Diagnose van immunologisch veroorzaakte onvruchtbaarheid

Tijdens een lange huwelijksleven zonder het gebruik van voorbehoedsmiddelen, en in aanwezigheid van micro-in slijmvliezen van de genitale kan geleidelijk optreden bevlekken immunisatie antigenen van spermatozoa. Het lichamelijk onderzoek van de echtgenoten, bestaande in een kale huwelijk, kan de oorzaak van onvruchtbaarheid in 10-15 niet bepalen % gevallen. Het is in deze groep van onvruchtbare echtgenoten bij de toepassing van bijzondere opsporingsmethoden geheime cervixkanaal, sperma plasma en serum antistoffen worden vaak gedetecteerd (ASAT), Maakt gebruik van kwalitatieve en kwantitatieve testen van immunologisch onderzoek.

Postkoytalnыy-test (FCT)

Postkoytalnыy-test (FCT) Het verwijst naar kwalitatieve immunoassay. Een negatief testresultaat geeft de afwezigheid van sperma in het cervixkanaal geheim, maar u kunt de oorzaak van hun afwezigheid niet identificeren.

Methode. Door het aantal beweeglijke zaadcellen in het cervixkanaal geheim, verkregen na coïtus, vaststellen van de omvang van de schendingen van hun doordringende vermogen met onvruchtbaarheid of immuniteit voor hen slijm van de baarmoederhals.

FCT is nodig om uit te voeren de volgende voorwaarden: Het onderzoek moet worden uitgevoerd in de periode van de eisprong, die colpocytologic of een andere methode onthuld, na voorafgaande onthouding echtgenoten binnen 2-3 dagen.

De methodologie van de. Na de gebruikelijke coïtus een vrouw 30 minuten moet op zijn rug liggen, buigen je knieën. Douchen en schoonmaken van de verboden, hoeft alleen maandverband, die in de opname voor de studie van slijm van het cervixkanaal wordt verwijderd. Na 2-4 uur, toelaatbaar en na 6-10 uur (tijd, verstreken voordat de studie, ik bij de behandeling) na het vrijen baarmoederhals blootgesteld met behulp van een spiegel Cuzco en endocervicale mucus aanzuiging of tuberculinespuit (zonder naald), een pipet met een rubberen bol, of polyethyleen catheter.

Bij het wassen van het instrument mag niet worden gebruikt ontsmettingsmiddelen, omdat ze van invloed zijn beweeglijkheid van sperma. Een druppel van de resulterende slijm van de baarmoederhals wordt overgebracht naar een voorverwarmde glasplaatje, gecoate dekglaasje, Grondgebied gesmeerd met vloeibare paraffine te lekken. Formulering onmiddellijk mikroskopiruyut (oculair 7X, 40X objectief), bepalen van het aantal en de aard van spermamotiliteit. Het geneesmiddel kan worden gedetecteerd met actieve zaadcellen progressieve beweeglijkheid, oscillerende beweging (het verschijnsel van de swing) en vaste.

Aanvaard bieden vijf soorten conclusies FCT.

• Uitstekend (relevante normen): in vijf gezichtsveld tot 15-20 met actieve sperma progressieve mobiliteit en meer. Sperma het fenomeen van trilling kleiner dan 25 %.
• Bevredigend: in vijf velden van mening omhoog 10 actieve sperma progressieve mobiliteit en minder 25 % zaadcellen met het fenomeen van de swing.
• Arm: minder 5 spermatozoa in vijf gezichtsvelden.
• Minus: afwezigheid van sperma.
• Twijfelachtig: in vijf velden van meer weergeven 5 actieve beweeglijk sperma en 25 % het verschijnsel van de swing.

Wanneer de vijfde type FCT vaak waargenomen immuun onverenigbaarheid tussen echtgenoten, Daarom moet het ACAT bepalen. Om ACAT geheim endocervical identificeren, plasma, sperma of bloedserum en deze weergeven (agglutinatie of geïmmobiliseerd) Het vereist de benoeming van kwantitatieve immunoassays.

Een negatieve PBC studies beginnen met een definitie penetreren (doordringen) het vermogen van het sperma via penetratie testen (Vr) en gevoeligheid voor sperma afscheiding van de baarmoederhals met een testcontact sperma en baarmoederhalsslijm (TKSTSS).

