Anämie, durch Mangel an Aktivität des Glucose-6-Phosphat-Dehydrogenase

Defizit Aktivitäten Glucose-6-fosfatdegidrogenazы (G-6-FD) - Ist die häufigste genetische Veränderung der roten Blutzellen, was zu einer hämolytischen Krise, mit der Einnahme einer Anzahl von Drogen Mittel. Außerhalb der Krisen in der Mehrzahl der Patienten, die einen Zustand der Gesamtvergütung, obwohl der Mensch hat einen festen Platz hämolytische Anämie.

Die erste Beschreibung Defizit Aktivität der G-6-PD wurde gemacht 1956 g. in Personen, unter prophylaktischen Malariamedikament Primaquin. Unabhängig von diesen Untersuchungen 1957 g. Es wurde Mangel von G-6-PD in den roten Blutzellen des Patienten entdeckt, die in regelmäßigen Abständen beobachtet hämolytische Krise ohne irgendwelche Drogen.

Derzeit beschrieben mehr 250 verschiedene mutierte Formen von G-6-PD. Sie unterscheiden sich voneinander in der elektrophoretischen Mobilität des Enzyms, seine Affinität für Substrate - Glucose-6-Phosphat und Nicotinamid (NADF) Eine Folge der verringerte Affinität ist nicht ausreichend Enzymaktivität in einer, wenn die Konzentration der Substrate wird ausschließlich durch die Geschwindigkeit ihrer Bildung in der vorhergehenden Reaktion begrenzt. Der Mangel an Aktivität nicht in den meisten Fällen bedeutet den Verlust des Enzyms als solche, obwohl es kann auch Fälle. In den meisten Fällen das Fehlen oder die Verringerung der Enzymaktivität - das Ergebnis der Anwesenheit seiner Patienten in eine pathologische Form des inaktiven.

Struktur-Gen und Gen-Kontrolle, obuslovlivaûŝie Synthese von G-6-FD, auf der X-Chromosom, jedoch Vererbung Mangel an diesem Enzym-Aktivität in Erythrozyten immer mit X-Chromosom in Eingriff.

Es gibt zwei Hauptformen von mutierten, in denen Aminosäuresubstitutionen nicht zu den aktiven Zentren beziehen, und deshalb beide weit verbreitete Mutationen sind normal. Sie unterscheiden sich in der elektrophoretischen Mobilität, jedoch Affinität zur Substrat sie gleich sind. In der modernen Nomenklatur, eine dieser Formen, in Europa gemeinsame, BB genannt Form, und der andere, fanden in Afrika - Form A. Derzeit beschriebenen und andere mutierte Formen von uns, der auch nicht voneinander durch kinematischen Parameter unterschied, aber verschiedene elektrophoretische Mobilität.

Clutch Enzym Boden gibt eine signifikante Dominanz der Männer unter den Personen mit symptomatischer Erkrankung. Es wird bei homozygoten Männchen beobachtet, Diese Pathologie von der Mutter vererbt mit ihrem X-Chromosom, homozygote Frauen (erbte die Krankheit von beiden Elternteilen) und ein Teil der heterozygoten Frauen, erben die Krankheit von einem Elternteil mit ausdrücklicher Mutantenphänotyps.

In Europa häufig Defizit Aktivität der G-6-PD auftritt, auf der Mittelmeerküste, Griechenland, Italien, wie auch in einigen lateinamerikanischen Ländern, Afrika usw..

Kann Sein, dass die extrem hohe Anhäufung von einer anomalen Gens in einer Reihe von Siedlungen trägt zur Sitte der Verwandtenehen, was zu der Ansammlung von einer Population von homozygoten Frauen, was schwere klinische Manifestationen der Erkrankung oft, als heterozygote Träger, und erhöht die Wahrscheinlichkeit Geburts homozygote Männchen, und auch weit in der Vergangenheit in diesen Orten falciparum Malaria.

