Nasledstvennaya gemoliticheskaya anémie, vzhledem k aktivitě pyruvátkinázy nedostatek červených krvinek

Nasledstvennaya gemoliticheskaya anémie, Související erytrocytů pyruvátkinázy nedostatek - poměrně vzácná forma hemolytické anémie, který se dědí autosomálně recesivním způsobem, To dává klinické projevy u homozygotů, pokračuje se známkami intracelulární hemolýzy, Makrocytóza erytrocytů, nízký obsah draslíku. Existuje více než 200 případy homozygotní nosičů deficit piruvatkinaznoy činnosti.

Patogeneze

Pyruvát kináza je jedním z enzymů, uzavírání glykolýza. Tento odkaz glykolýza a ATP tvořil nikotinamiddinukleotid. Většina pacientů s deficitem pyruvát kinázy je snížena v obsahu červených krvinek těchto dvou metabolitů, V některých případech, je obsah ATP je normální, ale narušen stabilitu ATP během inkubace. Normální hladina ATP nalezené u výraznou retikulocytosou. To je způsobeno přítomností retikulocytů a možnost mitochondriální ATP nejen prostřednictvím glykolýzy, ale také v důsledku oxidativní fosforylace.

Důsledkem pyruvátu deficitu kinázy To je také hromadění výrobků glykolýzy, vytvořený na předešlých etapách - fosfofenolpiruvata, 3-fosfoglycerát, a zejména 2,3-diphosphoglycerate. Obsah piruvatanlaktata snížení počtu červených krvinek.

Nedostatek ATP v erytrocytech pyruvát kinázy deficitu To vede k narušení funkce ATP-aznogo čerpadla červených krvinek a ke ztrátě draselných iontů, vyznačující se tím, že koncentrace sodíkových iontů v erytrocytech nerostoucí. To způsobuje snížení obsahu jednomocných iontů v erytrocytech, dehydratace buňky a jeho smrštění. Tento jev se nazývá dessikotsitoz. Pokles v červených krvinkách vody komplikuje proces okysličení a kyslíku uvolňování hemoglobinem. V tomto ohledu, některá kompenzační úlohu, kterou hrají významnou akumulaci v erytrocytech 2,3-kyseliny difosfoglitserinovoy.

Afinita hemoglobinu ke kyslíku je snížen o jeho interakci s 2,3-diphosphoglycerate. Proto, při vyšších koncentracích k 2,3-diphosphoglycerate vrací kyslíku do tkání, je usnadněn.

Klinické projevy činnosti pyruvát deficitu kinázy

Klinické projevy deficitu pyruvát kinázy závislé na stupni hemolýzy. V některých případech, zvýšená hemolýza se projevuje při narození a je doprovázena výskytem těžké hemolytické krize, způsobující potřebu krevní transfuze, aby bylo možné hemoglobin udržet na úrovni sub-normální. V jiných případech, onemocnění může nastat prakticky asymptomatické s první známky zvýšené hemolýzy (subikterichnost skléry a kůže) ve věku 17-30.

Všeobecně; ve srovnání s microspherocytosis, pyruvát kináza má nedostatek závažnější.

Téměř všichni pacienti s hmatatelnou sleziny. Mírný nárůst ve svých zveřejněných některých anomálií heterozygotní nosiče, ačkoli oni mají anémii, obvykle, chybějící. Počet pacientů možné splenomegalii. Výrazný nárůst v játrech se vyskytují zřídka. V ojedinělých pacientů s identifikován bércové vředy.

Laboratorní ukazatele aktivity pyruvátu deficitu kinázy

Většina pacientů s deficitem pyruvát kinázy pozorován mírný anémie (4,34- 6,21 mmol / l, nebo 70-100 g / l), Nicméně, během krizového hemoglobinu může být snížena na 3,1 3,72 mmol / l (50-60 G / l). Obsah eritrotsitov- 2,5-3,0 T 1 l. Hemolytické krize může být způsobena infekcí. Existují případy, hemolýzy zisk během menstruace.

Červené krevní buňky u pacientů s deficitem pyruvát kinázy charakterizované makrocytózu s normohromiey, mírné anisocytóza a poikilocytóza. Tam byl spravedlivý polychromatophilia. Někdy našel mishenevidnye červených krvinek a červených krvinek s vroubkovaným hranami nebo ve formě Mulberry, často se identifikoval bazofilní erytrocytů punktatsiya, Jolly krvinky. U některých pacientů se v periferní krvi odhalila významné množství erythrokaryocytes, v průběhu krize, může být zvýšena až na 60 - 70 %. ESR, počet bílých krvinek, leukogram, krevních destiček v rozmezí normálních hodnot. Stejně jako u jiných forem hemolytické anémie, v kostní dřeni odhalila ostrý podráždění červená klíčků krvetvorbu.

Hladina bilirubinu, obvykle, vzrostl v důsledku nepřímé.

Plazma bez hemoglobin normální, ale může být snížené hladiny haptoglobinu. Hemosiderin v moči je nepřítomný. Obsah fetálního hemoglobinu a hemoglobinu A₂ v normálním rozmezí.

