Studie av blodkoagulasjonssystemet

Forskningsmetoder for blodkoagulasjonssystemet inkluderer følgende grupper:

1. veiledende (generell), gi en ide om tilstanden til hele koagulasjonskaskaden som helhet og dens individuelle stadier (sjekk inn kan gjøres visuelt eller ved bruk av separate enheter - koagulograf, tromboelastograf, etc.);
2. differensiere mangler ved visse faktorer - korrigerende koagulasjonstester, tester for å blande det studerte blodplasmaet med blodplasmaet til pasienter med kjent mangel på visse faktorer;
3. kvantitativ bestemmelse av individuelle komponenter i systemet ved deres funksjonelle aktivitet (koagulasjonsprøver, studier på kromogene og andre underlag) og (eller) av immunologiske markører;
4. identifisering av intravaskulær aktivering av blodkoagulasjonsprosessen og fibrinolyse ved funksjonelle tegn eller molekylære markører for slik aktivering - identifisering av aktiverte koagulasjonsfaktorer i sirkulasjonen, blodplater degranuleringsprodukter, splitting av komponentene i blodkoagulasjonssystemet eller deres metabolitter, fremveksten av nye antigene markører av aktiverte faktorer og deres komplekser, akselerert metabolisme av merkede komponenter i blodkoagulasjonssystemet (forkorte halveringstiden i omløp).

Dermed, når man vurderer tilstanden til blodkoagulasjonssystemet, brukes de som den faktiske koagulasjonsteknikker (laboratorium og instrumental), danner grunnlaget for den diagnostiske prosessen, og immunologisk, radionuklid og andre typer forskning. I mange tilfeller kan komponentene i systemet bestemmes både av funksjonell aktivitet, og immunologisk - i henhold til innholdet av det tilsvarende antigenet i blodet. Parallell bruk av slike teknikker gjør det mulig å skille former for patologi., assosiert med manglende syntese av den tilsvarende koagulasjonsfaktoren (i dette tilfellet er det like redusert som dets funksjonelle aktivitet, og mengden antigen), og skjemaer, hvor faktormolekylet syntetiseres, men det er unormalt og funksjonelt defekt.

For å betegne de første skjemaene, blir tegnet "-" lagt til nummeret til den tilsvarende faktoren (f.eks, VIII-, IX- og t. d.), og i det andre - tegnet "+" (f.eks, VIII +, IX +).

Veiledende (generell) koagulasjonstester

Bestemmelse av blodproppstid

Bestemmelse av blodproppstid (å foretrekke fremfor Lee-White-metoden) - lenge brukt hurtigpresterende (direkte ved pasientens seng) orienteringstest, oppdage signifikante blødningsforstyrrelser, assosiert med mangel på hemokoagulasjonsfaktorer (unntatt faktor VII) eller med virkningen av antikoagulantia og fibrinolytika. Brukes som en veiledningstest og for å overvåke heparinbehandling, eliminering av virkningen av heparin med protaminsulfat. Testen er relativt ufølsom, indikatorene brytes bare med en markant reduksjon i innholdet av koagulasjonsfaktorer i plasmaet (under 4-5 %), derfor ikke egnet for å oppdage milde former for hemofili A og B, så vel som blodproppsforstyrrelser ved angiohemofili, faktor XI-mangel, prekallikrein og kininogen med høy molekylvekt. Av disse grunner kan ikke testen brukes til preoperativ undersøkelse av pasienter.: med normale testverdier (5-10 min) forekomsten av kraftig postoperativ blødning er mulig.

Plasma-omberegningstid

Plasma-omkalkningstid - ikke-standardisert test med lav følsomhet, mindre pålitelig for å oppdage hypokoagulering, enn koaguleringstiden for fullblod. Kan ikke anbefales for diagnostisering av hemostaseforstyrrelser.

Aktivert plasma delvis tromboplastintid

Aktivert plasma delvis tromboplastintid (APTV, kaolin-cephalin test) - høysensitiv metode, oppdage blodproppsforstyrrelser når prosessen startes med en intern mekanisme. Selektivt følsom for plasmakoagulasjonsfaktormangel (siden blodplater og faktormangel 3 blodplater kompenseres av eksternt administrert cefalin eller erytrofosfatid).

Brukes til å overvåke heparinbehandling, preoperativ undersøkelse av pasienter m.m.. d. Standardindikatorer avhenger av de brukte multeprøvene, er i de fleste tilfeller 37-50 s (optimal - 37-45 s).

