Diagnóza imunologicky spôsobeného neplodnosti

Počas dlhej manželstvo bez použitia antikoncepcie, a v prítomnosti mikroregiónu slizníc v pohlavných orgánov môže dôjsť postupne všimnúť imunizačný antigény spermií. Fyzikálne vyšetrenie manželov, spočívajúce v pustej manželstve, nemôže určiť príčinu neplodnosti v 10-15 % Prípady. To je v tejto skupine neplodných manželov pri použití špeciálnych metód vyšetrovanie tajnej cervikálneho kanála, sú často zistené protilátky spermie v plazme a sére spermií (ASAT), Používa kvalitatívne a kvantitatívne testy imunologické výskumu.

Postkoytalnыy skúška (FCT)

Postkoytalnыy skúška (FCT) To sa odkazuje na kvalitatívne imunotest. Negatívny výsledok ukazuje na neprítomnosť spermií v cervikálneho kanála tajomstvo, ale nemôžete identifikovať príčinu ich neprítomnosti.

Metóda. Podľa počtu pohyblivých spermií v cervikálnej kanál tajomstvo, získané po pohlavnom styku, zistiť rozsah porušení ich prenikavosť schopnosti s neplodnosťou či imunitou im hlienu z cervikálneho kanála.

FCT je nutné vykonať nasledujúce podmienky: Štúdia by mala byť vykonaná v období ovulácie, ktorý odhalil colpocytologic alebo iné metódy, Po predchádzajúcej abstinencie manželov počas 2-3 dní.

Metodike. Po obvyklom koitu pre ženu 30 minút by mal ležať na chrbte, ohýbanie kolená. Douching a vyčistenie zakázané, Potrebujete iba hygienické vložky, ktorá je odstránená počas zachytenie pre štúdium hlienu krčka maternice. Po 2-4 hodinách, prípustné a po 6-10 hodinách (čas, uplynula pred začatím štúdie, je uvedené v analýze) po pohlavnom styku čapík vystavená pomocou zrkadlo Cuzco a Endocervikálne hlien saním alebo tuberkulínovou striekačkou (bez ihly), pipetu s gumovým balónikom, alebo polyetylén katéter.

Pri praní prístroj by sa nemali používať dezinfekčné, pretože ovplyvňujú pohyblivosť spermií. Jedna kvapka výslednej hlienu z cervikálneho kanála sa prevedie do zohriateho sklíčko, potiahnuté krycie sklíčko, Územie mazaná tekutým parafínom unikať. Formulácia okamžite mikroskopiruyut (okulár 7X, 40X cieľ), určovanie počtu a charakteru pohyblivosť spermií. Liek môže byť detekovaný s aktívnym spermií progresívnou motility, kmitavý pohyb (fenomén švihu) a pevná.

Prijaté poskytovať päť typov závery FCT.

• Vynikajúci (príslušné normy): v piatich oblastiach zobrazenie až 15-20 s aktívnou spermií progresívnou pohyblivosťou a ďalšie. Spermie s fenoménom oscilácie je nižšia ako 25 %.
• Uspokojivý: v piatich oblastiach pohľad hore 10 aktívne spermie progresívne mobility a menej 25 % spermie s fenoménom swingu.
• Chudobný: menej 5 spermie v piatich zornom poli.
• Bez: absencia spermií.
• Pochybné: v piatich zornom poli viac 5 aktívny pohyblivých spermií a viac 25 % fenomén švihu.

Keď piaty typ FCT často pozoruje imunitný nekompatibilitu medzi manželmi, preto nutné určiť ACAT. K identifikácii ACAT tajného Endocervikálne, plazma, spermie alebo krvné sérum a ich zobrazenie (aglutinačné alebo znehybnený) To si vyžaduje vymenovanie kvantitatívnych imunoanalýza.

Negatívne PBC Štúdie začať s definíciou prenikaniu (prienik) schopnosť spermií cez razantné testu (Pi) a náchylnosť k spermií sekréciu cervikálneho kanála pomocou testovacieho kontaktu spermií a hlienu krčka maternice (TKSTSS).

Penetracionnyj skúška (TP)

Tenká Dĺžka kapiláry 10 Pozri napísaný počas ovulácie hlienu z cervikálneho kanála. Jeden otvorený koniec kapiláry uzatvára íl, a druhý je umiestnený do skúmavky s testovacím čerstvým ejakulátu (nie viac 3 hodiny po ejakulácii). S íl v kapiláre je pripojený k zvislej trubke. Vzorka sa inkubuje v termostate pri teplote 37 ° C. 1 žiadna. Na kvalitu ejakulátu je posudzovaná podľa hĺbka prieniku spermií v hlienu z cervikálneho kanála. Existujú tri typy skleníkových plynov.

