Diagnostisering av immunologisk forårsaket infertilitet

Under en lang gift liv uten bruk av prevensjonsmidler, og i nærvær av mikro-regionen i slimhinner i kjønnsorganer kan oppstå gradvis få øye immuniserings antigener av sædceller. Den fysiske undersøkelsen av ektefellene, som består i en ufruktbar ekteskap, kan ikke fastslå årsaken til infertilitet hos 10-15 % saker. Det er i denne gruppen av infertile ektefellene når du søker spesielle metoder for etterforskning hemmelig cervixkanalen, sæd plasma og serum sperm antistoffer er ofte oppdages (ASAT), Bruker kvalitative og kvantitative tester av immunologisk forskning.

Postkoytalnыy test (FCT)

Postkoytalnыy test (FCT) Det refererer til kvalitativ immunologisk. Et negativt resultat indikerer fravær av sædceller i livmorhalskanalen hemmelig, men du kan ikke identifisere årsaken til deres fravær.

Metode. Med antall aktive sædceller i livmorhalskanalen hemmelig, oppnås etter samleie, etablere omfanget av brudd på deres penetrerende evne med infertilitet eller immunitet mot dem slim fra livmorhalsen.

FCT er nødvendig for å utføre følgende betingelser: Studien skal gjennomføres i perioden for eggløsning, som avslørte colpocytologic eller annen metode, etter tidligere avholdenhet ektefeller innen 2-3 dager.

Metodikken i. Etter vanlig coitus for en kvinne 30 Protokollen bør ligge på ryggen, bøye knærne. Skylling og rengjøring av forbudt, trenger bare sanitetsbind, som fjernes under fangst for studiet av slim i livmorhalsen. Etter 2-4 timer, tillatte og etter 6-10 timer (tid, gått før studien, angitt i analysen) etter samleie cervix utsatt bruker et speil Cuzco og endocervikale slim aspirert eller tuberkulinsprøyte (uten nål), en pipette med en gummipære, eller polyetylenkateter.

Når du vasker instrumentet bør ikke brukes desinfeksjonsmidler, som de påvirker sperm motilitet. En dråpe av den resulterende slim fra livmorhalsen blir overført til en oppvarmet glass-slide, belagt dekk, Territorium smurt med flytende parafin å lekke. Formulering umiddelbart mikroskopiruyut (okularet 7X, 40X objektiv), å bestemme antallet og arten av sperm motilitet. Stoffet kan oppdages med aktiv sperm progressiv motilitet, oscillerende bevegelse (fenomenet sving) og fast.

Akseptert gi fem typer konklusjoner FCT.

• Utmerket (relevante normer): i fem felt av utsikt opp til 15-20 med aktiv sperm progressive mobilitet og mer. Sperm med fenomenet svingning er mindre enn 25 %.
• Tilfredsstillende: i fem synsfelt opp 10 aktiv sperm progressive mobilitet og mindre 25 % sperm med fenomenet swing.
• Dårlig: mindre 5 sædceller i fem synsfelt.
• Minus: fravær av sperm.
• Tvilsomt: i fem synsfelt flere 5 aktiv-aktive sædceller og mer 25 % fenomenet sving.

Når den femte type FCT ofte observert immun inkompatibilitet mellom ektefeller, derfor nødvendig å bestemme den ACAT. Å identifisere ACAT hemmelig endocervikale, plasma, sæd eller blod serum og vise dem (Agglutinasjon eller immobilisert) Det krever utnevnelsen av kvantitative immunoassays.

Et negativt PBC studier begynner med en definisjon av gjennomtrengende (penetrasjon) muligheten av sperm via gjennomtrengende test (Fr) og mottakelighet for sperm sekresjon av livmorhalsen ved hjelp av en test kontakt med sperm og slimet i livmorhalsen (TKSTSS).

Penetracionnyj test (TP)

Den tynne kapillærlengde 10 Se skrevet under eggløsning slim fra livmorhalsen. En åpen ende av kapillaren lukkes leire, og den andre er plassert i et reagensrør med en test frisk sæd (ikke mer 3 timer etter utløsning). Med leire i kapillarrøret er festet til opprettstående rør. Prøven inkuberes i en termostat ved en temperatur på 37 ° C. 1 Nei. På kvaliteten på sæden er dømt av dybden av penetrasjon av sperm i slimet i livmorhalsen. Det er tre typer av GHG.