Osmotický odpor nedostatku erytrocyty pyruvát kinázy ve většině případů normálních, někdy snížena po dnech inkubace. Autogemoliz, obvykle, upgrade na různých stupních. Existují případy pyruvátkinázy deficitu s normálním autogemolizom. V první hlášeny případy nedostatku pyruvátkinázy byla zapsána typu II autogemoliza, koriguje přidávání ATP, a ne oprava nebo mírně korekci přidání glukózy. Následně, se v mnoha případech byl popsán s typem deficitem enzymu I autogemoliza nebo žádný. Proto se nedoporučuje používat metodu autogemoliza pro diferenciální diagnostice hemolytické anémie. Životnost červených krvinek s deficitem pyruvát kinázy je vždy zkrácena.

Typ dědičnost pyruvátkinázy aktivita autosomálně recesivní. Heterozygoti prakticky zdravých, Podle různých výzkumníků, závažnost deficitu se pohyboval v rozmezí od 50 na 70 % normy.

Diagnostické aktivita pyruvát-kinázy deficitu

Diagnóza pyruvátkinázy nedostatek červených krvinek lze očekávat dodat v případě hemolytické anémie, teče v průběhu let s nárůstem slezině, nedostatečné periferní krevní nátěry znaky microspherocytosis, elliptotsitoza a stomatotsitoza.

Kvalitativní testy pro stanovení aktivity pyruvát kinázy. Pro tento účel se běžně používá metoda fluorescenční barvivo, na základě, že v průběhu reakce, kataliziruemoy piruvatkinazoy, nikotinamiddinukleotid oxiduje a fluorescence zmizí.

Aktivita pyruvát-kinázy u zdravých jedinců v rozmezí od 4,0 na 7,7 mmol (min / 1010 erytrocyty) nebo 4,0 na 7,7 Síla. Většina homozygotní enzymové aktivity onemocnění méně 1 Síla. Nicméně, mohou nastat případy, mírnému poklesu aktivity enzymu. Diagnóza vzácná forma hemolytické anémie je velmi obtížné, a diagnóza může být provedena pouze ve studiu enzymové kinetiky.

Diferenciální diagnostika hemolytické anémie, spojené s nedostatkem pyruvát kinázy

Diferenciální diagnostika hemolytická anémie, spojené s nedostatkem pyruvát kinázy, nutné provádět další formy dědičné hemolytické anémie.

Vzhledem k tomu, u většiny pacientů s nedostatkem pyruvát-kinázy na rozdíl od jednotlivců, utrpení microspherocytosis, elliptotsitozom, stomatocitozom, hemolytická anémie, klimatizované kočár nestabilní hemoglobin, a thalassemia nemoci se dědí autosomálně recesivní, že tato patologie se nachází pouze ve stejné generace a téměř nikdy neviděl mezi rodiči.

Když dědičné anémie, klimatizované kočár nestabilní hemoglobin, zejména v těžké nemoci, někdy proband je prvním nositelem mutace, a pak onemocnění se přenáší na další generaci. Proto je diferenciální diagnostika musí být provedena s hemoglobinopathies, klimatizované kočár nestabilní hemoglobin, stejně jako recesivní zděděná hemolytická anémie, způsobené nedostatečnou aktivitou jiných enzymů.

To hraje podpůrnou roli stabilitu hemoglobinu, Yego elektroforéza. Chcete-li vyloučit další fermentopathia zkoumali aktivitu jiných enzymů erytrocytů, a vyloučit autoimunitní hemolytické anémie nesený Coombs, agregatgemagglyutinatsionnaya.

Fluorescenční metoda pro stanovení aktivity podle piruvatkiiazy Beutler

Činidla.

1. Kyselina Fosfoenolpirovinogradnaya (tritsiklogeksilammoniynaya sůl) 0,15 M roztok, neutralizována na pH 7,0 až 8,0 0,2 M roztok NaOH (0,03 ml).
2. ADF 0,03 M roztok, neutralizována (0,1 ml).
3. NAD-N 0,015 M roztok, neutralizována (0,1 ml).
4. Síran hořečnatý 0,08 M roztok (0,1 ml).
5. Se roztok fosfátového pufru draslíku 0,25 M, pH 11 7,4 (0,05 ml).
6. Distillirovannaya voda (0,62 ml). Tato směs může být skladován při - 20 ° C není větší než týden.

Metoda.

Pro výzkumné účely krev, užívat s heparinem nebo citrátem sodným. To se odstředí, aspirated a připravit plazma 20 % suspenze červených krvinek přidáním čtyř objemů izotonickým roztokem chloridu sodného.

Suspenze erytrocytů v množství 0,02 ml se smísí s 0,2 ml činidla a inkubovány po dobu 30 minut při 37 ° C. Kapička byla umístěna na filtračním papíru, a procházení fluoroskop. Základní fluorescence byla po přidání erytrocytů do směsi před inkubací okamžitě detekována. Obvykle po 30 min inkubace zmizí, a aktivita nedostatku ostatků pyruvátkinázy. Tohle je, NADH, která fluoreskuje pod vlivem UV záření v oblasti, V blízkosti je viditelný, vzhledem k tomu, NAD není fluoreskují. Vzhledem k tomu, je nestabilní a snadno degradován řešení výše, vyžaduje sledování. Měli byste si pečlivě oddělit vrstvu bílých krvinek, protože aktivita pyruvát-kinázy erytrocytů nedostatku aktivity enzymu v leukocytech může být normální.