Nach der aktuellen Hypothese, Person, imeûŝie Defizit G-6-FD, einfacher Malaria tropica tolerieren und nur selten an der Krankheit sterben. Zu Gunsten dieser Hypothese ist die Tatsache der ungleichen Verbreitung des Parasiten bei Frauen heterozygot roten Blutkörperchen. Es wurde gefunden, in normalen Zellen, die eine viel größere Menge von Parasiten enthalten, als mangel. Es gibt zwei Erklärungen für dieses angebliche Tatsache,. Der erste von diesen: Erythrozyten Defizit von G-6-PD ist nicht in der Lage, die Wirkungen des Parasiten zu widerstehen und spaltet in der phagozytierenden Makrophagen sofort, wo er Plasmodium getötet. Eine andere Ansicht schlägt neobhodmost für die Entwicklung des Parasiten reduziertem Glutathion, die Menge davon ist in Erythrozyten verringert defizienten G-6-PD.

Ätiologie und Pathogenese

Die erste Stufe der Arzneimittelexposition - seine Umwandlung im Körper, Übergang in die aktive Form, die Veränderungen in der Struktur der Membran der Erythrozyten verursachen können. Die aktive Form des Arzneimittels reagiert mit Oxyhämoglobin. Dies erzeugt eine bestimmte Menge von Wasserstoffperoxid.

Reduziertes Glutathion-Peroxidase-System unter Verwendung neutralisiert einen Teil Peroxid, eine Reduktionsreaktion des oxidierten Glutathions.

Bei gesunden Menschen entwickelt akute hämolytische Krise mit der Einführung von signifikanten Mengen des Medikaments (toksicheskaya Dosis). Die Krise kann auftreten, wenn, wenn das System des reduzierten Glutathions ist nicht mit dem Überschuß des gebildeten Komplexes und oxidiertem Glutathion bewältigen. Bei Mangel an Glucose-6-phosphat-Dehydrogenase und NADP beeinträchtigter Recovery, trotz der normalen Tätigkeit von Glutathion-Reduktase, verletzt seine Genesung, weil es keine normale Wasserstoffquelle. Reduziertes Glutathion kann die oxidative Wirkung der herkömmlichen therapeutischen Dosen von Drogen nicht widerstehen. Dies führt zu der Oxidation des Hämoglobins, Verlust von Häm aus Hämoglobinmolekül, Fällung der Globinketten. Milzzellen aus den Erythrozyten frei Heinz. Gleichzeitig ist es ein Teil der Oberfläche der roten Blutkörperchen verloren, die zu ihrem Tod führt.

Bei der Pathogenese von Anämie, mit der Einnahme von Ackerbohnen assoziiert, eshte vielen neyasnogo. Primahinovaya Anämie (favizm) Es entwickelt sich nur einige Personen defizitäre Tätigkeit der G-6-PD. Wahrscheinlich, für die Manifestation von Anämie ist eine Kombination von zwei Enzymdefekten. Kann Sein, dass es einen Mangel an neutralisiere einige einzelne toxische Substanz ist, in Ackerbohnen enthalten, oder die Bildung eines Metaboliten, verursacht Störungen in den Sulfhydrylgruppen der roten Blutzellen. Bei gesunden Personen, die geringe Mengen an Pferdebohne verursacht schwere hämolytische Anämie, Da in Gegenwart von reduziertem Glutathion Erythrozyten Lage sind, die toxische Wirkung von Metaboliten entgegenzuwirken. Vererbung dieses Defizits, offenbar, autosomnoe Dominanz. Mit der Kombination von ungewöhnlichen Umwandlung der toxischen Substanz im Körper,, in Ackerbohnen enthalten, defizitäre Tätigkeit der G-6-PD-Show klinischen Anzeichen Favismus.

Klinische Manifestationen

WHO Experten in Übereinstimmung mit den klinischen Manifestationen in Patienten mit homozygoter und das Niveau der Aktivität in den Erythrozyten in vier Klassen eingeteilt Varianten von G-6-PD,.

First-Class- - Optionen, begleitet von chronischer Anämie.

Die zweite Klasse - Optionen mit dem Niveau der G-6-PD Erythrozyten-0- 10 % von der Norm, Schlitten, hämolytische Anämie verursacht, keine Krise, und Krisen, mit der Einnahme von Drogen oder trinken horsebean zugeordnet.

