Studien av blodkoagulation

Metoder för att studera blodkoagulationssystemet inkluderar följande grupper:

1. Preliminär (allmän), ger en uppfattning om tillståndet i hela koagulationskaskaden som helhet och dess enskilda stadier (registrering kan göras visuellt eller av enskilda enheter - koagulografa, thromboelastography och andra.);
2. differentiera underskott på individuella faktorer - korrigerande koagulationstester, Tester blandnings studie av blodplasma blodplasma av patienter med en känd känd brist på vissa faktorer;
3. kvantifiering av enskilda komponenter på deras funktionella aktiviteten (koagulationstester, studier och andra kromogena substrat) och (eller) på immunologiska markörer;
4. identifiering av intravaskulär aktivering av blod koagulation och fibrinolys funktionella egenskaper eller molekylmarkörer sådan aktiverings - att identifiera cirkulerande aktiverade koagulationsfaktorer, Trombocytprodukt degranulering, uppdelning av komponenterna i blodkoagulation eller deras metaboliter, Framväxten av nya antigenmarkör aktiverade faktorer och deras komplex, accelererade metabolization märkta komponenter i blodkoagulering (minska tiden för deras halveringstid i cirkulation).

Sålunda, vid bedömningen av tillståndet i blodkoagulationssystemet använder både sin egen koagulation metod (laboratorium och instrument), som utgör grunden för den diagnostiska processen, och immunologisk, Radionuklid och andra typer av forskning. I många fall kan komponenterna definieras som en funktionell aktivitet, och immunologiskt - innehållet i den motsvarande antigen i blodet. Samtidig användning av dessa tekniker gör det möjligt för oss att skilja former av patologi, relaterad till bristen på syntesen av den respektive koagulationsfaktor (i detta fall samma som den sänks funktionell aktivitet, och mängden antigen), och mögel, i vilken molekylen syntetiseras faktor, men det är onormalt och funktionellt defekta.

Att hänvisa till antalet av de första formerna av motsvarande faktor läggas skylten "-" (t.ex, VIII-, IX- och t. d.), och den andra - tecknet " " (t.ex, VIII , IX ).

Grov (allmän) koagulationstester

Fastställande av koagulationstiden

Fastställande av koagulationstiden (En föredragen metod av Lee-White) - Lång används bystrovypolnimy (vid säng) vägledande tester, gör det möjligt att identifiera betydande blödningsrubbningar, i samband med ett underskott på koagulationsfaktorer (förutom Faktor VII) eller med effekten av antikoagulantia och fibrinolytiskt. Det används som en vägledning för test och kontroll över heparin, eliminering av heparinprotaminsulfat. Testet är relativt låg känslighet, hans siffror bryts endast vid markant minskning av plasma koagulationsfaktorer (under 4-5 %), och därför olämplig för detektering av lindriga former av hemofili A och B, samt blödningsrubbningar när angiohemophilia, Faktor XI brist, prekallikrein, och högmolekylära kininogen. Av dessa skäl, kan testet inte användas för preoperativa patienter: under normala funktionstest (5-10 Minuter) du kan uppleva ymnig postoperativ blödning.

Plasma rekalcifieringstid

Plasma rekalcifieringstid - icke-standardiserade låg känslighetstest, mindre tillförlitliga för detektering hypocoagulation, än helblodet koagulationstid. Det kan inte rekommenderas för diagnos av störningar i hemostas.

Den aktiverade partiella tromboplastintiden, plasma

Den aktiverade partiella tromboplastintiden, plasma (APTT, kaolin-kefalinovыy testet) - Mycket känslig metod, avslöjar blodets förmåga att levra processen när du kör den inre mekanismen. Selektivt känsliga för brist på plasma koagulationsfaktorer (eftersom bristen på trombocyter och faktorer 3 Platelet kompenseras administreras externt eller Kefalonia eritrofosfatidom).

Det används för att övervaka heparinbehandling, preoperativ undersökning av patienter och så vidare. d. Standardvärden beror på de prover som användes kephaline, i de flesta fall upp till 37-50 (optimalt - 37-45).

