Paroxysmální noční hemoglobinurie – Nemoc Marchiafava Michele

Paroxysmální noční hemoglobinurie je relativně zřídka nalezený získaná forma Hemolytická anémie, souvisí se změnou ve struktuře červených krvinek, neutrofilních granulocytů a krevní destičky. Toky se příznaky intravaskulární hemolýza, kde jsou hemoglobinurie, gemosiderinuriya, zvýšení úrovně plazmy volného hemoglobinu. Nemoc je často komplikována periferní žíly a cévní trombóza vnitřních orgánů.

Etiologie a Patogeneze paroxysmální noční gemoglobinurii

První popis nemoci byl uveden v 1882 g. Byl popsán podrobněji v 1928 g.

Běžný název této choroby je paroxysmální noční hemoglobinurie (APG), Nicméně skutečně odpovídá malé nemoc, protože neexistuje žádný přítomen paroxysmální hemoglobinurie ne vždy pozorována.

Intravaskulární hemolýza s gemosiderinuriej navíc APG je pozorován v mnoha formách autoimunitní Hemolytická anémie jako s teplem, a s studenou protilátky, zejména když formy s teplo gemolizinami, stejně jako v některých forem dědičné Hemolytická anémie, vztahující se k porušení struktury membránu erytrocytů.

Nemoc Markiafavy-Micheli pozorované v různém věku. Důvodem zvýšené destrukce červených krvinek je že defekt erytrocytů, samy o sobě.

Červené krevní buňky pacientů s PNH, jak je uvedeno výše, komplementom snadno zhroutí při vytváření optimálních podmínek pro její platnost, nebo kdy okyselení séra, nebo při zvýšení koncentrace komplementu kolem sedimentace vytvořením nízké koncentrace iontů v saharoznoj Středa. Červené krevní buňky pacientů s PNH mají zvýšenou citlivost k účinkům protilátek jako aglutininy, a, zvláště, hemolysins.

Když PNG ovlivňuje nejen červených krvinek, ale leukocytů a trombocytů pacienta. Trombocytů a leukocytů pacientů s PNH mají zvýšenou citlivost k účinkům doplňkem jako při okyselení séra, a ve středu s sacharosy nízké iontové síle. Jsou to mnohokrát více citlivé na účinky izoagglûtininov, než dárců trombocytů a leukocytů. Tak, krevních destiček a bílých krvinek mají stejnou vadu v membráně, to a červených krvinek.

Protilátky na povrchu červených krvinek, leukocytů a trombocytů a tím dokázat členství APG autoagressivnyh skupina nemocí nemůže být nejcitlivější metody.

Je přesvědčivé důkazy o existenci dvou odlišných populacích APG v erytrocytech. Nejodolnější buněk v zdravý člověk je reticulocyte APG jsou více křehké. To znamená, že, patologické červených krvinek populace jednoduše nepřežili k zrání, a starší zralých erytrocytů se týkají zdravé nebo téměř zdravé populaci.

IN 1970 ve studii erytrocyt Latina, ovlivněné PNG, Byla objevena, že obsahují, stejně jako u žen zdravých mulat, elektroforetické varianty dvou normálních pan 6-FD; Varianta, mezi lidmi z Afriky, a možnost v, Typický obyvatel Evropy. Poté, co strávil hemolýze se, abnormální červené krevní buňky obsahují pouze jednu možnost pana 6-FD, a normální červené krvinky – elektroforetické varianty g-6-PD. Proto, lýze erytrocyty jsou pocházející z jediné buňky.

Tato skutečnost s velkou přesností indikuje přítomnost dvou populací erytrocytů, jiné ne pouze funkčně, jako, např, na mikrosferocitoze, ale i podle původu: jinými slovy, To potvrzuje přítomnost patologického klonu buněk, T. to je. somatická mutace. Identita erytrocyt membránová léze, neutrofily a trombocyty naznačuje, že, Tyto patologické informace s největší pravděpodobností dostane do klece, dále pro kmen, T. to je. předchůdcem buňky mielopoèza. Blastomnyj růst pro PNG není konkrétní. Popsat pouze izolované případy rychlého rozvoje leukémie na pozadí PNG. Nicméně, Můžeme předpokládat,, PNG je varianta benigní nádor krevního systému, na dlouhou dobu produkovat žádné buněčné proliferace nádoru, charakteristické pro jiné formy leukémie.

