Paroxysmalis éjszakai haemoglobinuria – Betegség Marchiafava Michele

Paroxysmalis éjszakai haemoglobinuria viszonylag ritkán található szerzett formájában hemolitikus anémia, kapcsolódik a vörösvértestek a szerkezetváltás, Vérlemezkék és a neutrofil granulocita. Folyik az intravascularis hemolízis jeleit, Hol vannak a haemoglobinuria, gemosiderinuriya, повышение уровня свободного гемоглобина плазмы. Заболевание нередко осложняется тромбозом периферических вен и сосудов внутренних органов.

Этиология и патогенез пароксизмальной ночной гемоглобинурии

Первое описание заболевания было дано в 1882 g. Более подробно оно было описано в 1928 g.

Общераспространенное название заболевания — paroxizmális éjszakai hemoglobinuria (ПНГ), однако оно мало соответствует сути заболевания, так как при нем нет настоящих пароксизмов и не всегда наблюдается гемоглобинурия.

Внутрисосудистый гемолиз с гемосидеринурией кроме ПНГ наблюдается и при многих формах аутоиммунной гемолитической анемии как с тепловыми, так и с холодовыми антителами, особенно при формах с тепловыми гемолизинами, а также при некоторых формах наследственной гемолитической анемии, связанной с нарушением структуры мембраны эритроцита.

Болезнь Маркиафавы—Микели наблюдается в разном возрасте. Причиной повышенного разрушения эритроцитов является дефект самих эритроцитов.

Эритроциты больных ПНГ, как указывалось выше, легко разрушаются комплементом при создании оптимальных условий для его действия, либо при подкислении сыворотки, либо при увеличении концентрации комплемента вокруг эритроцита за счет создания низкой концентрации ионов в сахарозной среде. Эритроциты больных ПНГ имеют повышенную чувствительность к воздействию антител как агглютининов, és, főleg, гемолизинов.

При ПНГ поражаются не только эритроциты, но и лейкоциты и тромбоциты больного. Тромбоциты и лейкоциты больных ПНГ обладают повышенной чувствительностью к воздействию комплемента как при подкислении сыворотки, так и в среде с сахарозой низкой ионной силы. Они во много раз чувствительнее к действию изоагглютининов, чем донорские тромбоциты и лейкоциты. Így, тромбоциты и лейкоциты имеют тот же Дефект мембраны, что и эритроциты.

Обнаружить иммуноглобулины на поверхности эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов и тем самым доказать принадлежность ПНГ к группе аутоагрессивных заболеваний не удается самыми чувствительными методами.

Van meggyőző két különböző populációk az APG eritrociták meglétét. A legellenállóbb sejtek egy egészséges személy egy reticulocyte az APG is a leginkább sérülékeny. Ez azt sugallja, hogy, hogy a kóros vörösvérsejt lakosság egyszerűen nem élte túl az érés, és idősebb érett eritrocita egészséges, vagy szinte egészséges népesség.

IN 1970 a tanulmány a vörösvértest Latina, érintett PNG, Fedezte fel, tartalmaznak, mint a nők egészséges mulatto, két normál Mr. 6-FD elektroforetikus változatai; Változat egy, gyakori az emberek Afrika között, és beállítást, jellemző Európa népessége. Után költés hemolízis fordult, hogy vörösvérsejtek kóros tartalmaznak csak egy lehetőség Mr. 6-FD, és a normál vörösvérsejtek, mind az elektroforetikus változatok, g-6-PD. Ezért, egyetlen cella műgyantákból VVT leszármazottai.

Ez a tény nagy pontossággal jelzi a jelenlétét a vörösvértestek a két populáció, különböző nem csak funkcionálisan, mint, pl, a mikrosferocitoze, de a származási: más szóval, Ez megerősíti a jelenlétét a sejtek kóros klón, t. ez. szomatikus mutáció. Identitás vörösvérsejt membrán elváltozások, neutrofil granulociták és a vérlemezkék azt sugallja, hogy, kóros információk nagy valószínűséggel lesz a ketrec, következő, a szár, t. ez. az előző cella mielopojeza. Blastomnyj növekedés PNG nincs konkrét. Le csak elszigetelt esetekben gyors fejlődése, a leukémia, a háttér PNG. Mindazonáltal, Azt is feltételezhetjük,, PNG, hogy egy jóindulatú daganat vérrendszer változata, hosszú ideig, termelő nem tumor sejtek szaporodását, jellemző egyéb formáit a leukémia.