Kaolin tidsplasma

Kaolin under plasma - testet, liknar det föregående, men utan tillsats av plasma kephaline (eritrofosfatida), varigenom den är känslig inte endast för en brist på plasma koagulationsfaktorer, utan även på avsaknaden av blodplättsfaktor 3 trombocyter. Beräknade aktiviteten utvärdering av denna faktor kan utföras genom att jämföra tiden för kaolin testplasma den med högt och lågt innehåll av blodplättar (normen - 57-70 med).

Vi rekommenderar inte användning av fosfolipidkomponenter, ger i aPTT koagulationstider lika med 55 s och mer, eftersom detta minskar i hög grad noggrannheten och reproducerbarheten av testet, inklusive den kvantitativa bestämningen av faktor VIII och IX.

Silikontidsplasma

Silikon tid plasma - en plasma rekalcifieringstid, vilket resulterar i en nål silikonirovaniya, mikrorör, pipetok, t. det är. med minimal kontaktaktivering. Testet är känslig för hyperkoagulerbart topp intravaskulär aktivering av kontaktfasen av uppstart (faktorer XII och XI), dock denna kränkning visar tydligare genom att definiera silikon koagulationstiden av helblod (på grundval av Lee-White eller tromboelastograficheskoy registreringsprocessen silikoniserad kyvett).

Standardvärden beror på silikon och målmedvetna studier blodet hos friska personer för varje sina separata prov. Vid val silikon är det bästa, som sträcker sig till den högsta graden av koagulationstiden (plasma).

Protrombin (tromboplastin) tidsplasma

Protrombin (tromboplastin) tidsplasma (Snabb tid, protrombin Index) karakteriserar hastigheten koagulering av blodplasma recalcified startprocessen till extern enhet, t. det är. lägga en mänsklig hjärna tromboplastin (eller kanin).

Aktiv tromboplastin standardiserat på blandade prover av normal (testet) plasma. Den vanligaste tromboplastin aktivitet med 12-18 (i klassisk teknik med Kvika- 12-13). Den svagare tromboplastin, ju större felet hos metoden.

Under normal protrombintid plasma testet avslöjar en isolerad eller ackumulerade underskott på protrombinkomplex - VII, X, V и II, varifrån tre faktorer (VII, X и II) K-vitaminozavisimy och deras aktivitet minskar under inverkan av indirekta antikoagulanter. I detta avseende är protrombin testet grundläggande för styrning av doserings kumariner (neodikumarin, eller pelentan, sinkumar et al.,) och andra läkemedel i denna grupp (fenilin).

Protrombintid är normalt med ett underskott på faktorer som inre mekanism aktivering av protrombinas - faktor XII, XI, IX, VIII (t. det är. för alla typer av blödarsjuka och defekt Hageman), liksom brist på prekallikrein och högmolekylär kininogen (VM kininogena)

I litteraturen de olika beteckning protrombin testresultat. Den mest ändamålsenligt att ange protrombintiden studien och kontrollplasma på några sekunder (ge information och aktiviteten hos tromboplastin används). Ibland använder jag förhållandet mellan dessa två värden, t. det är. index (PV studie plasma, från ,)/(MF kontrollplasma, från), (hastigheten av 0,9-1,1).

En annan form av bedömning av denna indikator, som är den mest använda i laboratorier, protrombin index är en beräkning av den procentuella andelen genom att sammanställa återkopplings aritmetiska proportioner (generellt - 90-110%), Men det är fel denna beräkning, eftersom mellan koncentrationen av koagulationsfaktorer och koagulationstiden har inte aritmetik, en logaritmisk beroende. Förutom, protrombin test är känsligt endast till en minskning av koagulationsfaktorer nedan 50 % deras normala storlek. Genom detta lämpligt att använda bestämma protrombin index Procent genom utspädning kurva (1:2, 1:4, 1:8 och t. d.) blandat prov av normalt plasma. En sådan kurva byggs en gång för tromboplastiner olika initial aktivitet (från 12 till 18 från) och det bestäms av protrombin index i de studerade patienter. Fördelen med denna teknik består i att, att resultaten av alla studier, inklusive löpande dynamik på olika dagar, Det är inte genom olyckshändelse olika prover av normal blodplasma, och i genomsnitt samma standardparametrar, vilket resulterar i en signifikant minskad fel metod. Index, erhållen genom proportion och spädningskurva för normalt plasma, inte motsvarar varandra. Detta bör beaktas vid övervakning av effekten av indirekta antikoagulantia, För index att sjunka konventionell 50 % ungefär motsvarar en minskning av indexkurvan utspädning till 25-30% • I detta sammanhang bör analysen alltid ange, Hur är det protrombin förhållandet, vad är normer för aktiviteten hos tromboplastinet.

