Anémie, spojených s nedostatkem kyseliny listové

Ať už je důvod listové Nedostatek kyseliny anémie je charakterizována výskytem v megaloblasts kostní dřeně, nitrodřeňové zničení erythrokaryocytes, patsitopeniey, Makrocytóza a hyperchromia červené krvinky a někdy - duševní poruchy.

Folievaya (pteroilglutaminovaya) kyselina (vitamín B₉) Skládá se ze tří složek:

• pteridin kroužek;
• P-aminobenzoová kyselina (dohromady tvoří kyselinu pteroievuyu);
• kyselina glutamová.

Molekulová hmotnost kyseliny listové - 441. Kyselina listová je aktivní ve formě derivátů kyseliny tetrahydrofolových. Obsah kyseliny listové v různých formách v lidském těle, je asi 5 až 10 mg. Zásoby v rozporu s jeho vstupu do těla mohou být vyčerpány v průběhu 4 měsíce.

Denní potřeba kyseliny listové je 100-200 mikrogramů, Těhotenství, hemolytická anémie, zvyšuje mnohonásobně.

Celkové množství kyseliny listové v potravě s plným výkonem 500-600 mikrogramů denně. Folate - foláty obsažena ve značném množství v játrech, droždí, špenát, maso. Více 50 % kyselina listová, v potravinách, To může být zničen při vaření.

Kyselina listová je absorbována v horní části tenkého střeva. Schopnost střev absorbovat kyselinu listovou, je mnohem vyšší, než jeho denní potřeby.

Kyselina listová se podílí na syntéze pyrimidinových a purinových bází, spolu s methylcobalamin - syntézou uridinmonofosfata timidinm nofosfata. Folate koenzymy Více zapojit v řadě reakcí. Zejména, tetrahydrofolát se podílí na syntéze kyseliny glutamové histidinu.

Etiologie a patogeneze anémie při deficitu kyseliny listové

Nedostatek kyseliny listové, jakož i deficit kobalaminu, To vede k vývoji megaloblastickou anemií.

Malabsorpce folátu pozorováno u jedinců, resekce tenkého střeva, především jejunum, stejně jako v dlouhodobé užívání antikonvulziva, jako difenylhydantoin (difenina) a fenobarbital (luminal). Příjem kyseliny listové je přerušeno, když je sprue a celiakie. Nedostatek kyseliny listové, jakož i deficit kobalaminu, pozorována Syndrom slepé smyčka. Popsaný vzácné případy dědičných poruch kyseliny listové transport přes střevní stěnu a do mozkomíšního moku. Absorpce dalších látek, aniž by utrpěl.

Nedostatek kyseliny listové u novorozenců pozorováno u předčasně narozených dětí, porušení střevní absorpce, FED kozí mléko, obsahující malé množství kyseliny listové.

Významnou malabsorpce kyseliny listové se může vyskytnout u pacientů, alkoholici.

Zvýšená spotřeba kyseliny listové v průběhu těhotenství To může vést k nedostatku kyseliny listové, Nicméně, ve vyspělých zemích dnes to je vzácné. Nedostatek kyseliny listové u těhotných žen se nachází v nízkém výkonu, přítomnost hemolytická anémie, použití před těhotenstvím velké množství alkoholických nápojů.

Klinické projevy nedostatku kyseliny listové

Nedostatek kyseliny listové u dětí a mladých žen. Ve stejné době, pacienti stěžují na celkovou slabost, závrať. Na rozdíl od deficitu kobalaminu bolavý jazyk vzácně pozorována. Parestezie a jiné známky lanové myelosis chybí. Skléry často ikterichnost.

Na rozdíl od deficitu kobalaminu deficience kyseliny listové, je jen zřídka pozorovaná gistaminoupornaya Akhil, gastratrophia, i když snížení žaludeční sekrece, je často.