Komplementchuvstvitelnosti fejlesztési mechanizmus a PNG, míg a világos.

Jelentős változások a Glikolízis és pentozno-foszfát ciklus enzimek tevékenységének nem.

Amikor a PNG csökkenteni tevékenysége az acetilkolin, mind a vörösvértestek, nagy valószínűséggel a zavar a vörösvérsejt membrán szerkezete miatt, mert az enzim található, a membrán felületre, és könnyen törött, amikor veresége. Ismert, hogy használatát gátló acetilkolin, mind nincsenek hatással a vörösvértestek túlélési. Azonban az őszi, acetilkolin, mind tevékenységi is figyelhető meg egyéb formái hemolitikus anémia, ezért nem lehet megmagyarázni a jelenség megnövekedett komplementchuvstvi- Problémájukról.

Adatok állnak rendelkezésre, bizonyíték a telítetlen zsírsavak számának növekedése, a struktúrában a foszfolipidek szereplő, vörösvérsejt membrán. Lehetőség van, amely megváltoztatja a lipidek – csak tükrözi a módosításokat a piros vér sejt membránok felépítése. A tanulmány a betegek PNH poliakrilamid gél-elektroforézis segítségével jelenlétében nátrium-dodecilsulfata a vörösvérsejt membrán protein beállítása, számos törtek a fehérjetartalom is jelentősen eltér a vezérlő.

A legfontosabb szerepe az APG trombotikus szövődmények patogenezisében kiesett vnutrisosudistomu lebontása a vörösvértestek és a véralvadási tényezőket stimuláció, megjelent a vörösvértestek a szakítás során. Mikor APG elpusztult többnyire reticulocyte, talán, Ez és elmagyaráz ezt a betegséget, eltérően más formái hemolitikus anaemiák trombotikus szövődmények gyakorisága, kíséretében egy hangsúlyos intravascularis hemolízis.

Klinikai megnyilvánulásai Paroxizmális éjszakai gemoglobinurii

A betegség gyakran kezdődik a vinnyogás. A betegek panaszkodnak a gyengeség, rossz közérzet, szédülés. Néha megjegyzi, subicteric skler. Gyakran az első panaszok fejfájás, a különböző lokalizációs hasfájás. A tendencia, hogy fokozott a vérrög kialakulását okozza a beteg orvoshoz. Haemoglobinuria elég ritka az első tünet a betegség, és néhány betegnél az APG hiányzik minden. Egyes esetekben úgy tűnik, az első alkalommal, 2-3 éven át, és még a 10 évvel a betegség kialakulását.

Egyik jellegzetessége a PNG-roham a hasi fájdalom. Honosítás, hogy nagyon eltérőek lehetnek.. Az időszak kriza hasi fájdalom, általában, Nem figyeltek meg. Gyakran csatlakozik a hányás. Leginkább, a betegek PNH hasi fájdalom társul DVT mesenterica hajók.

Perifériás vascularis trombózis (gyakrabban, mint nem-erek, felső és alsó végtagok, legalább-a vese hajók) is jellegzetes tünet Paroxizmális éjszakai gemoglobinurii. -ban 12 % Az APG betegeknél megfigyelt throm. Tromboembóliás szövődmények is ez a betegség a leggyakoribb halálok.

При объективном исследовании больного чаще всего обращает на себя внимание бледность с небольшим желтушным оттенком. Нередко наблюдается одутловатость лица, иногда излишняя полнота. Talán egy enyhe növekedése a lépben és a májban, Bár ez nem jellemző az APG.

A Paroxizmális éjszakai gemoglobinurii jellemzi, intravascularis hemolízis jeleit, a legfontosabb az a megnövekedett plazma szabad hemoglobin. Ez a témakör az APG rendszeresen szinte minden beteg. Однако степень повышения свободного гемоглобина плазмы варьирует и зависит от того, в какой период заболевания проводилось исследование. В период криза этот показатель значительно возрастает, отмечается также увеличение количества метальбумина плазмы.