Plasma trombintid

Plasma trombintid, t. det är. koagulationstiden för citratbehandlad plasma genom tillsats till det en standardtrombinaktivitet, Det är ett stort test för utvärdering av den sista etappen för blodpropp. Införandet av denna indikator är viktig för en korrekt tolkning av alla andra koagulationstester, För brott mot slutskedet av blodkoagulering oundvikligen måste leda till en förlängning av koagulationstiden i alla ovanstående metoder.

I de flesta fall, under provningen, trombin användes denna koncentration av trombinlösning, som, när det blandas med en lika stor volym av blodplasma koagulering för att ge 12- 18 från, men att erkänna disfibrinogenemy används och svagare koncentrationer (leder till en minskning av 30-35 med).

Trombintid - En viktig diagnostisk indikator, kränkning av den observerade som medfödd, och när förvärvat sunt (sekundär) gipoprotrombinemii, i de flesta disfibrinogenemy, samt under påverkan av heparin, Produkt fibrinolys (PDF) och andra hämmare av självorganisering och antitrombiner fibrinmonomerer. I kraft av denna trombintid i första hand och i ökande grad bryts i akut och subakut DIC, som spelar en viktig roll för snabb diagnos av denna patologi.

Autokoagulyatsionny testet

Autokoagulyatsionny testet (Tillstånd) - En mycket känslig två-steg, Den beskriver processen för blodkoagulering när det började den inre mekanismen. Liksom aPTT, test är inte känslig för en brist på faktor VII, men samtidigt hans vittnesmål inte är beroende av innehållet i fibrinogen (фактора I) i testserumet, hur det skiljer sig från alla andra prover indikerar koagulation.

En annan fördel med ACT består i, som undersökte utspätt blod, som väsentligen ökar känsligheten av testet till en brist på koagulationsfaktorer och, Förutom, genomförandet av AVS inte kräver användning av kaolin och kephaline, eftersom standardisering av kontaktaktivering av fosfolipid och uppnådde sin egen röda blodkroppar hemolysat undersökts.

SAMMANFATTNING AVS är, i det 2 ml hypoton lösning (0,222 %) Kalciumklorid tillsätts 0,1 ml blodprov.

I denna hemolysat kalcium blandning bildas och protrombinas trombin, Aktivitet bestäms genom att sekventiellt addera 0,2 ml av denna blandning till 0,2 ml testplasma (varje 2 minut under den första 10 m, och sedan - efter varje 10 min för 1 Nej).

Plasman är källan av fibrinogen undersöktes, som testade aktiviteten av trombin som genereras i blandningen. Som framgår av ett stort antal studier, det kan ersättas av blodplasma från friska människor eller fibrinogenlösning. I detta fall är patientens blodflöde reduceras till 0.1-0,2 ml (Den kan tas från fingret!), va omvandlar autokoagulyatsionny test i mikrokoagulyatsionny (MKT) och det gör det mycket bekvämt för pediatrisk användning, inklusive studier av hemostas hos nyfödda.

Koagulation aktivitet i ACT och MKT initialt ökar hos friska människor brukar uppgår till högst 10 minuter, inkubation av blod-kalciumblandning (KKS), När plasmakoagulering substrat sker vid 10 ± 1. Sedan koagulering aktivitet börjar sjunka KKS, Det indikerar att inaktivering av trombin bildad däri. Med Hemofili, verkan av heparin och annan koagulering koagulering aktivitet KKS kraftigt reducerad, och den maximala drag från den 10: e minuten på ett senare datum. Om det finns en hyperkoagulerbart tidigare och mer betydande ökning av trombinaktiviteten i CCS.

Vid genomförande av testet i ett enda provrör (definition endast 10 minuters inkubation KKS) det kan användas för att övervaka heparinbehandling. Fördelen med denna testmetod över aktiverad partiell tromboplastintid är, att det planade differential inverkan på olika cefaliner heparin koagulationstid.

