Mikroskopisk undersökning av cerebrospinalvätskan

Definition av cytos

Cerebrospinalvätskan hos friska människor innehåller väldigt få celler.. Leukocyter är av klinisk betydelse. (lymfocyter). För att inte störa antalet leukocyter erytrocyter, de förstörs genom att tillsättas i outspädd cerebrospinalvätska 1/10 delar av ättiksyra med fuchsin. Fuchsin färgar kärnförsedda celler röda. Samsons reagens används för att färga leukocyter. (blandad 30 ml isättika, 2 ml flytande fenol, 2 ml fuchsin alkohollösning 1 : 10 och fyllde på 100 ml destillerat vatten). Reagens resistent, färgar cellerna väl och bevarar dem från cytolys i flera timmar.

Lösningen används också, innefattande 5 ml 10 % ättiksyralösning och 0,1 g metylviolett. Han är mindre hållbar, färgar celler blå.

På grund av cerebrospinalvätskans cytolytiska egenskaper bör antalet celler räknas omedelbart efter intag.. Vätskan mäts upp i ett provrör med droppar eller en mikropipett i proportionen 10 delar av cerebrospinalvätskan och 1 en del av färgningslösningen och låt stå i 10-25 minuter för att färga cellerna. För utspädning kan du använda en mixer för leukocyter. Cerebrospinalvätskeceller fäster mycket snabbt till provrörets väggar., så flytande, i ett provrör, före studien är det nödvändigt att blanda noggrant med rotationsrörelser mellan handflatorna.

används för att räkna cytos. Fuchs-Rosenthal kamera. Räkning utförs i hela rutnätet genom 5 min efter kammarfyllning. Antal celler i 1 µl bestäms av formeln

X=(A*11)/(3.2*10)

där X är antalet celler i 1 l; A är antalet celler, räknas på rutnätsytan; 3,2 - kammarvolym; 11/10 - utspädningsgrad.

Det är tillåtet att visa resultatet av beräkningen i form av en bråkdel, t.ex 14/3, var 14 är antalet räknade celler i kammaren, 3 — avrundad siffra på kammarvolymen. Med ett stort antal celler räcker det att räkna dem i ena halvan av rutnätet och dubbla det resulterande antalet. Med svår pleocytos (en betydande ökning av antalet celler) får räkna in cellerna 16 små kvadrater och multiplicera det resulterande talet med 16.

I avsaknad av en Fuchs-Rosenthal-kammare kan man använda räknekammare Goryaev med mycket mindre kapacitet, därför räknas celler i minst tre rutor i den, beräkna det aritmetiska medelvärdet och multiplicera det med 1,2. Faktor 1,2 få från formeln

X=(A*11)/(0.9*10)

där 0,9 är kammarens kapacitet, 11/10 - utspädningsgrad.

Vid räkning av celler i outspädd cerebrospinalvätska, en av de första dropparna, som rinner från punkteringsnålen, placeras i en Fuchs-Rosenthal-kammare och antalet celler bestäms, såsom angivits ovan.

Det normala antalet celler (lymfocyter) i 1 µl cerebrospinalvätska från hjärnans ventriklar och cisternen i cisternen är 0-1, och i vätska, erhålls genom lumbalpunktion - 2-4.

Hos barn under tre månaders ålder 1 µl cerebrospinalvätska detekteras upp till 20-23 celler, upp till ett år - 14-15, upp till två år - 11-14, från två till fem år - 10-12, fem till sju år—8—10, från sju till tio år - 6-8, äldre än tio år - 4-5.

I hjärnhinnorna, abscess och hjärntumörer ökar antalet celler i cerebrospinalvätskan.

I studien av hemorragisk cerebrospinalvätska är det i vissa fall nödvändigt att fastställa dess verkliga cytos. För detta ändamål används den Friedmans metod: hemorragisk vätska samlas upp med Samsons reagens för att bestämma cytos och isotonisk natriumkloridlösning för att räkna antalet erytrocyter i 1 µl cerebrospinalvätska.

