研究線溶
診療所のための血液の線維素溶解活性を増大させる識別として極めて重要です, とその還元, それは、プラスミノーゲン活性化因子との大量消費のいずれかによるものであろう 活性化とバンチで固定、および血栓, プラズマのantiplazminovoy antiaktivatornoyおよび活性を増加させるのいずれか. それは、常に忘れてはなりません, 房や血栓でその強烈な線溶, 血漿中のFDPの内容を改善するために、検出可能, 論理的にプラズマの減少と予備プラスミノーゲン活性化因子と組み合わせ (循環血液).
自然血餅溶解の状態
自然血餅溶解の状態の概要 方法Kotovshchikova-Kuznikの修正を提供することができます. P. Baludaまたは修正E. P. イワノワ.
この方法の原理は、, これは、ヘマトクリットを与えられ、血液の赤血球内容は、最後の数によって決定されます, インキュベーションの一定期間の預金で束を中退. この画分の血液線維素溶解活性の量を増加させることによって (第3) 増加した赤血球. ディープ抗凝固および低フィブリノゲン血症の場合には, 不良と緩い房を生成します, これらの方法は、誤った結果を与えることができます.
修正手順ビッドウェルDで. IN. フィブリン塊の損失によって評価Andreenkoの線溶.
血漿の画分オイグロブリン研究線維素溶解活性
研究線維素溶解活性のユーグロブリン血漿分画は、最も重要な基本的なテストであります, 血栓症に関する欧州学会委員会によって確認されました.
これを行うには、ユーグロブリン血餅溶解を決定する古典的な方法のいずれかを使用, フィブリンプレート上の溶解活性のユーグロブリン分画の定義 (後者の場合、フィブリン試験の読みの異なる量の影響が平準化). これらの試験における溶解はに起因するものです, オイグロブリン画分に単離され、プラスミノーゲン活性化因子でした, 線維素溶解の阻害剤に対し、の大部分が削除されました. 従って、プラスミノーゲン活性化因子の血漿レベルオイグロブリン測定試験を使用して.
基礎代謝の下血の調製において, T. それはあります. 空腹時に朝に, ベッドから患者を持ち上げる前に、, 血中の組織プラスミノーゲン活性化因子はないほとんどです. 従って, このような条件で、主に内部状態によって決定されます (適切な血液) プラスミノーゲンの活性化.
このプロセスは、非常に第XIIa因子、カリクレイン - キニノゲンVMカオリンの予備接触活性化によって促進することができます, 2.5-3時間2-10分で還元オイグロブリン溶解をもたらします. この原理は、接触活性化に基づいています 決定するための方法 12-依存線溶.
血管内皮の機能は、血流外部ベーター線溶に分泌します (組織型アクチベーター, デジタルディバイドの解消) これは、血圧を測定するための手段からの血管カフを圧縮した後、オイグロブリン溶解を促進するために推定されています (サンプルOyvina-Chekalinoy), または投与された物理的な負荷後のサイクルエルゴメーター上, または薬理学的刺激 (バソプレシン誘導体 - デスモプレシンまたはadiuretinom).
これらの技術の文献では、多くの変更.
そう, 例えば, 間に 古典的な技術上の圧縮試験 カフ圧がで維持されます 10,7 キロパスカル (80 ミリメートル水銀柱. アート。) または 1,3 キロパスカル (10 ミリメートル水銀柱. アート。) 15〜20分間、より高い拡張期, および試験の最新の変形例の中. P. 玉 - 3 上の圧縮時分 1,3 キロパスカル (10 ミリメートル水銀柱. アート。) 高い収縮期血圧. 両方の場合において、第二の時間がカフを除去するために挟ま容器から採取した血液を研究します.
そのようなサンプルだけでなく、線維素溶解圧縮の効果を研究することができると, 血管壁および他の抗血栓特性 (抗凝固剤, antiaggregantなど。).