• Vyrovnávacia - Hĺbka penetrácia (najväčšiu vzdialenosť v centimetroch, najazdení najmenej jedna spermia) vyššie 5 cm; počet spermií v bode maximálneho preniknutiu viac 5 v dohľade, a počet pohyblivých spermií v hornej tretine kapiláry je väčšia než 50 %.
• Pochybné - Hĺbka penetrácie až do 5 Pozri menší počet spermií 5, ich mobility v hornej tretine kapilárnych toku 50%.
• Bez - Hĺbka prieniku spermií toku 1 cm.

Schopnosť spermií voči prieniku To záleží na fáze menštruačného cyklu. Začína sa vyjsť z 9. deň menštruačného cyklu,, Postupne aktivácia, dosahuje svoju maximálnu expresie v čase ovulácie, konala na tejto úrovni po dobu dvoch dní, a potom postupne klesá.

Skúšobné kontaktné spermie a vaginálne hlien (TKSTSS)

Na snímke je kladený malá kvapka hlienu z cervikálneho kanála, prevzaté z žien počas ovulácie, a množstvo rovnakej veľkosti kvapky ejakulátu. Obe kvapky sú potiahnuté krycím sklíčkom, čo je mierne stlačené, pripojený k poklesu. Droga sa umiestni do vlhkej komory (Petriho miska vlhkou bavlnenou handričkou) a inkubujú v termostate pri 37 ° C. 1 žiadna.

Za týchto podmienok, normálne spermie preniknúť tajomstvo normálny cervikálneho kanála, ako je možné vidieť pod mikroskopom pri zväčšení 200X. To zodpovedá pre reakciu v blízkosti hranice medzi dvoma médiami počíta množstvo prenikajúce tajomstvo cervikálneho kanála spermií v dvoch susedných zornom poli.

S vynikajúcou TKSTSS v dvoch oblastiach pohľad odhalí viac 25 aktívne pohyblivých spermií vo fenoméne swingu menej 25 %. Ak je uspokojujúca TKSTSS v dvoch oblastiach pohľade odhalil viac 15 Aktívne pohyblivých spermií, TKSTSS v low - menej ako 15. Negatívny chýba penetrácia TKSTSS, ak sporný - fenoménom oscilácie presahuje 25 %.

V tomto teste, rovnako ako v PCT, fenomén švihu, presahujúca 25 %, pravdepodobný, To indikuje prítomnosť ACAT a vyžaduje vymenovanie kvantitatívnych imunoanalýza.

S použitím spermií a krčné sekréciu kanálov neplodné a plodné muža v rôznych množstvách na používanie TKSTSS identifikovať neúrodné manžela.

• Príklad 1. Prevzaté tajnú kanál krčka maternice u žien neplodných párov a kontrola ejakulátu zdravých mužov. Vynikajúci TKSTSS indikuje slabú penetračná schopnosť spermií manžela, a náchylnosť normálna sekrécia cervikálneho kanála.
• Príklad 2. Prevzaté plné tajomstiev krčka maternice zdravá žena a jej manžel ejakulátu z neplodných párov. Bad TKSTSS naznačuje slabú penetráciu spermií.
• Príklad 3. Prijatá tajné endocervikálne ženy neplodné páry a riadenie ejakulátu zdravých mužov. Bad TKSTSS označuje menejcennosti tajné cervikálneho kanála, čo samozrejme nepreniknú normálne spermie.

Kvantitatívne imunologické testy

Mikroagglyutinatsionny skúška Friberg

Mikroagglyutinatsionny skúška Friberg (TF) dostatočne citlivé a je k dispozícii pre klinické diagnostické laboratóriá. Použitie TF môže určiť prítomnosť ACAT a aglutinačnom titri v rôznych materiáloch (plazma ejakulát, extrakty z hlienu krčka maternice a v sére oboch manželov).

Činidlá:

1. Fyziologický roztok pufrovaný fosfátmi (FSB) 0,01 М pH 7,2-7,4.

2. Vazelinovoe olej.

Vybavenie: mikroskop, tuberkulín striekačka, mikroagglyutinatsionnye pipety 1 ml, micropipette kapacita 0,1 ml.