Уровень свободного гемоглобина плазмы зависит от степени гемолиза в данный момент, содержания гаптоглобина, Szűrés a hemoglobin a vizeletben és a sebesség a megsemmisítés komplex hemoglobin-haptoglobin. В случае небольшой степени гемолиза уровень свободного гемоглобина плазмы будет недостаточным для фильтрации его через почечный фильтр. Поэтому гемоглобинурия не является обязательным симптомом болезни. При прохождении через канальцы нефронов выделяемый гемоглобин частично разрушается и откладывается в эпителии канальцев. Это является причиной выделения с мочой гемосидерина.

Paroxizmális éjszakai haemoglobinuria betegek túlnyomó többsége a vizelet hemosiderin ellátva. Gemosiderinurija néha nem jelenik meg azonnal. Ez azért fontos, но не специфичный для ПНГ признак заболевания.

Лабораторные показатели при пароксизмальной ночной гемоглобинурии

Содержание гемоглобина у больных ПНГ колеблется от 1,86— 3,1 mmol / l (30—50 г/л) és még alacsony és normál-idején remisszió.

A betegek PNH eritrociták száma csökkenti a csökkentés a hemoglobin szintje. Цветовой показатель длительный период остается близким к единице. Hol, если больной теряет значительное количество железа с мочой в виде гемосидерина и гемоглобина, уровень железа постепенно снижается. Низкий цветовой показатель наблюдается примерно у половины больных. У некоторых из них повышен уровень гемоглобина P, особенно в период обострения.

У значительной части больных содержание ретикулоцитов повышенное, но сравнительно невысокое (2- 4 %). Количество лейкоцитов при ПНГ в большинстве случаев снижено. Sok beteg is 1,5-3 gramm 1 l, de néha csökken 0,7-0,8 g 1 l. Leukopénia, általában, Van a neutrofil granulociták számának csökkentése. Иногда содержание лейкоцитов при ПНГ нормальное или повышенное — до 10—11 Г в 1 l.

При ПНГ снижается фагоцитарная активность нейтрофильных гранулоцитов.

Thrombocytopenia также часто наблюдается при ПНГ, однако функциональное состояние тромбоцитов при этом нормальное. Valószínűleg, этим объясняется редкость геморрагических осложнений при данном заболевании, хотя количество тромбоцитов иногда снижается в значительной степени — до 10—20 Г в 1 l. Обычно у большинства больных содержание тромбоцитов 50—100 Г в 1 l. Normál thrombocyta szám nem zárja ki a diagnózis Paroxizmális éjszakai gemoglobinurii.

A csontvelő vizsgálata észlelt tünetek, в основном характерные для гемолитической анемии — раздражение красного ростка кроветворения при нормальном количестве миелокариоцитов. У ряда больных имеет место небольшое снижение количества мегакариоцитов.

Уровень железа сыворотки при ПНГ зависит от стадии заболевания, fokú intravascularis hemolízis és a tevékenység a vér. Hol, Ha a betegek állandó vagy gyakori haemoglobinuria, valamint az állandó gemosiderinurija, содержание железа в организме, és így, и в сыворотке крови снижается, порой очень значительно. Иногда ПНГ начинается с признаков гипоплазии. Запасы железа в организме больного ПНГ зависят, az egyik oldalon, от потери железа с мочой, а с другой от интенсивности эритропоэза. Поэтому нельзя считать дефицит железа диагностическим признаком пароксизмальной ночной гемоглобинурии.

PNG szérum bilirubin szint a legtöbb esetben, életlen, fokozott vagy normális, elsősorban közvetett. Bilirubin átlagos tartalma 22-28 μmol/l. Meg kell figyelembe venni, что при внутрисосудистом распаде гемоглобина образуется гемоглобин-гаптоглобиновый комплекс, который а в конечном итоге также распадается с образованием билирубина.

У части больных ПНГ заболевание начинается с картины апластической анемии.