Komplementčuvstvitel′nosti mechanismus rozvoje v PNG, zatímco nejasná.

Významné změny v aktivitě enzymů cyklu glykolýzu a pentozno fosfát ne.

Když PNG snižuje aktivitu acetylcholinesterázy erytrocytů, s největší pravděpodobností kvůli narušení struktury membrány červených krvinek, proto, že enzym se nachází na povrchu membrány a snadno rozdělená, když jeho porážku. Známý, že použití inhibitorů acetylcholinesterázy nemá žádný vliv na přežití erytrocytů. Nicméně pád acetylcholinesterázy činnosti je také pozorován v jiných forem Hemolytická anémie, Proto nelze vysvětlit jev zvýšené komplementčuvstvi- Blémy.

Existují důkazy,, důkazy o zvýšení počtu nenasycených mastných kyselin, zahrnuty do struktury fosfolipidů, membrána erytrocytů. Je zde možnost, změny v lipidy – je jen odrazem jiné změny ve struktuře membrány červených krvinek. Ve studii proteinu membrány erytrocytů pacientů s PNH dovezeni v přítomnosti sodíku dodecilsulfata, to v mnoha frakcí bílkovin je výrazně odlišná od ovládacího prvku.

Hlavní roli v patogenezi trombotických komplikací v APG odsunuta vnutrisosudistomu rozpadu červených krvinek a koagulační faktory stimulace, propuštěn z erytrocytů při jejich rozpadu. Když APG zničen většinou reticulocyte, možná, To by měl vysvětlit frekvence trombotických komplikací v této choroby, na rozdíl od jiných forem Hemolytická anémií, spolu s výrazným intravaskulární hemolýza.

Klinické projevy paroxysmální noční gemoglobinurii

Nemoc často se začíná s fňukat. Pacienti si stěžují na slabosti, nevolnost, závrať. Někdy subicteric skler poznámky. Často první stížnosti na bolesti hlavy, bolesti žaludku různé lokalizace. Sklon k zvýšené trombus formace způsobuje pacientovi vyhledat lékařskou pomoc. Hemoglobinurie docela vzácné je prvním příznakem choroby a někteří pacienti APG může chybět vůbec. V některých případech se zdá, že poprvé prostřednictvím 2-3 roky a dokonce i prostřednictvím 10 let po propuknutí choroby.

Jedním z charakteristických rysů PNG-záchvaty bolesti břicha. Lokalizace to může být velmi odlišné. Mimo období kriza bolesti žaludku, obvykle, nedodržení. Často se připojí zvracení. Pravděpodobně, bolest břicha u pacientů s PNH je spojena s DVT mezenterických cév.

Periferní cévní trombóza (více často než ne – žíly horní a dolní končetiny, nejméně-ledviny plavidel) rovněž charakteristickým příznakem paroxysmální noční gemoglobinurii. V 12 % APG pacientů pozorovány throm. Tromboembolických komplikací jsou nejčastější příčinou smrti v této choroby.

Když cíl studie pacientů často pozoruhodné bledost s mírným nádechem želtušnym. Často je to obličejové otoky, občas nadměrnou plnost. Možná mírný nárůst sleziny a jater, Sice to není typické pro APG.

Pro paroxysmální noční gemoglobinurii se vyznačuje příznaky intravaskulární hemolýza, z nichž nejvýznamnější je zvýšené plazmatické volného hemoglobinu. Toto téma pravidelně téměř všichni pacienti APG. Avšak míra zvýšení plazmatické volného hemoglobinu liší a závisí na, v jaké období nemoci studie. Během krize tohoto poměru zvyšuje výrazně, Také došlo k nárůstu počtu metal′bumina plazmy.