• Affirmative - Dybden av penetrasjon (den største avstand i centimeter, reiste minst enkelt sædcelle) ovenfor 5 cm; antall sædceller i det punktet av maksimal penetrasjon mer 5 i sikte, og antallet bevegelige spermatozoer i den øvre tredjedel av kapillaren er større enn 50 %.
• Tvilsomt - En inntrengningsdybde opptil 5 Se mindre sædkvalitet 5, deres mobilitet i øvre tredjedel av kapillære delene 50%.
• Minus - Dybden av penetrasjon av sperm delene 1 cm.

Sædens evne til penetrasjon Det avhenger av fasen av menstruasjonssyklusen. Hun begynner å dukke opp fra niende dagen av menstruasjonssyklusen,, gradvis aktivering, når sin maksimale ekspresjon i perioden for eggløsning, holdt på dette nivå i to dager, og deretter gradvis avtar.

Test kontakt sæd og slimet i livmorhalsen (TKSTSS)

På lysbildet er satt en liten dråpe av slim fra livmorhalsen, tatt fra kvinner under eggløsning, og en rekke av samme størrelse dråpe ejakulat. Begge dråper er dekket med et dekkglass, som er litt nede i, koblet til en dråpe. Stoffet blir plassert i et fuktig kammer (Petriskål med fuktet bomullspinne) og inkuberes i en termostat ved en temperatur på 37 ° C. 1 Nei.

Under disse forholdene, normal sperm trenge hemmeligheten av den normale cervixkanalen, som det kan sees i mikroskop ved en forstørrelse 200X. Å gjøre rede for reaksjons nær grensen mellom to medier teller antall trengende hemmelighet cervixkanalen sperm i to tilstøtende synsfelt.

Med utmerket TKSTSS i to synsfelt avslører mer 25 aktivt aktive sædceller i fenomenet swing mindre 25 %. Dersom tilfredsstillende TKSTSS i to synsfelt avslørt mer 15 aktivt aktive sædceller, TKSTSS i lav - mindre enn 15. En negativ fraværende penetrasjon TKSTSS, hvis tvilsom - et fenomen for pendling skrider 25 %.

I denne test, som i PCT, fenomenet sving, stiger 25 %, sannsynlig, Det indikerer tilstedeværelse av ACAT og krever ansettelse av kvantitative immunoassays.

Ved hjelp av sæd og cervical sekreter kanal infertile og fertile menn i ulike mengder til å bruke TKSTSS identifisere ufruktbar mann.

• Eksempel 1. Tatt en hemmelig kanal av livmorhalsen i kvinners infertile par og kontroll ejakulere friske menn. Utmerket TKSTSS indikerer en svak inntrengning evne sperm fra sin mann, og mottakelighet av normal utskillelse av cervixkanalen.
• Eksempel 2. Tatt full hemmelighet cervixkanalen sunn kvinne og hennes mann ejakulerer av infertile par. Bad TKSTSS indikerer en svak penetrasjon av sperm.
• Eksempel 3. Tatt hemmelige endocervikale kvinner infertile par og kontroll ejakulere friske menn. Bad TKSTSS indikerer mindreverdighets hemmelig cervixkanalen, som åpenbart ikke trenge normal spermatozoer.

Kvantitative immunologiske tester

Mikroagglyutinatsionny test Friberg

Mikroagglyutinatsionny test Friberg (TF) tilstrekkelig følsom og er tilgjengelig for kliniske diagnostiske laboratorier. Ved hjelp av TF kan bestemme tilstedeværelsen av ACAT og agglutinasjon titer i forskjellige materialer (plasma ejakulere, ekstrakter av slim i livmorhalsen og i serum av begge ektefeller).

Reagenser:

1. Fosfat saltløsning (FSB) 0,01 М pH 7,2-7,4.

2. Vazelinovoe olje.

Utstyr: mikroskop, tuberkulinsprøyte, mikroagglyutinatsionnye pipetterer 1 ml, mikropipette kapasitet 0,1 ml.