Baserat AVS (MKT) Det utvecklades en enkel och noggrann metod för differentialdiagnos hemophilias.

Med referenser citerade under omställning tabeller indikationer ACT (MKT) kan uttryckas som en procentandel och plottas - autokoagulogrammy.

För att uppskatta antalet allmänna parametrar används allmänt blodkoagulering och instrumentella metoder för undersökning, huvudsakligen med hjälp av olika koagulografov och thromboelastography.

Thromboelastography ger inte bara en bild av tidsparametrarna för koagulering blod eller plasma, men också på struktur och mekaniska egenskaper hos blodproppar bildas. Under de senaste åren introducerades maskinvara och metoder för registrering standardisering och fosfolipid kontaktaktivering av koagulation. Koagulation skapade också för mass genomförande av gemensamma koagulationstester - aPTT, protrombin, trombin och annan automatisk registrering av resultaten.

Metoder för differentiering av olika brist på koagulationsfaktorer och deras kvantitativa bestämningen

Följande tabell visar data som, som trevande studie av blodproppar med tre grundläggande tester möjliggör grupp skillnad underskott olika plasma koagulationsfaktorer. Så, saktar endast i protrombin koagulering testet (Jag тип нарушения) under normala värden i alla andra egenskap av ärftlig brist på faktor VII eller för att minska nivån på denna faktor i ett tidigt skede av utvecklingen av obstruktiv gulsot eller under de första 1-2 dagarna av behandling med antikoagulantia av indirekta åtgärder, När undertryckande av syntesen av faktor VII är framåt i sin reduktion av alla andra K-vitaminozavisimyh koagulationsfaktorer utveckling.

Brott av endast den inre mekanismen för koagulation, t. det är. aktiverad partiell tromboplastintid och AVS (II тип), det finns brist på faktor XII, XI, IX, VIII, Villeʙranda (inte i alla former), prekallikrein och kininogen VM. Av dessa, vid ärftliga defekter koagulationsfaktor brister XII, prekallikrein och kininogen WM är extremt sällsynt och är inte förenat med någon blödning, medan brist på faktor VIII (Hemofili A), IX (Hemofili B) och von Willebrand-faktor är mycket vanligt (är större än 96 % alla ärftlig blödningsrubbningar) och åtföljs av allvarlig blödning. Mellan dem i första hand och att genomföra ytterligare differentialdiagnos.

Faktor XI brist relativt sällsynt (ca 0,5-1,0 % Alla hemophilias), fortsätter med en mycket mild blödning (oftast efter skador och operationer) och det upptar en mellanposition mellan den första undergruppen av asymptomatiska störningar och hemofili och von Willebrands sjukdom.

En annan typ av störningar som kännetecknas av förlängningen som den partiella tromboplastintiden och AVS, och protrombintid. Det är karakteristiskt för brist av faktor V, X eller II eller för komplex brist på K-faktorer vitaminozavisimyh (VII, X, IX, II), som observeras i obstruktiv gulsot och andra former av vitamin K-brist, och tar emot indirekta antikoagulantia.

Och slutligen, såsom kan ses från denna tabell, möjlig kränkning av vittnesmål av de tre testerna (IV тип), som observeras i ärftliga och förvärvade hypo- och disfibrinogenemiyah (inte alla), när du tar antikoagulantia av direkta åtgärder (geparina, geparinoidov, hirudin et al.,), behandling av fibrinolys aktivatorer och defibriniruyuschimi droger (streptokinas, urokinas et al.,), visas i blodet och patologiska ämnen antitrombiner, förhindrande förbindelse (aggregat) fibrin-monomerov - paraproteinov, kryohlobulynov, immunkomplex, liksom den sofistikerade koagulering, orsakad av DIC. Således trombin tid är ofta störd i större utsträckning, och en lite tidigare, än andra tester.

När du tar hänsyn till varaktigheten av sjukdomen och möjligheten att ärftliga ursprung eller sekundära förbindelser med andra sjukdomar och mediciner eller andra effekter, närvaron eller frånvaron av blödning och dess typ kan inte korrekt identifiera uppkomsten av dessa djupa blodproppssjukdomar.