Plasma kaolin tid

Plasma Kaolin Time - Test, lik den forrige, men uten å tilsette cefalin i plasmaet (erytrofosfatid), som et resultat av at den er følsom ikke bare for mangel på plasmakoagulasjonsfaktorer, men også mangel på blodplater og faktor 3 Blodplate. Et grovt estimat av aktiviteten til denne faktoren kan utføres ved å sammenligne kaolintiden for plasmaet som er undersøkt med høyt og lavt antall blodplater. (norm - 57-70 s).

Bruk av fosfolipidkomponenter anbefales ikke, gir i APTT en koagulasjonstid lik 55 med og mer, ettersom dette reduserer nøyaktigheten og reproduserbarheten til testene kraftig, inkludert i kvantitativ bestemmelse av faktor VIII og IX.

Silikonplasma tid

Plasmasilikontid er tidspunktet for plasma-omkalkning, oppnådd under betingelsene for silikonisering av nålene, prøverør, pipette, t. Det er. med minimal kontaktaktivering. Testen er sensitiv for hyperkoagulering - intravaskulær aktivering av startkontaktfasen (faktorene XII og XI), imidlertid er denne lidelsen tydeligere identifisert ved å bestemme silikon-koagulasjonstiden for fullblod (basert på Lee-White-metoden eller tromboelastografisk registrering av prosessen i en silikonisert kyvette).

Standardindikatorene avhenger av silikonet som brukes, og bestemmes ved å undersøke blodet til friske mennesker for hver av prøvene separat.. Når du velger en silikon, er den beste, som er den mest langvarige blodproppstiden (plasma).

Protrombin (tromboplastin) plasma tid

Protrombin (tromboplastin) plasma tid (Rask tid, protrombin indeks) karakteriserer koagulasjonshastigheten til omkalket blodplasma når prosessen startes av en ekstern mekanisme, t. Det er. med tillegg av menneskelig hjerne tromboplastin (eller kanin).

Tromboplastinaktivitet standardisert på blandede prøver av normal (kontroll) plasma. De mest brukte tromboplastiner med en aktivitet på 12-18 s (i den klassiske metoden Quick - 12-13 s). Jo svakere tromboplastin, jo større er feilen i metoden.

Med normal protrombintid av plasma, lar testen deg identifisere en isolert eller kumulativ mangel på protrombinkompleksfaktorer - VII, X, V и II, hvorav tre faktorer (VII, X og II) K-vitaminavhengig og deres aktivitet avtar under påvirkning av indirekte antikoagulantia. I denne forbindelse er protrombintesten den viktigste for å kontrollere dosen av kumariner. (neodicoumarin, eller pelentan, syncumar, etc.) og andre medikamenter i denne gruppen (fenilin).

Protrombintid forblir normal med mangel på faktorer i den indre mekanismen for protrombinaseaktivering - faktor XII, XI, IX, VIII (t. Det er. med alle typer hemofili og Hagemans mangel), så vel som med mangel på precallikrein og kininogen med høy molekylvekt (VM kininogen)

Ulike ting aksepteres i litteraturen betegnelse av protrombintestresultater. Det er mest hensiktsmessig å indikere protrombintiden til det studerte og kontrollere blodplasmaet på sekunder (som gir informasjon om aktiviteten til det brukte tromboplastinet). Noen ganger brukes forholdet mellom disse to verdiene, t. Det er. indeks (PV av det undersøkte plasmaet, fra ,)/(Kontroller plasma PV, fra), (norm 0,9-1,1).

En annen form for vurdering av denne indikatoren, som er mest brukt i laboratorier, er beregningen av protrombinindeksen i prosent ved å kompilere den omvendte aritmetiske andelen (norm - 90-110%), denne beregningen er imidlertid feil, siden det ikke er noen aritmetikk mellom konsentrasjonen av koagulasjonsfaktorer og koagulasjonstiden, og den logaritmiske avhengigheten. Foruten, protrombintest er følsom bare for en reduksjon i koagulasjonsfaktorene nedenfor 50 % deres normale størrelse. På grunn av dette anbefales det å bruke bestemmelsen av protrombinindeksen som en prosentandel langs fortynningskurven (1:2, 1:4, 1:8 og t. d.) blandet prøve av normalt plasma. En slik kurve er tegnet en gang for tromboplastiner med forskjellig innledende aktivitet. (fra 12 til 18 fra) og ifølge den bestemmes protrombinindeksen hos de studerte pasientene. Fordelen med denne teknikken er også den, at resultatene av alle studier, inkludert de som utføres i dynamikk på forskjellige dager, tilsvarer ikke tilfeldige forskjellige prøver av normalt blodplasma, og å ha gjennomsnitt av de samme standardparametrene, som et resultat reduseres metodefeilen betydelig. Indekser, oppnådd fra proporsjonen og fra fortynningskurven til normalt plasma, samsvarer ikke i det hele tatt. Dette bør tas i betraktning når man overvåker virkningen av indirekte antikoagulantia., for nedgangen i den vanlige indeksen til 50 % tilsvarer omtrent en reduksjon i indeksen langs fortynningskurven til 25-30%, hvordan protrombinindeksen ble beregnet, hva er dens normative indikatorer for tromboplastin av denne aktiviteten.