Plazmatické hladiny volného hemoglobinu závisí na stupni hemolýza v okamžiku, obsah gaptoglobina, stupeň filtrace hemoglobinu v moči a rychlost destrukce komplex hemoglobinu – haptoglobin. V případě malé míře hemolýza volného hemoglobinu v plazmatické hladiny nepostačí k filtrovat filtrem ledvin. Proto hemoglobinurie není povinný příznak onemocnění. Když procházející nefronov kanálků, vylučovaný hemoglobin je částečně zničen a uloženy v tubulární epitelu. To je důvod, proč moči hemosiderinu.

Vybaven moči hemosiderinu v drtivé většině pacientů s paroxysmální noční hemoglobinurie. Gemosiderinuriâ někdy se neobjeví okamžitě. To je důležité, ale nejsou specifické pro PNG příznak choroby.

Laboratorní parametry v paroxizmalna noc gemoglobinurii

Hemoglobin v pacientů s PNH se pohybuje od 1,86 — 3,1 mmol / l (30-50 g/l) a ještě k normálu během remise.

Počet erytrocytů u pacientů s PNH sníží úroveň snížení hemoglobinu. Barva indikátoru delší období zůstává blízko k jednotce. Kde, Je-li pacient ztrácí značné množství železa s močí ve formě hemosiderinu a hemoglobinu, postupně snižuje hladinu železa. Nízkobarevné indikátor je pozorován v přibližně polovina pacientů. Některé z nich mají zvýšené hladiny hemoglobinu (P), zejména v období exacerbace.

Velká část pacientů zvýšený obsah reticulocyte, ale relativně nízká, (2- 4 %). Počet leukocytů v PNG ve většině případů snížena. U mnoha pacientů je 1,5-3 g 1 l, ale někdy redukovány na 0,7-0,8 g 1 l. Leukopenie, obvykle, Je tím, že sníží počet neutrofilní granulocyty. Někdy krev v APG normální nebo vysoké – až do výše 10-11 g 1 l.

Když APG snižuje fagocytární aktivitu neutrofilů granulocytů.

Trombocytopenie také běžně vidět v PNG, Nicméně funkční stav krevních destiček v normální. Pravděpodobně, To vysvětluje vzácnost krvácivých komplikací při této nemoci, Přestože počet krevních destiček někdy výrazně snížena – do 10-20 g 1 l. Obvykle ve většině pacientů trombocytů 50 – 100 g 1 l. Normální destiček nevylučuje diagnózu paroxysmální noční gemoglobinurii.

Ve studii kostní dřeně zjištěné příznaky, hlavně Hemolytická anémie je červený podráždění klíčků krvetvorby v normální číslo mielokariocitov. V některých pacientů má mírné snížení počtu Megakaryocyte.

Hladinu sérového železa v PNG To záleží na stadiu onemocnění, stupeň intravaskulární hemolýza a aktivitu krve. Kde, Je-li pacienti mají stálé nebo časté hemoglobinurie, stejně jako stálé gemosiderinuriâ, obsah železa v těle, a tudíž, a klesá v séru, někdy i velmi výrazně. Občas PNG začíná s příznaky hypoplastického. Železo se ukládá v těle pacienta závisí APG, jedna strana, od ztráty železa v moči, a na druhé straně, intenzita erytropoézu. Proto nemůžete vzít železa nedostatek diagnostické znamení paroxysmální noční gemoglobinurii.

Hladina sérového bilirubinu v PNG ve většině případů, rozostřený, normální nebo zvýšený, především prostřednictvím nepřímého. Průměrný obsah bilirubinu je 22-28 μmol/l. Mělo by se vzít v úvahu, že když hemoglobinu hemoglobinu tvořil kaz vnutrisosudistom-gaptoglobinovyj komplex, kdo a nakonec také rozejde s tvorbě bilirubinu.

Někteří pacienti s nemocí PNH začíná s obrazy aplastické anémie.

Diagnóza paroxysmální noční gemoglobinurii

Je-li paroxysmální noční gemoglobinurii shell struktury erytrocytů je přerušeno, Jak se odráží v vysokou citlivost k účinkům její doplněk. Tato přecitlivělost je detekován pomocí buď Hema vzorků, nebo více citlivé saharoznoj vzorků. V některých případech se však, zejména v podobě gemolizinovoj autoimunitní Hemolytická anémie, saharoznaâ vzorku může dát falešně pozitivní výsledek. Gemoliziny jsou stanoveny na povrchu svých vlastních červených krvinek a v přítomnosti komplementu v saharoznoj středu zničil jejich, Zatímco PNG je charakterizována zničení buněk komplementom bez vystavení protilátky.