Allt differentierande tester bygger på principen om korrigering, t. det är. för bestämning, i vilken utsträckning avslöjade en blödningssjukdom eller elimineras, omvänt, Det kvarstår prover av blodplasma eller blodprodukter som erhållits artificiellt tydligt känd brist på en koagulationsfaktor.

För detta ändamål, för att specialiserade laboratorier skapa en samling av blodplasma faktorodefitsitnyh, få dem från patienter med en känd uppsättning djup (mindre 1 %) brist på varje faktor och lagra dem i små förpackningar (av 0,5 ml) vid en temperatur - 30 ° C. Vid behov kan dessa prov tinades och användes i diagnostiska tester.

Plasma, varit oavsiktligt eller avfrostning förblir oanvänd, återfrysning inte är föremål för. De kriminalvårds tester bör inte användas med immun plasmainhibitorer av en faktor. De diagnostiska kit för ett antal företag innehåller frystorkade prover av blodplasma bristfällig koagulationsfaktorer identifierade (substratplasma). Men många blödningsrubbningar sällan sett i klinisk praxis, om användning artificiellt framställda blodkomponenter normal brist på vissa koagulationsfaktorer, och heterogena plasma (kycklingar, ankor och andra.).

Följande tabell innehåller information om innehållet i koagulationsfaktorer i blodkomponenter, används för korrigering av koagulationstester, beroende på villkoren för deras lagring. Med användning av denna tabell, lätt att dechiffrera bevis för någon av de tre stora koagulationstester. De korrigerande tekniker för denna typ används tester, standardiserats av kontakt och aktivera fosfolipid, t. det är. kaolin-kefalinovыe eller primeneniem gemolizata (i ACT).

Tester av blandningsblodplasma från patienter med plasma, har verkligen känt brist på en faktor

Bestäm den aktiverade partiella tromboplastintiden i testplasma, Normalt plasma (kontroll) och plasma tydligt känd faktor VIII-brist (av patienter med hemofili A), IX (av hemofili B), XI и XII. Därefter tillsattes en blandning av citrat plasmaprover undersöktes (7/10 volymen) och successivt med var och en av plasmor bristfällig (3/10 volymen), eftersom brist på faktor VIII och IX (de vanligaste formerna av patologi!).

Till blandningen sattes kaolin och cefalin, och av 2 min utsattes för en rekalcifiering (vid en temperatur 37 ° C). Till blandningen, där den aktiverade partiella tromboplastintiden är inte normaliseras, Den har samma koagulering fel.

Så, om den undersökte patienten aktiverad partiell tromboplastintid normaliseras genom tillsats av blodplasma från patienter med en känd känd brist på faktor VIII, men korrigerade blodplasma av patienter med brist på faktor IX, det har Hemofili A.

På liknande sätt, men på grundval av protrombin testet skilja underskott protrombinkomplexet (X, V, VII и II).

Tromboplastin generationstest

För differentiering av kränkningar av den inre mekanismen av blodkoagulering används oftast klassiska tromboplastin generationstest ersättning av blodplättskomponent, beredning kräver avsevärda investeringar i tid och blod, Kefalonia nackdelar tromboplastin generation testet är dess skrymmande, det är nödvändigt att framställa ett stort antal reagens, mycket tid på genomförandet.

Korrigerande testet, baserat på grundval av test autokoagulyatsionnogo.

Snabb diagnos av problemen är helt olika svar korrigerande testet, baserad på den andra korrigering, samma komponenter i normalt blod-baserade test autokoagulyatsionnogo.

Detta test är mycket tillförlitlig, snabbhet och enkel implementering och kräver lite (inte mer 0,5 ml) mängden blodprov, det kan användas på pediatriska patienter.

I honom, som i det tromboplastin generationstest, används för att korrigera det adsorberade plasma och serum gammal, vilket återcentrifuger före studien. I tre flaskor hällde 2 ml 0,222 % kalciumkloridlösning och två av dem tillsattes 0,1 ml adsorberad normalt plasma (1-Jag flaska) och 0,1 ml gammal normalt serum (2-Jag flaska). De andra tre rören gör för 0,2 ml citratbehandlad normal plasma. Sedan till alla rör med kalciumkloridlösning tillsattes 0,1 ml citratlösning blod av testet.