Plasma-trombintid

Plasma-trombintid, t. Det er. koaguleringstid for sitrert plasma når trombin av standardaktivitet tilsettes det, er hovedtesten for å vurdere sluttfasen av blodpropp. Å ta hensyn til denne indikatoren er viktig for korrekt tolkning av alle andre koagulasjonstester., fordi et brudd på den siste fasen av blodkoagulering uunngåelig må føre til en økning i koagulasjonstiden i alle de ovennevnte metodene.

I de fleste tilfeller, når du utfører en trombintest, brukes denne konsentrasjonen av trombinoppløsning, som, når det blandes med et like volum blodplasma, koagulerer i 12- 18 fra, men når man gjenkjenner dysfibrinogenemi, brukes også svakere konsentrasjoner (fører til koagulasjon i 30-35 s).

Trombintid - en viktig diagnostisk indikator, dets brudd observeres som med medfødt, og ofte ervervet (sekundær) hypoprothrombinemia, med de fleste dysfibrinogenemier, og også under påvirkning av heparin, fibrinolyseprodukter (PDF) og et antall andre antitrombiner og hemmere av selvmontering av fibrinmonomerer. På grunn av dette svekkes trombintid primært og i større grad i akutte og subakutte spredte intravaskulære koagulasjonssyndromer (DIC)., som spiller en viktig rolle i rask diagnose av denne patologien.

Autokoagulasjonstest

Autokoagulasjonstest (HANDLING) - svært følsom to-trinns, karakteriserer prosessen med blodkoagulasjon når den utløses av en indre mekanisme. Som APTV, testen er ikke følsom for faktor VII-mangel, men samtidig avhenger ikke indikasjonene av innholdet av fibrinogen (faktor I) i det studerte blodplasmaet, hvordan den skiller seg fra alle andre omtrentlige koagulasjonsprøver.

En annen dyd med ACT er, at fortynnet blod blir undersøkt, på grunn av hvilken sensitiviteten til testen for mangel på koagulasjonsfaktorer økes betydelig og, Foruten, å utføre ACT krever ikke bruk av kaolin og multe, siden standardiseringen av kontakt og fosfolipidaktivering i den oppnås ved hemolysat av egne erytrocytter av de studerte.

Essensen av ACT er, hva å 2 ml hypotonisk oppløsning (0,222 %) kalsiumklorid tilsettes 0,1 ml blod fra pasienten.

I denne hemolysat-kalsiumblandingen dannes protrombinase og trombin, hvis aktivitet bestemmes av det påfølgende tilskuddet 0,2 ml av denne blandingen til 0,2 ml plasma av den undersøkte (hver 2 min i løpet av den første 10 m, og deretter hver 10 min under 1 Nei).

Fagets plasma er en kilde til fibrinogen, som tester aktiviteten til trombin dannet i blandingen. Som mange studier har vist, det kan erstattes med blodplasma fra friske mennesker eller fibrinogenoppløsning. I dette tilfellet reduseres pasientens blodforbruk til 0,1-0,2 ml (kan tas fra fingeren!), hva forvandler en autokoagulasjonstest til en mikrokoagulasjonstest (MCT) og gjør det veldig praktisk for pediatrisk bruk, inkludert i studien av hemostase hos nyfødte.

Koagulasjonsaktivitet i ACT og MKT begynner å øke og hos friske mennesker når det vanligvis maksimalt i det 10. minutt, inkubasjon av blod-kalsiumblanding (KKS), når koagulasjonen av substratplasmaet skjer i 10 ± 1 s. Da begynner koagulasjonsaktiviteten til CCS å avta., som indikerer inaktivering av trombin dannet i den. Med hemofili, virkningen av heparin og andre koagulasjonsforstyrrelser, koagulasjonsaktiviteten til CCS er kraftig redusert, og maksimum beveger seg fra det 10. minutt til en senere dato. Ved hyperkoagulasjon observeres en tidligere og mer signifikant økning i trombinaktivitet i CCS..