ストレステスト 標準化された方法, 通常のユーグロブリンに溶解が加速します 2 回以上 (基礎代謝の研究をしていないが、非常に大きなランダムエラーにつながります, したがって、この研究は、午前中に開始する前に患者がベッドから出るべきではありません, 静脈穿刺は、ハウスで行われるべきです).
圧縮に対する反応の弱体化 ロードまたは線維素溶解系の反応性の欠如を示し、血栓形成のリスク増加, 検証その多くの研究.
血漿中のプラスミノーゲンの内容
血漿中のプラスミノーゲンの内容 これは、半定量的にストレプトキナーゼのオイグロブリン派特定の用量を追加することによって評価することができます. フェドロワ - 手続きSlobozhankinoyによれば、, 選択されたような活性ストレプト, これは、9-11分間溶解オイグロブリンを提供します, しかし、高濃度を使用することが可能です (標準値は、個別に各研究室で表示されています). このテストでプラスミノーゲン溶解時間の欠乏で複数に拡張されます, このプロ酵素より小さい.
研究血餅溶解血漿
血餅溶解血漿の並列研究 ストレプトキナーゼの刺激に同じ手順によって、被検血漿中抗プラスミンの活性を推定するために数字を結果として生じる差を可能にします, オイグロブリン分画 - 抗プラスミンほとんどないため、, それが有する全血漿中で凝固.
量は、抗プラスミンの割合で計算されます
(Plcの砂)/SAND;
ここで、PLC - 凝固血漿は、ストレプトキナーゼの存在下で溶解時間,
ELS - ストレプトキナーゼの同じ用量の存在下でのユーグロブリン血餅溶解時間.
さらに, この係数を使用, 抗プラスミン活性は、コンパイル前希釈曲線のパーセンテージとして決定されます (正常血漿の混合試料で得られました).
より正確には、まだ実装が容易 分割azofibrinaによる研究方法の線溶, 化合物のフィブリンを表します, 共有結合hromogennыmsubstratomでsvyazannogo (azopeptidom)
この方法の原理は、, その3本のチューブピペット 10 MG azofibrina, 緩衝液と混合 (pH値 7,4), そのうちの2つのピペット 0,15 血漿mlのこれらの管のいずれかのさらなる研究 - 10000 ストレプトキナーゼのU / mlの.
インキュベーションの後 1 時間、溶液を濾過し、波長で分光光度計の測光しました 440 青色光フィルタでnm以下の医療測色計.
プラスミン活性は、ストレプトキナーゼことなく、試料中のプラズマによって決定されます 第三の管の内容物と比較して、ろ液の光学密度の変化, そしてプラスミノーゲンの血漿レベル - ストレプトキナーゼを含むサンプル中の. プラスミンのインキュベーションと同一基板上にプラズマの研究はantiplazminovayaアクティビティを決定されます. ベンチマーク, 正常血漿の研究で得られました, のために受け入れ 100 %.
このようにして, 簡単な実験室の機能方法の比較的小さなセットの助けを借りて、線維素溶解の様々な機構の状態に関するアイデアを得ることができます, 血漿中のコンテンツと血管壁のプラスミノーゲンから解放, その活性化剤および阻害剤.
血液凝固の研究のように、, これらのデータは著しくフィブリノーゲンおよびフィブリンのフィブリン溶解システムの構成要素及び分解生成物の免疫学的決意を補うことができます.
「証人」と血管内凝固線溶の分子マーカーを検出するための方法
血管内凝固の過程で強烈な線維素溶解が発生した関連, 片側, 消費と止血システムのいくつかの構成要素の血液中の多かれ少なかれ顕著な減少, 一方、 - 部品の外観, フラグメントおよび代謝産物, これは正常な血漿中でないかの含有量が少ないです.
血管内凝固および線維素溶解のこれらの「証人」、および活性化マーカーの同定は、播種性血管内凝固症候群に大きな診断価値があります, 異なる起源とmikrotrombovaskulitahの血栓塞栓性疾患 (感染, 免疫の, 腫瘍など. D。).
