Paroxysmal nattlig hemoglobinuri – Sjukdom Marchiafava Michele

Paroxysmal nattlig hemoglobinuri är förhållandevis sällan hittat förvärvad hemolytisk anemi, i samband med ändring av strukturera av erytrocyter, Neutrofil granulocyt och trombocyter. Flöden med tecken på intravaskulära hemolys, där det finns hemoglobinuria, gemosiderinuriya, öka på nivån i plasma fritt hemoglobin. Sjukdomen kompliceras ofta av perifera vener och vaskulär trombos inre organ.

Etiologi och patogenes för paroxysmal nattlig gemoglobinurii

Den första beskrivningen av sjukdomen fick i 1882 g. Den beskrevs mer ingående i 1928 g.

Det gemensamma namnet på sjukdomen är paroxysmal nattlig hemoglobinuri (APG), Men matchar det verkligen lite sjukdomen, eftersom det finns observeras ingen närvarande paroxysmal hemoglobinuria inte alltid.

Intravaskulära hemolys med gemosiderinuriej i tillägg APG observeras i många former av autoimmun hemolytisk anemi som med värme, och med kall antikroppar, särskilt när former med värme gemolizinami, liksom i vissa former av ärftlig hemolytisk anemi, relaterade till brott mot membranstruktur erytrocyt.

Sjukdomen Markiafavy-Micheli observeras vid olika åldrar. Ökad destruktion av röda blodkroppar beror på erytrocyter sig defekt.

Röda blodkroppar hos patienter med PNH, som nämnts ovan, komplementom lätt komprimera när du skapar optimala förutsättningar för dess giltighet, eller när försurning serum, eller när du ökar koncentrationen av komplement runt erytrocyt genom att skapa låg koncentration joner i saharoznoj onsdag. Röda blodkroppar hos patienter med PNH har förhöjd känslighet för effekterna av antikroppar som AB0, och, speciellt, hemolysins.

När PNG påverkar inte bara röda blodkroppar, men leukocyter och trombocyter av patienten. Trombocyter och leukocyter av patienter med PNH har en ökad känslighet för effekterna av ett komplement som när försurning serum, och onsdag med sackaros låg jonstyrka. De är många gånger mer känsliga för effekterna av izoagglûtininov, än givaren trombocyter och leukocyter. Sålunda, blodplättar och vita blodkroppar har samma defekt i membranet, som och röda blodkroppar.

Påvisa antikroppar på ytan av röda blodkroppar, leukocyter och trombocyter och därmed bevisa medlemskapet i APG för autoagressivnyh grupp av sjukdomar kan inte vara de mest känsliga metoderna.

Det finns övertygande bevis för existensen av två skilda populationer av APG i erytrocyter. De mest resistenta cellerna i en frisk person är en reticulocyte APG är de mest utsatta. Detta tyder på att, den patologiska röd blod cell befolkningen helt enkelt överlevde inte till mognad, och äldre mogna erytrocyter avser friska eller nästan friska befolkningen.

IN 1970 i studien av erytrocyt Latina, drabbade PNG, Det upptäcktes, att de innehåller, som med friska mulatt kvinnor, elektrofores varianter av två normala Mr 6-FD; Variant en, vanligt bland människorna i Afrika, och alternativet i, typiskt för befolkningen i Europa. Efter att ha tillbringat hemolys vände, att onormala röda blodkroppar innehåller bara ett alternativ Mr 6-FD, och normala röda blodkroppar — både genom elektrofores varianter av g-6-PD. Därför, lyserat röda blodkroppar härstammar från en enda cell.

Detta faktum med stor noggrannhet indikerar förekomst av två populationer av erytrocyter, olika inte bara funktionellt, som, t.ex, på mikrosferocitoze, men också av ursprung: med andra ord, Det bekräftar närvaron av patologiskt klon celler, t. det är. somatisk mutation. Identitet av erytrocyt membran lesioner, neutrofiler och trombocyter tyder på att, den patologiska informationen sannolikt blir buren, Nästa för stam, t. det är. föregående cell mielopoèza. Blastomnyj tillväxt för PNG är inte specifik. Beskriva endast enstaka fall av snabb utveckling av leukemi på en bakgrund PNG. Icke desto mindre, Vi kan anta, att PNG är en variant av benign tumör i blodomloppet, under en lång tid, producerar ingen tumör cellproliferation, Kännetecken för andra former av leukemi.