Når du utfører testen i ett prøverør (bestemmelse bare på 10. minutt av inkubering av CCS) den kan brukes til å kontrollere heparinbehandling. Fordelen med denne teknikken over aktivert partiell tromboplastintidstest er at, at det eliminerer ulik effekt av forskjellige cefaliner på heparin-koagulasjonstid.

Basert på ACT (MCT) en enkel og nøyaktig metode for differensialdiagnose av hemofili er utviklet.

Ved hjelp av konverteringstabellene gitt i referansebøkene, indikasjonene på ACT (MCT) kan uttrykkes i prosent og vises som en graf - autokoagulogram.

For å vurdere en rekke generelle parametere for blodkoagulering er instrumentelle forskningsmetoder også mye brukt., hovedsakelig med bruk av forskjellige koagulografer og tromboelastografer.

Tromboelastografi gir en ide ikke bare om de temporale parametrene for blod eller plasmakoagulering, men også om strukturen og de mekaniske egenskapene til de dannede klumper. De siste årene har standardiseringen av kontakt- og fosfolipidaktivering av koagulasjonsprosessen blitt introdusert i maskinvareopptaksmetoder.. Koagulogrammer lages også for masseutførelse av generelle koagulasjonstester - APTT, protrombin, trombin og andre med automatisk registrering av resultater.

Metoder for å skille mangelen på forskjellige koagulasjonsfaktorer og deres kvantifisering

Dataene i tabellen nedenfor viser, at en omtrentlig studie av blodkoagulerbarhet ved bruk av tre hovedtester tillater en gruppedifferensiering av mangelen på forskjellige plasmafaktorer for hemokoagulasjon. Så, reduserer koagulering bare i protrombintesten (Jeg type brudd) med normale indikasjoner på alle andre, er det karakteristisk for en arvelig mangel på faktor VII eller å redusere nivået av denne faktoren i de tidlige stadiene av utviklingen av obstruktiv gulsott eller i de første 1-2 dagene av behandling med indirekte antikoagulantia, når undertrykkelse av faktor VII-syntese er foran utviklingen av en reduksjon i nivået av alle andre K-vitaminavhengige koagulasjonsfaktorer.

Brudd på bare den interne koagulasjonsmekanismen, t. Det er. aktivert delvis tromboplastintid og ACT (Type II), observert med mangel på faktor XII, XI, IX, VIII, Von Willebrand (ikke for alle former), prekallikreina og VM kininogen. Av disse, med arvelige koagulasjonsfeil, mangelen på faktor XII, prekallikrein og VM kininogen observeres ekstremt sjelden og ledsages ikke av blødning, mens faktor VIII-mangel (hemofili A), IX (hemofili B) og von Willebrand-faktor er veldig vanlig (er mer 96 % alle arvelige koagulopatier) og er ledsaget av alvorlig blødning. Mellom dem utføres for det første ytterligere differensialdiagnostikk..

Faktor XI-mangel er relativt sjelden (ca. 0,5-1,0 % all hemofili), fortsetter med veldig mild blødning (hovedsakelig etter skader og operasjoner) og har et mellomliggende sted mellom den første undergruppen av asymptomatiske lidelser og hemofili og von Willebrands sykdom.

En annen type lidelse er preget av forlengelse av både delvis tromboplastintid og ACT, og protrombintid. Det er karakteristisk for mangel på faktor V, X eller II eller for en kompleks mangel på alle K-vitaminavhengige faktorer (VII, X, IX, II), det som observeres med obstruktiv gulsott og andre typer K-vitaminmangel, så vel som når man tar indirekte antikoagulantia.

Og endelig, sett fra samme bord, mulig brudd på indikasjonene på alle tre testene (Type IV), det som observeres med arvelig og ervervet hypo- og dysfibrinogenemia (ikke alle), når du tar direkte antikoagulantia (geparina, heparinoider, girudin et al.), behandling med fibrinolyse aktivatorer og defibrinerende medisiner (streptokinase, urokinase, etc.), utseendet i blodet av patologisk antitrombin og stoffer, forstyrrer forbindelsen (montering) fibrinmonomerer - paraproteiner, kryoglobuliner, immunkomplekser, så vel som for komplekse koagulasjonsforstyrrelser, forårsaket av spredt intravaskulær koagulasjon. I dette tilfellet blir trombintid ofte brutt i større grad og noe tidligere., enn andre tester.

Med tanke på sykdommens varighet og muligheten for dens arvelige oppkomst eller sekundær sammenheng med andre typer patologi og medisinske eller andre effekter, tilstedeværelse eller fravær av blødning og dens type, er det mulig å bestemme opprinnelsen til disse dype blodproppsforstyrrelsene.