血小板止血のマーカー消費と活性化
消費と活性化マーカーの血小板止血のためのものです 血小板減少症, antigeparinovogo因子 - 顆粒の血漿成分を上げます 4 血小板, (3-トロンボら。, 同様に低活性および血小板の少ない凝集機能循環の保全など.
損傷および機能障害、血管内皮の主なマーカー - フォンビルブラント因子の血漿レベルを増加させます, 圧縮カフ中の溶解容器ユーグロブリン弛緩反応, バソプレシン類似体の物理的な運動又は投与.
凝固亢進
凝固亢進, 可能な場合は, 血液凝固の活性化を示すことができます. 彼女は一般的な凝固試験とイメージング研究によって明らかになりました (トロンボエラストグラフィー), とクリニック - 静脈から血液を得ることが困難に基づいて - 肺血管の両方の血栓症, 針, 不完全クエン酸と一緒に撹拌することにより、血液を安定させます (インビトロマクロ教育- とmicroclots).
この部分的に凝固した血液は、止血システムのさらなる研究のために完全に不適切です, そのように確認する必要があり、血液を遠心分離することを確認し, それが凝固するかどうか. 血の塊の存在下では、さらなる研究の対象ではありません (それは血清および生化学的分析のシリーズを調製するために使用することができ). 体験ショー, それは、この勧告に十分な密着性が、多くの場合、止血システムの研究に重大なエラーの原因ではありません.
まだいくつかのテスト血栓形成の危険性の証拠で凝固亢進. さらに, 血栓が多数, 初期次亜によって特徴づけされています, 代わりに、凝固性亢進. これらは、血栓を含みます, 第XII因子の欠乏によって引き起こされます, プレカリクレインおよびキニノゲンVM, disfibrinogenemiyami, プロテインC等の欠乏. D. 増加によるヘマトクリットインデックスに血栓症の傾向でほとんど変化凝固 (多くの場合、しばらくそこhypocoagulation), 血小板血症, 線維素溶解の劣等、など. D.
与えられた理由に基づいて, 凝固能亢進および血栓形成のリスクと同一視することはできません, この機能は現在、聖痕血栓の中に含まれていないことにより.
要因第XIIa カリクレインと第VII因子との間の「ブリッジ」の活性化
要因第XIIa カリクレインと第VII因子との間の「ブリッジ」の活性化, そのウシトロンボプラスチンとプロトロンビン時間を調べることにより、そして 4℃で18〜24時間、血漿を研究するために冷却した後に認識されています (低温試験の活性化). 血栓形成傾向の数のプロトロンビン時間25〜50で観測された減少を冷却した後 %. その他トロンボプラスチン, 牛を除きます, この研究のためには不適切です.
遊離ペプチドAの血漿中に存在します
遊離ペプチドAの血漿中に存在します, 免疫学的方法によって検出, これは、直接の証拠であるthrombinemia, トロンビンはフィブリノーゲンから離脱するので、主に分子がAペプチド. による免疫抗血清を得ることが困難に限定可用性の技術.
ほかに, 血漿ペプチドの増加通常は一時, それは、迅速に、単核食細胞の循環系から除去されるため. この点において、ペプチドのレベルの有益な場合にのみ増加, 血液中の活性トロンビンの存在の信頼できる兆候はあります.
成層とプラズマ可溶性フィブリンモノマー複合体中のフィブリノーゲンのプールの形成 (RFMK)
フィブリノゲンの健康な人では、プロパティ, 電気泳動移動度およびトロンビンに対する感度, 完全に12-14秒のトロンビンを添加することによりトロンビンアッセイで凝固.
対照的に、ときに血管内凝固の活性化 (trombinemii) と線維素溶解バンドルフィブリノゲンプールを発生, 教育SFMC, フィブリノゲンの結合 (ロックされたフィブリノゲン), そして、おそらく、, 線維素溶解の早期製品 (フラグメントXとV), そして初期および後期FDPフリー状態. SFMCと凝固していない影響を受け、関連フィブリノゲンまたはトロンビン (血清中に残りました), トロンビンの高濃度に暴露された場合、またはゆっくりとのみ凝固 (3-秒). 次のテストのparacoagulation血漿および血清SFMCと他の不活性成分のフィブリノゲンプールを検出するために、.
