Diagnóza imunologicky způsobeného neplodnosti

Během dlouhé manželství bez použití antikoncepce, a v přítomnosti mikroregionu sliznic v pohlavních orgánů může dojít postupně všimnout imunizační antigeny spermií. Fyzikální vyšetření manželů, spočívající v pusté manželství, nemůže určit příčinu neplodnosti v 10-15 % Případy. To je v této skupině neplodných manželů při použití speciálních metod vyšetřování tajné cervikálního kanálu, jsou často zjištěny protilátky sperma v plazmě a séru spermií (ASAT), Používá kvalitativní a kvantitativní testy imunologické výzkumu.

Postkoytalnыy zkouška (FCT)

Postkoytalnыy zkouška (FCT) To se odkazuje na kvalitativní imunotestem. Negativní výsledek ukazuje na nepřítomnost spermií v cervikálního kanálu tajemství, ale nemůžete identifikovat příčinu jejich nepřítomnosti.

Metoda. Podle počtu pohyblivých spermií v cervikální kanál tajemství, získané po pohlavním styku, zjistit rozsah porušení jejich pronikavost schopnosti s neplodností či imunitou jim hlenu z cervikálního kanálu.

FCT je nutné provést následující podmínky: Studie by měla být provedena v období ovulace, který odhalil colpocytologic nebo jiné metody, Po předchozí abstinence manželů během 2-3 dnů.

Metodice. Po obvyklém koitu pro ženu 30 minut by měl ležet na zádech, ohýbání kolena. Douching a vyčištění zakázáno, Potřebujete pouze hygienické vložky, která je odstraněna během zachycení pro studium hlenu děložního hrdla. Po 2-4 hodinách, přípustné a po 6-10 hodinách (doba, uplynula před zahájením studie, je uvedeno v analýze) po pohlavním styku čípek vystavena pomocí zrcadlo Cuzco a Endocervikální hlen sáním nebo tuberkulinovou stříkačkou (bez jehly), pipetu s gumovým balónkem, nebo polyethylen katétr.

Při praní přístroj by se neměly používat dezinfekční, protože ovlivňují pohyblivost spermií. Jedna kapka výsledné hlenu z cervikálního kanálu se převede do zahřátého sklíčko, potažené krycí sklíčko, Území mazána tekutým parafínem unikat. Formulace okamžitě mikroskopiruyut (okulár 7X, 40X cíl), určování počtu a charakteru pohyblivost spermií. Lék může být detekován s aktivním spermií progresivní motility, kmitavý pohyb (fenomén švihu) a pevná.

Přijato poskytovat pět typů závěry FCT.

• Vynikající (příslušné normy): v pěti oblastech zobrazení až 15-20 s aktivní spermií progresivní pohyblivostí a další. Spermie s fenoménem oscilace je nižší než 25 %.
• Uspokojivý: v pěti oblastech pohled nahoru 10 aktivní spermie progresivní mobility a méně 25 % spermie s fenoménem swingu.
• Chudý: méně 5 spermie v pěti zorném poli.
• Bez: absence spermií.
• Pochybné: v pěti zorném poli více 5 aktivní pohyblivých spermií a více 25 % fenomén švihu.

Když pátý typ FCT často pozoruje imunitní nekompatibilitu mezi manželi, proto nutné určit ACAT. K identifikaci ACAT tajného Endocervikální, plazma, sperma nebo krevní sérum a jejich zobrazení (aglutinační nebo znehybněn) To vyžaduje jmenování kvantitativních imunoanalýz.

Negativní PBC Studie začít s definicí pronikání (průnik) schopnost spermií přes razantní testu (Pá) a náchylnost k spermií sekreci cervikálního kanálu pomocí testovacího kontaktu spermií a hlenu děložního hrdla (TKSTSS).

Penetracionnyj zkouška (TP)

Tenká Délka kapiláry 10 Viz napsaný během ovulace hlenu z cervikálního kanálu. Jeden otevřený konec kapiláry uzavírá jíl, a druhý je umístěn do zkumavky s testovacím čerstvým ejakulátu (ne více 3 hodiny po ejakulaci). S jíl v kapiláře je připojen k svislé trubce. Vzorek se inkubuje v termostatu při teplotě 37 ° C. 1 žádná. Na kvalitu ejakulátu je posuzována podle hloubka průniku spermií v hlenu z cervikálního kanálu. Existují tři typy skleníkových plynů.