Penetracionnyj-test (TP)

De dunne capillaire lengte 10 Zie tijdens de ovulatie slijm van de baarmoederhals getypt. Een open einde van de capillaire sluit klei, en de tweede wordt in een reageerbuis met een proef verse ejaculaat (niet meer 3 uur na de zaadlozing). Met klei in de capillair naar de rechtstandige buis bevestigd. Het monster wordt geïncubeerd in een thermostaat bij een temperatuur 37 ° C. 1 Nee. Aan de kwaliteit van het ejaculaat wordt beoordeeld door de diepte van penetratie van sperma in het slijm van het cervixkanaal. Er zijn drie types van broeikasgassen.

• Bevestigend - De indringdiepte (de grootste afstand in centimeters, reisde minstens één zaadcel) boven 5 cm; Het aantal zaadcellen in het punt van maximale penetratie 5 in zicht, en het aantal beweeglijke spermatozoa in het bovenste derde van de capillaire groter dan 50 %.
• Twijfelachtig - Een penetratiediepte tot 5 Zie minder zaadcellen 5, hun mobiliteit in het bovenste derde van de capillaire bereikt 50%.
• Minus - De penetratiediepte van sperma bereikt 1 cm.

Het vermogen van sperma penetratie Afhankelijk van de fase van de menstruatiecyclus. Ze begint om uit de 9 dagen van de menstruatiecyclus,, geleidelijk activeren, bereikt zijn maximale expressie in de tijd van ovulatie, gehouden op dit niveau gedurende twee dagen, en vervolgens geleidelijk afneemt.

Contact-test sperma en baarmoederhalsslijm (TKSTSS)

Op de dia wordt zet een kleine druppel van slijm uit de baarmoederhals kanaal, uit vrouwen tijdens de ovulatie, en een aantal van dezelfde grootte druppel ejaculaat. Beide druppels bedekt met een afdekglas, die iets naar beneden voor indrukt, verbonden met een druppel. Het geneesmiddel wordt in een vochtige kamer (Petrischaal met vochtige wattenstaafje) en geïncubeerd in een thermostaat bij een temperatuur 37 ° C. 1 Nee.

Onder deze omstandigheden normale zaadcellen penetreren het geheim van de normale cervixkanaal, zoals te zien onder de microscoop bij een vergroting 200X. Ter compensatie van de reactie bij de grens tussen twee media telt het aantal indringende het geheim van de baarmoederhals sperma in twee aangrenzende gezichtsvelden.

Met uitstekende TKSTSS in twee gezichtsvelden onthult meer 25 actief beweeglijk sperma in het fenomeen van de swing minder 25 %. Als bevredigend TKSTSS in twee gezichtsvelden onthulde meer 15 actief beweeglijk sperma, TKSTSS in laag - minder dan 15. Een negatieve afwezig penetratie TKSTSS, als twijfelachtig - een fenomeen oscillatie overschrijdt 25 %.

In deze test, zoals in PCT, het verschijnsel van de swing, meer dan 25 %, waarschijnlijk, Het duidt op de aanwezigheid van ACAT en vereist de aanstelling van kwantitatieve immunoassays.

Met sperma en cervicale afscheidingen kanaal onvruchtbare en vruchtbare mannen in verschillende hoeveelheden te gebruiken TKSTSS identificeren onvruchtbare man.

• Voorbeeld 1. Genomen een geheim kanaal van de baarmoederhals bij vrouwen onvruchtbare paren en controle ejaculaat gezonde mannen. Uitstekende TKSTSS duidt op een zwakke penetratie vermogen van sperma van haar man, en de gevoeligheid van de normale afscheiding van de baarmoederhals.
• Voorbeeld 2. Genomen volledige geheim van de baarmoederhals gezonde vrouw en haar man ejaculaat van onvruchtbare paren. Bad TKSTSS duidt op een zwakke penetratie van sperma.
• Voorbeeld 3. Genomen geheim endocervicaal vrouwen onvruchtbare paren en controle ejaculaat gezonde mannen. Bad TKSTSS geeft minderwaardigheidscomplex geheim cervixkanaal, die uiteraard niet de normale spermatozoa doordringen.

Kwantitatieve immunologische testen

Mikroagglyutinatsionny testen Friberg

Mikroagglyutinatsionny testen Friberg (TF) voldoende gevoelig en is beschikbaar voor klinische diagnostische laboratoria. Gebruik TF kan de aanwezigheid van ACAT en agglutinatie titer in verschillende materialen vast (plasma ejaculaat, extracten van slijm van de baarmoederhals en het serum van de echtgenoten).

Reagentia:

1. Fosfaat gebufferde zoutoplossing (FSB) 0,01 М pH 7,2-7,4.

2. Vazelinovoe olie.

Uitrusting: microscoop, tuberculinespuit, mikroagglyutinatsionnye pipetteerinrichting 1 ml, micropipet capaciteit 0,1 ml.