Mekanismen för Komplementčuvstvitel′Nosti utveckling i PNG medan oklart.

Signifikanta förändringar i aktiviteten av enzym i Glykolysen och pentozno-fosfat cykeln inte.

När PNG minskad aktivitet av acetylkolinesteras av erytrocyter, troligen på grund av avbrott av strukturera av röda blodkroppar membran, eftersom enzymet ligger på membran yta och lätt bruten när dess nederlag. Kända, att användningen av acetylkolinesteras-hämmare har ingen effekt på överlevnad av erytrocyter. Men har nedgången av acetylkolinesteras aktivitet också observerats i andra former av hemolytisk anemi, Därför kan inte förklara fenomenet med ökad komplementčuvstvi- Blemen.

Det finns bevis, bevis på ökningen av antalet av omättade fettsyror, ingår i strukturera av fosfolipider, erytrocyt membran. Det finns en möjlighet, att förändringar i lipider – är endast en återspegling av andra ändringar i strukturera av röda blodkroppar membran. I studien av protein av erytrocyt membran av patienter med PNH i polyakrylamid gelelektrofores i närvaro av natrium dodecilsulfata anger, som i ett antal fraktioner av proteinhalten skiljer sig väsentligt från kontrollen.

Den huvudsakliga rollen i patogenesen av trombotiska komplikationer i APG nedflyttade vnutrisosudistomu nedbrytning av röda blodkroppar och koagulering faktorer stimulering, frigörs från erytrocyter vid sin upplösning. När APG förstörde mestadels reticulocyte, kanske, Detta och bör förklara frekvensen av trombotiska komplikationer i denna sjukdom, till skillnad från andra former av hemolytisk anemier, tillsammans med en uttalad intravaskulära hemolys.

Kliniska manifestationer paroxysmal nattlig gemoglobinurii

Sjukdomen börjar ofta med ett gny. Patienterna klagar på svaghet, sjukdomskänsla, yrsel. Ibland konstaterar subicteric skler. Ofta de första klagomålen av huvudvärk, ont i magen av olika lokalisering. En tendens till ökad trombos bildas orsakar patienten att söka läkare. Hemoglobinuria ganska ovanligt är det första symtomet på sjukdomen och vissa patienter för APG kan vara frånvarande på alla. I vissa fall verkar det för första gången genom 2-3 år och även genom 10 år efter debuten av sjukdomen.

En av de karakteristiska dragen i PNG-anfall av smärta i buken. Lokalisering av det kan vara mycket olika. Utanför perioden av Götes magont, vanligen, inte observerats. Ofta går den kräkningar. Troligtvis, buksmärta hos patienter med PNH är associerad med DVT mesenteriala fartyg.

Perifer vaskulär trombos (mer ofta än inte — venerna i övre och nedre extremiteter, minst-njure fartyg) också karakteristiska symptom paroxysmal nattlig gemoglobinurii. I 12 % APG patienter observeras throm. Tromboemboliska komplikationer är den vanligaste orsaken till dödsfall i denna sjukdom.

När ett mål studie av den patienten ofta anmärkningsvärt blekhet med en liten touch av želtušnym. Ofta finns det ansikts svullnader, ibland överdrivna fyllighet. Kanske en liten ökning i mjälten och levern, Det är inte typiskt för APG.

För paroxysmal nattlig gemoglobinurii kännetecknas av tecken på intravaskulära hemolys, varav de viktigaste är ökad plasma fritt hemoglobin. Detta ämne regelbundet nästan alla patienter för APG. Men graden av ökning av plasma fritt hemoglobin varierar och beror på, i vilken period av sjukdom studie. Under krisen av denna andel ökar betydligt, Det har också skett en ökning av antalet metal′bumina plasma.