Metode. Blodprøve serum inaktiveres ved inkubasjon i en inkubator ved 56 ° C. 30 m. Ejakulere, oppnås ved onani, umiddelbart fortynnet slik at FSB, konsentrasjonen av sædceller var 40 millioner. i 1 ml.

På grunn av materialet (plasma ejakulere, pakke ut hemmeligheten av livmorhalsen eller serum) forbereder en serie av fortynninger 1:4 til 1:128 ved bruk som en væske for fortynning FSB. I brønner med parafinolje mikroagglyutinatsionnyh planchettes tuberkulinsprøyte med en nål er innført (henhold vazelinovoe olje) Små dråper av hver fortynning av testmaterialet. Etter at hver prøve ble vasket fire ganger i sprøyten. I hver fortynning tilsettes til 5 ganger mindre dråpe ejakulere, og etter 4 time ved romtemperatur detektert agglutinates. Siste avl, hvorved under et mikroskop ved 100X forstørrelse detektert 3 agglutinate til gjennomgang og mer, agglutinasjon titer tilsvarer ACAT.

Spermoimmobilizuyuschy test Izodzhima (SIT).

Titer immobiliserende ACAT serum, plasma eller sæd extract hemmelig cervixkanalen er satt av antall aktive sædceller i nærvær av antigener (sperm).

Komponenter.

1. Ejakulere, som er produsert og fremstilt på lignende måte, for TF bruker FSB; motilitet stige 70 %.

2. Komplementsoderzhaschaya serum av marsvin.

3. Immun human serum (ICHS), gir i nærvær av komplement via 1 h inkubasjon immobilisering 90 % sperm.

4. Normalt humant serum (NCHS), inaktivert ved oppvarming ved en temperatur 56 ° C. 30 m.

5. Test inaktivert serum, plasma og sæd trekke hemmelig cervixkanalen.

Metode. Å evaluere komplementaktivitet immobilisere den første røret er innført 0,5 ml isoton natriumkloridoppløsning, å bestemme endringer i sædcellemotilitet uten ASAT den andre prøverør - 0,5 ml NHS, kontroll immobilisering tredje tube - 0,5 ml ICHS og å bestemme ACAT immobilisere det fjerde rør - 0,5 ml av serum, eller plasma av ejakulere, ekstrakt eller sekresjon endocervikale.

Deretter tilsettes hvert rør innføres etter 0,1 ml komplement. Den siste tingen å alle rør er lagt 0,05 ml spermiesuspensjon i en konsentrasjon 40 millioner. i 1 ml. Stativ rør ble plassert i en inkubator ved en temperatur på 37 ° C 1 Nei. Rørene er fjernet fra ovnen og forsiktig ristet for å reflektere avgjort agglutinerte sperm.

Å evaluere resultater under høy forstørrelse mikroskop (400X) beregnet prosentandelen av motile spermier i en dråpe av prøverøret, avsatt på en glassplate og dekket med et deksel. Likeledes stiller den prosentandelen av motile spermier i dråpene av prøverørene med NHS og ICHS. Resultatet av reaksjonen i betraktning ved formel

SIT = K / A

der K - antall aktive sædceller i kontrollen med ICHS og NHS;

Om - antall aktive sædceller i et reagensrør (serum test, eller plasma av ejakulere, eller hemmelig av livmorhalsen).

Med gjennomsnittlig SIT<2 testen er negativ (antall bevegelige sædceller i kontroll og i reagensrørene tilnærmet like), Hvis indeksen CTI>2 - Testen er positiv, t. Det er. i materialet (serum, plasma eller sæd trekke hemmelig cervixkanalen) er immobilisert ACAT.

• Eksempel 1. Bakkekontrollen til ICHS - 10 % aktive sædceller. Den andre styring med NHS - 80% aktive sædceller. De to kontroller sammen - 90 % aktive sædceller. I reagensglasset - 80 % aktive sædceller.

SIT = R / D = 90/80 = 1,1

Testen er negativ, immobilisert ACAT fraværende.

• Eksempel 2. I reagensglasset - 40 % aktive sædceller, Men i kontroll, i Eksempel 1.

KN = 90/40 = 2.2

Testen positiv. Det er immobilisert antistoff (ASAT), gjennom hvilke sperm motilitet betydelig redusert.