Die dritte Klasse - Varianten mit Aktivitätsniveaus in Erythrozyten 10-60 % von der Norm, bei dem das Licht kann klinischen Erscheinungen beobachtet werden, mit der Einnahme von Drogen.

Vierten Klasse - Optionen für einen normalen oder fast normalen Aktivitätsniveau, nicht durch klinische Pathologie begleitet.

Bei der Geburt hat das Kind hämolytische Anämie, Bezogen auf das erste, und die zweite Klasse Mangel an G-6-PD.

Das Niveau der Aktivität der G-6-PD in roten Blutzellen nicht immer mit der Schwere der klinischen Manifestationen zu korrelieren. In vielen Ausführungsformen ist die erste Klasse bestimmt 20-30 % Niveau der Enzymaktivität. Auf der anderen Seite, bei einem Nullaktivitätsniveau bei einigen Patienten keine klinischen Symptome zeigen. Dies ist darauf zurückzuführen, Zuerst, mit den Eigenschaften von Enzymen lutantnyh, Zweitens, sehr wahrscheinlich, bei einer Geschwindigkeit von Neutralisierung von Arzneimitteln Vorrichtung Leber Cytochrom Patienten.

Die häufigste Mangel der Aktivität der G-6-PD bietet keine klinischen Manifestationen ohne besondere Provokation hämolytische Krise. In den meisten Fällen beginnt hämolytische Krise nach Empfang Sulfonamide (norsulfazola, stryeptotsida, sulfadimetoksina, Natrium sulfatsil, etazola, biseptola), Antimalariamittel (Primaquin, xinina, akrihina), Nitrofuran Drogen (furazolidona, furadonina, furagina, 5-NOK, nevigramona), Arzneimittel Isonicotinsäure (tuʙazida, ftivazida), PAS-Natrium, Ein także nitrogliцerina.

Von Antimalaria Mangel an Aktivität von G-6-PD kann delagil zugewiesen, von Sulfa - ftalazol. Eine Anzahl von Arzneimitteln, in großen Dosen verursachen hämolytische Krise, in kleinen Dosen können im Defizit Aktivität der G-6-PD verwendet werden. Dazu gehören Acetylsalicylsäure, amidopirin, fenatsitin, levomicetin, Streptomycin, Antidiabetika Sulfonamide.

Alle Medikamente, kann hämolytische Krise führen, Denaturierung von Hämoglobin katalysierte Oxidation mit molekularem Sauerstoff.

Klinischen Manifestationen der Krankheit kann in der zweiten oder dritten Tag nach dem Beginn der Medikation erfolgen. Zunächst gibt es eine leichte Gelbsucht Sklera, dunkler Urin. Bei Beendigung des Medikaments in dieser Zeit der schweren hämolytischen Krise nicht entwickeln,. Wenn die Behandlung fortgesetzt wird, 4-5-ten Tag der hämolytischen Krise kann mit der Freisetzung von Urin schwarz oder braun manchmal auftreten,, die mit intravaskulären erythrocytolysis verbunden ist. Hämoglobin kann durch 2-3 reduziert werden %.

In schweren Erkrankung steigt die Körpertemperatur, scharf erscheinen Kopfschmerzen, Schmerzen in den Extremitäten, Erbrechen, manchmal - Durchfall. Es gibt Kurzatmigkeit, Blutdruckabfall. Oft erhöht Milz, manchmal - Leber.

In seltenen Fällen entwickelt sich Nierenversagen, aufgrund der stark verminderten Nieren Filtration und renale tubuläre Obstruktion durch Blutgerinnsel.

Laborbefunde

Bei einer Blutanalyse ergab, Anämie mit erhöhten Retikulozyten. Hat es eine Zunahme der Anzahl von Leukozyten mit einer Verschiebung um Myelozyten. Bei einigen Patienten,, insbesondere bei Kindern, weißen Blutkörperchen kann manchmal signifikante Stellen ansteigen (100 Zinn 1 l und). Die Zahl der Plättchen unverändert. Wenn mit Kristallviolett roten Blutkörperchen bei schweren hämolytischen Krise gefärbten zeigte eine große Anzahl von Heinz-Körper.