Диагностика пароксизмальной ночной гемоглобинурии

Ha megszakad a Paroxizmális éjszakai gemoglobinurii shell felépítését eritrociták, Ahogy a nagyfokú érzékenység a hatását a vele kiegészítése. Такая повышенная чувствительность выявляется с помощью либо пробы Хема, либо более чувствительной сахарозной пробы. Однако в ряде случаев, прежде всего при гемолизиновой форме аутоиммунной гемолитической анемии, сахарозная проба может давать ложноположительный результат. Gemoliziny rögzítik a felszínen, a saját vörös vérsejtek és kiegészíti a saharoznoj szerdán megsemmisült a, тогда как для ПНГ характерно разрушение клеток комплементом без воздействия на них антител.

Űrlap kizárandó gemolizinovoj autoimmun hemolitikus anaemia tanulmány azt javasolta hemolysins, mint leír fenti, és a szérum mintát a beteg és a donor odnogruppnogo eritrociták kereszt-saharoznoj segítségével, а не наоборот, как это принято. При ПНГ прямая проба положительна, és a határon - negatív. Amikor hemolizin forma AIHA figyelhető meg, mint a pozitív, és negatív cross-minta. Ezekben az esetekben célszerű használni egy harmadik megvalósítási módja szerint a szacharóz tesztek - használatával mind a szérum, és a vörös vérsejtek a beteg. A mértéke hemolízis ebben a kiviteli alakban, a minimális és maximális a APG formájában AIHA hemolizin. Объяснить такой результат можно лишь высокой специфичностью антител сыворотки больного гемолизиновой формой аутоиммунной гемолитической анемии к антигену, имеющемуся в большем количестве в эритроцитах больного, чем в эритроцитах донора. Прямая положительная сахарозная проба у этих больных связана, valószínűleg, с наличием на эритроцитах фиксированных антител.

Выявление гемолизинов методом агрегатгемагглютинации и другими помогает поставить правильный диагноз. Нельзя использовать в качестве донорской сыворотку больных, так как в случае содержания в ней гемолизина результат может оказаться ложноположительным. Отрицательный результат может иметь место, если в качестве источника комплемента используется сыворотка самого больного ПНГ или сыворотка больного циррозом печени, Rheumatoid arthritis, Egyéb betegségek és a szisztémás Lupus Erythematosus, kiegészítik a szintje csökken. Saharoznaja minta és a minta Hema kevésbé lesz hangsúlyos, если при взятии крови больного в качестве антикоагулянта используется гепарин, а не цитрат натрия. После гемолитического криза интенсивность пробы Хема и сахарозной пробы снижается, но при этом они не становятся отрицательными.

Определение свободного гемоглобина плазмы крови методом Бинга в модификации Дервиза и Бялко при пароксизмальной ночной гемоглобинурии

Метод основан на способности гемоглобина вступать в реакцию с бензидином в кислой среде в присутствии перекиси водорода с образованием зеленой окраски, переходящей сначала в синюю, majd egy vöröses-lila. Élénksége arányos a hemoglobin száma.

Reagensek.

1. Acetát puffer 0,1 M, pH 4,6: 27,22 g nátrium-acetátot oldott 1 l víz (0,2 M oldat); a másik mérő izzó Cook 1 l 0,2 М раствора уксуснокислой кислоты; vegyes 480 мл раствора № 1 és 520 мл раствора № 2.
2. Hidrogén-peroxid 0,3 % megoldás (готовят перед употреблением путем разведения пергидроля в 100 idő).
3. Бензидин солянокислый 0,1 % megoldás: 50 мг солянокислого бензидина растворяют в 35—40 мл ацетатного буфера, нагревают раствор до 80 °С на водяной бане и после охлаждения доводят ацетатным буфером до 50 ml.

Фильтруют в темную склянку и хранят при комнатной температуре не более 7 nap. Пожелтевший реактив непригоден, при быстром потемнении его необходимо перекристаллизовать бензидин из спирта.

Módszer.

Vér vizsgálatoknak a vénák száraz tű a cső silikonirovannuju, tartalmaz minden antikoaguláns. Antikoaguláns vért centrifugálják többé 10 perc 1500 / Min. Azután a plazma centrifugáljuk ismét 10 perc 8000 rpm-lerakódás a leukociták.

