδενικό επίπεδο της δραστηριότητας σε ορισμένους ασθενείς δεν παρουσιάζουν κλινικά συμπτώματα. Αυτό οφείλεται, Αρχικά, με τις ιδιότητες των ενζύμων lutantnyh, κατά δεύτερο λόγο, πιθανότατα, με ταχύτητα εξουδετέρωσης συσκευής φαρμάκων ασθενούς ηπατικού κυτοχρώματος.

Η πιο κοινή ανεπάρκεια της δραστικότητας του G-6-PD δεν παρέχει κλινικές εκδηλώσεις χωρίς ειδική πρόκληση αιμολυτική κρίση. Στις περισσότερες περιπτώσεις, αιμολυτική κρίση ξεκινά μετά τη λήψη σουλφοναμιδίων (norsulfazola, stryeptotsida, sulfadimetoksina, sulfatsil νατρίου, etazola, biseptola), ανθελονοσιακά (πριμακίνης, xinina, akrihina), νιτροφουράνιο φάρμακα (furazolidona, furadonina, furagina, 5-NOK, nevigramona), φάρμακα ισονικοτινικού οξέος (tuʙazida, ftivazida), PAS-νάτριο, Μια nitrogliцerina takƶe.

Από ανθελονοσιακά ανεπάρκεια της δραστικότητας της G-6-PD μπορεί να εκχωρηθεί delagil, της sulfa - ftalazol. Ένας αριθμός φαρμάκων, σε μεγάλες δόσεις προκαλεί αιμολυτική κρίση, σε μικρές δόσεις μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε έλλειμμα δραστικότητα της G-6-PD. Αυτά περιλαμβάνουν ακετυλοσαλικυλικό οξύ, amidopirin, fenatsitin, levomicetin, Στρεπτομυκίνη, αντιδιαβητικά φάρμακα σουλφωνίου.

Όλα τα φάρμακα, μπορεί να προκαλέσει αιμολυτική κρίση, μετουσίωση της αιμοσφαιρίνης που καταλύεται οξείδωση με μοριακό οξυγόνο.

Οι κλινικές εκδηλώσεις της νόσου μπορεί να συμβεί στη δεύτερη ή τρίτη ημέρα από την έναρξη της φαρμακευτικής αγωγής. Κατ 'αρχάς, υπάρχει μια μικρή κιτρινίλα σκληρό χιτώνα, σκούρα ούρα. Κατά τον τερματισμό του φαρμάκου κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου βαριά αιμολυτική κρίση δεν αναπτύσσει. Εάν η θεραπεία συνεχίζεται, 4-5-ης ημέρας του αιμολυτική κρίση μπορεί να προκύψει με την απελευθέρωση των ούρων μαύρο ή μερικές φορές καφέ, το οποίο συνδέεται με ενδοαγγειακή erythrocytolysis. Η αιμοσφαιρίνη μπορεί να μειωθεί κατά 2-3 %.

Σε σοβαρή νόσο, η θερμοκρασία του σώματος αυξάνεται, φαίνεται απότομη πονοκέφαλος, πόνος στα άκρα, έμετος, μερικές φορές - διάρροια. Υπάρχει δύσπνοια, μειωμένη πίεση αίματος. Συχνά αυξημένη σπλήνα, μερικές φορές - του ήπατος.

Σε σπάνιες περιπτώσεις, η νεφρική ανεπάρκεια αναπτύσσει, οφείλεται στην απότομη μείωση της νεφρικής διήθησης και απόφραξη των νεφρικών σωληναρίων από θρόμβους αίματος.

Εργαστηριακά ευρήματα

Σε μια ανάλυση αίματος έδειξε αναιμία με αυξημένη δικτυοκύτταρα. Έχει υπάρξει μια αύξηση στον αριθμό των λευκοκυττάρων με μια στροφή προς μυελοκύτταρα. Σε ορισμένους ασθενείς,, ειδικά στα παιδιά, λευκών αιμοσφαιρίων μπορεί μερικές φορές να ανέλθει σε σημαντικά ψηφία (100 Τ στην 1 l και περισσότερο). Ο αριθμός των αιμοπεταλίων αμετάβλητος. Όταν βάφονται με κρυσταλλικό ιώδες ερυθρών αιμοσφαιρίων κατά τη διάρκεια σοβαρή αιμολυτική κρίση αποκάλυψε ένα μεγάλο αριθμό φορέων Heinz.