Till Exempel, antal celler i 1 μl — 20, antal erytrocyter - 3600. Antalet erytrocyter och leukocyter i patientens blod framgår av den allmänna analysen, utförs före lumbalpunktion. Till Exempel, i 1 l blod 4 200 000 erytrocyt, 7000 leukocyter. Därför finns det 4200000/7000=600 erytrocyter per leukocyt.

För att få fram värdet av sann cytos görs en ekvation:

på 600 erytrocyter - 1 leukocyt;

på 3600 erytrocyter - X leukocyter, Följaktligen,

X=3600/600=6 leukocyter.

Sann cytos av cerebrospinalvätska 20-6=14 celler per 1 l.

Tillämpningen av denna metod är begränsad, eftersom cerebrospinalvätska med en betydande inblandning av blod är olämplig för en sådan studie.

Bestämning av antalet röda blodkroppar i cerebrospinalvätskan är viktigt för att fastställa svårighetsgraden av patientens tillstånd med intrakraniell blödning.

I närvaro av 1 µl 2000-5000 erytrocyter cerebrospinalvätska blir rosa, 900-1000 erytrocyter - endast lätt opaliserande. En färglös vätska kan visa ett lägre antal röda blodkroppar. Av klinisk betydelse är ökningen av nivån av erytrocyter i dynamiken.

Differentiering av cerebrospinalvätskeceller utförs i en räknekammare i naturlig och färgad form.

Vid hög förstoring (okular 10X eller 15X, 40X objektiv) i räknekammaren var uppmärksam på storleken på cellerna, formen, kärnornas läge och storlek, närvaron av inneslutningar i cytoplasman. Lymfocyter är lätt differentierade, neutrofila granulocyter, makrofager. Normalt innehåller cerebrospinalvätska endast lymfocyter..

För att erhålla en fullständig karakterisering av den cellulära sammansättningen av cerebrospinalvätskan undersöks färgade preparat.. Vätskeceller färgas värre, än blodkroppar. Det finns flera sätt att färglägga: enligt Rosinoy, voznoy, cellprov, Alekseev, Maj-Grunwald, Pappenheim.

Bestämning av arten av pleocytos genom luminescerande mikroskopi

En droppe cerebrospinalvätska appliceras på ett fettfritt objektglas och blandas med fluorokromfärgning. (en blandning av vatten-saltlösningar av akridin apelsin och rhodamin i utspädning 1:20000). Det framställda preparatet undersöks under ett ML-2 fluorescerande mikroskop i blåvioletta strålar av det synliga spektrumet., med hjälp av kombinationer av excitationsfilter: FS 1-4, SZS 14-4, BS 8-2 och blockerande ljusfilter ZhS-1 med nedsänkningsobjektiv. Dimetylftalat används som en icke-fluorescerande immersionsolja för forskning. (ortoftalsyradimetylester).

På en mörk bakgrund identifieras polynukleära celler och lymfocyter lätt av cytoplasmans gröna glöd. Räkna upp i rad 100 cellen, med hänsyn till antalet lymfocyter och neutrofila granulocyter.

Lymfocyter skiljer sig från neutrofila granulocyter i kärnans natur (klumpig struktur med orange inneslutningar) och ljusgrön fluorescens.

Neutrofila granulocyter ha en tydlig struktur, kromatinet i deras kärnor lyser diffust, enhetlig ljus- i grönt. Cytoplasman är gul- grön, tegelröda granulat är utspridda i den.

I fall av obetydlig cytos centrifugeras den naturliga cerebrospinalvätskan och sedimentet undersöks..

Luminescerande mikroskopisk undersökning av cerebrospinalvätskan gör det enkelt att dra en slutsats om neutrofil, lymfocytisk eller polymorf-cellulär karaktär av pleocytos.

Morfologiska egenskaper hos cerebrospinalvätskeceller

Lymfocyter

Cerebrospinalvätskan hos friska personer innehåller små och medelstora lymfocyter (1-2 tum 1 l) storlek 4-6 mikron. Dessa är rundade celler med en stor klumpig kärna och en mycket smal cytoplasma..

Vid lymfoid pleocytos (tuberkulös meningit, dynt) tillsammans med små och medelstora lymfocyter uppträder (8— 9 μm), ibland kan du hitta lymfocyter med direkt delning av kärnan.