Plasma fritt hemoglobin nivå beror på graden av hemolys i ögonblicket, innehåll gaptoglobina, grad av filtrering av hemoglobin i urinen och hastigheten på förstörelse komplexa hemoglobin-haptoglobin. Vid en liten grad av hemolys kommer fritt hemoglobin i plasmanivåer inte att räcka att filtrera det genom njure filtret. Hemoglobinuria är därför inte obligatoriska symptom sjukdom. När passerar genom canaliculi nefronov utsöndras av hemoglobin är delvis förstörd och deponeras i tubulära epitelet. Detta är anledningen till att urinen hemosiderin.

Försedd med urin hemosiderin i den överväldigande majoriteten av patienter med paroxysmal nattlig hemoglobinuria. Gemosiderinuriâ visas ibland inte omedelbart. Detta är en viktig, men inte är specifika för PNG tecken på sjukdom.

Laboratoriet parametrar i paroxizmalna natt gemoglobinurii

Hemoglobin hos patienter med PNH varierar från 1,86 — 3,1 mmol / l (30-50 G / I) och ännu mer låg till normal under remissioner.

Antalet erytrocyter hos patienter med PNH minskar nivån av minskning av hemoglobin. Färg lampan längre fortsätter nära enhet. Var, Om patienten förlorar betydande mängder av järn med urinen i form av hemosiderin och hemoglobin, järn gradvis minskar. Indikator för låg färg observeras i cirka hälften av patienterna. Några av dem har förhöjda hemoglobin nivåer (P), särskilt under tider av ökade.

En stor del av patienter innehåll ökade reticulocyte, men den relativt låga (2- 4 %). Antalet leukocyter i PNG i de flesta fall minskas. Många patienter är det 1,5-3 gram 1 l, men ibland reduceras till 0,7-0,8 g 1 l. Leukopeni, vanligen, Det är genom att minska antalet neutrofila granulocyter. Ibland blod i APG normal eller hög – upp till 10-11 g 1 l.

När APG minskar neutrofila fagocytos aktivitet av granulocyter.

Trombocytopeni också vanliga i PNG, Dock det funktionella tillståndet av trombocyter i normal. Förmodligen, Detta förklarar sällsynthet av blödning komplikationer när denna sjukdom, Även om blodplättsräkning ibland minskas betydligt – upp till 10-20 g 1 l. Vanligt i de flesta patienter trombocyter 50 — 100 g 1 l. Normala blodplättsräkning utesluter inte en diagnos av paroxysmal nattlig gemoglobinurii.

I studien av benmärg identifierade symtom, främst kännetecknar hemolytisk anemi är en röd irritation grodden blodbildning i normala nummer mielokariocitov. Hos vissa patienter har en liten minskning av antalet Megakaryocyte.

Nivån på serum järn i PNG Det beror på scenen av sjukdomen, grad av intravaskulära hemolys och aktiviteten av blod. Var, Om patienter har konstant eller ofta hemoglobinuria, Förutom den ständiga gemosiderinuriâ, innehållet av järn i kroppen, och sålunda, och minskningar i serum, ibland betydligt. Ibland börjar PNG med tecken på hypoplastiska. Järndepåer i kroppen av patienten APG beror, en sida, från järn förlust i urinen, och, å andra sidan intensiteten av erytropoes. Därför kan du inte ta järn brist diagnostiskt tecken av paroxysmal nattlig gemoglobinurii.

Nivå av serum bilirubin i PNG i de flesta fall, ur fokus ökade eller normal, främst genom indirekta. Den genomsnittliga halten av bilirubin är 22-28 μmol/l. Det bör beaktas, att när hemoglobin hemoglobin bildade förfalla vnutrisosudistom-gaptoglobinovyj komplex, Vem och så småningom också bryter upp med bildandet av bilirubin.

Vissa patienter med PNH sjukdom börjar med målningar av aplastisk anemi.