Ergab eine scharfe Reizung roten Wachstumsmark. Erhöhen Sie den Gehalt an freiem Hämoglobin Serum, häufig erhöhte Konzentrationen von Bilirubin durch indirekte. Mit Benzidin Probe zeigte die Anwesenheit von Hämoglobin im Urin ohne rote Blutzellen, manchmal fand Hämosiderin.

In einigen Formen der Mangel an Glucose-6-Phosphat-Dehydrogenase Hämolyse beobachtet Halte, t. es ist. hämolytische Krise Pausen, trotz, dass der Patient weiterhin die Droge zu nehmen, daß verursacht hämolytische Krise. Fähigkeit zur Selbstbegrenzung der Hämolyse durch erhöhte Zahlen verursacht fast normalen Niveau der Enzymaktivität in der Retikulozyten-. In den meisten Formen davon wesentlich reduziert wird.

Bei Kindern treten häufiger schwere hämolytische Krisen, als bei Erwachsenen. Im deutlichen Mangel der Aktivität der G-6-PD manchmal unmittelbar nach der Geburt auftreten,. Diese hämolytische Erkrankung des Neugeborenen, nicht mit immunologischen Konflikt assoziiert. Es kann genauso hart auftreten, als hämolytische Anämie, rezusnesovmestimostyu aufgrund der Mutter und Fötus. Vielleicht ist die Anwesenheit von Kernikterus mit schweren neurologischen Symptomen.

Die Pathogenese dieser Krisen wurde nicht untersucht. Es ist nicht festgestellt, ob diese Krisen treten spontan aufgrund des Fehlens der physiologischen Aktivität des Enzyms Glutathion-Peroxidase bei der Geburt oder bewirken, dass sie die Verwendung bestimmter Antiseptika bei der Verarbeitung der Nabelschnur des Kindes. Kann Sein, dass manchmal Krisen mit der Einnahme einiger Medikamente Mutter zugeordnet.

In manchen Fällen hämolytische Krise Mangel an Aktivität von G-6-PD vor dem Hintergrund von infektiösen Krankheiten entstehen: Grippe, salmonelleza, Viral Hepatitis. Krisen können als Azidose bei Diabetes mellitus oder Nierenversagen ausgelöst werden.

Ein kleiner Prozentsatz der Patienten mit einem Mangel an Aktivität von G-6-PD beobachtet konstant hämolytische Anämie, mit der Einnahme von Drogen. In diesen Fällen gibt es eine leichte Zunahme in der Milz, moderate normochrome Anämie mit hohem Gehalt von Retikulozyten, erythrokaryocytes im Knochenmark und Bilirubin. Verschlechterung der Krankheit entweder nach der Einnahme der oben genannten Medikamente möglich, oder auf dem Hintergrund von Infektionen.

Diagnostics

Die Grundlage für die Diagnose dieser Krankheit ist die Bestimmung der roten Blutkörperchen Enzymaktivität von G-6-PD in der Probanden und seine Familie. Qualitative Methoden, für diesen Zweck verwendet, sollten zwei der einfachen Methoden empfehlen.

Verfahren Bernstein Sie macht es möglich, nicht nur den Mangel an Aktivität von G-6-PD jeder hemizygote männliche diagnostizieren, Frauen homozygot, aber einige schätzen den Grad der Mangel an diesem Enzym in heterozygote Frauen. Diese Methode ist es möglich, einige identifizieren 50 % heterozygote Weibchen. Der Vorteil dieses Verfahrens ist seine Eignung für die Verwendung in der Massenscreening der Bevölkerung in Feldbedingungen.