Antal lymfocyter (tillsammans med andra celler) ökningar av cerebrospinalvätska i hjärntumörer, kroniskt förlopp av meningit. Vid neurokirurgiska sjukdomar uppstår en ökning av antalet lymfocyter i den postoperativa perioden efter en ökning av antalet neutrofila granulocyter och indikerar ett gynnsamt resultat..

Plasmaceller

Plasmaceller kan hittas i cerebrospinalvätskan endast under långvariga inflammatoriska processer i hjärnvävnaden och hjärnhinnorna. Plasmacellernas morfologi är densamma, som i blod- eller benmärgsaspiration.

Dessa är rundade celler med en excentriskt placerad kärna och intensivt färgade, basofil cytoplasma. I vissa fall kan deras antal nå 26%. Plasmaceller finns också under den postoperativa perioden och i det tröga förloppet av reparativa processer vid hjärnskador..

Gistiocitы

I normal cerebrospinalvätska finns ibland i form av enstaka kopior.

I färgade preparat har histiocyter en stor kärna och en relativt smal cytoplasma.. Cellstorlek från 7 till 10 m, formen är rund eller oregelbunden. Kärnbönaformad eller oregelbundet flikig, normokrom. Nukleoler är synliga i naturliga preparat med faskontrastmikroskopi..

Vid tuberkulös meningit finns ett stort antal histiocyter i cerebrospinalvätskan., placerade separat och i kluster, deras cytoplasma är basofil, färgas mer intensivt.

Enligt tillgängliga uppgifter, celler av vissa typer av neuroglia kan förvandlas till histiocyter. Ett stort antal histiocyter i cerebrospinalvätskan finns hos patienter, som har opererats i hjärnan eller ryggmärgen (vilket indikerar en aktiv vävnadsreaktion och normal sårläkning), och i individer, lider av tuberkulös meningit och cysticercos med ett trögt förlopp av den inflammatoriska processen. Vid hjärntumörer med invasion i subaraknoidalrummet eller in i ventriklarnas väggar kan histiocyter uppträda i cerebrospinalvätskan i kombination med makrofager och förändrade celler., vad som är typiskt för uppkomsten av en reaktiv zon runt tumören.

Makrofager

Makrofager bildas av en- och multinukleära arachnoid-endotelceller och monocyter. Element i endotelet av arachnoid mater separeras från syncytium och förvandlas till rundade celler., besitter en amöboidrörelse och penetrerar cerebrospinalvätskan.

Makrofager uppslukar och smälter aktivt celler och andra element, kommer in i cerebrospinalvätskan under patologiska processer, hjälper till att rensa. Inneslutningar i cytoplasman av makrofager är lätt differentierade i kammaren och i färgade preparat..

Makrofager fagocyterar erytrocyter, förstörda eller oförändrade neutrofila granulocyter, fettdroppar, hematoidinkristaller etc.. Ofta finns det i en makrofags cytoplasma vakuoler av olika storlekar eller en stor vakuol, som upptar nästan hela cytoplasman, kärnan förskjuts till periferin. I sådana fall ser cellen ut som en ring - en ringformad makrofag.

Normalt finns det inga makrofager i cerebrospinalvätskan.. Deras utseende under normal cytos indikerar blödning eller en inflammatorisk process i centrala nervsystemet.. Ett stort antal makrofager i cerebrospinalvätskan under den postoperativa perioden indikerar aktiv debridering. (positiv syn). Ett litet antal makrofager eller deras frånvaro vid svår pleocytos är ett ogynnsamt prognostiskt tecken..

korniga bollar – ksantomnye celler

korniga bollar (ksantomnye celler) är stora makrofager med flera inneslutningar av fettdroppar i cytoplasman.

Dessa är oftast runda celler., magenta färgad mörkbrun. Vid bearbetning av cerebrospinalvätska med Sudan III blir granulära bollar orangeröda..

De finns i cerebrospinalvätskan när vätska från cystor av olika etiologier kommer in i den., vid nedbrytning av hjärnvävnad (tillsammans med droppar fett), ibland under den postoperativa perioden, med vissa hjärntumörer (kraniofaryngiom, ependymom, etc.). Om tumören är belägen nära ventriklarna i hjärnan, då detekteras oftast granulära kulor i cerebrospinalvätskan från ventriklarna. Källan till granulära bollar är mikrogliocyter, såväl som oligodendrocyter, celler i den yttre beklädnaden av blodkärl och arachnoid.