Exakt 4 min inkubation, blandningen av dess koagulationsaktivitet testades på normalt plasma.

Den kraftiga nedgången i koagulering aktivitet endast i det första provröret (normala baso₄-plasma) Det indikerar närvaron av patientens brist på faktor IX (Hemofili B), Endast i det andra röret (Serum från gamla) - Om bristen på faktor VIII (Hemofili A); Om korrigering sker i båda rören (lika stark), sedan, uppenbarligen, Det finns en brist på faktor XI eller XII (cm. Bord. 14).

Detta test är mycket känsligt, som studien genomförs i en frånskild 20 tid blod i kompenseringsfaktor 3 Trombocyt hemolysat. Den enda reaktant som användes - hypoton lösning av kalciumklorid, offentliggörande prov.

Lika enkel är metoden för korrigering prover, utförs på grundval av ett test för protrombin brist differentieringsfaktor II, V и VII , X (i tabellen).

För att separera den brist på faktor VII och X, ytterligare koagulationstester som utförs med tillsats av den studerade blodplasmalösning ormgift huggorm - medicinering lebetoks (väljs så koncentration av gift, som i närvaro av kalciumklorid och kephaline orsakar koagulering 20-25 med; Alla ingredienser är tagna i en mängd 0,1 ml och blanda) (Tabellen nedan).

Med samma syfte preparatet används Russell huggormsgift, bostad i Indien (beredning stipven).

Differentialdiagnos är klar, om det behövs kvantifiera knappa faktorer eller specifika immunhämmare, Varför finns särskilda mycket känsliga, standardiserade metoder. Dessa byggtekniker som används utspädningskurvor av blandade prover av normal blodplasma med korrigerings brist på faktorer, utöver testet. Dessa kurvor definierar aktiviteten hos testfaktorn i plasma hos patienter.

Speciellt viktig kvantitativ bestämning av koncentrationen av faktor VIII och IX, och har sina hämmare hos patienter med hemofili A och B (särskilt före och under kirurgi och intensivvård ersättningsterapi), samt uppskjuten riklig postpartum blödning, när det är nödvändigt att differentiera DIC och en sällsynt sjukdom - uppkomsten av immun hämmare faktor VIII (fortfarande mycket mindre - Faktor V).

Med djup brist på faktor XIII (en mycket sällsynt ärftlig patologi) alla koagulationstester är normala, men upplösa blodproppar i 5M och 7M urea.

Det bidrar till att skilja de olika koagulationsfaktorer brist också står för omfattningen och, speciellt, när det gäller att normalisera avläsningar test till patienter efter intravenös administrering av blodprodukter, t. det är. Justerat leva enligt metod A. 3. Barkagan.

Denna teknik är särskilt effektiv när en stor skillnad i förväntad livslängd differentiable faktor i omlopp. Så, halveringstid varaktighet protrombinkomplexet varierar från några timmar (faktor VII) till flera dagar (фактор II). Ett mellanläge mellan dem hålla X Factor (2-2,5 Dagar) och V (12-18).

Därför, efter massiva transfusioner av plasma jet protrombin index ökar med faktor VII brist är mycket kort, brist på faktor V - något längre (ca 4-6 gånger), en brist på faktor X och, speciellt, II för en längre period (under 1-2 dagar). Det är betydelsefullt i detta avseende och effekterna av läkemedel på protrombin index PPSB (koncentrat av faktor VII, IX, X и II). Han kort normaliserar också protrombintiden brist på faktor VII och längre (många gånger!) brist på faktor X och II. Eftersom detta läkemedel är inte Faktor V, Denna brist korrigeras inte dem.

En liknande skillnad uppenbaras i transfusion och substitutionsbehandling av koagulationsfaktorer inre mekanism (XII, XI, IX и VIII), som registrerade en aktiverad partiell tromboplastintid testet.

Av särskilt intresse är högtalarnivå korrektionsfaktor VIII och aPTT avläsningar när transfusion terapi av hemofili A och von Willebrands sjukdom. Den första av dessa villkor upptäcks omedelbart maximal förbättring blödning efter transfusion (spraya, snabb!) Antihemofili plasma eller kryoprecipitat administration, följt av en ganska snabb (för 10-18 timmar) en stadig nedgång i sin, medan vWF observeras en viss ökning koagulationsaktivitet inom några timmar efter transfusion, och sedan dess nedgång - mycket långsammare, än. I detta sammanhang, vid behandling av von Willebrands sjukdom används sällan fler substitutionstrans, än hemofili A.

