Paroksysmal nattlig hemoglobinuri – Sykdom Marchiafava Michele

Paroksysmal nattlig hemoglobinuri er relativt sjelden funnet ervervet form av Hemolytisk anemi, forbundet med endring av strukturen på erytrocytter, Nøytrofile granulocytt og blodplater. Renner med underskriver av intravascular hemolyse, der det er hemoglobinuria, gemosiderinuriya, økning i nivået av plasma gratis hemoglobin. Sykdommen er ofte komplisert av eksterne vener og vaskulære trombose indre organer.

Etiologien og patogenesen ved paroxysmal nattlige gemoglobinurii

Den første beskrivelsen av sykdommen ble gitt i 1882 g. Det ble beskrevet mer detaljert i 1928 g.

Det vanlige navnet på sykdommen er paroxysmal nattlige hemoglobinuria (APG), Men passer det virkelig liten sykdommen, fordi det er ikke finnes paroxysmal hemoglobinuria ikke alltid observert.

Intravascular hemolyse med gemosiderinuriej i tillegg APG er observert i mange former for autoimmune Hemolytisk anemi som med varme, og med kaldt antistoffer, spesielt når skjemaer med varme gemolizinami, så vel som i noen former for arvelig Hemolytisk anemi, knyttet til brudd på røde blodlegemer membran strukturen.

Sykdom Markiafavy-Micheli observert på ulike aldersgrupper. Grunnen til økt ødeleggelsen av røde blodlegemer er erytrocytter seg defekt.

Røde blod celler av pasienter med PNH, som nevnt ovenfor, komplementom lett skjule når du oppretter optimale forhold for sin gyldighet, eller når forsuring serum, eller når du øker konsentrasjonen av komplement rundt røde blodlegemer ved å opprette lav konsentrasjon ioner i saharoznoj onsdag. Røde blod celler av pasienter med PNH har økt følsomhet for effekten av antistoffer som agglutinins, og, spesielt, hemolysins.

Når PNG påvirker ikke bare røde blodlegemer, men leukocytter og blodplater pasientens. Blodplater og leukocytter av pasienter med PNH har en økt følsomhet for effekten av komplement som da forsuring serum, og onsdag med sukker lave ioniske styrke. De er mange ganger mer følsomme for effekten av izoaggljutininov, enn donor blodplater og leukocytter. Dermed, blodplater og hvite blodlegemer har samme feilen i membranen, som og røde blodlegemer.

Oppdage antistoffer på overflaten av røde blodlegemer, leukocytter og blodplater og dermed bevise medlemskap i APG for autoagressivnyh gruppe sykdommer kan ikke være de mest sensitive metodene.

Det er overbevisende bevis for eksistensen av to forskjellige populasjoner av APG i erytrocytter. Mest motstandsdyktige cellene i en frisk person er en retikulocytt APG er den mest sårbare. Dette tyder på at, at patologisk røde blodlegemer befolkningen bare overlevde ikke til modning, og eldre moden erytrocytter forholde seg til sunne eller nesten sunn befolkningen.

IN 1970 i studiet av røde blodlegemer Latina, berørte PNG, Det ble oppdaget, at de inneholder, som med sunn mulatt kvinner, electrophoretic varianter av to vanlige Mr. 6-FD; Variant en, vanlig blant folk i Afrika, og i, typisk av befolkningen i Europa. Etter å ha tilbrakt hemolyse slått, at unormal røde blod celler inneholder bare ett alternativ Mr. 6-FD, og normal røde blod celler – både electrophoretic variantene av g-6-PD. Derav, lysed RBCs nedstammer fra en enkelt celle.

Dette faktum nøyaktig angir at to bestander av erytrocytter, forskjellige ikke bare funksjonelt, som, f.eks, ved mikrosferocitoze, men også etter opprinnelse: med andre ord, Det bekrefter tilstedeværelsen av patologisk klone celler, t. Det er. somatiske mutasjon. Identiteten til røde blodlegemer membran lesjoner, nøytrofile og blodplater antyder at, patologisk informasjonen sannsynligvis får buret, Neste for stammen, t. Det er. foregående cellen mielopojeza. Blastomnyj vekst for PNG er ikke bestemt. Beskrive bare isolerte tilfeller av rask utvikling av leukemi på bakgrunn PNG. Likevel, Vi kan anta, at PNG er en variant av godartet svulst av blodet, i lang tid, produserer ingen svulst celle spredning, karakteristisk for andre former for leukemi.