A kémcsőben teli 4 ml acetát puffer, 2 ml hidrogén-peroxid, 2 ml benzidin és 0,04 мл испытуемой сыворотки крови смешивают и оставляют стоять 3 m, затем переливают в кювету с длиной оптического пути 1 см и фотометрируют против компенсационного раствора при зеленом светофильтре. Интенсивность голубой окраски нарастает в течение 4—5 мин, поэтому измерение повторяют 3—5 раз подряд и регистрируют максимальные показания. Спустя 5—6 мин окраска сыворотки приобретает лилово-бурый оттенок, és optikai sűrűségét érték indulások-hoz csökken. Az optikai sűrűséget a közeg hozott két meghatározott maximális eredményeket.

Kompenzáció megoldás, álló 6 ml acetát puffer, 8 ml hidrogén-peroxid, 3 ml benzidin és 0,06 ml izotóniás nátrium-klorid-oldat, готовят одновременно с пробой.

Калибровочную кривую выводят по раствору гемоглобина. A vérben, взятой для приготовления раствора гемоглобина, измеряют его содержание (на медицинском колориметре или медицинском рефрактометре). Готовят раствор гемоглобина с концентрацией 1 g / l, из него приготавливают растворы меньшей концентрации: 0,005,0,025, 0,05, 0,1 és 0,2 g / l. Из каждого полученного раствора добавляют 0,04 мл к смеси 4 ml acetát puffer, 2 ml benzidin és 2 ml hidrogén-peroxid.

Основной раствор гемолизата (1 g / l) для калибровочной кривой должен храниться на холоде, és működő megoldásokat alacsonyabb koncentrációban kell készíteni, közvetlenül a vizsgálat előtt.

Normális esetben, a 1 a vérplazma liter tartalmaz 0,0005 mmol / l (0,01-0,04 G) Hemoglobin.

Paroxizmális éjszakai gemoglobinurii vizelet hemosiderin meghatározása

A hemoglobin vas it adszorbeált vese tubuláris hám és hemosiderin része. Слущенные клетки эпителии почечных канальцев в этих случаях содержат зерна гемосидерина.

При внимательном исследовании осадка мочи после центрифугирования зерна гемосидерина видны и без специальной окраски. Однако более четко они выделяются при окраске по методу Перлса.

Módszer.

После центрифугирования мочи верхний ее слой отсасывают, к осадку добавляют свежеприготовленный раствор 1 % желтой кровяной соли и 1 % раствор соляной кислоты (смешивают равные объемы 2 % раствора соляной кислоты и желтой кровяной соли). Utána 10 мин после перемешивания смесь центрифугируют и осадок просматривают. Зерна гемосидерина окрашиваются в синий цвет.

Определение метгемальбумина плазмы спектрофотометрическим методом

Reagensek.

1. Фосфатный изоосмотический буфер (pH 7,4): vegyes 18 ml 0.15 М раствора дигидрофосфата натрия (24,4 г ЫаН2Р04 на 1 l víz) és 82 ml 0,15 М раствора гидрофосфата натрия (21,3 г NaH₂UTÁN₄ tovább 1 l víz).
2. Гидросульфит натрия.
3. Раствор едкого натра 1 M.
4. Раствор сывороточного альбумина человека (40 g / l).
5. Раствор гемина (5 mg / 100ml); готовится сразу путем растворения гемина в малом количестве едкого натра, és aztán: hozza fel a szükséges mennyiségű szérum albumin megoldás.

Módszer.

K 2 hozzáadott ml szérum vagy plazma vér 1 ml zabuferernogo izoosmoticheskogo oldat, pH 7,4. A keveréket centrifugálják 30 perc-1200-1500 fordulat/perc. Az optikai sűrűség meghatározása 569 nm. Majd ha hígított plazma kerül egy kémcsőbe, és adjunk hozzá mintegy 5 mg szárított vizes nátrium-szulfát. Keresztül 5 мин повторно измеряют оптическую плотность при той же длине волны. Разница между двумя величинами оптической плотности соответствует оптической плотности метгемальбумина. Концентрацию метгемальбумина определяют по калибровочному графику.