Metóda. Krvný Testové sérum sa inaktivuje inkubáciou v inkubátore pri teplote 56 ° C. 30 m. Ejakulát, získaný masturbáciou, ihneď zriedená tak, že FSB, koncentrácia spermií bola 40 milión. v 1 ml.

Vzhľadom k materiálu, (plazma ejakulát, extrahovať tajomstvo cervikálneho kanála alebo séra) pripravuje sériu riedení 1:4 na 1:128 použitie ako kvapalina pre riedenie FSB. V jamkách s parafínový olej mikroagglyutinatsionnyh doštičky tuberkulínové striekačky sa ihla zavedená (pod vazelinovoe oleja) Malé kvapky každého zriedenia testovaného materiálu. Potom, čo bol každý vzorka sa premyje štyrikrát striekačky. V každej zriedenie sa pridá k 5 krát menší pokles ejakulátu, a 4 h pri teplote miestnosti detekovaná aglutináty. Posledná chov, pričom pod mikroskopom pri zväčšení 100X detekovaného 3 zhlukuje preskúmavať a ďalšie, aglutinácie množstvo zodpovedá ACAT.

Spermoimmobilizuyuschy skúška Izodzhima (SIT).

Titer imobilizující ACAT sérum, extraktu plasma alebo semien tajný cervikálny kanál je daný počtom pohyblivých spermií v prítomnosti antigénov (spermie).

Komponenty.

1. Ejakulát, ktorý je produkovaný a pripraví podobne, pre TF pomocou FSB; pohyblivosť prekročiť 70 %.

2. Komplementsoderzhaschaya sérum morčiat.

3. Imunitný ľudské sérum (ICHS), dávať v prítomnosti komplementu cez 1 h inkubácie imobilizácia 90 % spermie.

4. Normálne ľudské sérum (NCHS), inaktivovaná zahrievaním na teplotu 56 ° C. 30 m.

5. Testovacie inaktivované sérum, plazma a semeno extrahovať tajné cervikálneho kanála.

Metóda. Pre vyhodnotenie aktivity doplnkov znehybnenie 1. trubica je zavedený 0,5 ml izotonickým roztokom chloridu sodného, pre stanovenie zmien v pohyblivosti spermií bez AST 2. skúmavke - 0,5 ml NHS, regulácia znehybnenie Tretia rúrka - 0,5 ml ICHS a určiť ACAT znehybnenia 4. trubice - 0,5 ml séra, alebo plazmy z ejakulátu, extrakt alebo sekrécia endocervikálne.

Potom sa každá rúrka je zavedené 0,1 ml doplnok. Posledná vec, ktorú do všetkých skúmaviek sa pridá 0,05 ml spermie suspenzie v koncentrácii 40 milión. v 1 ml. Skúmavky statív boli umiestnené v inkubátore pri teplote 37 ° C 1 žiadna. Trubice sa vyberú z pece a opatrne trepe, aby odrážal ustálený aglutinované spermie.

Na vyhodnotenie výsledkov za vysokom zväčšení mikroskopu (400X) vypočítané percento pohyblivých spermií v kvapke skúmavky, uložené na podložné sklíčko a pokrytá krytom. Rovnako tak, nastaví percento pohyblivých spermií v kvapôčkach skúmaviek s NHS a ICHS. Výsledok reakcie do úvahy vzorca

SIT = K / A

kde K - počet pohyblivých spermií v ovládacom prvku s ICHS a NHS;

O - počet pohyblivých spermií v skúmavke (Testované sérum, alebo plazmy z ejakulátu, alebo tajomstvo cervikálneho kanála).

S priemernou SIT<2 je test negatívny (počet pohybujúcich spermatických buniek v konaní a v skúmavkách z približne rovnaký), V prípade, že index CTI>2 - Test je pozitívny, T. to je. v materiáli (sérum, plazma alebo spermie extrahovať tajné cervikálneho kanála) sú imobilizované ACAT.

• Príklad 1. Pozemnej kontroly na ICHS - 10 % pohyblivých spermií. Druhé konanie s NHS - 80% pohyblivých spermií. Tieto dva ovládacie prvky spoločne - 90 % pohyblivých spermií. V skúmavke - 80 % pohyblivých spermií.

SIT = R / D = 90/80 = 1,1

Test je negatívny, znehybnený ACAT chýba.

• Príklad 2. V skúmavke - 40 % pohyblivých spermií, Avšak, v kontrole, v príklade 1.

KN = 90/40 = 2,2

Test Pozitívne. Je tu imobilizované protilátku (ASAT), prostredníctvom ktorého pohyblivosť spermií významne znížená.