Komplementchuvstvitelnosti utviklingsmekanismen i PNG mens uklart.

Betydelige endringer i aktiviteten av enzymer Glykolysen og pentozno-fosfat syklus ikke.

Når PNG redusert aktivitet i acetylcholinesterase av erytrocytter, sannsynligvis på grunn av avbrudd i strukturen av røde blodlegemer membraner, fordi enzymet ligger på membran overflaten og enkelt brutt når nederlaget. Kjente, at bruk av hemmere av acetylcholinesterase har ingen virkning på overlevelse av erytrocytter. Men er høsten acetylcholinesterase aktivitet også observert i andre former for Hemolytisk anemi, Derfor kan ikke forklare fenomenet økt komplementchuvstvi- Lems.

Det er dokumentert, bevis av økningen i antall umettede fettsyrer, inkludert i strukturen i fosfolipider, røde blodlegemer membran. Det er en mulighet, at endringer i lipider, er bare en refleksjon av andre endringer i strukturen av røde blodlegemer membraner. Angi i studiet av protein av røde blodlegemer membran av pasienter med PNH i polyakrylamid gel geleelektroforese i nærvær av natrium dodecilsulfata, i mange deler av proteininnhold er signifikant forskjellig fra kontrollen.

Hovedrollen i patogenesen av trombotiske komplikasjoner i APG henvist vnutrisosudistomu nedbryting av røde blodlegemer og Blodlevring faktorer stimulering, løslatt fra erytrocytter under bruddet. Når APG ødelagt det meste retikulocytt, Kunne, Dette og bør forklare frekvensen av trombotiske komplikasjoner i denne sykdommen, i motsetning til andre former for Hemolytisk anemias, ledsaget av en uttalt intravascular hemolyse.

Kliniske manifestasjoner paroxysmal nattlige gemoglobinurii

Sykdommen starter ofte med en klynk. Pasienter klager på svakhet, utilpasshet, svimmelhet. Noen ganger notater subicteric skler. Ofte de første klagene over hodepine, magesmerter av ulike lokalisering. En tendens til økt dannelse årsaker pasienten å søke lege. Hemoglobinuria ganske sjelden er det første symptomet på sykdommen og noen pasienter i APG kan være borte hele. I noen tilfeller vises det for første gang gjennom 2-3 år og selv gjennom 10 år etter utbruddet av sykdommen.

En av de karakteristiske trekk ved PNG-utbrudd av magesmerter. Lokalisering av det kan være svært forskjellige. Utenfor perioden kriza magesmerter, vanligvis, ikke observert. Ofte blir brekninger. Mest sannsynlig, magesmerter hos pasienter med PNH er forbundet med DVT hvem fartøy.

Eksterne vaskulære trombose (oftere enn ikke-årer av øvre og Nedre ekstremiteter, minst-av nyre fartøy) også karakteristiske symptom paroxysmal nattlige gemoglobinurii. I 12 % APG pasienter observert throm. Thromboembolic komplikasjoner er den hyppigste dødsårsaken i denne sykdommen.

Når et mål studie av pasienten ofte bemerkelsesverdig blekhet med en liten touch av zheltushnym. Det er ofte ansikts poser, noen ganger overdreven fylde. Kanskje en svak økning i milten og leveren, Mens det ikke er typisk for APG.

For paroxysmal nattlige gemoglobinurii er preget av tegn på intravascular hemolyse, Det viktigste som er på økt plasma gratis hemoglobin. Dette emnet regelmessig nesten alle pasienter i APG. Men graden av økning av plasma gratis hemoglobin varierer og avhenger av, i hvilken periode av sykdom studie. Under krisen dette andel øker betydelig, Det har også vært en økning i antall metalbumina plasma.