Neutrofila granulocyter

Neutrofila granulocyter i cerebrospinalvätska liknande neutrofila blodgranulopiter, deras cytoplasma (i räknekammaren och i inhemska preparat) ofta sträckt eller utskjutande (pseudopodi). Denna variation av cellformer observeras under de första 10-15 minuterna efter intag av cerebrospinalvätskan och indikerar bevarandet av neutrofila- mi granulocyter förmågan att röra sig. En segmenterad kärna är karakteristisk, antalet segment i vilka sträcker sig från två till fem; stick neutrofila granulocyter är ganska sällsynta.

Under lagring av cerebrospinalvätska förändras neutrofila granulocyter tidigare, än andra celler. Kärnor av neutrofila granulocyter kan genomgå lys eller segment bli rundade, med tydliga konturer, förbundna med en tunn bro; senare tar de formen av separata granuler. Neutrofil granulocyt, som bara behåller ett avrundat segment av kärnan, ser ut som en normoblast. Möt svullna neutrofila granulocyter med otydliga konturer av segment, upptar nästan hela cytoplasman. I färgade preparat kan man observera alla stadier av sönderfallet av neutrofila granulocyter - från svullnad av kärnan till fullständig förstörelse av cellstrukturen., när cytoplasmans konturer inte är synliga, och segmenten av kärnan blir formlösa, består av ett känsligt retikulum av kromatin. Dessa cellers tillhörighet till neutrofila granulocyter kan endast fastställas genom reaktionen till peroxidas.: närvaron av gröngula eller bruna granuler i den förstörda cytoplasman.

Ibland finns i cerebrospinalvätskan neutrofila granulocyter med en pyknotisk kärna i form av oregelbundet formade hyperkroma klumpar..

Neutrofila granulocyter uppträder i cerebrospinalvätskan med blödningar i subaraknoidalrummet, inflammatoriska sjukdomar i nervsystemet, efter neurokirurgiska operationer. Närvaron av neutrofila granulocyter i närvaro av blod i cerebrospinalvätskan indikerar inflammation i hjärnhinnorna.

Övervägande av oförändrade neutrofila granulocyter indikerar en akut inflammatorisk process.

plötslig uppkomsten av neutrofil pleocytos observeras när en böld brister under hjärnans slemhinna.

Med en böld, djupt i hjärnvävnaden, brukar ses lindrigt uttalad pleocytos med dominans av lymfocyter.

Med dämpningen av den inflammatoriska processen i cerebrospinalvätskan, degenererade former av neutrofila granulocyter.

Förekomsten av förändrade och oförändrade neutrofila granulocyter är karakteristisk för en pågående inflammatorisk process.. Det bör beaktas, att oförändrade neutrofila granulocyter uppträder i cerebrospinalvätskan med inblandning av färskt blod, i sådana fall är en korrigerande bestämning av cytos nödvändig.

Eosinofila granulocyter

Eosinofila granulocyter i naturliga preparat av cerebrospinalvätska är differentierade från andra celler genom närvaron av en karakteristisk glänsande grov granularitet., fyller cytoplasman. Celler med tvålobskärna är sällsynta., oftast observerade mononukleära former. I det färgade preparatet är morfologin för eosinofila granulocyter densamma, som blod. I cerebrospinalvätskan hittas oftast förstörda eosinofila granulocyter..

Innehållet av eosinofila granulocyter i cerebrospinalvätskan vid cysticercos sträcker sig från 1 till 46%.

Förekomsten av meningit som en komplikation av cysticercosis arachnoiditis åtföljs av uppkomsten av neutrofil pleocytos och en minskning av antalet eosinofila granulocyter.. För abscess av echinokockerblåsan i hjärnan är närvaron av neutrofila och eosinofila granulocyter i dess innehåll karakteristisk., vad som fungerar som ett hjälptecken för att särskilja det med en abscess. Ibland kan ett stort antal eosinofila granulocyter hittas i innehållet i cystor av tumörer i hjärnan och ryggmärgen. (nervös, kraniofaryngiom, ependymom, cancermetastaser till hjärnan). En uttalad ökning av antalet eosinofila granulocyter i cerebrospinalvätskan kan observeras efter ventrikulär cisternoskopi..