Methode. Blood testserum wordt geïnactiveerd door incubatie in een incubator bij 56 ° C. 30 m. Ejaculaat, verkregen door masturbatie, onmiddellijk verdund zodat de FSB, de concentratie van sperma was 40 miljoen. in 1 ml.

Door het materiaal (plasma ejaculaat, extract het geheim van de baarmoederhals of serum) bereidt een reeks verdunningen 1:4 naar 1:128 gebruikt als vloeistof voor verdunning FSB. In putten met paraffineolie mikroagglyutinatsionnyh planchetten tuberculine spuit met een naald wordt geïntroduceerd (onder vazelinovoe olie) Kleine druppels van elke verdunning van het testmateriaal. Na elk monster vier keer de injectiespuit gewassen. In elke verdunning wordt toegevoegd aan de 5 keer kleiner druppel ejaculaat, en 4 h bij kamertemperatuur gedetecteerd agglutinaten. Laatste fokkerij, waarbij onder een microscoop bij 100x vergroting waargenomen 3 agglutinaat bij en meer, agglutinatie titer overeenkomt ACAT.

Spermoimmobilizuyuschy testen Izodzhima (SIT).

Titer immobiliseren ACAT serum, plasma of sperma uittreksel geheime baarmoederhals wordt het aantal beweeglijke zaadcellen in aanwezigheid van antigenen (sperma).

Componenten.

1. Ejaculaat, dat wordt vervaardigd en op soortgelijke wijze bereid, TF voor het gebruik van FSB; beweeglijkheid overschrijdt 70 %.

2. Komplementsoderzhaschaya serum van cavia's.

3. Immuun humaan serum (ICHS), die in de aanwezigheid van complement tot 1 h incubatie immobilisatie 90 % sperma.

4. Normaal menselijk serum (NCHS), geïnactiveerd door verwarming bij een temperatuur 56 ° C. 30 m.

5. Test geïnactiveerd serum, plasma en sperma uitpakken geheime cervixkanaal.

Methode. Complement activiteit evalueren immobiliseren van de buis 1 wordt geïntroduceerd 0,5 ml isotone natriumchlorideoplossing, aan de veranderingen in de beweeglijkheid van de zaadcellen zonder ASAT de 2e reageerbuis te bepalen - 0,5 ml NHS, controle immobilisatie derde buis - 0,5 ml ICHS en het bepalen van de ACAT immobiliseren de 4e buis - 0,5 ml serum, of plasma van het ejaculaat, uittreksel of afscheiding endocervicaal.

Vervolgens wordt elke buis ingebracht door 0,1 ml complement. Het laatste wat aan alle buizen toegevoegd 0,05 ml spermasuspensie in een concentratie 40 miljoen. in 1 ml. Tripod buisjes werden in een incubator geplaatst bij een temperatuur 37 ° C 1 Nee. De buisjes worden verwijderd uit de oven en voorzichtig geschud vaste agglutineerde sperma weerspiegelen.

Om de resultaten onder hoge vergroting microscoop te evalueren (400X) berekende percentage van beweeglijke zaadcellen in een daling van de reageerbuis, afgezet op een glasplaatje en bedekt met een afdekking. Evenzo wordt het percentage beweeglijk sperma in de druppeltjes van de reageerbuizen met NHS en ICHS. Het resultaat van de reactie worden gehouden door de formule

SIT = K / A

waarbij K - het aantal beweeglijke zaadcellen in de controle met de ICHS en NHS;

Over - het aantal beweeglijk sperma in een reageerbuis (serumtest, of plasma van het ejaculaat, of het geheim van de baarmoederhals).

Met gemiddeld SIT<2 de test negatief (aantal beweeglijke zaadcellen in controle en de reageerbuizen ongeveer dezelfde), Als de index CTI>2 - De test is positief, t. het is. in het materiaal (serum, plasma of sperma uitpakken geheime cervixkanaal) geïmmobiliseerd ACAT.

• Voorbeeld 1. Controle op de grond te ICHS - 10 % beweeglijk sperma. De tweede controle met de NHS - 80% beweeglijk sperma. De twee controles samen - 90 % beweeglijk sperma. In de reageerbuis - 80 % beweeglijk sperma.

SIT = R / D = 90/80 = 1.1

De test is negatief, geïmmobiliseerd ACAT afwezig.

• Voorbeeld 2. In de reageerbuis - 40 % beweeglijk sperma, In de controlegroep, in Voorbeeld 1.

KN = 90/40 = 2,2

De test positief. Er is geïmmobiliseerd antilichaam (ASAT), waardoorheen spermamotiliteit aanzienlijk verminderd.