Plasma gratis hemoglobin nivå avhenger på graden av hemolyse i øyeblikket, innhold gaptoglobina, filtrering av hemoglobin i urinen og hastigheten på ødeleggelse komplekse hemoglobin-haptoglobin. I en liten grad av hemolyse vil gratis hemoglobin i Plasmanivåer ikke være tilstrekkelig til å filtrere det gjennom nyre filteret. Derfor er hemoglobinuria ikke obligatorisk symptom sykdom. Når går gjennom canaliculi nefronov utskilles av på hemoglobin er delvis ødelagt og deponert i rørformede epitel. Dette er grunnen urin-hemosiderin.

Utstyrt med urin hemosiderin i det overveldende flertallet av pasienter med paroxysmal nattlige hemoglobinuria. Gemosiderinurija vises noen ganger ikke umiddelbart. Dette er en viktig, men ikke bestemt til PNG tegn på sykdom.

Laboratoriet parametere i paroxizmalna kveld gemoglobinurii

Hemoglobin i pasienter med PNH varierer fra 1.86- 3,1 mmol / l (30-50 g/l) og enda mer lavt til normal under forbedringer.

Antall erytrocytter hos pasienter med PNH reduserer nivået av reduksjon av hemoglobin. Farge lyset lengre forblir nær enhet. Hvor, Hvis pasienten mister betydelige mengder jern med urin i form av hemosiderin og hemoglobin, jern nivåer er gradvis avtagende. Lav farge indikator er observert i omtrent halvparten av pasienter. Noen av dem har forhøyede hemoglobin nivåer (P), spesielt i tider med økt.

En stor del av pasienter innhold økt retikulocytt, men den relativt lave (2- 4 %). Antall leukocytter i PNG i de fleste tilfeller redusert. I mange pasienter er 1,5-3 gram 1 l, men noen ganger redusert til 0,7 til 0,8 g 1 l. Leukopeni, vanligvis, Det er ved å redusere antall nøytrofile granulocytter. Noen ganger blod i APG normal eller høy-opptil 10-11 g 1 l.

Når APG reduserer nøytrofile Phagocytic aktivitet av granulocytter.

Trombocytopeni også sett ofte i PNG, Men funksjonell delstaten Platederivert i vanlig. Sannsynligvis, Dette forklarer sjeldenhet av blødning komplikasjoner når denne sykdommen, Selv om antall blodplater noen ganger er redusert betydelig, opp til 10-20 g 1 l. Vanligvis i de fleste pasienter blodplater 50-100 g 1 l. Antall normal blodplater utelukker ikke en diagnose av paroxysmal nattlige gemoglobinurii.

I studiet av benmarg oppdaget symptomer, hovedsakelig karakteristisk for Hemolytisk anemi er en rød irritasjon bakterie hematopoiesis i vanlig nummer mielokariocitov. Noen pasienter har en liten reduksjon i antall Megakaryocyte.

Nivået av serum jern i PNG avhengig av fasen av sykdommen, intravascular hemolyse og aktiviteten til blod. Hvor, Hvis pasienter har konstant eller hyppig hemoglobinuria, i tillegg til den konstante gemosiderinurija, innholdet i jern i kroppen, og derfor, og nedgang i serum, noen ganger svært betydelig. Noen ganger begynner PNG med tegn på hypoplastic. Jern lagres i kroppen til pasienten APG avhenger, en side, fra jern tap i urin, og på den annen siden, intensiteten av erythropoiesis. Derfor kan du ikke ta jern mangel diagnostiske tegn på paroxysmal nattlige gemoglobinurii.

Nivå av serum bilirubin i PNG i de fleste tilfeller, uskarpt økt eller normal, hovedsakelig gjennom indirekte. Gjennomsnittlig innholdet i bilirubin er 22-28 μmol/l. Det bør tas i betraktning, что при внутрисосудистом распаде гемоглобина образуется гемоглобин-гаптоглобиновый комплекс, который а в конечном итоге также распадается с образованием билирубина.

У части больных ПНГ заболевание начинается с картины апластической анемии.

