Nasledstvennaya gemoliticheskaya anemi, på grunn av aktiviteten av pyruvat kinase mangel på røde blodlegemer

Nasledstvennaya gemoliticheskaya anemi, Relatert erytrocytt pyruvat kinase mangel - en relativt sjelden form for hemolytisk anemi, som er arvet i en autosomal recessiv måte, Det gir kliniske manifestasjoner hos homozygote, provenyet med tegn på intracellulær hemolyse, makrocytose av erytrocytter, lavt innhold av kalium. Det er mer enn 200 tilfeller av homozygot bærere av underskudd piruvatkinaznoy aktivitet.

Patogenesen

Pyruvat-kinase er et av de enzymer, avslutt glykolyse. Denne koblingen glykolyse og ATP dannet nikotinamiddinukleotid. De fleste pasienter med mangel på pyruvat kinase-aktivitet er redusert i innholdet av de røde blodceller i disse to metabolitter, I noen tilfeller er normalt innhold av ATP, men forstyrret stabiliteten av ATP under inkubasjonen. Normale nivåer av ATP finnes på betydelig retikulocytose. Dette er på grunn av tilstedeværelsen av retikulocytter og muligheten av mitokondriell ATP ikke bare via glykolyse, men også på grunn av oksidativ fosforylering.

Konsekvensen av pyruvat kinase mangel Det er også akkumuleringen av produktene fra glykolyse, dannet på tidligere stadier - fosfofenolpiruvata, 3-phosphoglycerate, og spesielt 2,3-difosfoglyserat. Innhold piruvatanlaktata avtar i røde blodceller.

Mangelen av ATP i erytrocytter pyruvat kinase-mangel Det fører til forstyrrelser i funksjonen av ATP-aznogo pumpe røde blodceller og til tap av kaliumioner, karakterisert ved at konsentrasjonen av natriumioner i erytrocyttene ikke-stigende. Dette fører til en reduksjon i innholdet av monovalente ioner i erytrocyttene, dehydrering av cellen og dens krymping. Dette fenomenet kalles dessikotsitoz. Nedgangen i røde blodlegemer av vann kompliserer prosessen med oksygenering og oksygen frigivelse av hemoglobin. I denne forbindelse, bestemt kompenserende rolle spilt av en signifikant akkumulering i erytrocytter av 2,3-syre difosfoglitserinovoy.

Affiniteten av hemoglobin for oksygen reduseres ved dens interaksjon med 2,3-difosfoglyserat. Derav, ved høyere konsentrasjoner for 2,3-difosfoglyserat returnerer oksygen til vevene lettes.

Kliniske manifestasjoner av aktiviteten av pyruvat kinase mangel

Kliniske manifestasjoner av mangel pyruvat kinase-aktivitet, avhenger av graden av hemolyse. I noen tilfeller økes hemolyse manifestert ved fødselen og er ledsaget av forekomst av alvorlig hemolytisk krise, forårsaker behovet for blodoverføringer for å opprettholde hemoglobinet i sub-normal nivåer. I andre tilfeller kan sykdommen forekommer nesten asymptomatisk med de første tegn på økt hemolyse (subikterichnost sclera og huden) alderen 17-30.

Vanligvis; sammenlignet med microspherocytosis, pyruvat kinase mangel har en mer alvorlig.

Nesten alle pasienter med følbar milt. Den svak økning i sine avslørt noen uregelmessigheter heterozygote bærere, selv om de har anemi, vanligvis, mangler. Et antall pasienter mulig splenomegali. En betydelig økning i lever sjelden funnet. I isolerte pasienter med leggsår identifisert.

Laboratorie indikatorer på aktiviteten av pyruvat-kinase mangel

De fleste av pasientene med mangel av pyruvat kinase aktivitet observert moderat anemi (4,34- 6,21 mmol / l, eller 70-100 g / l), Men i løpet av kriser hemoglobin kan reduseres til 3,1 3,72 mmol / l (50-60 G / l). Innhold eritrotsitov- 2,5-3,0 T 1 l. Hemolytisk krise kan være forårsaket av infeksjon. Det er tilfeller av hemolyse gevinst under menstruasjon.

Røde blodceller fra pasienter med pyruvat kinase mangel preget av makrocytose med normohromiey, svak anisocytose og poikilocytose. Det var en rimelig polychromatophilia. Noen ganger fant mishenevidnye røde blodceller og røde blodceller med scalloped kanter eller i form av morbær, ofte identifisert basophilic erythrocyte punktatsiya, Jolly legemer. Noen pasienter i perifert blod viste et betydelig antall erythrokaryocytes, under krisen, kan den økes til 60-70 %. ESR, hvite blodlegemer, leukogram, platetall innenfor normalområdet. Som med andre former for hemolytisk anemi, i benmargen avslørte en kraftig irritasjon rød bakterie hematopoiesen.

Nivået av bilirubin, vanligvis, økte som følge av indirekte.

Den frie plasma hemoglobin normal, men det kan være reduserte nivåer av haptoglobin. Hemosiderin i urin er fraværende. Innholdet i føtalt hemoglobin og hemoglobin A₂ innenfor normalområdet.

