Nasledstvennaya gemoliticheskaya anemi, på grund av aktiviteten hos pyruvatkinas brist på röda blodkroppar

Nasledstvennaya gemoliticheskaya anemi, Relaterade erytrocyter pyruvatkinas brist - en relativt sällsynt form av hemolytisk anemi, som ärvs på ett autosomalt recessivt sätt, Det ger kliniska manifestationer i homozygoter, fortsätter med tecken på intracellulär hemolys, makrocytos av erytrocyter, låg halt av kalium. Det finns mer än 200 fall av homozygota bärare av underskott piruvatkinaznoy aktivitet.

Patogenes

Pyruvatkinas är en av de enzymer, avslutande glykolys. Denna länk glykolys och ATP bildas nikotinamiddinukleotid. Majoriteten av patienter med brist på pyruvatkinas aktiviteten minskas i innehållet av de röda blodkroppar i dessa två metaboliter, I vissa fall är det normala innehållet av ATP, men störd stabiliteten i ATP under inkubation. Normala nivåer av ATP finns på betydande retikulocytos. Detta beror på närvaron av retikulocyter och möjligheten att mitokondriella ATP inte bara genom glykolys, men också på grund av att den oxidativa fosforylering.

Konsekvensen av pyruvatkinas brist Det är också en ansamling av produkter från glykolys, bildas vid tidigare stadier - fosfofenolpiruvata, 3-fosfoglycerat, och i synnerhet 2,3-difosfoglycerat. Innehåll piruvatanlaktata minskar i röda blodkroppar.

Avsaknaden av ATP i erytrocyter pyruvatkinas brist Det leder till störningar av funktionen av ATP-aznogo pump röda blodkroppar och förlust av kaliumjoner, vari koncentrationen av natriumjoner i erytrocyter för icke-ökande. Detta orsakar en minskning i halten av envärda joner i erytrocyterna, dehydratisering av cellen och dess krympning. Detta fenomen kallas dessikotsitoz. Minskningen av röda blodkroppar av vatten komplicerar processen för syresättning och syrefrigivnings av hemoglobin. I detta avseende, vissa kompensatorisk roll spelas av en signifikant ackumulering i erytrocyter av 2,3-syra difosfoglitserinovoy.

Affiniteten av hemoglobin för syre reduceras genom dess interaktion med 2,3-difosfoglycerat. Därför, vid högre koncentrationer för 2,3-difosfoglycerat återgår syre till vävnaderna underlättas.

Kliniska manifestationer av aktiviteten hos pyruvatkinas brist

Kliniska manifestationer av brist pyruvatkinas aktivitet beror på graden av hemolys. I vissa fall är ökad hemolys manifest vid födseln och åtföljs av förekomsten av allvarlig hemolytisk kris, vilket gör att behovet av blodtransfusioner för att bibehålla hemoglobinnivån i under normala nivåer. I andra fall kan sjukdomen uppträda nästan symptomfri med de första tecknen på ökad hemolys (subikterichnost sklera och hud) åldern 17-30.

Generellt; jämfört med microspherocytosis, pyruvatkinas-brist har en mer allvarlig.

Nästan alla patienter med påtaglig mjälte. Den svaga ökningen i sina beskrivs vissa avvikelser heterozygota bärare, trots att de har anemi, vanligen, saknas. Ett antal patienter möjliga splenomegali. En betydande ökning i lever sällan. I enstaka patienter med bensår som identifierats.

Laboratorie indikatorer verksamhetsområden pyruvatkinas brist

Majoriteten av patienter med brist på pyruvatkinas aktivitet som observeras måttlig anemi (4,34- 6,21 mmol / l, eller 70-100 g / I), Men under kriser hemoglobin kan sänkas till 3,1 3,72 mmol / l (50-60 G / I). Innehålls eritrotsitov- 2,5-3,0 T 1 l. Hemolytisk kris kan orsakas av infektion. Det finns fall av hemolys vinst under menstruationen.

Röda blodkroppar hos patienter med pyruvatkinas-brist kännetecknad av makrocytos med normohromiey, svag anisocytos och poikilocytos. Det var rimligt polychromatophilia. Ibland tyckte mishenevidnye röda blodkroppar och röda blodkroppar med fransig kant eller i form av mullbär, identifieras ofta basofila erytrocyt punktatsiya, Jolly blodkroppar. Vissa patienter i det perifera blodet avslöjade en signifikant antal erythrokaryocytes, under krisen, kan det ökas upp till 60-70 %. ESR, vita blodkroppar, leukogram, trombocytantal inom det normala intervallet. Som med andra former av hemolytisk anemi, i benmärgen visade en kraftig irritation röd bakterie hematopoies.

Nivån av bilirubin, vanligen, ökat på grund av indirekt.

Den fria plasma hemoglobin normala, men det kan sänkas nivåer av haptoglobin. Hemosiderin i urinen är frånvarande. Innehåll av fetalt hemoglobin och hemoglobin A₂ inom det normala intervallet.

