Metoder for påvisning av Leishmania i skraping av de berørte vev ved isolering av ren kultur

Når sådd skrape det berørte vevet av pasienten til en bestemt næringsmedium Leishmania formere seg, og de kan påvises ved mikroskopi.

Reagens

Среда W.W.W. for dyrking av Leishmania (14 g agar, 6 g natriumklorid, omtrent 150 ml av defibrinert kaninblod, tatt direkte fra hjertet før forbereder medium, 900 ml destillert vann). I destillert vann ble tilsatt, natriumklorid og agar. Kolben inneholdende medium ble varmet inntil fullstendig smelting av agar, og 20-30 min steriliseres i en dampsterilisator ved 147,1 kPa (15 ved).

Avkjølt til 56 ° C agar legge sterile defibrinert kanin blod, omrørt ved å rotere kolbe og fylt i sterile pipette 4 ml rør. Kolben blodagar under utleverings er et vannbad ved en temperatur 58 ° C. Rørene med mediet tips.

Etter størkning av agaren, er de plassert i en inkubator for en dag i 37 ° C for sterilitet styring og mottak av det flytende kondensat. Hvis det er produsert ikke er nok, før såing i sterile ampuller, kan du legge om 1 En ml følgende løsninger: 0,85 % natriumklorid, 1 % peptone løsning, Hanks løsning, lactalbumin hydrolysat eller andre næringsstoff medier i isotone konsentrasjoner.

Fremgangsmåter for å detektere Leishmania i avskraping av berørte vev av isolering av ren kultur

Når du velger en kultur følger nøye reglene for sterilitet. Testen område av huden tørkes av med en bomullspinne, fuktet 70 % alkohol.

Etter fordampning av alkoholen den spisse enden av et sterilt oftalmisk skalpell innsnitt tuberkel lengde på 2-3 mm. Fra bunnen av kuttet med steril Pasteur pipette do skraping vev. Den resulterende dråpe serøs-blodig væske ble overført til et reagensrør med omgivelsene. Manipulering utføres flere ganger, såing materiale hver gang et nytt rør. Øreplugger er innebygd i parafin eller sette dem gummidekslene og plassert i en inkubator ved 22-24 ° C.

Evaluering av resultater

Avlinger blir undersøkt under et mikroskop på en daglig basis for å identifisere utløsende agent. Utforsk innfødte narkotika, fremstilt ved fremgangsmåten av knust dråper, с объективом 40×40. Resultatene betraktes som negative såing, hvis du er i 40 dager patogen ble ikke funnet. Kulturer er langstrakte Leishmania (10-12 Microns med ledninger).

Bruk av kulturen metoden er mest nyttig når tuberculoid form av leishmaniasis, diagnostikk at andre metoder kan være mindre effektive.