Pro nedostatku kyseliny listové, jakož i pro nedostatek kobalaminu, charakterizovány výskytem v makrocytózu periferní krvi, megalocitov a megaloblasts, přítomnost hyperchromický anémie, snížení počtu retikulocytů, krevních destiček a leukopenie se neutrofilním posunu doleva a doprava. V kostní dřeni - megaloblasts.

Změny v nervovém systému se liší od projevů na B₁₂-nedostatek anémie.

Prokázané, že osoby s epilepsií, Nedostatek kyseliny listové vede k častým útokům, k jejich větší závažnosti. To je důležité zejména vzhledem ke skutečnosti,, že s antikonvulziva mohou způsobit malabsorpci folátů. Podle literatury, u jedinců s deficitem schizofrenie Kyselina listová vede ke zhoršení nemoci, vážnější příznaky a méně účinná léčba.

Diferenciální diagnostika kobalaminu deficitu a kyseliny listové

Pro diferenciální diagnostiku kobalaminu deficitu a kyseliny listové se používá Způsob radioimmunoassay pro stanovení kyseliny listové v séru, a to zejména v erytrocytech. Obsah kobalaminu je určena mikrobiologickou metodou. Jako zkušební organismus používané jako Streptococcus faecalis a Lactobacillis casei. Za normálních okolností, obsah kyseliny listové v krevním séru rozsahy, Podle autorů, použití různých výzkumných metod, z 3 na 25 ng / ml, a erytrocytů - od 100 na 425 ng / ml.

Při nedostatku kyseliny listové se snižuje jako úroveň séra, a v erytrocytech. Obsah kyseliny listové u deficitem kolabaminov v krevním séru často stoupá, a erytrocytů může někdy být snížena, ačkoli pokles, obvykle, malý.

Pro diagnózu deficitu kyseliny listové je také používán Metoda zatížení histidin (15 g), pak definovat obsah kyseliny v moči formiminglutaminovoy. Normálně, většina z forem kyseliny glutamové histidin. S výstupem moč 1-18 mg kyseliny formiminglutaminovoy. Na nedostatku kyseliny listové pro 8 hodin po jeho zavedení do organismu je uvolněn z moči 20 na 1500 mg kyseliny formiminglutaminovoy. Značný počet kyseliny formiminglutaminovoy vyloučí v moči po podání histidinu u osob, neléčených methotrexátem. Na nedostatku kobalaminu, cirhóza jater vylučování kyseliny zvyšuje formiminglutaminovoy, v menší míře, než s deficitem kyseliny listové. Normální hladina močových Methylmalonová obsahu kyseliny zvyšuje formiminglutaminovoy histidin Kyselina po obdržení důkazy o nedostatku kyseliny listové, namísto kobalaminu.

Pomáhá rozlišit tyto dva státy a studium radionuklidů. Na nedostatku kobalaminu, spojené s porušením sekrece vnitřnímu faktoru, zhoršená absorpce značeného kyanokobalaminu, nedostatek kyseliny listové, je správně absorbován.

Na nedostatku kyseliny listové, jeho zavedení do těla vede k vyššímu obsahu retikulocytů, vzhledem k tomu, injekcí kyanokobalaminu (deriváty) neúčinný. Listová Nedostatek kyseliny methylcobalamin zvyšuje hladinu retikulocytů.

Definování index segmentace neutrofily

Spočítejte počet neutrofilů, s 4 segment a více (Celkem 200 buňka). Určit procento buněk, s 5 segmenty a více, vztaženo na množství buněk, s 4 segment. Index je stanovuje podle vzorce:

IS =(KS (5 a více))/KS(4);

kde IC - index segmentace;

KS (5 a více) - Počet segmentových neutrofilů (na 200 buňka), ve kterém je počet segmentů se rovná 5 nebo více;

KS (4) - Počet segmentových neutrofilů, ve kterém je počet segmentů se rovná 4.