Das Verfahren basiert auf der Bleichung des Farbstoffs 2,6-Dichlorphenolindophenol und wenn rekonstituiert basierend. In Gegenwart von G-6-PD Oxidation von Glucose-6-Phosphat und NADP Rekonstitution zu NADP-H zu bilden,. Diese Substanz Phenazinmethosulfat wieder her, die ihrerseits wieder 2,6-Dichlorphenolindophenol. Phenazinmethosulfat wirkt bei der Reaktion als sehr aktive Träger von Elektronen von NADPH auf die Farbstoff. Ohne Phenazinmethosulfat Reaktion läuft für mehrere Stunden, und in der Gegenwart von Phenazinmethosulfat Verfärbung tritt in 15- 30 m.

Reagenzien.

1. Die Lösung NADP: 23 mg NADP in gelöster 10 ml Wasser.
2. Eine Lösung von Glucose-6-Phosphat (G-6-F): 152 mg des Natriumsalzes von Glucose-6-phosphat löst man in 10 ml Wasser. Das Bariumsalz von Glucose-6-phosphat muss zuvor in das Natriumsalz umgewandelt werden,. Um dies wog 265 mg Bariumsalz von Glucose-6-phosphat, gelöst in 5 ml Wasser, hinzufügen 0,5 ml 0,01 M Salzsäurelösung und 1 mg trockenes Natriumsulfat. Der Niederschlag wurde zentrifugiert. Der Überstand wurde neutralisiert 0,01 M Natronlauge und mit destilliertem Wasser eingestellt 10 ml.
3. Phenazinmethosulfat-Lösung: 2 mg Phenazinmethosulfat, gelöst in 100 ml Tris-Puffer 0,74 M; pH 8,0.
4. Die Farbstofflösung aus 2,6-Dichlorphenol (natrievoy Salze): 14,5 mg Farbstoff in gelöster 100 ml Pufferlösung aus Tris-Salzsäure (0,74 M; pH 8,0). Die Pufferlösung wird hergestellt aus 1,48 M Tris gidroksimetilaminometana (42,27 d 250 ml Wasser) und 1,43 M Salzsäurelösung (2 Ampullen fiksanala, enthält 0,1 eq, mit Wasser eingestellt 135 ml). K 230 ml Tris gidroksimetilaminometala hinzugefügt 110 ml Salzsäure, pH wird 8,0 und Wasser hinzugefügt 460 ml.

Vor der Applikation eine Mischung der Reagenzien: 1 Nein. NADP-Lösung (1), 1 Nein. Lösung G-6-P (2), 2 Nein. Phenazinmethosulfat-Lösung (3) und 16 Nein. Lösung von 2,6-dihlorfenolinodofenola (4).

Verfahren.

Das Rohr, enthält 1 ml destilliertem Wasser, beitragen 0,02 ml Blut.

Nach dem Auftreten der Hämolyse hinzugefügt 0,5 ml Reagenzien. Die Ergebnisse werden in Betracht genommen durch 30 m. Die Reaktion wird als normal angesehen, mit voller Bleichung des Farbstoffs. Wo, wenn es keine Verfärbung des Farbstoff (Es ist intensiv blau-grüne I Farbe), Antwort wird als stark positiv bewertet. Wenn die Farbintensität nimmt ab, aber die blau-grüne Farbe ist, die Reaktion wird als polo-positive. Wo, wenn es eine offensichtliche Verfärbung, aber grünlich wenn sie mit der Kontrollgruppe verglichen blieb, Reaktions Bezug als Plus-Minus-.

Rezkopolozhitelnye positive Reaktion treten in hemizygot Männchen und homozygote Frauen. Manchmal heterozygote Frauen eine positive Reaktion, aber am Plus-Minus. Außerdem, plus oder minus die Reaktion wird manchmal in vollkommen gesunden Menschen mit einer geringen Abnahme in der Enzymaktivität auf dem Hintergrund der Krankheit oder Medikamenten beobachtet. Plus-Minus-Reaktionen sollten in Betracht gezogen werden, und die Aktivität des Enzyms quantitative Methode zu überprüfen, nur wenn Sie die Anwesenheit von Anämie bei Frauen vermuten,, durch Mangel an Aktivität des Glucose-6-Phosphat-Dehydrogenase. Es sollte nicht in Betracht gezogen werden, Plus-Minus-Reaktionen bei Massen-Screening.