Αποκάλυψε μια απότομη ερεθισμό του μυελού κόκκινο ανάπτυξη. Αυξήστε το περιεχόμενο των ελεύθερων Ορός αιμοσφαιρίνης, συχνά αυξημένα επίπεδα χολερυθρίνης, λόγω της έμμεσης. Με δείγμα βενζιδίνη αποκάλυψε την παρουσία αιμοσφαιρίνης στα ούρα χωρίς ερυθρά αιμοσφαίρια, μερικές φορές που βρέθηκαν αιμοσιδιρίνη.

Σε ορισμένες μορφές της ανεπάρκειας γλυκόζης-6-φωσφορικής αφυδρογονάσης αιμόλυση που παρατηρείται συγκράτηση, t. Αυτό είναι. αιμολυτική διαλείμματα κρίση, παρά, ότι ο ασθενής συνεχίζει να λαμβάνει το φάρμακο, ότι προκάλεσε αιμολυτική κρίση. Δυνατότητα αυτοπεριορισμό της αιμόλυσης που προκαλείται από αυξημένο αριθμό σε σχεδόν φυσιολογικό επίπεδο δραστηριότητας ενζύμου στο δικτυοερυθροκυττάρων. Στις περισσότερες μορφές της είναι σημαντικά μειωμένη.

Στα παιδιά, η σοβαρή αιμολυτική κρίσεις συμβαίνουν συχνότερα, από ό, τι στους ενήλικες. Σε έντονη ανεπάρκεια της δραστικότητας του G-6-PD μερικές φορές να συμβεί αμέσως μετά τη γέννηση. Αυτή η αιμολυτική νόσος του νεογνού, δεν συνδέονται με ανοσολογική σύγκρουση. Αυτό μπορεί να συμβεί το ίδιο σκληρά, ως αιμολυτική αναιμία, rezusnesovmestimostyu λόγω της μητέρας και του εμβρύου. Ίσως η παρουσία του kernicterus με σοβαρά νευρολογικά συμπτώματα.

Η παθογένεια αυτών των κρίσεων δεν έχει μελετηθεί. Δεν βρέθηκε, εάν αυτές οι κρίσεις συμβαίνουν αυθόρμητα λόγω της έλλειψης της φυσιολογικής δραστικότητας του ενζύμου υπεροξειδάση της γλουταθειόνης κατά τη γέννηση ή να προκαλέσει αυτούς είναι η χρήση ορισμένων αντισηπτικών στην επεξεργασία του ομφάλιου λώρου του παιδιού. Ίσως, ότι μερικές φορές οι κρίσεις που συνδέονται με τη λήψη ορισμένων φαρμάκων μητέρα.

Σε ορισμένες περιπτώσεις αιμολυτική κρίση ανεπάρκεια δραστικότητας του G-6-PD προκύψουν στο πλαίσιο των μολυσματικών ασθενειών: Γρίπη, salmonelleza, Ιογενούς Ηπατίτιδας. Οι κρίσεις μπορεί να προκληθεί ως οξέωση σε σακχαρώδη διαβήτη ή νεφρική ανεπάρκεια.

Ένα μικρό ποσοστό των ασθενών με ανεπάρκεια δραστικότητας του G-6-PD παρατηρήθηκε σταθερή αιμολυτική αναιμία, που συνδέονται με τη λήψη φαρμάκων. Σε αυτές τις περιπτώσεις, υπάρχει μια ελαφρά αύξηση στη σπλήνα, μέτρια normochromic αναιμία με υψηλή περιεκτικότητα σε δικτυοερυθροκύτταρα, erythrokaryocytes στο μυελό των οστών και η χολερυθρίνη. Επιδείνωση της νόσου είναι δυνατή είτε μετά τη λήψη των παραπάνω φαρμάκων, ή για το φόντο των λοιμώξεων.