Diagnos av paroxysmal nattlig gemoglobinurii

Om paroxysmal nattlig gemoglobinurii shell struktur av erytrocyter är trasig, vilket återspeglas i den höga graden av känslighet för effekterna av hennes komplement. Denna överkänslighet upptäcks med hjälp av antingen Hema prover, eller mer känsliga saharoznoj prover. I vissa fall kan dock, särskilt i gemolizinovoj form av autoimmun hemolytisk anemi, saharoznaâ provet kan ge ett falskt positivt resultat. Gemoliziny är fasta på ytan av sina egna röda blodkroppar och i närvaro av komplement i saharoznoj onsdag förstörde deras, Medan PNG kännetecknas av förstörelsen av celler komplementom utan exponering för antikroppar.

För att utesluta form rekommenderas gemolizinovoj autoimmun hemolytisk anemi studien hemolysins som beskrivs ovan och med cross-saharoznoj med serumprov från patient och donator odnogruppnogo erytrocyter, och inte tvärtom, som brukligt. När APG direkt prov är positivt, och cross-negativa. När gemolizinovoj form AIGA kan uppstå som en positiv, och negativt cross-prov. I dessa fall är det tillrådligt att använda de tredje alternativet saharoznoj proverna – med hjälp av både serum, och röda blodkroppar av patienten. Graden av hemolys i denna variant ett minimum när PNG och maximal gemolizinovoj form av AIGA. Förklara ett sådant resultat kan endast vara mycket specifika antikroppar i serum hos patienten gemolizinovoj form av autoimmun hemolytisk anemi till Antigen, finns i stora mängder i erytrocyterna för sjuka, än i erytrocyter av givare. Direkt positivt prov saharoznaâ dessa patienter är associerad, förmodligen, med förekomsten av erytrocyter fast antikroppar.

Påvisande av hemolysins metod agregatgemagglûtinacii och andra hjälper sätta rätt diagnos. Kan inte användas som en givare serum från patienter, som i fallet med gemolizina får innehåll resultatet inte vara ložnopoložitel′nym. Ett negativt resultat kan uppstå, Om källan använder patientens serum komplement APG eller patientens serum levern skrumplever, Reumatoid artrit, Systemisk Lupus Erythematosus och andra sjukdomar, i vilka komplement minskar. Saharoznaâ prov och prov Hema blir mindre uttalad, Om du tar blod från en patient som antikoagulantia heparin används, i stället för natriumcitrat. Efter hemolytisk kris intensitet prov Hema och saharoznoj prov reduceras, men de blir inte negativa.

Definitionen av gratis plasma hemoglobin i Bing Derviz ändring metod och Bâlko med paroxysmal nattlig gemoglobinurii

Metoden är baserad på hemoglobin förmåga att reagera med syra-benzidin onsdag i närvaro av väteperoxid med bildandet av den gröna färgämnen, rullande först i blå, och sedan i en röd-lila. Intensitet är proportionell mot antalet hemoglobin.

Reagens.

1. Acetatbuffert 0,1 M, pH 4,6: 27,22 g natriumacetat upplöst i 1 l vatten (0,2 M lösning av); i en annan mätning lampa Cook 1 l 0,2 M lösning av uksousnokisloy.; blandad 480 ml nr. 1 och 520 ml nr. 2.
2. Väteperoxid 0,3 % lösning (förbereda före användning genom avel en lösning i 100 tid).
3. Solânokislyj benzidin 0,1 % lösning: 50 mg solânokislogo benzidin upplöst i 35-40 ml acetatbuffert, Värm lösningen på 80 ° C i ett vattenbad och efter avkylning, få acetatnym bufferten till 50 ml.

Filtrerkolven och förvaras i mörker vid rumstemperatur mer än 7 dagar. Gulnade reagens är olämplig, Snabb potemnenii du måste perekristallizovat′ benzidin från alkohol.

Metod.

Blod för studier från vener torr nål i ett silikonirovannuû rör, innehåller någon antikoagulant. Blod med antikoagulans centrifugeras inte mer 10 minuter vid 1500 / Min. Efter avskiljandet av dess plasma Centrifugera igen för 10 minuter vid 8000 RPM för nedfall av leukocyter.