En studie av den funktionella aktiviteten av koagulationsfaktorer och komponenter i kallikrein-kinin och fibrinolytiska system som använder kromogena substrat

Metoderna baseras på studier av aktiviteten hos proteolytiska enzymer och deras inhibitorer, inblandade i blodkoagulation, fibrinolys och kinin bildning, i intensitet och klyvningshastigheten specifikt känsliga för dessa enzymer peptider, som frigörs under nedbrytningen av färgämne (B-нитроанилин).

Graden av färgning av reaktionsblandningen bestämdes genom spektrofotometri, och dess intensitet bedöms på aktiviteten hos motsvarande enzymer (koagulationsfaktor, kallikreina, plasmin och andra.), och bromsprocessen - aktiviteten hos enzymhämmare.

Så, t.ex, kan bedömas effekten av antitrombin III och heparin genom klyvning av kromogena substrat försvagas faktor Xa eller trombin, och aktiviteten hos α₂-antiplasmin - för reduktion av motsvarande kromogena plasmin substrat. Kromogena substrat eller har en numerisk beteckning (t.ex, s-2222), eller hänvisas till i sammandrag hromozinami prefixet, betecknar enzymet, som den känsliga substrat (t.ex, Chromozym PL - субстрат плазмина, Chromozym TH - субстрат тромбина, Chromozym PK - prekallikrein substrat / kallikrein, etc.. d.).

Kromogena substrat utöka forskningsmöjligheter hemostatiska systemet, men det är inte tillräckligt tillgänglig för många laboratorier. Vissa studier, gjort med deras hjälp, De har fördelar jämfört med konventionella koagulationstester och ge dem matchande resultat; i andra fall, förenklar och snabbar upp studie deras användning, Det gör det mer korrekt; i tredje - dessa tekniker har en självständig betydelse och kan inte bytas ut koagulationstester (t.ex, prekallikrein bestämning).

Immunologisk bestämning av komponenterna i det hemostatiska systemet

Immunologisk bestämning av komponenterna i det hemostatiska systemet utförs genom metoder:

• Immunoprecipitacii;
• Immunoelektroforeza;
• Radioimmunoanalys och den andra med den lämpliga antisera

Samtidigt för ämnet i blodplasman av antigen av en koagulationsfaktor (eller dess fragment), inte funktionell aktivitet, som kan reduceras dramatiskt med normal antigen i plasma. Denna situation är typisk för samtliga fall, När syntetiseras i kroppen onormalt (funktionellt defekta) faktorer, bevara sin antigenicitet, men saknar förmågan att delta i hemostas.

Detta gör att du kan skilja mellan fullständigt upphörande av syntes av relevanta faktorer och bildandet av onormala former.

Emellertid kan flera komponenter i det hemostatiska systemet endast bestämmas immunologiskt.

I denna grupp ingår sådana viktiga studier, eftersom definitionen av följande komponenter:

• B-тромбоглобулина;
• a2-макроглобулина;
• протеинов C и S;
• antigener faktor VIII:C и VIII:R_minne;
• Produkt fibrinolys (PDF);
• neoantigenov kompleksov trombin - antitrombin III och plasmin - antiplasmin;
• ett antal andra tester.

Därför immunologisk studie kompletterar avsevärt funktionell utvärdering av de olika komponenterna i systemet för hemostas.

Diagnostiska test, som bygger på användning av läkemedel som reagens från ormgifter

Det har länge varit etablerat, att många ormgifter innehåller högaktiva proteolytiska enzymer, orsaka blodproppar och inverkan på de olika länkarna i koagulationskaskaden. Följaktligen ormgifter och isolerade från koagulas dem i stor utsträckning för detektering av hemostatiska rubbningar, Kvantitativ bestämning av koagulationsfaktorer, detektion och kvantitativ bestämning av monomera komplex lösliga fibrin (RFMK) och ett antal andra studier.

Prover av ormgift är ofta mycket lättare och göra snabbare diagnos av hemostatiska rubbningar.