Za normálních okolností tento index rozsahy 2,5 na 25 %. Kde, jestliže přesáhne 30 % (oscilace 120%), Můžete mluvit o hypersegmentace neutrofilů. Uvedl, nedostatek kyseliny listové, metilkoʙalamina, a uremia.

Stanovení kyseliny methylmalonové v moči u Giordio a Plaud

Činidla.

1. Anex Dowex-Zx4 (Formulář chlorid, 200-400 Mesh). Pryskyřice byla promyta pěti objemy destilované vody 3 doba, se suspenduje ve dvou objemech destilované vody a uloženy v tmavém misce při teplotě 4 ° C.

2. Roztok p-nitroanilinu 0,075 % připraví rozpuštěním 37,5 mg činidlo 500 ml 0,2 M roztoku kyseliny chlorovodíkové. Skladujte v tmavém hrnci, To zůstala stabilní po dobu několika měsíců při teplotě místnosti.

3.Acetátový pufr (pH 4,3) z 1 M octanu sodného a 1 M roztok kyseliny octové.

4.Diazoreaktiv: 4 ml 0,5 % dusičnanu sodného, ​​roztok se smíchá s 15 ml para-nitroanilin. Směs se umístí v chladničce při 4 ° C a byl přidán ochlazený roztok 4 ml 0,2 M octan sodný. Reagent stabilitu při teplotách 4 ° C po dobu jednoho dne.

5.Normální 0,05 M roztok kyseliny methylmalonové: 295 mg kyseliny methylmalonové se rozpustí v 50 ml vody.

Metoda

Moč se shromažďovala do skleněné láhve a zmrazený až do studie. Pro studium nabíjecí část moči (20- 25 ml), rozmražené, tsentrifugiruyut, a supernatant byl shromážděn pomocí slabý roztok hydroxidu sodného nebo kyseliny chlorovodíkové k úpravě pH 6,5.

Chromatografická výška sloupce 20 cm a průměr 1 cm byla naplněna pryskyřicí Dowex-Zx4. Pryskyřice vrstva by měla být v rámci 3 cm. Prochází pryskyřici 5 ml moči, promyje se destilovanou vodou (2 × 50 ml v množství ne více než 15 ml 1 z). Kyseliny methylmalonové může být eluován z pryskyřice 20 ml 0,1 M roztoku kyseliny chlorovodíkové. Další 2 ml eluátu se smísí s 3 ml 1 M acetátový pufr pH 4,3 ve zkumavce se skleněnou zátkou (15×2cm). Ke směsi se přidá 3 ml studený diazoreaktiva, vyznačující se tím, pH se zvýší na 4,0. Směs se zahřívá na vodní lázni při teplotě 94 ° C. 3 min a 2 ml 3 M roztoku hydroxidu sodného. Trubice byla potom odstraněna z vodní lázně, uzavře a obsah byl míchán. Reakční směs se zchladí na teplotu místnosti za 10 min a při fotometriruyut 620 nm v kyvetě se délka dráhy 1 cm.

Jako kontrola, směs, skládající se z 2 ml 0,1 M roztoku kyseliny chlorovodíkové, 3 ml a diazoreaktiva 3 ml acetátového pufru. Standardní roztok kyseliny methylmalonové se skládá ze stejných komponent a 0,02 ml 0,05 M roztok kyseliny methylmalonové. Absorbance těchto roztoků byly měřeny za stejných podmínek.

Obsah kyseliny methylmalonové (mg) na jednotku objemu moči (1 l) definována vzorcem:

(IS_Vzorek-IS_ovládání)/(IS_standard-IS_ovládání)*A*((1000*T)/M)

kde E - absorbance různých vzorků;

A - množství kyseliny methylmalonové ve standardní zkumavky, ml;

1000 - Množství moči, přijata pro výzkum, ml;

T - množství kyseliny chlorovodíkové, považována za vymytí, ml;

M - počet eluátu, přijata pro výzkum, ml.