Alt differensieringstester er basert på korreksjonsprinsippet, t. Det er. på å bestemme, i hvilken grad den identifiserte blødningsforstyrrelsen er eliminert eller, omvendt, ikke eliminert av blodplasmaprøver eller kunstig oppnådde blodprodukter med en kjent mangel på en eller annen koagulasjonsfaktor.

For dette formål lager spesialiserte laboratorier for seg selv samlinger av faktormangel i blodplasma., motta dem fra pasienter med bevisst etablert dyp (mindre 1 %) mangel på hver av faktorene og lagre dem i liten emballasje (av 0,5 ml) ved en temperatur - 30 ° C. Om nødvendig blir disse prøvene tint og brukt i diagnostiske tester..

Plasma, tint eller ubrukt ved et uhell, ikke gjenstand for frysing. Plasma med immunhemmere av en bestemt faktor skal ikke brukes i korreksjonstester.. Diagnostiske sett fra en rekke selskaper inneholder frysetørkede blodplasmaprøver med mangel på detekterbare koagulasjonsfaktorer (substratplasma). Imidlertid er mange koagulasjonsforstyrrelser ekstremt sjeldne i klinisk praksis., i denne forbindelse brukes kunstig tilberedte komponenter av normalt blod med mangel på visse koagulasjonsfaktorer, så vel som heterogene plasmaer (kyllinger, andunger, etc.).

Tabellen gir informasjon om innholdet av blodkoagulasjonsfaktorer i blodkomponenter, brukes til å utføre korrigerende koagulasjonstester, avhengig av holdbarhet. Ved hjelp av denne tabellen, lett å tyde avlesningene til noen av de tre grunnleggende koagulasjonstestene. I korrigerende teknikker brukes denne testen., standardisert for kontakt- og fosfolipidaktivering, t. Det er. kaolin-cephalin eller ved bruk av hemolysat (i ACT).

Tester for å blande pasientens blodplasma med plasma, har en kjent mangel på en eller annen faktor

Bestem den aktiverte partielle tromboplastintiden i det studerte blodplasmaet, normalt plasma (kontroll) og i plasma med en kjent mangel på faktor VIII (fra en pasient med hemofili A), IX (fra en pasient med hemofili B), XI og XII. Deretter fremstilles en blanding fra sitrerte plasmaprøver av de undersøkte (7/10 volum) og sekvensielt med hver av de mangelfulle plasmene (3/10 volum), starter med faktor VIII og IX-mangel (de vanligste formene for patologi!).

Tilsett kaolin og cefalin i blandingen, og etter 2 miner utsettes for omberegning (ved 37 ° C). I den blandingen, der aktivert delvis tromboplastintid ikke normaliseres, har samme koagulasjonsfeil.

Så, hvis den aktiverte partielle tromboplastintiden ikke blir normalisert i den undersøkte pasienten ved tilsetning av blodplasma fra en pasient med en kjent mangel på faktor VIII, men korrigert av blodplasmaet til en pasient med faktor IX-mangel, han har hemofili A.

Likeledes,, men på grunnlag av protrombintesten er mangelen på faktorene i protrombinkomplekset differensiert (X, V, VII og II).

Tromboplastingenerasjonstest

For å skille brudd på den indre mekanismen for blodkoagulasjon, den klassiske tromboplastin generasjon test med erstatning av blodplatekomponenten, forberedelse som krever en betydelig investering av tid og blod, kephalin Ulempene ved tromboplastingenereringstesten er dens besværlighet, behovet for å fremstille et stort antall reagenser, betydelig tid brukt på implementeringen.

Korreksjonstest, basert på autokoagulasjonstest.

En annen korrigerende test er ganske tilstrekkelig for oppgavene til ekspressdiagnostikk., basert på korreksjon med de samme komponentene i normalt blod på grunnlag av en autokoagulasjonstest.

Denne testen er svært pålitelig, hastighet og enkel implementering og krever lite (ikke mer 0,5 ml) mengden blod som er testet, som lar deg bruke den i pediatrisk praksis.

I han, som i tromboplastingenereringstesten, bruk adsorbert plasma og gammelt blodserum for korreksjon, som sentrifugeres på nytt før testing. Tre reagensglass helles i 2 ml 0,222 % kalsiumkloridløsning og tilsett til to av dem 0,1 ml adsorbert normalt blodplasma (1-Jeg er et prøverør) og 0,1 ml gammelt normalt blodserum (2-Jeg er et prøverør). Tre andre rør er lagt til 0,2 ml normalt sitrert plasma. Deretter tilsettes i alle reagensglass med en løsning av kalsiumklorid 0,1 ml sitrert blod fra testen.