I provröret fylls 4 ml acetatbuffert, 2 ml väteperoxid, 2 ml benzidin och 0,04 ml testserum blandas och kvar att stå 3 m, Häll sedan i den optiska ljuspassagelängden kuvetten 1 se och fotometriruût mot en ersättning lösning på gröna visor. Intensiteten i blått färga ökar under 4-5 minuter, Därför, mätning av upprepa 3 - 5 gånger i rad och spela in de maximala avläsningarna. Efter 5-6 minuter blir färg serum lila-brun nyans, och optisk densitet värde börjar att minska. Två identifierade maximalt resultat den optiska densiteten av medlet tas.

Ersättning lösning, bestående av 6 ml acetatbuffert, 8 ml väteperoxid, 3 ml benzidin och 0,06 ml isoton natriumkloridlösning, Förbered samtidigt med.

Kalibrering curve display på en lösning av hemoglobin. I blodet, för lösning av hemoglobin, mäta dess innehåll (på den medicinska kolorimetre eller medicinsk refraktometre). Bered en lösning av hemoglobin koncentrationen 1 g / I, av det bereds lösningarna av lägre koncentration: 0,005,0,025, 0,05, 0,1 och 0,2 g / I. Varje resulterande lösning Lägg 0,04 ml av en blandning 4 ml acetatbuffert, 2 ml benzidin och 2 ml väteperoxid.

Den viktigaste lösningen gemolizata (1 g / I) för kalibrering ska buktar förvaras i kallt väder, och arbetar lösningar lägre koncentrationer bör förberedas omedelbart före undersökningen.

Normalt i 1 liter blodplasma innehåller 0,0005 mmol / l (0,01-0,04 G) Hemoglobin.

Definition av hemosiderin urin med paroxysmal nattlig gemoglobinurii

Nedbrytningen av hemoglobin järn it adsorberat renal tubulär epitel och är en del av hemosiderin. Sluŝennye celler av renal tubulär epitel i dessa fall innehåller korn av hemosiderin.

En noggrann studie av urinen sediment efter centrifugering korn hemosiderin synliga och utan speciell färg. Men de sticker ut mer tydligt när färg i Perlsa metoden.

Metod.

Efter centrifugering urin översta lagret sugas ut, djupgåendet lägga till svejeprigotovlenny lösning 1 % Gul blod salt och 1 % saltsyra (Blanda lika delar 2 % lösning av saltsyra och gul blood salt). Efter 10 minuter efter blandning, blandningen centrifugeras och sediment är att titta på. Grain hemosiderin infärgning blå.

Bestämning av plasma metgemal′bumina spektrofotometrisk metod

Reagens.

1. Fosfat buffert izoosmotičeskij (pH 7,4): blandad 18 ml 0.15 M lösning natrium digidrofosfata (24,4 g YaN2R04 på 1 l vatten) och 82 ml 0,15 M lösning natrium väte (21,3 g NaH₂PO₄ på 1 l vatten).
2. Natrium bisulfite.
3. Natriumhydroxid 1 M.
4. Humant serum albumin lösning (40 g / I).
5. Lösning gemina (5 mg / 100 ml); förbereder omedelbart genom att lösa gemina i små mängder av kaustiksoda, och då: att föra det upp till mängden serumalbumin lösning.

Metod.

K 2 ml serum eller blodplasma läggs 1 ml zabuferernogo izoosmotičeskogo lösning, pH 7,4. Blandningen centrifugeras 30 minuter vid 1200-1500 rpm. Bestämma den optiska densiteten vid 569 nm. Sen om utspädda plasma placeras i ett provrör och lägga till cirka 5 mg torkade hydrous sulfat natrium. Genom 5 min upprepade gånger Mät den optiska densiteten vid samma våglängd. Skillnaden mellan två värden optiska tätheten motsvarar den optiska densiteten för metgemal′bumina. Metgemal′bumina koncentration bestäms av kalibrering schema.