Osmotisk motstånd av erytrocyter pyruvatkinas brist i de flesta fall normala, ibland minskat efter dag inkubation. Autogemoliz, vanligen, uppgraderas till varierande grad. Det finns fall av pyruvatkinas brist med normal autogemolizom. I den första rapporterade fall av pyruvatkinas brist har registrerats typ II autogemoliza, korrigerar tillsats av ATP, och inte korrigera eller något korrigera tillsats av glukos. Därefter har många fall beskrivits med enzymbrist typ I autogemoliza eller ingen. Därför är det inte rekommenderat att tillämpa metoden autogemoliza för differentialdiagnos av hemolytiska anemier. Livslängden för röda blodkroppar med brist av pyruvat-kinasaktivitet är alltid förkortad.

Typ arv pyruvatkinas aktivitet autosomal recessiv. Heterozygoter praktiskt taget friska, Enligt olika forskare, svårighetsgraden av underskottet har varierat från 50 till 70 % normer.

Diagnostisk aktiviteten av pyruvatkinas-brist

Kan förväntas Diagnosen av pyruvatkinas brist på röda blodkroppar för att leverera i fallet med hemolytisk anemi, flyter genom åren med ökningen av mjälten, brist på perifera blodutstryk tecken microspherocytosis, elliptotsitoza och stomatotsitoza.

Kvalitativa tester för bestämning av aktiviteten av pyruvatkinas. För detta ändamål är förfarandet allmänt används fluorescent färgämne, baserat på, att under loppet av reaktionen, kataliziruemoy piruvatkinazoy, nikotinamiddinukleotid oxiderade och fluorescensen försvinner.

Aktiviteten av pyruvatkinas i friska individer varierade från 4,0 till 7,7 mmol (min / 1010 erytrocyter) eller 4,0 till 7,7 Ström. Majoriteten av homozygot sjukdomsenzymaktivitet mindre 1 Ström. Det kan dock finnas fall liten nedgång i aktiviteten av enzymet. Diagnos av en sällsynt form av hemolytisk anemi är mycket svårt, och en diagnos kan endast göras i studiet av enzymkinetik.

Differentialdiagnos av hemolytisk anemi, associerad med brist på pyruvatkinas

Differentialdiagnos av hemolytisk anemi, associerad med brist på pyruvatkinas, nödvändigt att utföra andra former av ärftlig hemolytisk anemi.

Eftersom de flesta patienter som lider brist på pyruvatkinas aktivitet till skillnad från individer, lider microspherocytosis, elliptotsitozom, stomatocitozom, hemolytisk anemi, rade vagn instabil hemoglobin, och thalassemi sjukdom ärvs på ett autosomalt recessivt, att denna patologi finns bara i samma generation och nästan aldrig sett bland föräldrar.

När ärftlig anemi, rade vagn instabil hemoglobin, särskilt i svår sjukdom, ibland proband är den första bärare av mutationen, och sedan sjukdomen överförs till nästa generation. Därför måste differentialdiagnos utföras med hemoglobinopatier, rade vagn instabil hemoglobin, liksom recessivt ärftlig hemolytisk anemi, orsakas av bristande aktivitet hos andra enzymer.

Den spelar en biroll hemoglobinstabilitet, yego elektrofores. För att utesluta andra fermentopathia undersökte aktiviteten hos andra enzymer i erytrocyter, och att utesluta autoimmun hemolytisk anemi utförs Coombs, agregatgemagglyutinatsionnaya.

Fluorescerande förfarande för bestämning av aktiviteten genom piruvatkiiazy Beutler

Reagens.

1. Fosfoenolpirovinogradnaya syra (tritsiklogeksilammoniynaya salt) 0,15 M lösning av, neutraliserades till pH 7,0-8,0 0,2 M lösning av NaOH (0,03 ml).
2. ADF 0,03 M lösning av, neutraliserad (0,1 ml).
3. NAD-N 0,015 M lösning av, neutraliserad (0,1 ml).
4. Magnesiumsulfat 0,08 M lösning av (0,1 ml).
5. Fosfatbuffertlösning av kalium 0,25 M, pH 11 7,4 (0,05 ml).
6. Distillirovannaya vatten (0,62 ml). Blandningen kan förvaras vid - 20 ° C är inte mer än en vecka.

Metod.

För forskningsändamål blod, tas tillsammans med heparin eller natriumcitrat. Det centrifugeras, aspire och förbereda plasma 20 % suspension av röda blodkroppar genom att tillsätta fyra volymer av isotonisk natriumkloridlösning.

Erytrocytsuspension i en mängd 0,02 ml blandas med 0,2 ml reagens och inkuberades under 30 minuter vid 37 ° C. En droppe placerades på filterpapper, och surfa på fluoroskop. Baslinje fluorescens detekterades omedelbart efter tillsats av erytrocyter till blandningen före inkubering. Normalt efter 30 min av inkubation det försvinner, och aktiviteten hos pyruvatkinas brist lämningar. Detta är, NADH som fluorescerar under inverkan av UV-strålning i området, nära synlig, medan NAD inte fluorescerar. Eftersom lösningen ovan är instabil och lätt bryts ned, kräver övervakning. Du bör noga skilja skiktet av vita blodkroppar, eftersom aktiviteten av pyruvatkinas-brist erytrocyt enzymaktivitet i leukocyter kan vara normal.