Tabellen visar data om verkningsmekanismen av gifter på blodproppar och möjligheter diagnostisk användning varje.

Dessa funktioner ytterligare utöka samtidig användning av flera gifter och enkla gemensamma koagulationstester. Så, t.ex, samtidig användning av koagulationstester med huggormsgift och gör det lätt att skilja efa faktor VII brist, Х-V и II (i tabellen nedan), och med en ytterligare korrektion filtreras normal plasma (effektfaktor V och II) -defitsit Faktorer X, V.

Fastställande av grundläggande fysiologiska antikoagulantia

Det viktigaste är att bestämma aktiviteten av de viktigaste fysiologiska antikoagulantia - antitrombin III, en minskning som kan genetiskt bestämmas (Primär trombofili) eller sekundär på grund av intensiv konsumtion (DIC, Massiva trombos) eller accelererad metabolism (heparinbehandling, L-аспарагиназой, syntetiska preventivmedel) och blockad av immunkomplex, paraproteinami, fiʙronektinom, akutfasproteiner.

I vilket fall som helst minskning av aktiviteten av antitrombin III nedan 60-65 % Den stöder intravaskulär koagulation, Den gör mindre uttalad antikoagulerande effekten av heparin. Men mycket ofta mellan graden av antitrombin III och minskad känslighet för heparin ingen lag följs.

Det är oftast en försvagning av antikoagulerande verkan av heparin råder betydligt under graden av minskning av aktiviteten av antitrombin III. Bevisade, att underskotten i olika former av dess antitrombin III affinitet heparin kan variera i olika grader. Förutom, olika fraktioner av heparin, förhållandet som i läkemedel mycket föränderliga, också ha en annan affinitet för antitrombin III. Därför, i praktiken, är det viktigt att undersöka både den faktiska aktiviteten hos antitrombin III, och dess förmåga att vända under påverkan av snabbverkande antikoagulerande heparin.

Den antikoagulerande aktiviteten hos antitrombin III

Den antikoagulerande aktiviteten hos antitrombin III Den bestäms av kapaciteten hos testplasma (skild - Metod för Copley Winter eller defibrinerat termisk denaturering vid en temperatur 56 ° C - metoder Loligera, Abildgaarda et al.,) inaktivera för en viss ingång från utsidan trombin. Den kvarvarande trombinaktivitet i ett plasma kan bestämmas för dess koagulationsaktivitet (av fibrinogene, bariumsulfat adsorberat plasma) eller genom klyvning av ett kromogent substrat, känslig för trombin eller faktor Xa (såsom antitrombin III och inaktiverar faktor).

Heparin-kofaktornaya aktivnosti

Heparin cofaktoraktivitet ingår i plasma antitrombin III längre period bestäms av en toleranstest av plasman till heparin, som kan anses vara vägledande, eftersom det ger en mycket stor variation av normalvärden och reproducera tillräckligt.

Mycket mer exakt SPELA izvodimy tester, att undersöka effekten av olika koncentrationer av heparin på trombin tid studera plasma, innehållande en liten mängd av blodplättar. Jämförelse sker med förlängning av trombintiden av normal kontrollplasma, som tillsätts på samma prov heparin.

Så, till trombin-heparin analys för att studera blodplasma läggs till mängden heparin, som förlänger trombintid kontroll med 15 till 32-35 med (låg koncentration) och upp till 95 till 110 (hög koncentration av heparin). Från dessa data, aktivitetsindex beräknas antitrombiner plasma (AAP) och reserv antikoagulerande plasma (CBA).

Det är också allmänt använt liknande tekniker för att uppskatta graden av inaktivering av trombin i koagulationstester, och de kromogena substraten.

Immunologisk detektion av antigen av antitrombin III

Immunologisk detektion av antigen av antitrombin III Det gör att du kan skilja mellan olika typer av trombofili:

• med otillräcklig syntes av antitrombin III (minskade nivåer av antigenmarkören minskad aktivitet adekvat);
• med bevarad syntes av onormala och funktionellt defekta dess former (nivån av antigenmarkören är mycket högre, aktivitet än).

Proteiner C och S, тромбомодулин и en₂-makroglobulin bestämdes genom immunoenzymatiska metoder.