Akkurat gjennom 4 min inkubasjon av denne blandingen, blir dens koagulasjonsaktivitet testet på normalt plasma.

En kraftig reduksjon i koagulasjonsaktiviteten bare i det første reagensrøret (med normal BaSO₄-plasma) indikerer tilstedeværelsen av faktor IX-mangel hos pasienten (hemofili B), bare i det andre reagensglasset (med gammelt serum) - omtrent faktor VIII-mangel (hemofili A); hvis korreksjon forekommer i begge rør (like sterk), da, åpenbart, det er en mangel på faktor XI eller XII (cm. Bord. 14).

Denne testen er veldig sensitiv, siden studien er utført på en skilt i 20 blodtider ved faktorkompensasjon 3 blodplatehemolysat. Det eneste reagenset som brukes er hypotonisk kalsiumkloridoppløsning, hva som gjør prøven offentlig.

Like enkel er teknikken for korreksjonstester., utført på grunnlag av en protrombintest for å differensiere faktor II-mangel, V og VII +, X (i bordet).

For å skille mellom faktor VII og X-mangler, en ekstra koagulasjonstest utføres med tilsetning av en oppløsning av en slangegyurza til det studerte blodplasmaet - stoffet lebetox (en slik konsentrasjon av gift er valgt, som i nærvær av cefalin og kalsiumklorid forårsaker koagulering i 20-25 s; alle ingrediensene tas i mengde 0,1 ml og bland) (tabellen nedenfor).

For samme formål brukes et preparat av giften til Russells huggorm., bor i India (forberedelse steppe).

Differensialdiagnose fullføres om nødvendig ved kvantitativ bestemmelse av mangelfaktorer eller deres spesifikke immunhemmere, som det brukes spesielle høysensitive standardiserte teknikker for. Disse teknikkene bruker konstruksjonen av fortynningskurver av blandede prøver av normalt blodplasma med korreksjon av mangelen på alle faktorer, bortsett fra de etterforskede. Disse kurvene brukes til å bestemme aktiviteten til den undersøkte faktoren i pasientenes plasma..

Spesiell det er viktig å kvantifisere konsentrasjonen av faktor VIII og IX, samt tilstedeværelsen av deres hemmere hos pasienter med hemofili A og B (spesielt før og under operasjonen og under intensiv substitusjonsbehandling), så vel som med forsinket rikelig postpartum blødning, når det er nødvendig å skille DIC-syndrom og en mer sjelden patologi - utseendet til en immunhemmer av faktor VIII (mye sjeldnere - faktor V).

Med dyp faktor XIII-mangel (veldig sjelden arvelig patologi) alle koagulasjonsprøver er normale, men blodproppene oppløses i 5 M eller 7 M urea.

Det hjelper også å skille mangelen på forskjellige koagulasjonsfaktorer ved å ta hensyn til graden og, spesielt, vilkår for normalisering av testavlesninger etter intravenøs administrering av blodprodukter til pasienter, t. Det er. regnskap for korreksjon i vivo etter metode L. 3. Barkagana.

Denne teknikken er spesielt effektiv med stor forskjell i forventet levealder for forskjellige faktorer i sirkulasjonen.. Så, halveringstiden til protrombinkompleksfaktorene varierer fra flere timer (фактор VII) opptil flere dager (faktor II). Faktorer X (2—2,5 dager) og V (12—18 s.).

Derfor, etter en massiv jetplasstransfusjon, øker protrombinindeksen med en mangel på faktor VII i veldig kort tid., med faktor V-mangel - litt lenger (omtrent 4-6 ganger), og med mangel på faktorene X og, spesielt, II over lengre tid (over 1-2 dager). Betydelig i denne forbindelse er effekten på protrombinindeksen til medikamentet PPSB (faktor VII konsentrat, IX, X og II). Det normaliserer også kort protrombintid med faktor VII-mangel og lenger. (mange ganger!) med mangel på faktorene X og II. Siden dette stoffet mangler faktor V, dette underskuddet blir ikke korrigert av det.

En lignende forskjell avsløres under transfusjon og erstatningsterapi av faktorer i den interne koagulasjonsmekanismen. (XII, XI, IX og VIII), hva registreres ved en aktivert partiell tromboplastintest.

Av spesiell interesse er dynamikk i korreksjon av faktor VIII-nivå og APTT-indikasjoner i transfusjonsterapi for hemofili A og von Willebrand sykdom. Under den første av disse forholdene er det en umiddelbar maksimal forbedring i koagulering etter transfusjon. (spray, rask!) antihemofil administrering av plasma eller kryopresipitat, og så ganske raskt (i 10-18 timer) den jevne nedgangen til henne, mens det i von Willebrands sykdom er en viss økning i koagulasjonsaktiviteten i løpet av få timer etter transfusjon, og da er tilbakegangen mye tregere, enn med. I denne forbindelse brukes substitusjonstransfusjoner sjeldnere i behandlingen av von Willebrands sykdom., enn med hemofili A.

