Nasledstvennaya gemoliticheskaya bloedarmoede, als gevolg van de activiteit van pyruvaat kinase deficiëntie van rode bloedcellen

Nasledstvennaya gemoliticheskaya bloedarmoede, Verwante erytrocyten pyruvaat kinase deficiëntie - een relatief zeldzame vorm van hemolytische anemie, die is overgenomen in een autosomaal recessieve manier, Het geeft klinische verschijnselen in homozygoten, opbrengst met tekenen van intracellulaire hemolyse, macrocytose van erytrocyten, laag gehalte aan kalium. Er zijn meer dan 200 gevallen van homozygote dragers van het tekort piruvatkinaznoy activiteit.

Pathogenese

Pyruvaat kinase is een van de enzymen, het sluiten van de glycolyse. Deze koppeling glycolyse en ATP gevormd nikotinamiddinukleotid. De meeste patiënten met deficiëntie van pyruvaat kinase activiteit in de inhoud van de rode bloedcellen van deze twee metabolieten verlaagde, In sommige gevallen is het gehalte aan ATP normaal, maar verstoorde de stabiliteit van ATP tijdens incubatie. Normale niveaus van ATP vinden op significante reticulocytose. Dit komt door de aanwezigheid van reticulocyten en de mogelijkheid van mitochondriale ATP niet alleen via glycolyse, maar ook door de oxidatieve fosforylatie.

Het gevolg van pyruvaat kinase deficiëntie Het is ook de accumulatie van de producten van glycolyse, gevormd in eerdere stadia - fosfofenolpiruvata, 3-fosfoglyceraat, en in het bijzonder 2,3-difosfoglyceraat. Content piruvatanlaktata vermindert in de rode bloedcellen.

Het gebrek aan ATP in erytrocyten pyruvaat kinase deficiëntie Het leidt tot verstoring van de werking van ATP-aznogo pomp rode bloedcellen en het verlies van kaliumionen, waarbij de concentratie van natriumionen in de erytrocyten van niet-stijgende. Dit veroorzaakt een verlaging van het gehalte aan eenwaardige ionen in de erytrocyten, uitdroging van de cel en de krimp. Dit verschijnsel heet dessikotsitoz. De vermindering van de rode bloedcellen water compliceert het proces van oxygenatie en zuurstofafgifte door hemoglobine. In dit verband kunnen bepaalde compenserende rol van een aanzienlijke accumulatie in erythrocyten van 2,3-acid difosfoglitserinovoy.

De affiniteit van hemoglobine voor zuurstof wordt gereduceerd door de interactie met 2,3-difosfoglyceraat. Vandaar, bij hogere concentraties van 2,3-difosfoglyceraat keert zuurstof naar de weefsels wordt vergemakkelijkt.

Klinische manifestaties van de activiteit van pyruvaat kinase deficiëntie

Klinische verschijnselen van een tekort pyruvaat kinase activiteit hangen van de mate van hemolyse. In sommige gevallen wordt verhoogd hemolyse gemanifesteerd geboorte en gaat gepaard met het optreden van ernstige hemolytische crisis, waardoor de behoefte aan bloedtransfusies hemoglobine in de sub-normale niveaus te handhaven. In andere gevallen kan de ziekte voorkomen bijna asymptomatisch met de eerste tekenen van verhoogde hemolyse (subikterichnost sclera en de huid) 17-30 jaar.

Algemeen; tegenover microspherocytosis, pyruvaat kinase deficiëntie een ernstigere.

Vrijwel alle patiënten met palpabele milt. De lichte stijging van haar onthuld sommige afwijkingen heterozygote dragers, hoewel ze bloedarmoede, doorgaans, vermist. Een aantal patiënten mogelijk splenomegaly. Een significante verhoging van de lever zelden. In geïsoleerde patiënten met beenzweren geïdentificeerd.

Laboratorium indicatoren van de activiteit van pyruvaat kinase deficiëntie

De meeste patiënten met deficiëntie van pyruvaat kinase-activiteit waargenomen matige anemie (4,34- 6,21 mmol / l, of 70-100 g / l), Tijdens de crisis hemoglobineconcentratie worden verminderd tot 3,1 3,72 mmol / l (50-60 G / l). Content eritrotsitov- 2,5-3,0 T 1 l. Hemolytische crisis kan worden veroorzaakt door infectie. Er zijn gevallen van hemolyse winst tijdens de menstruatie.

Rode bloedcellen van patiënten met pyruvaat kinase deficiëntie gekenmerkt door macrocytose met normohromiey, lichte anisocytose en poikilocytose. Er was een eerlijke polychromatophilia. Soms gevonden mishenevidnye rode bloedcellen en rode bloedcellen met geschulpte randen of in de vorm van moerbei, vaak geïdentificeerd basofiele erytrocyten punktatsiya, Jolly bloedlichaampjes. Sommige patiënten in het perifere bloed kwam een ​​aanzienlijk aantal erythrokaryocytes, tijdens de crisis kan worden verhoogd tot 60-70 %. ESR, witte bloedcellen, leukogram, bloedplaatjes binnen het normale bereik. Zoals bij andere vormen van hemolytische anemie, in het beenmerg bleek een scherpe irritatie rode kiem hematopoiesis.

Het niveau van bilirubine, doorgaans, toegenomen als gevolg van indirecte.

De gratis plasma hemoglobine normaal, maar kan verlaagde haptoglobine. Hemosiderin in urine afwezig. Inhoud van foetaal hemoglobine en hemoglobine A₂ binnen het normale bereik.