Chcete-li vyloučit forma gemolizinovoj autoimunitní Hemolytická anémie studie doporučila hemolysins, jak je popsáno výše a pomocí cross-saharoznoj s vzorky séra od pacienta a dárcovských erytrocytů odnogruppnogo, a ne naopak, jak je zvykem. Když je pozitivní APG přímé vzorek, a kříž negativní. Když gemolizinovoj forma AIGA může nastat jako pozitivní, a negativní cross vzorek. V těchto případech je vhodné použít třetí možnost saharoznoj vzorky – pomocí obou séra, a červených krvinek pacienta. Stupeň hemolýza v této variantě minimum když PNG a maximální gemolizinovoj podobu AIGA. Vysvětlit, že takový výsledek může být pouze vysoce specifických protilátek séra pacientů gemolizinovoj podobu autoimunitní Hemolytická anémie na Antigen, k dispozici ve velkém množství v erytrocytů nemocných, než v erytrocytech dárce. Saharoznaâ přímý pozitivní vzorek těchto pacientů je spojena, pravděpodobně, s přítomností erytrocytů pevné protilátky.

Detekce hemolysins metoda agregatgemagglûtinacii a jiných pomáhá správná diagnóza. Nelze použít jako dárce séra pacientů, stejně jako v případě gemolizina obsahu výsledek nemusí být ložnopoložitel′nym. Negativní výsledek může dojít, Je-li zdroj používá pacienta sérového komplementu APG nebo pacienta sérového jaterní cirhóza, Revmatoidní artritida, Systémový Lupus erythematodes a jiné nemoci, v nichž komplementu se snižuje úroveň. Saharoznaâ, který vzorek a vzorek Hema se stává méně výrazné, Pokud berete krev z pacienta jako antikoagulační heparin se používá, spíše než citrát sodný. Po hemolytické krize intenzita se sníží vzorky Hema a saharoznoj vzorků, ale nejedná se negativní.

Definice zdarma Plazma hemoglobinu v Bing Derviz modifikace metody a Bâlko s paroxysmální noční gemoglobinurii

Metoda je založena na schopnosti hemoglobinu reagují s kyselinou Benzidin Středa za přítomnosti peroxidem vodíku za vzniku zelené zabarvení, válcování nejprve v modrém, a pak v červeno fialové. Intenzita je přímo úměrná počtu hemoglobinu.

Činidla.

1. Acetátový pufr 0,1 M, pH 4,6: 27,22 g octanu sodného rozpuštěného v 1 l vody (0,2 M roztok); v dalším měření cibule Cook 1 l 0,2 M roztok kyseliny uksousnokisloy; smíšený 480 ml č. 1 a 520 ml č. 2.
2. Peroxid vodíku 0,3 % řešení (Příprava před použitím chov řešení v 100 doba).
3. Solânokislyj Benzidin 0,1 % řešení: 50 mg solânokislogo Benzidin rozpuštěné v 35-40 ml octanového, tepelné řešení 80 ° C ve vodní lázni a po ochlazení, aby vyrovnávací paměti acetatnym 50 ml.

Filtrační baňka a skladujte v temnu při pokojové teplotě více než 7 dnů. Zažloutlé činidlo nevhodné, Rychlé potemnenii je nutné perekristallizovat′ Benzidin z alkoholu.

Metoda.

Krev na studie z žíly suché jehly v silikonirovannuû trubice, obsahuje veškeré antikoagulační. Krev s antikoagulantem odstředí více 10 minut při 1500 / Min. Po oddělení její plazmě znovu se odstřeďuje 10 minut při 8000 OT pro depozici leukocytů.

V nádobce je vyplněna 4 ml acetátového pufru, 2 peroxid vodíku ml, 2 ml Benzidin a 0,04 ml testovací sérum smíchat a nechat odstát 3 m, pak podlijeme délka optické dráhy kyvety 1 See a fotometriruût proti odškodnění řešení na zelený štít. Intenzita modré zabarvení se zvyšuje během 4-5 minut, Proto měření opakujte 3 - 5 krát v řadě a zaznamenejte maximální naměřené hodnoty. Po 5-6 minutách zbarvení sérum se stává odstín fialová hnědá, a optická hustota hodnota začíná klesat. Výsledky dvou určené maximální optická hustota média je převzata.