Undersøkelse av den funksjonelle aktiviteten til koagulasjonsfaktorer og komponenter i kallikrein-kinin og fibrinolytiske systemer ved bruk av kromogene substrater

Metodene er basert på studiet av aktiviteten til proteolytiske enzymer og deres hemmere, involvert i blodpropp, fibrinolyse og kinindannelse, ved intensiteten og hastigheten på spaltning av peptider som er spesielt følsomme for disse enzymene, ved nedbrytning av hvilket fargestoffet frigjøres (β-nitroanilin).

Fargekvalitet på den reagerende blandingen bestemt spektrofotometrisk, og etter dens intensitet, vurderes aktiviteten til de tilsvarende enzymene (koagulasjonsfaktor, kallickreina, plasmin, etc.), og på hemming av prosessen - på aktiviteten til enzymhemmere.

Så, f.eks, effekten av heparin og antitrombin III kan vurderes ved å svekke spaltningen av kromogene substrater med faktor Xa eller trombin, og aktiviteten α₂-antiplasmin - ved å svekke effekten av plasmin på det tilsvarende kromogene substratet. Kromogene underlag eller er nummerert (f.eks, s-2222), eller kalt kromosiner med et forkortet prefiks, betegner det enzymet, som dette underlaget er følsomt overfor (f.eks, Chromozym PL er et substrat av plasmin, Chromozym TH er et substrat av trombin, Chromozym PK - substrat av prekallikrein / kallikrein, etc.. d.).

Kromogene substrater utvider mulighetene for å studere hemostasesystemet, men ennå ikke tilgjengelig for mange laboratorier. Litt forskning, utført med deres hjelp, har ingen fordeler i forhold til konvensjonelle koagulasjonstester og gir konsistente resultater; i andre tilfeller forenkler bruken av dem og forsker raskere, gjør det mer nøyaktig; for det tredje har disse teknikkene en uavhengig betydning og kan ikke erstattes av koagulasjonstester (f.eks, bestemmelse av prekallikrein).

Immunologisk bestemmelse av komponentene i hemostasesystemet

Immunologisk bestemmelse av komponentene i hemostasesystemet utføres ved hjelp av metoder:

• Immunutfelling;
• Immunoelektroforese;
• Radioimmunoanalyse og andre med passende antisera

I dette tilfellet blir innholdet i blodplasmaet av antigenet til en eller annen koagulasjonsfaktor vurdert (eller dets fragmenter), ikke funksjonell aktivitet, som kan reduseres kraftig med normale plasma antigen nivåer. Denne situasjonen er typisk for alle disse tilfellene., når kroppen syntetiserer unormal (funksjonelt defekt) faktorer, beholder sin antigenisitet, men blottet for evnen til å delta i hemostase.

Dette gjør det mulig å skille mellom fullstendig opphør av syntesen av de tilsvarende faktorene og dannelsen av deres uregelmessige former..

Samtidig kan en rekke komponenter i hemostasesystemet bare bestemmes immunologisk..

Denne gruppen inkluderer slike viktige studier, hvordan du definerer følgende komponenter:

• β-tromboglobulin;
• α2-makroglobulin;
• proteiner C og S;
• antigener av faktor VIII:100 og 8:R_hukommelse;
• fibrinolyseprodukter (PDF);
• neoantigen-komplekser trombin - antitrombin III og plasmin - antiplasmin;
• en rekke andre tester.

Derfor kompletterer den immunologiske studien den funksjonelle vurderingen av forskjellige lenker i det hemostatiske systemet betydelig..

Diagnostiske tester, basert på bruk av slangegiftpreparater som reagenser

Lenge etablert, at giftene til mange slanger inneholder høyt aktive proteolytiske enzymer, forårsaker blodkoagulasjon og påvirker forskjellige ledd i koagulasjonskaskaden. Som et resultat blir slangegifter og koagulaser isolert fra dem mye brukt for å gjenkjenne forstyrrelser av hemostase., kvantifisering av koagulasjonsfaktorer, identifisering og kvantifisering av oppløselige fibrin-monomere komplekser (SFMC) og en rekke andre studier.

Prøver med slangegift forenkler ofte og stiller en raskere diagnose av hemostaseforstyrrelser.