Kalibrering graph display som följer. Lösning gemina albuminom överföring in rören i mängd från 0,01 till 0,1 g / I (från 0,2 till 2 ml). I dessa rör, där mängden lösning mindre 2 ml, lägga till upp till 2 ml albumin. Lägg sedan till på 1 ml fosfat buffert izoosmotičeskogo. Centrifugera blandningen på 1500 / Min, och sedan mäta optiska densitet. Skillnaden mellan dimensioner används i diagrammet respektive antal gemina.

I normal blodplasma saknas gemal′bumin. Det verkar för intravaskulära hemolys, t.ex, Om paroxysmal nattlig gemoglobinurii eller gemolizinovoj form av autoimmun hemolytisk anemi, liksom i avsaknad av gaptoglobina, När heme binds till albumin.

Hema rättegång i paroxizmalna natt gemoglobinurii

Hema rättegång baserad på att sänka motståndet av röda blodkroppar av patienter med PNH till lägre pH onsdag i närvaro av komplement färskt serum.

Reagens.

1. En lösning av klorvätesyra 0,2 n.
2. Ammoniaklösning 0,04 %.

Metod.

Från Wien ta 5- 6 ml blod. Eftersom antikoaguleringsmedel används natrium citrat eller oxalat. Samtidigt ta 15-20 ml blod från givare i samma grupp. Separera de röda blodkropparna från blodplasman av patient och donator.

Givarens serum är hälls på 0,5 ml i sex rör, två av dem sätta på 20 min i ett vattenbad med en temperatur på 56 ° C för att inaktivera ett serum komplement, de andra fyra provrör lämnas i rumstemperatur. Röda blodkroppar patienten två gånger tvättas izotoniceski lösning av koksalt, sedan suspenziruût samma lösning i förhållandet 1:1.

Diagram av studien presenteras i tabell.

Innehållet i varje provrör blanda, sätta på din 1 h i termostaten vid en temperatur 37 ° C, och sedan centrifugeras.

Vid tomgång som ingick i urvalet 0,05 m röda blodkroppar för patienten och givaren läggs separat till den 0,55 ml isoton natriumkloridlösning.

Efter centrifugering kan graden av hemolys uppskattas av ögat. Att kvantifiera omfattningen av hemolys i varje rör till 4,7 ml 0,04 % Tillsätt ammoniaklösning 0,3 ml ytskikt, men i provröret med inaktiv breakout- 0,3 ml av referensserum.

Att identifiera 100 % hemolys till 4,7 ml ammoniaklösning lägga till 0,3 mL suspension av erytrocyter (0,05 ml erytrocyter patienten i 0,55 ml isoton natriumkloridlösning).

Lösningens optiska densitet mäts på den medicinska kolorimetre och jämföra avläsningarna med optisk densitet ammoniaklösning utan röda blodkroppar:

% hemolys =((IS₁-IS₂)/IS₃)*100;

där E₁ -optiska densitet analysera sond; IS₂-optisk densitet blindprov; IS₃-optisk densitet 100 % gemolizata.

Normalt inte mer än gemoliziruetsâ 5 % erytrocyt.

Provet anses positiva Hema i fall, Om gemoliziruetsâ mer 6 % erytrocyt.

I paroxizmalna natt gemoglobinurii och gemolizinovoj form av autoimmun hemolytisk anemi gemoliziruetsâ ibland upp till 50-80 % erytrocyt. För dessa sjukdomar kännetecknas av hemolys endast i närvaro av serum neinaktivirovannoj (-Nr. 2). Om inaktivering av serum inte förhindrar hemolys (-Nr. 3), Vi kan anta att förekomsten av andra former av hemolytisk anemi eller ett misstag att forskning.

För destruktion av röda blodkroppar av patienter med paroxysmal nattlig hemoglobinuria onsdag vid pH 6,5 kräver obligatorisk närvaro av komplement, som finns i färskt serum.

Saharoznaâ tryout med paroxysmal nattlig gemoglobinurii

Saharoznaâ provet är baserat på den, att röda blodkroppar hos patienter med paroxysmal nattlig hemoglobinuria och gemolizinovoj form av autoimmun hemolytisk anemi förstörs i lösningar av låg jonstyrka i närvaro av komplement.

Reagens.