Falsch positive Reaktionen Es kann in Patienten mit Anämie aufgrund der Tatsache ausgedrückt werden, was 0,02 ml Blut, in das Röhrchen eingeleitet, Sie enthalten eine geringe Menge an Erythrozyten und, Folglich, eine kleine Menge des Enzyms. In diesem Fall sollte das Rohr mit destilliertem Wasser, zwei oder drei zupipettiert werden (auf 0,02 ml) Blut, zur Farbe des Rohres vor der Zugabe des Farbstoffes nicht aus dem Steuer abweichen.

Das Verfahren der Fluoreszenzspots Beutler и Mitchell Es basiert auf spezifische Fluoreszenz verringert NADP im langwelligen UV-Licht (440- 470 nm), visuell in festen Laufzeiten bewertet.

Reagenzien.

1. Tris-HCl-Puffer 0,5 M; pH-Wert 8,0: 60,55 in Tris 800 ml destilliertem Wasser, hinzufügen 20 ml konzentrierter HCl, pH eingestellt 8,0 mit Hilfe 2 M HCl und gekrönt mit Wasser auf 1 ml; Lösung zu speichern 36 Tage bei 4 ° C.
2. Eine Lösung von Glucose-6-Phosphat 20 M: 6 mg Dinatrium-Glucose-6-phosphat löst man in 1 ml destilliertem Wasser; zu essen 2 Tage bei 4 ° C.
3. Die Lösung NADP 10 M: 8 mg NADP in gelöster 1 ml destilliertem Wasser; zu essen 10 Tage bei einer Temperatur 4 ° C.
4. Eine wässrige Lösung von Saponin 1 % zu essen 20 Tage bei einer Temperatur 4 ° C.
5. Die Lösung des oxidierten Glutathions (10 ml): 2,4 mg Glutathion, gelöst in 1 ml destilliertem Wasser; zu essen 10 Tage bei 4 ° C.

Verfahren.

Bevor definitiv bereit Inkubationsmischung, Vermischung 1 Nein. Lösung von Glucose-6-phosphat, 1 Nein. OVER-F-Lösung, 2 Nein. Saponin-Lösung, 5 Nein. Puffer 1 Nein. einfach bedeutet Glutathion. Blut (0,01 ml) in Fläschchen oder Zell Hämagglutination Bord eingeführt und fügen 0,2 ml Inkubationsgemisch. Durch 15 min Mikropipette ausgewählten Tropfen Inkubationsmischung (0,02 ml) aus jeder Probe und sie auf ein chromatographisches Papier in Form eines Punktdurchmesser von 10-12 mm aufgebracht. Die Spots wurden in Luft bei Raumtemperatur getrocknet, und das Surfen im UV-Licht, um die Fluoreszenz zu bewerten. Kontrollen sind Proben mit bekannten normalen Blut. Prüfreagens nicht Blut enthalten.

Auswertung der Ergebnisse.

Abwesenheit von Fluoreszenz entspricht dem Fehlen von Aktivität, Fluoreszenz nalïçïe (intensives blaues Leuchten) - Das Vorhandensein von Aktivität, ein schwaches Leuchten - Reaktionszwischen. Vorbehaltlich der Bedingungen der experimentellen Methode nicht geben falsche negative Ergebnisse. Die Quelle der falsch-positive Diagnose von schweren Anämie vermessen werden, jedoch in einem viel geringeren Ausmaß, als das Verfahren von Berstein. Selbst bei schwerer Anämie beobachtet Zwischenreaktionen, nicht ein Mangel an Fluoreszenz.

Verwendung eines quantitativen Verfahrens zur Bestimmung der Aktivität von G-6-PD macht es möglich, die Abnahme der Aktivität nicht nur in hemizygoten homozygoten Patienten zu identifizieren, aber bei den Frauen heterozygot. Aufgrund der Tatsache, dass die Zahl der Retikulozyten und Farbkomponente beeinflussen das Niveau der Enzymaktivität, es wird empfohlen, um die Ergebnisse zu ändern, unter Berücksichtigung dieser Indikatoren.