Диагностика пароксизмальной ночной гемоглобинурии

Hvis paroxysmal nattlige gemoglobinurii shell strukturen av erytrocytter er ødelagt, som gjenspeiles i høy graden av følsomhet for effekten av hennes supplement. Такая повышенная чувствительность выявляется с помощью либо пробы Хема, либо более чувствительной сахарозной пробы. Однако в ряде случаев, прежде всего при гемолизиновой форме аутоиммунной гемолитической анемии, сахарозная проба может давать ложноположительный результат. Gemoliziny er festet på overflaten av egne røde blodlegemer og i nærvær av supplement i saharoznoj onsdag ødela deres, тогда как для ПНГ характерно разрушение клеток комплементом без воздействия на них антител.

Hvis du vil utelate skjemaet anbefalt gemolizinovoj autoimmune Hemolytisk anemi studie hemolysins som beskrevet ovenfor og bruker kryss-saharoznoj med serumprøver fra pasienten og donor odnogruppnogo erytrocytter, а не наоборот, как это принято. При ПНГ прямая проба положительна, а перекрестная — отрицательна. При гемолизиновой форме АИГА может наблюдаться как положительная, так и отрицательная перекрестная проба. В этих случаях целесообразно применение третьего варианта сахарозной пробы — с использованием как сыворотки, так и эритроцитов больного. Степень гемолиза в этом варианте минимальная при ПНГ и максимальная при гемолизиновой форме АИГА. Объяснить такой результат можно лишь высокой специфичностью антител сыворотки больного гемолизиновой формой аутоиммунной гемолитической анемии к антигену, tilgjengelig i store mengder i Målestørrelsen på erytrocytter av syke, enn i erytrocytter av donor. Direkte positivt eksempel saharoznaja disse pasientene er tilknyttet, sannsynligvis, с наличием на эритроцитах фиксированных антител.

Выявление гемолизинов методом агрегатгемагглютинации и другими помогает поставить правильный диагноз. Нельзя использовать в качестве донорской сыворотку больных, так как в случае содержания в ней гемолизина результат может оказаться ложноположительным. Et negativt resultat kan oppstå, Hvis kilden bruker pasienten serum supplement APG eller pasienten serum lever cirrhose, ревматоидным полиартритом, системной красной волчанкой и другими заболеваниями, при которых снижается уровень комплемента. Сахарозная проба и проба Хема становятся менее выраженными, если при взятии крови больного в качестве антикоагулянта используется гепарин, а не цитрат натрия. После гемолитического криза интенсивность пробы Хема и сахарозной пробы снижается, но при этом они не становятся отрицательными.

Определение свободного гемоглобина плазмы крови методом Бинга в модификации Дервиза и Бялко при пароксизмальной ночной гемоглобинурии

Metoden er basert på evnen til hemoglobin å reagere med syren-benzidine onsdag i nærvær av Hydrogenperoksid med dannelsen av den grønne farge, rullende først i blått, og så i en rød-lilla. Intensitet er proporsjonal med antall hemoglobin.

Reagenser.

1. Acetatbuffer 0,1 M, pH 4,6: 27,22 g natrium acetate oppløst i 1 l vann (0,2 M oppløsning av); i en annen måle pære Cook 1 l 0,2 М раствора уксуснокислой кислоты; mixed 480 мл раствора № 1 og 520 мл раствора № 2.
2. Hydrogen peroksid 0,3 % løsning (готовят перед употреблением путем разведения пергидроля в 100 tid).
3. Бензидин солянокислый 0,1 % løsning: 50 мг солянокислого бензидина растворяют в 35—40 мл ацетатного буфера, нагревают раствор до 80 °С на водяной бане и после охлаждения доводят ацетатным буфером до 50 ml.

Фильтруют в темную склянку и хранят при комнатной температуре не более 7 dager. Пожелтевший реактив непригоден, при быстром потемнении его необходимо перекристаллизовать бензидин из спирта.

Metode.

Blod for studier fra årer tørr pinne i et silikonirovannuju rør, inneholder alle antikoagulerende. Blod med antikoagulerende sentrifugeres lenger 10 minutter ved 1500 / Min. После отделения плазмы ее вновь центрифугируют в течение 10 minutter ved 8000 об/мин для осаждения лейкоцитов.