Osmotisk resistens i erythrocytter pyruvat kinase-mangel i de fleste tilfeller normale, noen ganger redusert etter dag inkubasjon. Autogemoliz, vanligvis, oppgradert i varierende grad. Det er tilfeller av pyruvat kinase mangel med normal autogemolizom. I det første rapporterte tilfeller av pyruvat kinase mangel har vært registrert type II autogemoliza, korrigerer tilsetning av ATP, og ikke korrigere eller litt korrigere tilsetning av glucose. Senere har mange tilfeller blitt beskrevet med enzym mangel type I autogemoliza eller ingen. Derfor er det ikke anbefalt å bruke metoden autogemoliza for differensialdiagnose av hemolyse. Levetiden av røde blodceller med mangel av pyruvat kinase-aktivitet er alltid kortere.

Type arv pyruvatkinase aktivitet autosomal recessiv. Heterozygotes praktisk talt sunne, Ifølge ulike forskere, alvorlighetsgraden av underskuddet har variert fra 50 til 70 % normer.

Diagnostisk aktivitet av pyruvat kinase mangel

Diagnostisering av pyruvat kinase mangel på røde blodlegemer kan forventes å levere i tilfelle av hemolytisk anemi, som strømmer gjennom årene med økningen i milten, mangel på perifert blodutstryk tegn microspherocytosis, elliptotsitoza og stomatotsitoza.

Kvalitative tester for bestemmelse av aktiviteten av pyruvat kinase. For dette formål er fremgangsmåten brukte fluorescerende flekk, basert på, at i løpet av reaksjonen, kataliziruemoy piruvatkinazoy, nikotinamiddinukleotid oksydert og fluorescensen forsvinner.

Aktiviteten av pyruvat-kinase i friske individer varierte fra 4,0 til 7,7 mmol (min / 1010 erytrocytter) eller 4,0 til 7,7 Strøm. Flertallet av homozygot sykdomsenzymaktivitet mindre 1 Strøm. Imidlertid kan det være tilfeller svak nedgang i aktiviteten av enzymet. Diagnose av en sjelden form for hemolytisk anemi er meget vanskelig, og en diagnose kan gjøres bare i studiet av enzymkinetikk.

Differensialdiagnose av hemolytisk anemi, forbundet med mangel på pyruvatkinase

Differensialdiagnose av hemolytisk anemi, forbundet med mangel på pyruvatkinase, nødvendig for å utføre andre former for arvelig hemolytisk anemi.

Siden de fleste pasienter som mangler pyruvat kinase aktivitet i motsetning til enkeltpersoner, lidelse microspherocytosis, elliptotsitozom, stomatocitozom, hemolytisk anemi, kondisjonerte vogn ustabil hemoglobin, og talassemi sykdommen er arvelig i en autosomal recessiv, at dette patologi er funnet bare i samme generasjon og nesten aldri sett blant foreldre.

Når arvelig anemi, kondisjonerte vogn ustabil hemoglobin, spesielt ved alvorlig sykdom, noen ganger proband er den første bærer av mutasjonen, og deretter sykdommen overføres til neste generasjon. Derfor må differensialdiagnose utføres med hemoglobinpatier, kondisjonerte vogn ustabil hemoglobin, samt resessiv arvet hemolytisk anemi, forårsaket av utilstrekkelig aktivitet av andre enzymer.

Det spiller en birolle hemoglobin stabilitet, yego elektroforese. For å utelukke andre fermentopathia undersøkt aktiviteten av andre enzymer i erytrocytter, og for å utelukke autoimmun hemolytisk anemi utført Coombs, agregatgemagglyutinatsionnaya.

Fluorescent fremgangsmåte for å bestemme aktiviteten ved piruvatkiiazy Beutler

Reagenser.

1. Fosfoenolpirovinogradnaya syre (tritsiklogeksilammoniynaya salt) 0,15 M oppløsning av, nøytralisert til pH 7,0-8,0 0,2 M oppløsning av NaOH (0,03 ml).
2. ADF 0,03 M oppløsning av, nøytralisert (0,1 ml).
3. NAD-N 0,015 M oppløsning av, nøytralisert (0,1 ml).
4. Magnesium sulfat 0,08 M oppløsning av (0,1 ml).
5. Fosfatbufferoppløsning av kalium 0,25 M, pH 11 7,4 (0,05 ml).
6. Distillirovannaya vann (0,62 ml). Blandingen kan oppbevares ved - 20 ° C ikke er mer enn en uke.

Metode.

For forskningsbruk blod, tatt med heparin eller natriumsitrat. Det sentrifugeres, aspirert og forberede plasma 20 % Suspensjonen av røde blodceller ved å tilsette fire volumer av isoton natriumkloridoppløsning.

Erytrocytt suspensjon i en mengde 0,02 ml tilsettes 0,2 ml av reagens og inkubert i 30 minutter ved 37 ° C. En dråpe ble plassert på filterpapiret, og surfe på fluoroscope. Baseline fluorescens ble detektert umiddelbart etter tilsetningen av erytrocytter til blandingen før inkubering. Normalt etter 30 min inkubasjon den forsvinner, og aktiviteten av pyruvat-kinase mangel restene. Dette er, NADH som fluorescerer under innvirkning av UV-stråling i området, nær synlig, mens NAD ikke fluor. Fordi løsningen ovenfor er ustabil og lett degradert, krever overvåking. Du bør nøye skille lag av hvite blodlegemer, Siden aktiviteten av pyruvat kinase mangel erytrocytt-enzymaktivitet i leukocytter kan være normal.