• Vyrovnávací - Hloubka penetrace (největší vzdálenost v centimetrech, ujetí nejméně jedna spermie) výše 5 cm; počet spermií v bodu maximálního proniknutí více 5 v dohledu, a počet pohyblivých spermií v horní třetině kapiláry je větší než 50 %.
• Pochybné - Hloubka penetrace až do 5 Viz menší počet spermií 5, jejich mobility v horní třetině kapilárních toku 50%.
• Bez - Hloubka průniku spermií toku 1 cm.

Schopnost spermií vůči průniku To záleží na fázi menstruačního cyklu. Začíná se vyjít z 9. den menstruačního cyklu,, Postupně aktivace, dosahuje své maximální exprese v době ovulace, konala na této úrovni po dobu dvou dnů, a pak postupně klesá.

Zkušební kontaktní sperma a poševní hlen (TKSTSS)

Na snímku je kladen malá kapka hlenu z cervikálního kanálu, převzato z žen během ovulace, a množství stejné velikosti kapky ejakulátu. Obě kapky jsou potaženy krycím sklíčkem, což je mírně stisknuté, připojen k poklesu. Droga se umístí do vlhké komory (Petriho miska vlhkým bavlněným hadříkem) a inkubují v termostatu při teplotě 37 ° C. 1 žádná.

Za těchto podmínek, normální spermie proniknout tajemství normální cervikálního kanálu, jak je možno vidět pod mikroskopem při zvětšení 200X. To odpovídá pro reakci v blízkosti hranice mezi dvěma médii počítá množství pronikající tajemství cervikálního kanálu spermií ve dvou sousedních zorném poli.

S vynikající TKSTSS ve dvou oblastech pohled odhalí více 25 aktivně pohyblivých spermií ve fenoménu swingu méně 25 %. Je-li uspokojivá TKSTSS ve dvou oblastech pohledu odhalil více 15 Aktivně pohyblivých spermií, TKSTSS v low - méně než 15. Negativní chybí penetrace TKSTSS, pokud sporný - fenoménem oscilace přesahuje 25 %.

V tomto testu, stejně jako v PCT, fenomén švihu, přesahující 25 %, pravděpodobný, To indikuje přítomnost ACAT a vyžaduje jmenování kvantitativních imunoanalýz.

S použitím spermatu a krční sekreci kanálů neplodné a plodné muže v různých množstvích na používání TKSTSS identifikovat neúrodné manžela.

• Příklad 1. Převzato tajnou kanál děložního čípku u žen neplodných párů a kontrola ejakulátu zdravých mužů. Vynikající TKSTSS indikuje slabou penetrační schopnost spermií manžela, a náchylnost normální sekrece cervikálního kanálu.
• Příklad 2. Převzato plné tajemství děložního hrdla zdravá žena a její manžel ejakulátu z neplodných párů. Bad TKSTSS naznačuje slabou penetraci spermií.
• Příklad 3. Přijatá tajné endocervikální ženy neplodné páry a řízení ejakulátu zdravých mužů. Bad TKSTSS označuje méněcennosti tajné cervikálního kanálu, což samozřejmě neproniknou normální spermie.

Kvantitativní imunologické testy

Mikroagglyutinatsionny zkouška Friberg

Mikroagglyutinatsionny zkouška Friberg (TF) dostatečně citlivé a je k dispozici pro klinické diagnostické laboratoře. Použití TF může určit přítomnost ACAT a aglutinačního titru v různých materiálech (plazma ejakulát, extrakty z hlenu děložního hrdla a v séru obou manželů).

Činidla:

1. Fyziologický roztok pufrovaný fosfáty (FSB) 0,01 М pH 7,2-7,4.

2. Vazelinovoe olej.

Vybavení: mikroskop, tuberkulin stříkačka, mikroagglyutinatsionnye pipety 1 ml, micropipette kapacita 0,1 ml.

Metoda. Krevní Testované sérum je inaktivován inkubací v inkubátoru při teplotě 56 ° C. 30 m. Ejakulát, získaný masturbací, ihned zředěna tak, že FSB, koncentrace spermií byla 40 milión. v 1 ml.