1. Lösning av sackaros: 9,42 sackaros upplöst i 0,005 M fosfatnom buffert; pH 6,2 (91 ml 0,005 M NaH₂PO₄ och 9 ml 0,005 M Na₂HSO₄).
2. Reagens för hemoglobin koncentrationen bestämning: 200 mg röd blod salt löst i 1 l destillerat vatten, Det lägga 0,5 ml atsetontsiangidrina.

Metod.

Blod i en patient med från Wien till två rör är torr (8-10 ml) och med antikoagulans (2- 3 ml). Som antikoagulans använda natriumcitrat. Erytrocyter blod insamling rör med antikoagulans tvätta två gånger izotoniceski lösning av koksalt. Efter tvättning och supernatanten utvinning till 0,4 ml erytrocyter lägga till 0,25 ml isoton natriumkloridlösning.

Samtidigt med blod från en givare i samma grupp av blod i två rör — med antikoagulans (2-3 ml), Den behandlas på samma sätt, som blod av tålmodig, och torr (8- 10 ml) att få serum. Efter avskiljandet av givarens serum 0,5 ml är det placeras i ett vattenbad med en temperatur 56 ° C 30 min för inaktivering av komplement. Givarens serum ska ta dagliga erfarenheter och hålla i kylan. Systemet av studie ges i tabell.

Rören är placerade i termostaten på 30 minuter vid 37 ° C, och sedan Centrifugera i 10 minuter vid 2000 RPM och bedöma graden av hemolys.

Gör så här i provröret hälls 3,4 ml reagens för hemoglobin koncentrationen bestämning och 0,6 ml på- sediment från varje provrör. Genom 10 min Mät den optiska densiteten i en lösning i rör med 540 NM på hälsa refraktometre (spektrofotometer) eller medicinska kolorimetre (DEC fotokolorimetre-m) När en grön visor, genom att jämföra uppgifterna med optisk densitet lösning för hemoglobin bestämning. Tar genomsnittet av de två behandlingarna varje erfarenhet. Beräkningen görs enligt formeln:

% in vitro-hemolys =((IS₁-IS₅)/(IS₈-IS₅))*100

där E₁ -optiska densiteten i en lösning i ett test tube nr. 1; IS₅ -optiska densiteten i en lösning i ett test tube nr. 5, nödvändigt att utesluta färg serum; IS₈ -optiska densiteten i en lösning i ett test tube nr. 8, där 100% hemolys.

För cross-saharoznoj prover (-Nr. 2) 100%-th hemolys in vitro-undersöks nr. 7.

Utvärdering av resultaten.

Normal in-vitro nr. 1, innehåller röda blodkroppar probed patienten, hemolys överstiger inte 2-3 %.

I paroxizmalna natt gemoglobinurii och gemolizinovoj form av autoimmun hemolytisk anemi (AIGA) i denna vitro överstiger hemolys 6 % I provrör-nr. 4, som innehåller blod från patienten och givarens serum inaktivirovannuû, provröret # 5, innehållande erytrocyter och serum givare, och nummer 6, som innehåller serum i stället för isoton koksaltlösning – hemolys bör inte överstiga 1-2 %.

Cross-saharoznaâ rättegång (-Nr. 2) När gemolizinovoj form av AIGA oftast positiva (i närvaro av hemolysins i serum), men det kan vara negativt. In vitro-nr. 3 (röda blodkroppar och patientens serum) hemolys som observerats på APG, och i gemolizinovoj form av AIGA. I paroxizmalna upptäcks natt gemoglobinurii maximal hemolys i normal saharoznoj prov (-Nr. 1), mindre uttalad — med dess egna prov cell patient (-Nr. 3); Ingen hemolys i cross-saharoznoj prov (-Nr. 2).

När gemolizinovoj form av AIGA mest uttalad hemolys påvisas i ett prov med egen Blodserum och erytrocyter för sjuka (-Nr. 3), något mindre uttalad – in vitro-nr. 1. In vitro-nr. 2 hemolys observeras ofta, men bristen på det utesluter inte form gemolizinovuû AIGA.