Διαγνωστικά

Η βάση για τη διάγνωση της ασθένειας αυτής είναι ο προσδιορισμός της δραστικότητας του ενζύμου των ερυθροκυττάρων του G-6-PD στο proband και την οικογένειά του. Ποιοτικές μέθοδοι, χρησιμοποιούνται για το σκοπό αυτό, θα πρέπει να προτείνουμε δύο από τις πιο απλές μεθόδους.

Μέθοδος Bernstein Καθιστά δυνατή όχι μόνο να διαγνώσει την έλλειψη δραστηριότητας των G-6-PD σε όλα τα αρσενικά ημίζυγα, Γυναίκες ομόζυγο, αλλά μερικοί εκτιμηθεί ο βαθμός της ανεπάρκειας του ενζύμου αυτού σε ετερόζυγη γυναίκες. Η μέθοδος αυτή είναι δυνατό να εντοπίσουν μερικά 50 % ετερόζυγα θηλυκά. Το πλεονέκτημα αυτής της μεθόδου είναι η καταλληλότητά του για χρήση στη μαζική διαλογή του πληθυσμού σε συνθήκες πεδίου.

Η μέθοδος βασίζεται στην λεύκανση της χρωστικής 2,6-διχλωροφαινολινδοφαινόλη και όταν ανασυσταθεί. Με την παρουσία του G-6-PD οξείδωση της 6-φωσφορικής γλυκόζης και NADP ανασύσταση για να σχηματίσουν ΝΑϋΡ-Η. Η ουσία αυτή επαναφέρει φαιναζίνη, που με τη σειρά αποκαθιστά 2,6-διχλωροφαινολινδοφαινόλη. Φαιναζίνη δρα στην αντίδραση ως ένα πολύ ενεργό φορέα ηλεκτρονίων από NADPH στη βαφή. Χωρίς φαιναζίνη αντίδραση προχωρά μεθοθειϊκή για αρκετές ώρες, και με την παρουσία του φαιναζίνη αποχρωματισμός συμβαίνει σε 15- 30 m.

Αντιδραστήρια.

1. Το διάλυμα NADP: 23 mg NADP διαλύεται σε 10 ml νερού.
2. Ένα διάλυμα γλυκόζης-6-φωσφορικής (G-6-F): 152 mg του μετά νατρίου άλατος της γλυκόζης-6-φωσφορικής διαλύεται σε 10 ml νερού. Το άλας βαρίου της γλυκόζης-6-φωσφορικής πρέπει να μετατραπούν προηγουμένως σε άλας νατρίου. Για αυτό το ζυγισμένο 265 mg άλατος βαρίου γλυκόζης-6-φωσφορικής, διαλυμένο σε 5 ml νερού, προσθέστε 0,5 ml 0,01 Μ διάλυμα υδροχλωρικού οξέος και 1 mg ξηρού θειικού νατρίου. Το ίζημα φυγοκεντρήθηκε. Το υπερκείμενο εξουδετερώθηκε 0,01 Διάλυμα υδροξειδίου του νατρίου Μ και ρυθμίζεται με απεσταγμένο νερό για να 10 ml.
3. Φαιναζίνης λύση μεθοθειικό: 2 mg από φαιναζίνη διαλυμένο σε 100 ml Τρις-ρυθμιστικού διαλύματος 0,74 Μ; pH 8,0.
4. Το διάλυμα βαφής του 2,6-διχλωροφαινόλης (άλας νατρίου): 14,5 mg χρωστικής διαλύθηκε σε 100 ρυθμιστικού διαλύματος ml τρις-υδροχλωρικού οξέος (0,74 Μ; pH 8,0). Το ρυθμιστικό διάλυμα παρασκευάζεται από 1,48 Απλά συνεπάγεται Μ Tris-gidroksimetilaminometana (42,27 δ του 250 ml νερού) και 1,43 Μ διάλυμα υδροχλωρικού οξέος (2 αμπούλες fiksanala, περιέχει 0,1 ισοδύναμα, ρυθμίζεται με νερό για να 135 ml). Κ 230 ml Τρις gidroksimetilaminometala προστέθηκε 110 ml υδροχλωρικού οξέος, ρΗ ρυθμίζεται σε 8,0 και προστίθεται νερό για να 460 ml.