Za výše uvedených podmínek, vzorec lze zjednodušit takto::

(IS_Vzorek-IS_ovládání)/(IS_standard-IS_ovládání)*236

Kde, když je množství kyseliny methylmalonové v moči vyšší než 300 mg / l, by měly být znovu smíchán s acetátu vyrovnávací eluátem a diazoreaktivom, ale místo toho 2 ml eluátu je účelné, aby se 4- 10 krát nižší a doplňte na objem 2 ml 0,1 M roztoku kyseliny chlorovodíkové. Při výpočtu by mělo brát v úvahu ředění.

Za normálních okolností denně s výkonem moči 0,6-4,7 mg kyseliny methylmalonové. Při nedostatku kobalaminu denně vylučování kyseliny metylmalonové sáhne 294 mg. Za normálních okolností, recepce 10 g valin nezvýší clearance kyseliny methylmalonové, nedostatek kobalamin zvyšuje vylučování kyseliny methylmalonové.

Stanovení kyseliny methylmalonové v moči u Green

Činidla.

1. Ether.
2. Ethanol.
3. Roztok kyseliny chlorovodíkové 0,1 M.
4. Síran amonný.
5. Silná základna pryskyřice deatsidit FF (200 pletivo, Formulář chlorid).
6. Roztok dusičnanu sodného 0,5 % (hmotnost / objem).
7. Roztok p-nitroanilinu (750 mg rozpustí v 1 l 0,2 M roztoku kyseliny chlorovodíkové).
8. Octan sodný 0,2 M.
9. Acetátový pufr 1 M, pH 4,3: smíšený 1 M roztoku octanu sodného a 1 M roztok kyseliny octové v poměru 16,35:33,9.
10. Vodný roztok hydroxidu sodného 3 M.

A. Standardní roztok kyseliny methylmalonové: 100 mg rozpustí v 100 ml vody, uchováván v chladničce.

B. Pracovní standardní kyseliny metylmalonovou: Standardní roztok ředí 20 doba 0,1 M roztoku kyseliny chlorovodíkové (1 ml standard a 19 ml kyseliny chlorovodíkové). Toto množství ekvivalentu kyseliny methylmalonové 100 mg kyseliny methylmalonové 1 zkušební podmínky l moči.

Pro přípravu směsného diazoreaktiva 4 ml 0,5 % dusičnanu sodného a 15 ml para-nitroanilin. Směs se umístí do ledové lázně a přidejte 4 ml 0,2 M octan sodný.

Metoda.

Moč se shromažďovala po dobu jednoho dne, měřeno jeho objemu a 10 ml podkislyayut 1 M roztoku kyseliny sírové na pH 2,0 nebo mírně pod. Byl přidán síran amonný až do nasycení. Směs se umístí do dělicí nálevky a extrahuje se třikrát etherem a ethanolu v poměru 3:1. Aby se zabránilo tvorbě emulze extrakčního směsi použité v přebytku.

Extrakt se nechá projít malým sloupcovou chromatografií (1 – 1,5 cm průměr), dokončený 5 ml pryskyřice. Kolona byla promyta 50 ml destilované vody. Kyselina methylmalonové vymývá 0,1 M roztoku kyseliny chlorovodíkové. Po eluci vybrán 2 ml eluátu, W se přidá ml acetátového pufru, a 3 ml diazoreaktiva.

Po smísení se zkumavka byla umístěna do vodní lázně při teplotě 95 ° C 3 m. Potom se přidá 2 ml 3 M hydroxidu sodného a jednou uzavřené trubice zátkou, aby se minimalizovalo styku se vzduchem. Po ochlazení se absorbance byla měřena při vlnové délce 620 jim. U polotovaru namísto použití eluátu 2 ml 0,1 M roztoku kyseliny chlorovodíkové, a pro standardní roztok - 2 ml pracovní normy.