Tabellen viser data om virkningsmekanismen for giftstoffer på blodkoagulasjonssystemet og mulighetene for diagnostisk bruk av hver av dem..

Disse mulighetene forbedres ytterligere ved samtidig bruk av flere giftstoffer og de enkleste generelle koagulasjonstestene.. Så, f.eks, samtidig bruk av koagulasjonstester med giften av gyurza og efa gjør det enkelt å skille mangelen på faktor VII, X-V og II (i tabellen nedenfor), og med ytterligere korreksjon ved filtrert normalt plasma (kilde til faktor V og II) —Mangel på faktor X og V.

Bestemmelse av de viktigste fysiologiske antikoagulantia

Det viktigste er å bestemme aktiviteten til det viktigste fysiologiske antikoagulantiet - antitrombin III, en reduksjon som kan være genetisk bestemt (primær trombofili) eller sekundært på grunn av intensivt forbruk (DIC, massiv trombose) eller akselerert metabolisme (heparinbehandling, L-asparaginase, syntetiske prevensjonsmidler) og blokkering av immunkomplekser, paraproteiner, fibronektin, proteiner i den akutte fasen.

I alle fall en reduksjon i aktiviteten til antitrombin III under 60-65 % støtter intravaskulær blodkoagulasjon, gjør den antikoagulerende effekten av heparin mindre uttalt. Samtidig er det veldig ofte ingen naturlig samsvar mellom nivået av antitrombin III og en reduksjon i følsomhet for heparin..

I dette tilfellet hersker vanligvis svekkelsen av den antikoagulerende effekten av heparin betydelig over graden av reduksjon i aktiviteten til antitrombin III.. Påviste, at med forskjellige former for antitrombin III-mangel, kan dens affinitet for heparin variere i varierende grad. Foruten, forskjellige fraksjoner av heparin, forholdet mellom medisiner er veldig variabelt, har også forskjellige tilhørigheter for antitrombin III. Derfor er det praktisk viktig å undersøke hvordan den faktiske aktiviteten til antitrombin III, og dets evne til å konvertere under påvirkning av heparin til et rasktvirkende antikoagulant.

Antikoagulerende aktivitet av antitrombin III

Antikoagulerende aktivitet av antitrombin III bestemt av evnen til det analyserte blodplasmaet (skilt - Copley-Winterstein-metoden eller defibrinert varmedenaturering ved 56 ° С - Loliger-metoder, Abildgaarda et al.) inaktivere eksternt administrert trombin innen en viss periode. Den gjenværende aktiviteten av trombin i slikt plasma kan bestemmes av dens koagulasjonsaktivitet. (av fibrinogen, plasma adsorbert av bariumsulfat) eller ved spaltning av det kromogene substratet, følsom for trombin eller faktor Xa (siden antitrombin III også inaktiverer denne faktoren).

Heparinkofaktoraktivitet

Heparin-kofaktoraktivitet av antitrombin III inneholdt i blodplasma lang periode ble bestemt ved bruk av en plasmaheparintoleransetest, som kan betraktes som veiledende, siden det gir en veldig stor spredning av normale indikatorer og ikke er tilstrekkelig reproduserbar.

Betydelig mer nøyaktige og reproduserbare tester, hvor effekten av forskjellige konsentrasjoner av heparin på trombintiden til det studerte plasmaet blir undersøkt, inneholder et lite antall blodplater. Sammenligningen utføres med forlengelsen av trombintiden til kontrollnormalt blodplasma., som de samme heparinprøvene blir tilsatt.

Så, i trombin-heparintesten tilsettes slike mengder heparin til det studerte blodplasmaet, som i kontrollen forlenger trombintiden fra 15 til 32-35 s (lav konsentrasjon) og opptil 95-110 s (høy konsentrasjon av heparin). Disse dataene brukes til å beregne indeksene for plasma-antitrombinaktivitet (AAP) og antikoagulant plasmareserve (ARP).

Lignende teknikker er også mye brukt for å vurdere graden av trombininaktivering som i koagulasjonstester., og på kromogene underlag.

Immunologisk bestemmelse av antitrombin III-antigen

Immunologisk bestemmelse av antitrombin III-antigen gjør det mulig å skille forskjellige typer trombofili:

• med utilstrekkelig syntese av antitrombin III (nivået av den antigeniske markøren reduseres tilstrekkelig til reduksjonen i aktivitet);
• med bevart syntese av dens unormale og funksjonelt defekte former (nivået av den antigeniske markøren er mye høyere, enn aktivitet).

Proteiner C og S, trombomodulin og α₂-makroglobulin bestemmes av immunoenzymatiske metoder.