В пробирку наливают 4 ml acetatbuffer, 2 мл перекиси водорода, 2 мл бензидина и 0,04 мл испытуемой сыворотки крови смешивают и оставляют стоять 3 m, затем переливают в кювету с длиной оптического пути 1 см и фотометрируют против компенсационного раствора при зеленом светофильтре. Интенсивность голубой окраски нарастает в течение 4—5 мин, Derfor måling av Gjenta 3 - 5 ganger på rad og registrere maksimum målinger. Etter 5-6 minutter blir coloring serum fiolett-brun farge, и величина оптической плотности начинает снижаться. Из двух выявленных максимальных результатов оптической плотности берется средний.

Компенсационный раствор, bestående av 6 ml acetatbuffer, 8 мл перекиси водорода, 3 мл раствора бензидина и 0,06 ml isoton natriumkloridoppløsning, готовят одновременно с пробой.

Калибровочную кривую выводят по раствору гемоглобина. I blodet, взятой для приготовления раствора гемоглобина, измеряют его содержание (medisinsk kolorimetre eller medisinsk refraktometre). Forberede en løsning av hemoglobin konsentrasjon 1 g / l, fra det forberede løsninger lavere konsentrasjon: 0,005,0,025, 0,05, 0,1 og 0,2 g / l. Из каждого полученного раствора добавляют 0,04 мл к смеси 4 ml acetatbuffer, 2 мл раствора бензидина и 2 мл перекиси водорода.

Основной раствор гемолизата (1 g / l) для калибровочной кривой должен храниться на холоде, og arbeider løsninger lave konsentrasjoner bør være forberedt rett før eksamen.

Normalt, i 1 liter blodplasma inneholder 0,0005 mmol / l (0,01-0.04 g) Hemoglobin.

Определение гемосидерина мочи при пароксизмальной ночной гемоглобинурии

При распаде гемоглобина железо его адсорбируется эпителием почечных канальцев и входит в состав гемосидерина. Слущенные клетки эпителии почечных канальцев в этих случаях содержат зерна гемосидерина.

При внимательном исследовании осадка мочи после центрифугирования зерна гемосидерина видны и без специальной окраски. Однако более четко они выделяются при окраске по методу Перлса.

Metode.

После центрифугирования мочи верхний ее слой отсасывают, к осадку добавляют свежеприготовленный раствор 1 % желтой кровяной соли и 1 % раствор соляной кислоты (смешивают равные объемы 2 % saltsyre og gul blood salt). Etter 10 minutter etter blanding, blanding er centrifuged og sediment ser på. Korn hemosiderin flekker blå.

Определение метгемальбумина плазмы спектрофотометрическим методом

Reagenser.

1. Фосфатный изоосмотический буфер (pH 7,4): mixed 18 ml 0.15 М раствора дигидрофосфата натрия (24,4 г ЫаН2Р04 на 1 l vann) og 82 ml 0,15 М раствора гидрофосфата натрия (21,3 г NaH₂PO₄ på 1 l vann).
2. Natrium bisulfite.
3. Natriumhydroksid 1 M.
4. Menneskelige serum albumin løsning (40 g / l).
5. Løsning gemina (5 mg / 100ml); forbereder umiddelbart ved oppløsning gemina i små mengder kaustisk soda, og så: доведением его до необходимого объема раствором сывороточного альбумина.

Metode.

K 2 мл сыворотки или плазмы крови добавляют 1 мл забуферерного изоосмотического раствора, pH 7,4. Смесь центрифугируют 30 мин при 1200—1500 об/мин. Определяют оптическую плотность при 569 nm. Затем разведенную плазму помещают в пробирку и туда добавляют примерно 5 мг сухого гидросульфата натрия. Gjennom 5 мин повторно измеряют оптическую плотность при той же длине волны. Разница между двумя величинами оптической плотности соответствует оптической плотности метгемальбумина. Metgemalbumina konsentrasjon etter kalibrering tidsplan.