Kompenzace řešení, skládající se z 6 ml acetátového pufru, 8 peroxid vodíku ml, 3 ml Benzidin a 0,06 ml z izotonický roztok chloridu sodného, příprava ve stejnou dobu s.

Kalibrační křivka displej na řešení hemoglobinu. V krvi, za řešení hemoglobinu, změřit její obsah (na lékařské kolorimetre nebo lékařské refraktometre). Připravit roztok o koncentraci hemoglobinu 1 g / l, z něj připravit roztoky o nižší koncentraci: 0,005,0,025, 0,05, 0,1 a 0,2 g / l. Přidat jednotlivé výsledná řešení 0,04 ml směsi 4 ml acetátového pufru, 2 ml Benzidin a 2 peroxid vodíku ml.

Hlavní řešení gemolizata (1 g / l) pro kalibrační křivka by se měly skladovat v chladném počasí, a pracovní řešení nižší koncentrace by měl být připraven bezprostředně před vyšetření.

Za normálních okolností, v 1 obsahuje litrů krevní plazmy 0,0005 mmol / l (0,01-0,04 G) Hemoglobin.

Definice hemosiderinu moči s paroxysmální noční gemoglobinurii

Degradace hemoglobinu železo to adsorbované renální tubulární epitelu a je součástí hemosiderinu. Sluŝennye buňky renální tubulární epitelu v těchto případech obsahují zrna hemosiderinu.

Pečlivé studium sedimentu moči po odstředění obilí hemosiderinu viditelné a bez zvláštní zbarvení. Nicméně, oni stojí více jasně při barvení v Perlsa metoda.

Metoda.

Po odstředění vrchní vrstvu moči odsáván, k ponoru přidat svejeprigotovlenny řešení 1 % Žlutá krevní sůl a 1 % Kyselina chlorovodíková (Smíchejte stejné množství 2 % roztok kyseliny chlorovodíkové a žlutá krevní sůl). Po 10 Po míchání se směs zcentrifuguje a sediment se dívá na. Obilí hemosiderinu skvrny modré.

Stanovení plazmatické metgemal′bumina Spektrofotometrická metoda

Činidla.

1. Fosfát vyrovnávací paměti izoosmotičeskij (pH 7,4): smíšený 18 ml 0.15 M roztok digidrofosfata sodného (24,4 g YaN2R04 1 l vody) a 82 ml 0,15 M roztok sodný vodík (21,3 g NaH₂PO₄ na 1 l vody).
2. Hydrogensiřičitan sodný.
3. Hydroxid sodný 1 M.
4. Odbouráván řešení (40 g / l).
5. Řešení gemina (5 mg / 100 ml); okamžitě se připraví rozpuštěním gemina v malém množství hydroxidu sodného, a pak: uvedení do požadované množství albuminu řešení.

Metoda.

K 2 je přidána ml séra nebo krevní plazmy 1 ml zabuferernogo izoosmotičeskogo řešení, pH 7,4. Směs zcentrifuguje 30 minut při 1200-1500 ot/min. Stanovit optickou hustotu při 569 nm. Pak -li zředěného plazma je umístěn do zkumavky a přidejte přibližně 5 mg sušené Hydrophilus Síran sodný. Přes 5 opakovaně Změřte optickou hustotu při stejné vlnové délce, min. Rozdíl mezi dvěma hodnotami absorbance odpovídá optická hustota metgemal′bumina. Metgemal′bumina koncentrace určuje kalibraci plánu.

Kalibrační graf zobrazit následovně. Řešení gemina albuminom přenos do zkumavek v množství od 0,01 na 0,1 g / l (z 0,2 na 2 ml). V těchto trubkách, kde množství roztoku méně 2 ml, přidat do 2 ml albuminu. Pak přidat na 1 ml fosfátového vyrovnávací paměti izoosmotičeskogo. Odstřeďte směs na 1500 / Min, a pak Změřte optickou hustotu. Rozdíl mezi dimenzemi se aplikuje na grafu, respektive počet gemina.