Vzhledem k materiálu, (plazma ejakulát, extrahovat tajemství cervikálního kanálu nebo séra) připravuje sérii ředění 1:4 na 1:128 použití jako kapalina pro ředění FSB. V jamkách s parafinový olej mikroagglyutinatsionnyh planšety tuberkulinové stříkačky se jehla zavedena (pod vazelinovoe oleje) Malé kapky každého zředění zkoušeného materiálu. Poté, co byl každý vzorek se promyje čtyřikrát stříkačky. V každé zředění se přidá k 5 krát menší pokles ejakulátu, a 4 h při teplotě místnosti detekována aglutináty. Poslední chov, přičemž pod mikroskopem při zvětšení 100X detekovaného 3 aglutinovat přezkoumávat a další, aglutinace množství odpovídá ACAT.

Spermoimmobilizuyuschy zkouška Izodzhima (SIT).

Titr imobilizující ACAT sérum, extraktu plasma nebo semen tajný cervikální kanál je dán počtem pohyblivých spermií v přítomnosti antigenů (spermie).

Komponenty.

1. Ejakulát, který je produkován a připraví podobně, pro TF pomocí FSB; pohyblivost překročit 70 %.

2. Komplementsoderzhaschaya sérum morčat.

3. Imunitní lidské sérum (ICHS), dávat v přítomnosti komplementu přes 1 h inkubace imobilizace 90 % spermie.

4. Normální lidské sérum (NCHS), inaktivována zahříváním na teplotu 56 ° C. 30 m.

5. Testovací inaktivované sérum, plazma a semeno extrahovat tajné cervikálního kanálu.

Metoda. Pro vyhodnocení aktivity doplňků znehybnění 1. trubice je zaveden 0,5 ml z izotonický roztok chloridu sodného, pro stanovení změn v pohyblivosti spermií bez AST 2. zkumavce - 0,5 ml NHS, regulace znehybnění Třetí trubka - 0,5 ml ICHS a určit ACAT znehybnění 4. trubice - 0,5 ml séra, nebo plazmy z ejakulátu, extrakt nebo sekrece endocervikální.

Potom se každá trubka je zavedeno 0,1 ml doplněk. Poslední věc, kterou do všech zkumavek se přidá 0,05 ml sperma suspenze v koncentraci 40 milión. v 1 ml. Zkumavky stativ byly umístěny v inkubátoru při teplotě 37 ° C 1 žádná. Trubice se vyjmou z pece a opatrně třepe, aby odrážel ustálený aglutinované spermie.

K vyhodnocení výsledků za vysokém zvětšení mikroskopu (400X) vypočteno procento pohyblivých spermií v kapce zkumavky, uloženy na podložní sklíčko a pokryta krytem. Stejně tak, nastaví procento pohyblivých spermií v kapičkách zkumavek s NHS a ICHS. Výsledek reakce v úvahu vzorce

SIT = K / A

kde K - počet pohyblivých spermií v ovládacím prvku s ICHS a NHS;

O - počet pohyblivých spermií ve zkumavce (Testované sérum, nebo plazmy z ejakulátu, nebo tajemství cervikálního kanálu).

S průměrnou SIT<2 je test negativní (počet pohybujících spermatických buněk v řízení a ve zkumavkách z přibližně stejný), V případě, že index CTI>2 - Test je pozitivní, T. to je. v materiálu (sérum, plazma nebo sperma extrahovat tajné cervikálního kanálu) jsou imobilizovány ACAT.

• Příklad 1. Pozemní kontroly na ICHS - 10 % pohyblivých spermií. Druhé řízení s NHS - 80% pohyblivých spermií. Tyto dva ovládací prvky společně - 90 % pohyblivých spermií. Ve zkumavce - 80 % pohyblivých spermií.

SIT = R / D = 90/80 = 1,1

Test je negativní, znehybněn ACAT chybí.

• Příklad 2. Ve zkumavce - 40 % pohyblivých spermií, Nicméně, v kontrole, v příkladu 1.

KN = 90/40 = 2,2

Test Pozitivní. Je zde imobilizovanou protilátku (ASAT), jehož prostřednictvím pohyblivost spermií významně snížena.