Kalibrering graf skjerm som følger. Løsning gemina albuminom overføring til rør i antallet fra 0,01 til 0,1 g / l (fra 0,2 til 2 ml). В те пробирки, где количество раствора менее 2 ml, добавляют до 2 мл раствор альбумина. Затем добавляют по 1 мл фосфатного изоосмотического буфера. Смесь центрифугируют при 1500 / Min, а затем измеряют оптическую плотность. Разница между измерениями наносится на график соответственно количеству гемина.

В норме гемальбумин в плазме крови отсутствует. Vises i intravascular hemolyse, f.eks, Hvis paroxysmal nattlige gemoglobinurii eller gemolizinovoj form av autoimmune Hemolytisk anemi, а также в случае отсутствия гаптоглобина, когда гем связывается с альбумином.

Проба Хема при пароксизмальной ночной гемоглобинурии

Проба Хема основана на понижении стойкости эритроцитов больных ПНГ к снижению pH среды в присутствии комплемента свежей сыворотки.

Reagenser.

1. En oppløsning av saltsyre 0,2 n.
2. Раствор аммиака 0,04 %.

Metode.

Из вены берут 5— 6 ml blod. В качестве антикоагулянта применяют оксалат или цитрат натрия. Одновременно берут 15—20 мл крови у донора той же группы. Отделяют эритроциты от плазмы в крови больного и донора.

Сыворотку крови донора разливают по 0,5 мл в шесть пробирок, две из них помещают на 20 мин в водяную баню с температурой 56 °С для инактивации комплемента сыворотки, остальные четыре пробирки оставляют при комнатной температуре. Эритроциты больного дважды промывают изотоническим раствором хлорида натрия, затем суспензируют в таком же растворе в соотношении 1:1.

Схема исследования представлена в таблице.

Содержимое каждой пробирки перемешивают, помещают на 1 ч в термостат при температуре 37 ° C, а затем центрифугируют.

Для холостой пробы по 0,05 м эритроцитов больного и донора добавляют отдельно к 0,55 ml isoton natriumkloridoppløsning.

После центрифугирования степень гемолиза можно оценить на глаз. Для количественной оценки степени гемолиза в каждую пробирку к 4,7 ml 0,04 % раствора аммиака добавляют 0,3 мл поверхностного слоя, а в пробирку с холостой пробой — 0,3 мл исходной сыворотки крови.

Для выявления 100 % гемолиза к 4,7 мл раствора аммиака добавляют 0,3 мл суспензии эритроцитов (0,05 мл эритроцитов больного в 0,55 ml isoton natriumkloridoppløsning).

Оптическую плотность раствора измеряют на медицинском колориметре и сравнивают показания с оптической плотностью раствора аммиака без эритроцитов:

% гемолиза=((IS₁-IS₂)/IS₃)*100;

где E₁ — оптическая плотность исследуемой пробы; IS₂— оптическая плотность холостой пробы; IS₃— оптическая плотность 100 % гемолизата.

В норме гемолизируется не более 5 % erytrocytt.

Проба Хема считается положительной в том случае, если гемолизируется более 6 % erytrocytt.

При пароксизмальной ночной гемоглобинурии и гемолизиновой форме аутоиммунной гемолитической анемии гемолизируется иногда до 50—80 % erytrocytt. Для этих заболеваний характерен гемолиз лишь в присутствии неинактивированной сыворотки крови (пробирка № 2). Если инактивация сыворотки не предотвращает гемолиз (пробирка № 3), можно предположить наличие другой формы гемолитической анемии или ошибку в постановке исследования.

Для разрушения эритроцитов больных пароксизмальной ночной гемоглобинурией при pH среды 6,5 требуется обязательное присутствие комплемента, содержащегося в свежей сыворотке крови.

Сахарозная проба при пароксизмальной ночной гемоглобинурии

Сахарозная проба основана на том, at røde blod celler av pasienter med paroxysmal nattlige hemoglobinuria og gemolizinovoj form av autoimmune Hemolytisk anemi ødelagt i løsninger av lav ioniske styrke i nærvær av supplement.

Reagenser.