V normální krevní plazma gemal′bumin chybí. Zdá se, u intravaskulární hemolýza, např, Pokud paroxysmální noční gemoglobinurii nebo gemolizinovoj forma autoimunitní Hemolytická anémie, stejně jako v nepřítomnosti gaptoglobina, Když hemu se váže na albumin.

HEMA soud v paroxizmalna noc gemoglobinurii

HEMA proces založený na snížení odporu červených krevních buněk pacientů s PNH nižší pH ve středu v přítomnosti komplementu čerstvého séra.

Činidla.

1. Roztok kyseliny chlorovodíkové 0,2 n.
2. Roztok amoniaku 0,04 %.

Metoda.

Z Vídně se 5- 6 ml krve. Jako antikoagulans citranu sodného nebo šťavelanu. Ve stejné době trvat 15-20 ml krve od dárce stejné skupiny. Oddělte červené krvinky z krevní plazmy pacienta a dárce.

Dárce sérum se nalije 0,5 v šesti zkumavek ml, dva z nich na 20 minut do vodní lázně s teplotou 56 ° C k inaktivaci sérového komplementu, Další čtyři zkumavky jsou ponechány při pokojové teplotě. Červené krevní buňky pacienta, dvakrát prané izotoniceski roztoku chloridu sodného, pak suspenziruût stejné řešení v poměru 1:1.

Schéma studie jsou uvedeny v tabulce.

Obsah každé zkumavky se promíchá, na vašem 1 h v termostatu při teplotě 37 ° C, a pak odstředí.

Pro nečinnosti vzorkované 0,05 m červené krevní buňky pacienta a dárce je přidán zvlášť do 0,55 ml z izotonický roztok chloridu sodného.

Po odstředění lze odhadnout míru hemolýza oko. Kvantifikovat rozsah hemolýza v každé trubice 4,7 ml 0,04 % Přidat roztok amoniaku 0,3 povrchová vrstva ml, ale v nádobce s nečinnosti útěk – 0,3 ml referenčního séra.

K identifikaci 100 % hemolýza do 4,7 ml roztoku amoniaku přidat 0,3 mL suspenze erytrocytů (0,05 ml erytrocyty pacientovi 0,55 ml z izotonický roztok chloridu sodného).

Optická hustota roztoku se měří při lékařské kolorimetre a porovnat naměřené hodnoty s optickou hustotu roztoku amoniaku bez červených krvinek:

% hemolýza =((IS₁-IS₂)/IS₃)*100;

kde E₁ -optická hustota analýzy sonda; IS₂-optická hustota slepého vzorku; IS₃-optická hustota 100 % gemolizata.

Normálně ne více než gemoliziruetsâ 5 % erytrocytů.

Vzorek je považován za pozitivní Hema v případě, Pokud gemoliziruetsâ více 6 % erytrocytů.

V noci paroxizmalna gemoglobinurii a gemolizinovoj formě autoimunitní Hemolytická anémie gemoliziruetsâ někdy až do 50-80 % erytrocytů. Pro tyto nemoci je charakterizována hemolýza pouze za přítomnosti sérum neinaktivirovannoj (-Č. 2). Je-li inaktivace séra nebrání hemolýze (-Č. 3), Můžeme předpokládat existenci jiných forem Hemolytická anémie nebo chybu v nastavení výzkum.

Pro zničení červených krevních buněk pacientů s paroxysmální noční hemoglobinurie středu při pH 6,5 vyžaduje povinné přítomnosti komplementu, obsažených v čerstvé sérum.

Saharoznaâ zkoušku s paroxysmální noční gemoglobinurii

Saharoznaâ vzorek je založen na, že jsou zničeny červené krevní buňky pacientů s paroxysmální noční hemoglobinurie a gemolizinovoj formou autoimunitní Hemolytická anémie v roztocích nízké iontové síly v přítomnosti komplementu.

Činidla.