ベータテストnaftolovyj
ベータテストnaftolovyj (以前の名前 - フィブリノゲンBの定義) 不十分特定, 今ほとんど使用されません.
その本質は事実にあります, 血漿溶液中でβナフトールに追加されたこと 50 % エタノール (5 に低下 1 ミリリットル). 後の場合 10 振盪しながら分、粗いフレークの形態で沈殿します, サンプルが陽性であると考えられます.
エタノール試験
エタノールテスト - legkovypolnim, それのために 0,4 mlの血漿を調べ, クエン酸ナトリウムは、アミノカプロン酸と混合し安定化 (線維素溶解をブロックします), 加えます 0,15 ミリリットル 50 % エタノール (濃度がAlcoholmetersをチェック).
教育を通じて 10 穏やかな分は、血漿SFMCにおける血餅の存在を示します. 特異的な試験, しかしSFMCの一部のみを明らかにする (基本的には - krupnomolekulyarnyh), これは、DICにおいて肯定結果が得られます, 血栓症および他のタイプthrombinemia. III段階では、重度低フィブリノゲン血症の背景にエンジン (未満0.5〜0.7グラム/リットル), ヘパリンのような, エタノール試験は、多くの場合、負になります.
Protaminsulfatnyテスト
Protaminsulfatny試験は、線維素溶解のと硫酸プロタミンSFMCの初期生成物の堆積に基づいています, 魚の乳から得られました. テストは非常に特異的であり、, しかし、彼の行動に適した唯一の特定の種類の硫酸プロタミンのため.
無関係なヘパリンとプロタミン硫酸原因paracoagulationを不活性化する能力. これにより、試料は、硫酸プロタミン, paracoagulationをテストするために使用, 我々は、第一の溶液またはフィブリンモノマー上でテストする必要があります, または正常血漿, プレトロンビンおよびストレプトキナーゼを少量添加しました (または単にストレプト).
このテストは、正となると, 硫酸プロタミンは、診断の使用に適しています. 多くの独自の診断キットではコントロールが含まれて (リファレンス) プラズマ, 陽性の検査protaminsulfatnogoを与えます. これは、試験試薬のために使用されます.
これは、考慮されるべきです, 何 エタノールとprotaminsulfatnogoテストを使用すると、異なるコンポーネントのフィブリノゲンプールを同定し, 関連しているとの結果が必ずしも一致しません. そう, DIC患者の一部では、両方のテストが陽性であります, 他人 - それらの一方のみ. そのため、信頼性の高い診断のための両方のテストを行う必要があります.
Ortofenantrolinovyテスト
Ortofenantrolinovyテスト (OFT) - 非常に有益, これは、血小板の量が少ない血漿中のSFMCの定性的および定量的決意を可能にします (さらに遠心分離 20 分で 4000 /分).
試験を行うためにのみ適して 塩酸ortofenantrolin. ソリューションortofenantrolina 0,033 M (0,78 %) これは、等量のために室温で混合され、 (上 0,1 ミリリットル) スライドと揺動にプラズマを研究するために混合最初フレークの出現の時間を決定.
記録がために行われています 2 M.
結果 (秒) 量SFMCで検量線を経由して変換. 較正曲線は、種々の濃度を添加することにより調製したfibrinmonomera, 方法Radzevich-Hodorovaにより得られました, 健康なヒトの血漿のプール (ドナー). 通常、フレークはで表示されます 120 から; より速く、彼らが表示されます, 被検血漿に含まれる複数のSFMC.
テスト信頼性疾患, エタノールとprotaminsulfatnyより.
SFMC赤血球凝集反応の同定, pokrыtыhフィブリン - monomerami (FM-テスト)
私はヒト赤血球(〇) フィブリンモノマーで覆われたグループDIAGNOSTICUMで使用されています.
血漿は、ガラス試験赤血球と混合されます. 凝集の外観 (によって推定 + へ +++) それはSFMCの存在を示します, 赤血球の表面上のフィブリンモノマーとの相互作用.