Osmotische weerstand van erytrocyten pyruvaat kinase deficiëntie meestal normale, soms verminderd na dag incubatie. Autogemoliz, doorgaans, upgrade in verschillende mate. Er zijn gevallen van pyruvaat kinase deficiëntie met normale autogemolizom. In de eerste gerapporteerde gevallen van pyruvaat kinase deficiëntie is geregistreerd Type II autogemoliza, corrigeert de toevoeging van ATP, en niet verbeteren of enigszins corrigeren van de toevoeging van glucose. Daarna hebben vele gevallen beschreven met type enzymdeficiëntie I autogemoliza of niet. Daarom is het niet aan te raden om de methode autogemoliza gelden voor de differentiële diagnose van hemolytische anemie. De levensduur van de rode bloedcellen met deficiëntie van pyruvaat kinase activiteit altijd verkort.

Type erfenis pyruvaat kinase-activiteit autosomaal recessieve. Heterozygoten praktisch gezond, Volgens verschillende onderzoekers, de ernst van het tekort variëren van 50 naar 70 % normen.

Diagnostic activiteit van pyruvaat kinase deficiëntie

De diagnose van pyruvaat kinase deficiëntie van rode bloedcellen worden verwacht, moet bij hemolytische anemie, dat over de jaren met de toename van de milt, ontbreken van perifere bloed uitstrijkjes tekenen microspherocytosis, elliptotsitoza en stomatotsitoza.

Kwalitatieve testen voor het bepalen van de activiteit van pyruvaatkinase. Hiertoe wordt de werkwijze gebruikte fluorescentiekleurstof, gebaseerd op, dat in de loop van de reactie, kataliziruemoy piruvatkinazoy, nikotinamiddinukleotid geoxideerd en de fluorescentie verdwijnt.

De activiteit van pyruvaatkinase in gezonde individuen varieerden van 4,0 naar 7,7 mmol (min / 1010 erythrocyten) of 4,0 naar 7,7 Vermogen. De meeste homozygote ziekte enzymactiviteit minder 1 Vermogen. Echter, kunnen er gevallen lichte daling van de activiteit van het enzym. Diagnose van een zeldzame vorm van hemolytische anemie zeer moeilijk, en een diagnose kan dan ook in de studie van enzymkinetiek.

Differentiële diagnose van hemolytische anemie, in verband met deficiëntie van pyruvaat kinase

De differentiële diagnose van hemolytische anemie, in verband met deficiëntie van pyruvaat kinase, noodzakelijk voor het uitvoeren van andere vormen van erfelijke hemolytische anemie.

Aangezien de meeste patiënten deficiënt pyruvaat kinase activiteit tegenstelling individuen, lijden microspherocytosis, elliptotsitozom, stomatocitozom, hemolytische anemie, geconditioneerd vervoer onstabiele hemoglobine, en thalassemie ziekte wordt overgeërfd op een autosomaal recessieve, dat deze pathologie is alleen te vinden in dezelfde generatie en bijna nooit bij ouders gezien.

Bij erfelijke bloedarmoede, geconditioneerd vervoer onstabiele hemoglobine, vooral bij ernstige ziekten, soms probandus is de eerste drager van de mutatie, en dan wordt de ziekte aan de volgende generatie doorgegeven. Daarom is de differentiële diagnose moet worden uitgevoerd met hemoglobinopathies uitgevoerd, geconditioneerd vervoer onstabiele hemoglobine, alsmede recessief erfelijke hemolytische anemie, veroorzaakt door deficiënte activiteit van andere enzymen.

Het speelt een ondersteunende rol hemoglobine stabiliteit, Yego elektroforese. Voor andere fermentopathia uitsluiten onderzocht de activiteit van andere enzymen van erytrocyten, en auto-immune hemolytische anemie uitgevoerd Coombs sluiten, agregatgemagglyutinatsionnaya.

Fluorescent werkwijze voor het bepalen van de activiteit van piruvatkiiazy Beutler

Reagentia.

1. Fosfoenolpirovinogradnaya zuur (tritsiklogeksilammoniynaya zout) 0,15 M oplossing van, geneutraliseerd tot pH 7,0-8,0 0,2 M oplossing van NaOH (0,03 ml).
2. ADF 0,03 M oplossing van, geneutraliseerd (0,1 ml).
3. NAD-N 0,015 M oplossing van, geneutraliseerd (0,1 ml).
4. Magnesiumsulfaat 0,08 M oplossing van (0,1 ml).
5. Fosfaatbufferoplossing kalium 0,25 M, pH 11 7,4 (0,05 ml).
6. Distillirovannaya water (0,62 ml). Het mengsel kan worden bewaard bij - 20 ° C niet meer dan een week.

Methode.

Voor onderzoeksdoeleinden bloed, die met heparine of natriumcitraat. Er wordt gecentrifugeerd, aanzuiging en bereiden plasma 20 % suspensie van rode bloedcellen door het toevoegen van vier volumes isotone natriumchlorideoplossing.

Erytrocyt suspensie in een hoeveelheid 0,02 ml gemengd met 0,2 ml reagens en geïncubeerd 30 minuten bij 37 ° C. Een druppel werd geplaatst op het filter papier, en surfen op het fluoroscope. Basislijn fluorescentie werd onmiddellijk na de toevoeging van erytrocyten aan het mengsel vóór incubatie gedetecteerd. Gewoonlijk na 30 min incubatie verdwijnt, en de activiteit van pyruvaat kinase deficiëntie resten. Dit is, NADH die in het gebied fluoresceert onder invloed van UV-straling, dicht bij zichtbare, terwijl NAD niet fluoresceren. Omdat de bovengenoemde oplossing is stabiel en gemakkelijk afgebroken, vereist bewaking. U dient zorgvuldig de laag van witte bloedcellen te scheiden, aangezien de activiteit van pyruvaat kinase deficiëntie erythrocyten enzymactiviteit in leukocyten normaal wordt.