1. Roztok sacharosy: 9,42 Sacharóza, v 0,005 M fosfatnom buffer; pH 6,2 (91 ml 0,005 M NaH₂PO₄ a 9 ml 0,005 M Na₂HPO₄).
2. Činidla pro stanovení koncentrace hemoglobinu: 200 mg červené krevní soli rozpuštěné v 1 l destilované vody, Zde přidejte 0,5 ml atsetontsiangidrina.

Metoda.

Krev pacienta, přičemž z Vídně do dvou zkumavek je suchý (8-10 ml) a s antikoagulační (2- 3 ml). Jako antikoagulans použít citrát sodný. Erytrocytů krevní kolekce trubek s antikoagulantem dvakrát praní izotoniceski roztoku chloridu sodného. Po praní peněz a supernatantu extrakci do 0,4 Přidat ml erytrocytů 0,25 ml z izotonický roztok chloridu sodného.

Ve stejné době brát krev dárce stejné skupiny krve do dvou zkumavek – s antikoagulační (2-3 ml), To je zacházeno stejným způsobem jako, jako krev pacienta, a suchý (8- 10 ml) Chcete-li získat sérum. Po oddělení dárce séra 0,5 ml, které se umístí do vodní lázně o teplotě 56 ° C 30 min pro inaktivaci komplementu. Dárce sérum by měl mít každodenní zkušenosti a udržujte v chladu. Program studia je uveden v tabulce.

Trubky jsou umístěny v termostatu na 30 minut při 37 ° C, a pak se odstřeďuje 10 minut při 2000 OT a posoudit míru hemolýze.

Postup: zkumavky se nalije 3,4 ml činidla pro stanovení koncentrace hemoglobinu a 0,6 ml na- sedimenty z každé zkumavky. Přes 10 min Změřte optickou hustotu roztoku do zkumavek s 540 NM na zdraví refraktometre (Spektrofotometr) nebo zdravotní kolorimetre (DEC fotokolorimetre-m) Když zelená hledí, porovnáním údajů získaných s optickou hustotu roztoku pro stanovení hemoglobinu. Má průměr dvou čteních každé zkušenosti. Výpočet se provede podle vzorce:

% in vitro hemolýza =((IS₁-IS₅)/(IS₈-IS₅))*100

kde E₁ -optická hustota roztoku v testu Trubicová č. 1; IS₅ -optická hustota roztoku v testu Trubicová č. 5, nezbytné vyloučit zbarvení sérum; IS₈ -optická hustota roztoku v testu Trubicová č. 8, kde 100 % hemolýze.

Pro vzorky cross-saharoznoj (-Č. 2) 100%-Th hemolýza in vitro je zkoumána č. 7.

Vyhodnocení výsledků.

Normální in-vitro č. 1, obsahuje červené krvinky zkoumat pacienta, hemolýza nepřesahuje 2-3 %.

V noci paroxizmalna gemoglobinurii a gemolizinovoj formě autoimunitní Hemolytická anémie (AIGA) v tomto vitro hemolýza přesahuje 6 % Do zkumavky č. 4, obsahující krev pacienta a dárce sérum inaktivirovannuû, zkumavky # 5, obsahující erytrocytů a séru dárce, a číslo 6, obsahující sérum namísto roztoku NaCl Izotonický – hemolýza by neměla přesáhnout 1-2 %.

Zkušební verze cross-saharoznaâ (-Č. 2) Když gemolizinovoj podobu AIGA obvykle pozitivní (za přítomnosti hemolysins v séru), ale to může být záporná. In vitro č. 3 (červené krvinky a séru pacienta) hemolýza viděné v APG, a v gemolizinovoj formě AIGA. V paroxizmalna noc gemoglobinurii maximální hemolýza je zjištěna v normálním saharoznoj vzorku (-Č. 1), méně výrazné – s vlastním vzorku buněk pacienta (-Č. 3); Žádná hemolýza vzorku cross-saharoznoj (-Č. 2).

Když gemolizinovoj podobu AIGA nejvíce výrazný hemolýza je zjištěn v vzorku s vlastní krevní sérum a erytrocytů nemocných (-Č. 3), poněkud méně výrazné – č in vitro. 1. In vitro č. 2 hemolýza je často pozorovány, ale nedostatek to nevylučuje forma gemolizinovuû AIGA.