Πριν από την εφαρμογή, ένα μίγμα αντιδραστηρίων: 1 όχι. Λύση NADP (1), 1 όχι. διάλυμα G-6-P (2), 2 όχι. φαιναζίνης λύση μεθοθειική (3) και 16 όχι. Διάλυμα 2,6-dihlorfenolinodofenola (4).

Μέθοδος.

Ο σωλήνας, περιέχει 1 ml αποσταγμένου νερού, συμβάλλει 0,02 ml αίματος.

Μετά την έναρξη της αιμόλυσης προστέθηκε 0,5 ml αντιδραστήρια. Τα αποτελέσματα λαμβάνονται υπόψη μέσω 30 m. Η αντίδραση θεωρείται ως κανονική, με την πλήρη λεύκανση της χρωστικής. Που, όταν δεν υπάρχει αποχρωματισμός της χρωστικής (Είναι έντονα μπλε-πράσινο χρώμα μου), απόκριση αξιολογείται ως θετικό απότομα. Εάν η ένταση του χρώματος μειώνεται, αλλά το μπλε-πράσινο χρώμα είναι, η αντίδραση κρίνεται θετική πόλο. Που, όταν υπάρχει μια προφανής αποχρωματισμός, αλλά, σε σύγκριση με την ομάδα ελέγχου παρέμεινε πρασινωπό, Όσον αφορά αντίδραση ως συν-πλην.

Rezkopolozhitelnye θετική αντίδραση συμβαίνουν σε ημίζυγα άνδρες και γυναίκες ομόζυγη. Μερικές φορές ετερόζυγη γυναίκες δίνουν θετική αντίδραση, αλλά οι περισσότεροι συν-μείον. Εκτός, συν ή μείον η αντίδραση μερικές φορές παρατηρείται σε απολύτως υγιείς άνθρωποι με κάποια μείωση στην δραστικότητα του ενζύμου στο φόντο της ασθένειας ή φαρμακευτικής αγωγής. Συν-πλην αντιδράσεις θα πρέπει να ληφθούν υπόψη και να ελεγχθεί η δραστικότητα του ενζύμου ποσοτικής μεθόδου μόνο εάν υποψιάζεστε την παρουσία της αιμολυτικής αναιμίας στις γυναίκες, οφείλεται σε ανεπάρκεια της δραστηριότητας της αφυδρογονάσης της γλυκόζης-6-φωσφορικής. Δεν θα πρέπει να ληφθούν υπόψη, συν-πλην αντιδράσεων σε μάζα διαλογής.

Ψευδώς θετικών αντιδράσεων Μπορεί να εκφράζεται σε ασθενείς με αναιμία οφείλεται στο γεγονός, τι 0,02 ml αίματος, εισάγεται εντός του σωλήνα, Περιέχουν μια μικρή ποσότητα ερυθροκυττάρων και, Συνεπώς, μια μικρή ποσότητα του ενζύμου. Σε αυτήν την περίπτωση, ο σωλήνας που περιείχε απεσταγμένο νερό θα πρέπει να προστεθούν δύο ή τρεις πιπέτα (με 0,02 ml) αίμα, με το χρώμα του σωλήνα πριν από την προσθήκη της χρωστικής δεν διαφέρει από τον έλεγχο.

Η μέθοδος της φθορίζουσες κηλίδες Beutler и Μίτσελ Είναι βασισμένο σε συγκεκριμένες φθορισμού μειώνεται NADP σε υπεριώδες φως μεγάλου μήκους κύματος (440- 470 nm), αξιολογείται οπτικά σε καθορισμένους όρους.

Αντιδραστήρια.