テストは非常に敏感です, SFMC上記の濃度を明らかに 10 mg / mlの.
毒エファ砂を使用して、フィブリノーゲンおよびSFMCプールの凝固の完全な識別
解毒砂エパまたは凝固画分 (ehitoks, ekarin) 完全に凝固したフィブリノゲン, すべての製品SFMCと早期線溶, 関連していると、それは、血漿プール中のフィブリノゲンの凝固成分の合計量と、ロックSFMCおよびフィブリノーゲンの数を評価することができます, 血清中の最初の崩壊後に残っています, 凝固トロンビン後に得られました.
毒の濃度を使用してください, そのために20-30正常血漿の凝固を引き起こします.
サンプルSFMC毒血漿フィブリノゲンの存在下ではより多くのを明らかにしました, トロンビンと試験に比べ, 血清中, 15秒の凝固トロンビンの後に得られました, 毒を添加して第二の凝血塊を生じ, すべてのSFMCと関連するロックされたフィブリノゲンを行くします, 同様に、以前のPDF.
これらの現象はthrombinemiaと大規模な血管内凝固のための典型的なものです (DIC, 血栓塞栓症、及びら。), 健康な被験者の血清中に何の毒SFMCとロックされたフィブリノゲンを明らかにしないのに対し、. 凝固毒フィブリノゲンおよび高分子誘導体は、任意のクロマトグラフィーを見つけていない後に, 試験接着ブドウ球菌を介したオーディオ.
上記に加えて, フィブリノゲンのSFMCと早期切断産物を決定します (またはフィブリン) プラスミンは、以下のテストを適用することができます.
ブドウ球菌の試験接着
ブドウ球菌の試験接着 (TSS, ブドウ球菌klampingテスト) - 血清SFMCと線維素溶解の初期生成物を検出する簡単で非常に有益方法 (фрагментовX, ならびに関連するロックフィブリノゲン).
ブドウ球菌のある株の能力に基づいて、それ (ノイマンД2Sидр。) それらの表面上に存在する特定の因子klampingは凝集の影響を受け、残りの血清を受けます, 凝固および早期PDF後SFMC (фрагментовX).
研究のための血液 in vitroで線維素溶解を防止アミノカプロン酸と混合し、安定液に取られます.
試験は、ガラスまたはプレート上で行われます 74 同じ診断ツールのボリュームと希釈で血清の研究を混合することにより巣 1:2, 1:4, 1:8 とt. D.
アカウント最終希釈に入れ, これはまだ決定凝集. 健康な人では、血清中のSFMCと早期FDPの内容は超えていません 0,002 G / L (2 UG / mlの).
血清中の初期および後期FDPの免疫学的決意
血清中の初期および後期FDPの免疫学的決意が免疫血清antifibrinogenovoy降水成分フィブリノゲンプールを産生する能力に基づいています (感度は、フィブリノゲンの血清希釈物によって決定されます).
様々なモビリティSFMCに起因すると免疫, фрагментовX, アンド, D及びEは、おそらく、その決意を示しています. 定量的評価は、フィブリノーゲンの異なる希釈を調べることにより行われます, 血漿および血清. 特異的な抗血清抗Dとより具体的なテスト, 抗Dダイマーなど.
PDFラテックス試験
ラテックス粒子の試験結合, 抗Dを搭載しました, 抗E, антидимерDидр. (PDFラテックス試験), 血清の異なる希釈液を混合することにより、ラテックス粒子を接着PDPが記載されている診断キットを用いて決定されます.
血液循環中のトロンビンの指標としてのプラズマ活性XIII因子の決意
ФакторXIII, カルシウムイオンの存在下でのトロンビンによって活性化, チェーンはに分割され、, obladayushtuyuフィブリン - stabiliziruyushtey aktivnostyyu, 慣性チェーンS.