1. Раствор сахарозы: 9,42 сахарозы растворяют в 0,005 М фосфатном буфере; pH 6,2 (91 ml 0,005 М NaH₂PO₄ og 9 ml 0,005 М Na₂HPO₄).
2. Реактив для определения концентрации гемоглобина: 200 мг красной кровяной соли растворяют в 1 л дистиллированной воды, туда же добавляют 0,5 мл ацетонциангидрина.

Metode.

Кровь у больного берут из вены в две пробирки — сухую (8—10 мл) и с антикоагулянтом (2- 3 ml). В качестве антикоагулянта используют цитрат натрия. Эритроциты из пробирки с антикоагулянтом дважды отмывают изотоническим раствором хлорида натрия. После отмывания и отсасывания надосадочной жидкости к 0,4 мл эритроцитов добавляют 0,25 ml isoton natriumkloridoppløsning.

Одновременно берут кровь у донора той же группы крови в две пробирки — с антикоагулянтом (2—3 мл), ее обрабатывают так же, как кровь больного, и в сухую (8- 10 ml) для получения сыворотки. После отделения донорской сыворотки 0,5 мл ее помещают в водяную баню при температуре 56 ° C 30 мин для инактивации комплемента. Сыворотку крови донора следует брать в день опыта и сохранять на холоде. Схема исследования приведена в таблице.

Пробирки помещают в термостат на 30 minutter ved 37 ° C, а затем центрифугируют в течение 10 min hastigheter 2000 об/мин и оценивают степень гемолиза.

Для этого в пробирки наливают по 3,4 мл реактива для определения концентрации гемоглобина и 0,6 мл над- осадочного слоя из каждой пробирки. Gjennom 10 мин измеряют оптическую плотность раствора в пробирках при 540 нм на медицинском рефрактометре (спектрофотометре) или медицинском колориметре (фотоколориметре ФЭК-М) при зеленом светофильтре, сравнивая полученные данные с оптической плотностью раствора для определения гемоглобина. Берется среднее из двух показаний каждого опыта. Расчет производится по формуле:

% гемолиза в пробирке=((IS₁-IS₅)/(IS₈-IS₅))*100

где E₁ — оптическая плотность раствора в пробирке № 1; IS₅ — оптическая плотность раствора в пробирке № 5, необходимая для исключения окраски самой сыворотки; IS₈ — оптическая плотность раствора в пробирке № 8, где произошел 100%-й гемолиз.

Для перекрестной сахарозной пробы (пробирка № 2) 100%-й гемолиз исследуется в пробирке № 7.

Evaluering av resultater.

В норме в пробирке № 1, содержащей эритроциты исследуемого больного, гемолиз не превышает 2—3 %.

При пароксизмальной ночной гемоглобинурии и гемолизиновой форме аутоиммунной гемолитической анемии (АИГА) в этой пробирке гемолиз превышает 6 % В контрольных пробирках — № 4, содержащей эритроциты больного и инактивированную сыворотку крови донора, пробирке № 5, содержащей эритроциты и сыворотку крови донора, og antall 6, содержащей вместо сыворотки изотонический раствор хлорида натрия — гемолиз не должен превышать 1—2 %.

Перекрестная сахарозная проба (пробирка № 2) при гемолизиновой форме АИГА обычно положительная (при наличии гемолизинов в сыворотке крови), но она может быть и отрицательной. В пробирке № 3 (эритроциты и сыворотка крови больного) гемолиз наблюдается как при ПНГ, так и при гемолизиновой форме АИГА. При пароксизмальной ночной гемоглобинурии максимальный гемолиз обнаруживается в обычной сахарозной пробе (пробирка № 1), менее выраженный — в пробе с собственными эритроцитами больного (пробирка № 3); отсутствует гемолиз в перекрестной сахарозной пробе (пробирка № 2).

При гемолизиновой форме АИГА de uttales hemolyse oppdages i et utvalg med din egen blodårene og erytrocytter av syke (пробирка № 3), noe mindre uttalt, i vitro nr. 1. В пробирке № 2 haemolysis er ofte observert, но отсутствие его не исключает гемолизиновую форму АИГА.