1. Ρυθμιστικό Tris-HCl 0,5 Μ; pH 8,0: 60,55 διαλύονται σε Tris 800 ml αποσταγμένου νερού, προσθέστε 20 mL πυκνού HCl, το ρΗ ρυθμίστηκε σε 8,0 μέσω 2 Μ HCl και συμπληρώνεται με νερό για να 1 ml; λύση για την αποθήκευση 36 ημέρες στους 4 ° C.
2. Ένα διάλυμα γλυκόζης-6-φωσφορικής 20 Μ: 6 δινάτριο mg γλυκόζης-6-φωσφορικής διαλύεται σε 1 ml αποσταγμένου νερού; για να φάει 2 ημέρες στους 4 ° C.
3. Το διάλυμα NADP 10 Μ: 8 mg NADP διαλύεται σε 1 ml αποσταγμένου νερού; για να φάει 10 ημερών σε μία θερμοκρασία 4 ° C.
4. Ένα υδατικό διάλυμα σαπωνίνης 1 % για να φάει 20 ημερών σε μία θερμοκρασία 4 ° C.
5. Το διάλυμα της οξειδωμένης γλουταθειόνης (10 ml): 2,4 mg γλουταθειόνης διαλύθηκαν σε 1 ml αποσταγμένου νερού; για να φάει 10 ημέρες στους 4 ° C.

Μέθοδος.

Πριν σίγουρα έτοιμος μίγμα επώασης, μίξη 1 όχι. διάλυμα γλυκόζης-6-φωσφορικής, 1 όχι. OVER-F λύση, 2 όχι. λύση σαπωνίνη, 5 όχι. ρυθμιστικό 1 όχι. απλά συνεπάγεται γλουταθειόνης. Αίμα (0,01 ml) εισάγονται σε φιαλίδια ή αιμοσυγκόλλησης συμβούλιο των κυττάρων και να προσθέσετε 0,2 μίγμα επώασης ml. Μέσα 15 min μικροσιφονίου επέλεξε μία σταγόνα μίγμα επώασης (0,02 ml) από κάθε δείγμα και εφαρμόζεται σε αυτές σε μια χρωματογραφική χαρτί με τη μορφή διαμέτρου σημείο 10-12 χιλιοστά. Οι κηλίδες ξηραίνονται στον αέρα σε θερμοκρασία δωματίου, και η περιήγηση στο υπεριώδες φως για να αξιολογήσει φθορισμό. Οι έλεγχοι είναι δείγματα με γνωστές φυσιολογική αρτηριακή. Αντιδραστήριο ποιοτικού ελέγχου δεν περιέχει αίμα.

Αξιολόγηση των αποτελεσμάτων.

Απουσία του φθορισμού αντιστοιχεί στην απουσία δραστηριότητας, Φθορισμού nalïçïe (έντονο μπλε λάμψη) - Η παρουσία της δραστηριότητας, μια αμυδρή λάμψη - ενδιάμεση αντίδραση. Με την επιφύλαξη των όρων της πειραματικής μεθόδου δεν δώσει ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα. Η πηγή ψευδώς θετική διάγνωση μπορεί να επιθεωρηθεί από σοβαρή αναιμία, αλλά σε πολύ μικρότερο βαθμό, από τη μέθοδο του Berstein. Ακόμη και με σοβαρή αναιμία παρατηρήθηκαν ενδιάμεσες αντιδράσεις, δεν είναι η έλλειψη φθορισμού.

Η χρήση του ποσοτική μέθοδος προσδιορισμού η δραστηριότητα της g-6-PD δίνει την ευκαιρία να εντοπίσουν την επιβράδυνση όχι μόνο στον gemizigotnyh και ασθενείς με ομόζυγο, αλλά γυναίκες geterozigot. Επειδή, ότι ο αριθμός των Ηωσινόφιλων και χρώμα τιμή επηρεάζει το επίπεδο δραστηριότητας του ενζύμου, Συνιστάται να τροποποιήσει τα αποτελέσματα, λαμβάνοντας υπόψη τους δείκτες αυτούς.