その内容の別々の決意 (フィブリンオリゴマーおよび免疫学の安定化の程度に) プレゼンスthrombinemiaによって血液の血管内凝固症候群を診断します. メソッドの複雑, これは、科学的研究のために主に用いられています. 係数を決定するためのより手頃な価格の方法を開発されている第XIIIa.
プロトロンビンの活性化の検出
ときに活性化プロトロンビン因子Xaは切断する基板のフラグメントF1-2を, 免疫学的に決定. 血漿中の後者の含有量の増加は、血液凝固の活性化を示します.
血管内凝固の細胞活性化マーカーの同定
損傷の現象 (断片化) 赤血球
DICと小血管における封鎖の微小循環の他の種類の赤血球は傷害にさらされているとき, 関連して、血液塗抹標本は、断片化細胞の数を増加させます (以上7 10%).
具体的には、この現象は、密度勾配フィコール - verografinにおける血液細胞の分離によって決定されます (密度 1,077) に記載のように, リンパ球と単球の単離のために免疫学で使用されます. 通常の白血球間期リングは白っぽい乳白色の色であり、その計数室はGoryaeva未満が含まれています 400 赤血球 1 L (より頻繁に、最大で 200).
ポップアップのときDIC番号 (損傷を受けました) 劇的赤血球増加します (1000から1040のため 000 で 1 lであり、より), リングはピンクや赤に塗られているとの関連で. 定量的には、現象間期中の赤血球の含有量を計数することによって推定されます (チャンバーGoryaeva).
この方法は、DIC、主要な血管の微小循環血栓症の遮断とを区別することができます, これはわずかに赤血球の損傷で.
単球によるトロンボプラスチン生産の現象
DICのいくつかのタイプ (特に免疫および感染性の起源) 単球は活性化され、組織トロンボプラスチンを産生する能力を獲得しています.
この現象を検出するために血液細胞を密度勾配により分離されています (フィコール - verografinovaya混合物, 密度 1,077) 画分を得ました, 単球を多く含みます, 簡単に栽培, その後スラリーを前凝固活性により、細胞を破壊した後に決定されます. 重症感染症、敗血症プロセスでは、この関数は、単球によって抑制することができ.
低下プラズマの識別 (消費) 凝固の構成要素, 線維素溶解、およびカリクレイン - キニン系
急性および亜急性DICで止血システムの部品点数の増加、消費と代謝を観察, 従って、プラズマのレベルは大幅に低減されます. 第VIII因子の特に顕著な阻害, Ⅴ, антитромбинаIII, белковCиS, フィブロネクチン, prekallikreina, 高分子量キニノーゲン, プラスミノーゲン.
これらのパラメータのいくつかを決定することは、診断のために多く重要ではありません, 置換療法のプロセスの重大性と有効性を評価する方法.
因子のレベルI (フィブリノゲン) しばしば減少, 何, しかしながら, 最初に感染性および免疫疾患でのプラズマの高含量によってマスクされ, 妊娠中毒症、および病理の他の形態.
neoantigenov識別
凝固因子及び線維素溶解の活性化と生理的拮抗薬との複合体のその後の形成の間に新たな抗原性マーカーを生じます, 別個のは、これらのペアの構成部分にはありません. そう, 例えば, トロンビン - アンチトロンビンIII形抗原との複合体, 個別に、またはトロンビン」の特徴ではありません, ниантитромбинуIII.
同様に、プラスミンをペアリング新抗原に形成された - というように抗プラスミンと. D. これらの抗血清の存在下で活性化血液凝固キー酵素の存在を確立することは容易でneoantigenam (トロンビン) 線溶系 (プラスミン).
現代の診療所は、テストの十分に大きなセットを持っています, 血液凝固及び線維素溶解の血管内活性化を識別.
これらの試験の多くは、公的に入手可能です, 迅速かつ簡単に実装でき. いくつかの他の研究と組み合わせてそれらを使用すると、DIC及び大規模な血管内凝固、他のタイプの信頼できる検査室診断を提供します. 血管内凝固のマーカーを見て、それは病理学的プロセスのダイナミクスを正しく評価するために設定されています, 治療の有効性と妥当性.