Efter avlägsnande av en hjärntumör med aktiv läkning av det postoperativa såret ökar antalet eosinofila granulocyter, vad som kan betraktas som en lokal allergisk reaktion i hjärnhinnorna på trauma och absorption av vävnadsförfallsprodukter.

Förändrade celler och cellskuggor

På grund av de cytolytiska egenskaperna hos cerebrospinalvätskan, celler, vistas i den länge, behåller endast konturerna av cytoplasman och resterna av kärnorna. Det är inte möjligt att fastställa deras morfologiska tillhörighet.. Oftast genomgår neutrofila granulocyter sådana förändringar., ibland är de maligna tumörceller. Cellerna i arachnoidmembranet och ependyma i hjärnans ventriklar utsätts lätt för cytolys..

Vävnadsbasofiler finns i cerebrospinalvätskan efter neurokirurgiska ingrepp..

arachnoidceller i cerebrospinalvätskan

arachnoidceller (arachnoendotelium) är enskiktiga epitelceller, de kan differentieras som när man räknar cytos i kammaren, och färgade, framställd från sediment av cerebrospinalvätska. Dessa är ganska stora, oregelbundna eller runda celler med en relativt liten rund eller oval kärna., ett centralt beläget.

Cellkärnor färgas hypokromiskt, och cytoplasman är blek- eller gråblå, den har dock ojämna konturer och innehåller ofta inneslutningar av fagocyterade partiklar (fettdroppar, cellulära element, vakuoler). Cytoplasman hos arachnoidcellerna förstörs ofta, i sådana fall hittas karakteristiska kärnor och fragment av cytoplasman. Kärnkromatin har en fint ögla eller granulär struktur, ibland märks en blå kärna. Storleken på kärnorna från 5 till 19 m.

Närvaron i cerebrospinalvätskan av enstaka celler i arachnoidmembranet indikerar ännu inte patologi, eftersom dessa celler kantar subaraknoidalrummet och, skalar av, komma in i cerebrospinalvätskan. En ökning av antalet celler i arachnoidmembranet observeras med arachnoiditis, cysticerkos i hjärnan. I innehållet i arachnoidcysten finns separat placerade celler i arachnoidmembranet och deras symplaster i form av grupper av kärnor av olika storlekar och färgintensitet., omgiven av blek cytoplasma utan tydliga gränser mellan celler.

Choroid plexus celler

Från choroid plexus i ventriklarna in i cerebrospinalvätskan, polygonal, rundad, ibland cylindrisk stor (15-19 μm) cellen. Liten (4-5 μm) kärnor placerade centralt eller excentriskt, hyperkromatiska, cytoplasman eosinofil, intensivt färgade. Det finns granularitet i cytoplasman hos choroid plexus-celler, ibland i form av klumpar och inneslutningar, 1–3 µm, rund eller oregelbunden, grönaktig eller blåaktig. Vakuoler eller fångade röda blodkroppar kan finnas i vissa celler.

Choroidplexusceller finns oftast i vätskan från hjärnans ventriklar..

Celler av ependyma i hjärnans ventriklar i cerebrospinalvätskan

Celler av ependyma i hjärnans ventriklar i cerebrospinalvätskan, erhållen genom lumbalpunktion, förstörs lätt under beredningen och färgningen av läkemedlet. I ett fläckigt utstryk ser de ut som formationer, bestående av ovala kärnor med en delikat struktur. I vissa celler omger den bevarade cytoplasman kärnan i form av en smal kant..

I vätskan från hjärnans ventriklar finns oftast ependymala celler med en bevarad struktur., morfologiskt liknar arachnoidceller, men deras kärnor är blekare till färgen och har en mer känslig, homogen fördelning av kromatin. Polerna på ovala ependymala celler är ofta spetsiga, cytoplasman har en gråaktig nyans. Det finns isolerade celler och stora kluster, där gränserna för enskilda celler kanske inte kan fastställas.