Калибровочный график выводят следующим образом. Раствор гемина с альбумином переносят в пробирки в количестве от 0,01 hogy 0,1 g / l (-tól 0,2 hogy 2 ml). Ezek a csövek, Amennyiben a megoldás kisebb mennyiségű 2 ml, Add fel 2 ml albumin. Majd adjunk hozzá 1 ml foszfát puffer izoosmoticheskogo. Centrifugáljuk a keveréket: 1500 / Min, а затем измеряют оптическую плотность. Разница между измерениями наносится на график соответственно количеству гемина.

В норме гемальбумин в плазме крови отсутствует. Он появляется в случае внутрисосудистого гемолиза, pl, при пароксизмальной ночной гемоглобинурии или гемолизиновой форме аутоиммунной гемолитической анемии, а также в случае отсутствия гаптоглобина, когда гем связывается с альбумином.

Проба Хема при пароксизмальной ночной гемоглобинурии

Проба Хема основана на понижении стойкости эритроцитов больных ПНГ к снижению pH среды в присутствии комплемента свежей сыворотки.

Reagensek.

1. Egy oldat sósav 0,2 n.
2. Раствор аммиака 0,04 %.

Módszer.

Из вены берут 5— 6 ml vér. Antikoaguláns használt nátrium-citrát vagy oxalát. Ezzel egy időben fog 15-20 ml vért a donor ugyanannak a csoportnak. Külön a vörösvérsejtek, a beteg és az adományozó a vér plazma.

Szérum az adományozói öntenek 0,5 a hat cső ml, a két fektetni 20 min a hőmérséklete vízfürdő 56 ° C, a complement a szérum, a négy teszt-cső marad szobahőmérsékleten. Piros vér sejtek a beteg kétszer le kell mosni a nátrium-klorid oldat izotoniceski, затем суспензируют в таком же растворе в соотношении 1:1.

Схема исследования представлена в таблице.

Содержимое каждой пробирки перемешивают, помещают на 1 ч в термостат при температуре 37 ° C, а затем центрифугируют.

Для холостой пробы по 0,05 м эритроцитов больного и донора добавляют отдельно к 0,55 ml izotóniás nátrium-klorid-oldat.

После центрифугирования степень гемолиза можно оценить на глаз. Для количественной оценки степени гемолиза в каждую пробирку к 4,7 ml 0,04 % раствора аммиака добавляют 0,3 мл поверхностного слоя, а в пробирку с холостой пробой — 0,3 мл исходной сыворотки крови.

Для выявления 100 % гемолиза к 4,7 мл раствора аммиака добавляют 0,3 мл суспензии эритроцитов (0,05 мл эритроцитов больного в 0,55 ml izotóniás nátrium-klorid-oldat).

Оптическую плотность раствора измеряют на медицинском колориметре и сравнивают показания с оптической плотностью раствора аммиака без эритроцитов:

% гемолиза=((IS₁-IS₂)/IS₃)*100;

где E₁ — оптическая плотность исследуемой пробы; IS₂— оптическая плотность холостой пробы; IS₃— оптическая плотность 100 % гемолизата.

В норме гемолизируется не более 5 % vörösvérsejt.

A mintát akkor tekinthetjük pozitívnak a Hema-ügyben, Ha több gemoliziruetsja 6 % vörösvérsejt.

При пароксизмальной ночной гемоглобинурии и гемолизиновой форме аутоиммунной гемолитической анемии гемолизируется иногда до 50—80 % vörösvérsejt. Для этих заболеваний характерен гемолиз лишь в присутствии неинактивированной сыворотки крови (пробирка № 2). Если инактивация сыворотки не предотвращает гемолиз (пробирка № 3), можно предположить наличие другой формы гемолитической анемии или ошибку в постановке исследования.

Для разрушения эритроцитов больных пароксизмальной ночной гемоглобинурией при pH среды 6,5 требуется обязательное присутствие комплемента, содержащегося в свежей сыворотке крови.

Сахарозная проба при пароксизмальной ночной гемоглобинурии

Сахарозная проба основана на том, что эритроциты больных пароксизмальной ночной гемоглобинурией и гемолизиновой формой аутоиммунной гемолитической анемии разрушаются в растворах с низкой ионной силой в присутствии комплемента.

Reagensek.

1. Раствор сахарозы: 9,42 сахарозы растворяют в 0,005 М фосфатном буфере; pH 6,2 (91 ml 0,005 М NaH₂UTÁN₄ és 9 ml 0,005 М Na₂HPO₄).
2. Реактив для определения концентрации гемоглобина: 200 мг красной кровяной соли растворяют в 1 л дистиллированной воды, туда же добавляют 0,5 мл ацетонциангидрина.

Módszer.

Кровь у больного берут из вены в две пробирки — сухую (8—10 мл) и с антикоагулянтом (2- 3 ml). В качестве антикоагулянта используют цитрат натрия. Эритроциты из пробирки с антикоагулянтом дважды отмывают изотоническим раствором хлорида натрия. После отмывания и отсасывания надосадочной жидкости к 0,4 мл эритроцитов добавляют 0,25 ml izotóniás nátrium-klorid-oldat.

Ugyanakkor figyelembe véve a vért a donor ugyanannak a csoportnak a vér a két csövet, az antikoaguláns (2-3 ml), Ez azonos módon kezelt, mint a vér, a beteg, és száraz (8- 10 ml) megszerezni a szérum. После отделения донорской сыворотки 0,5 мл ее помещают в водяную баню при температуре 56 ° C-on 30 мин для инактивации комплемента. Сыворотку крови донора следует брать в день опыта и сохранять на холоде. Схема исследования приведена в таблице.

Пробирки помещают в термостат на 30 perc hőmérsékleten 37 ° C, а затем центрифугируют в течение 10 мин со скоростью 2000 об/мин и оценивают степень гемолиза.

Для этого в пробирки наливают по 3,4 мл реактива для определения концентрации гемоглобина и 0,6 мл над- осадочного слоя из каждой пробирки. Keresztül 10 мин измеряют оптическую плотность раствора в пробирках при 540 нм на медицинском рефрактометре (спектрофотометре) или медицинском колориметре (фотоколориметре ФЭК-М) при зеленом светофильтре, сравнивая полученные данные с оптической плотностью раствора для определения гемоглобина. Берется среднее из двух показаний каждого опыта. Расчет производится по формуле:

% гемолиза в пробирке=((IS₁-IS₅)/(IS₈-IS₅))*100

где E₁ — оптическая плотность раствора в пробирке № 1; IS₅ — оптическая плотность раствора в пробирке № 5, необходимая для исключения окраски самой сыворотки; IS₈ — оптическая плотность раствора в пробирке № 8, где произошел 100%-й гемолиз.

Для перекрестной сахарозной пробы (пробирка № 2) 100%-й гемолиз исследуется в пробирке № 7.

Az eredmények értékelése.

В норме в пробирке № 1, содержащей эритроциты исследуемого больного, гемолиз не превышает 2—3 %.

При пароксизмальной ночной гемоглобинурии и гемолизиновой форме аутоиммунной гемолитической анемии (Aiga) в этой пробирке гемолиз превышает 6 % В контрольных пробирках — № 4, содержащей эритроциты больного и инактивированную сыворотку крови донора, пробирке № 5, содержащей эритроциты и сыворотку крови донора, és száma 6, содержащей вместо сыворотки изотонический раствор хлорида натрия — гемолиз не должен превышать 1—2 %.

Перекрестная сахарозная проба (пробирка № 2) при гемолизиновой форме АИГА обычно положительная (при наличии гемолизинов в сыворотке крови), но она может быть и отрицательной. В пробирке № 3 (эритроциты и сыворотка крови больного) гемолиз наблюдается как при ПНГ, так и при гемолизиновой форме АИГА. При пароксизмальной ночной гемоглобинурии максимальный гемолиз обнаруживается в обычной сахарозной пробе (пробирка № 1), менее выраженный — в пробе с собственными эритроцитами больного (пробирка № 3); отсутствует гемолиз в перекрестной сахарозной пробе (пробирка № 2).

При гемолизиновой форме АИГА наиболее выраженный гемолиз выявляется в пробе с собственными сывороткой крови и эритроцитами больного (пробирка № 3), несколько менее выраженный — в пробирке № 1. В пробирке № 2 гемолиз отмечается часто, но отсутствие его не исключает гемолизиновую форму АИГА.