Definicija kvantitativnih i kvalitativnih obilježja sperme

Određivanje pokretljivosti sperme

Određivanje pokretljivosti sperme najvažniji je parametar, karakteriziraju kvaliteta ejakulata. Sperma, sposoban za oplodnju, su mobilnost - vršite ravno kretanje naprijed brzinom 50 μm / s. Ejakulat sadrži spermatozoidi s poremećajima motorike - diskinospermija u obliku vibracijskog, arena i druge vrste kretanja, koji su normalno odsutni.

Pokretljivost sperme procjenjuje se u nativnom pripravku ejakulata s ograničenim vidnim poljem (pomoću prozora Fonio), pomoću 7X okulara i 40X objektiva, s poluzatvorenim kondenzatorom. Brojanje 100 ćelija, zabilježite broj mobitela, sjedeći i nepokretni spermij. Obično su aktivno pokretni spermiji 80-90 %, sjedeći - 10-12, nepomično - 6 - 10 %. Uzimaju se u obzir samo oni aktivno pokretni i sjedeći spermiji, koji se kreću naprijed.

Možete upotrijebiti detaljniju ljestvicu ocjena od pet stupnjeva.:

• "4" - izvrsna pokretljivost (sve spermatozoidi imaju pravocrtnu translacijsku pokretljivost značajnom brzinom);
• "3" - dobra pokretljivost (malo smanjena);
• "2" - osrednja pokretljivost (mnogo nepokretnih spermija, ali s vibracijskim repovima);
• "1" - slaba pokretljivost (nedostatak kretanja prema naprijed, pokretljivost samo repova sperme);
• "0" - nema kretanja sperme.

Plodnost ejakulata ovisi o trajanju pokretljivosti sperme, stoga je potrebno utvrditi dinamiku pokretljivosti sperme (dinamički kinezisgram).

Kap ejakulata nanosi se na pokrovnu čašu, preokrenite ga i stavite na stakalno staklo s jamicom za vješanje kapi na ovaj način, tako da je kap u središtu depresije. Rubovi pokrovnog stakla podmazani su tekućim parafinom i postotkom aktivno pokretnih, sjedeći i nepokretni spermij kroz 1, 3, 6, 12 i 24 sati nakon ejakulacije. Studija se provodi na sobnoj temperaturi. Obično se broj aktivno pokretnih spermatozoida smanjuje svaka 2-3 sata za 20 % ,

• Bilješka. Mikroskopski pregled ejakulata u laboratoriju treba provoditi jedna osoba, s dovoljno iskustva u ovom području laboratorijske dijagnostike, budući da rezultati određivanja pokretljivosti sperme kod različitih istraživača variraju i do ± 40 % i uvelike ovise o iskustvu s ejakulatom.

Test za "revitalizaciju" sperme

Test za "revitalizaciju" sperme na temelju obnavljanja normalne pokretljivosti nepomičnih, ali živa sperma s stimulativnim otopinama:

1) Beckerovo rješenje (glukoza - 3 g, Već₂HPO₄ - 0,6 g, NaCl - 0,2 g, KH₂PO₄ -0,01 g, destilirana voda do 100 ml; pH - 7,8);

2) 0,1 % otopina kofeina (samo ne u ampulama!) - 10 % od volumena ejakulata;

3) 0,1 Otopina M arginina.

Način. Volumetrijski kapacitet pipete 1 ml sisati 0,1 ml ejakulata (dobro izmiješan) i s istim brojčanikom za pipetu 0,9 ml stimulirajuće otopine. Sadržaj pipete otpuhuje se na satno staklo, dobro promiješajte uzastopnim sisanjem i puhanjem tekućine na satno staklo, a zatim pripremite pripravke za viseće kapljice. Za 5- 10 min nepomično, ali živa se sperma počinje kretati.

Postotak pokretne sperme utvrđuje se odmah po obnovi pokretljivosti i nakon 3, 6, 12 i 24 ne. Da biste dobili pouzdanije rezultate, provedite paralelni test s dvije stimulativne otopine. Samo ako je nemoguće "oživjeti" nepokretne spermatozoide, možemo govoriti o nekropermiji.

Identifikacija živih spermatozoida među nepokretnim

Načelo metode temelji se na činjenici, da enzimi živih stanica sperme obezboje eozin. Koristi se kao reagensi 5 % vodena otopina eozin kalija i 10 % vodena otopina nigrozina.

Način. Na staklo se stavi mala kap ejakulata, stavite dvostruku veliku kap pored 5 % otopina eozin kalija i kap 10 % otopina nigrozina, koja je također dvostruko veća od kapi eozin kalija. Prvo se ejakulat pomiješa s eozin kalijem, pričekajte nekoliko sekundi, a zatim pomiješana s kapljicom nigrozina, opet pričekajte nekoliko sekundi i napravite tanke mrlje mljevenim staklom.

Korištenje sustava uronjenog mikroskopa, u razmazima računati najmanje 200 sperma, isticanje uživo (Bezbojan) i mrtve (eozin obojen crvenom bojom). Broj živih i mrtvih spermatozoida izražava se u postocima. U nedostatku nigrozina, kap ejakulata pomiješa se s kapljicom 5 % eozin otopine kalija i pripremite tanke mrlje za mikroskopiranje. Nigrozin mrlja samo pozadinu lijeka, na kojoj se spermiji ističu s više kontrasta. Obično je živa sperma 80-90 % od njihovih ukupnih.

Broj spermija 1 ml i u cijelom volumenu ejakulata

Broj spermija 1 ml i tijekom cijelog ejakulata broji se u komori za prebrojavanje Gorjajeva.

Broj sperme u cijelom ejakulatu određuje se množenjem broja sperme u 1 ml po količini ejakulata (u mililitrima).

• Bilješka. Komora za brojanje također može odrediti broj pokretnih spermija, za koju ejakulat treba razrijediti toplom izotoničnom otopinom natrijevog klorida i izbrojati broj nepokretnih spermija, a zatim ih oduzeti od ukupnog.

Normalno, u 1 ml ejakulata sadrži 60-120 milijuna. sperma, s hiperspermijom - više 120 milijuna, kod oligospermije - od 30 za 60 milijuna, što, obično, onemogućava oplodnju. Međutim, slučajevi su opisani, kada dođe do oplodnje i kada se zadrži u 1 ml ejakulata iz 5 za 30 milijuna. sperma.

Svejedno kada se otkrije oligospermija Potrebno je 2-3 kontrolna broja spermija u razmacima od 3-4 tjedna kako bi se utvrdio njihov maksimalni broj sperme. Broj spermija istog čovjeka podložan je značajnim fiziološkim fluktuacijama.

Obično cijeli ejakulat sadrži više 150 milijuna. sperma.

Broj spermatograma

Spermatogram je postotak različitih morfoloških oblika sperme i stanica spermatogeneze.

U razmazu, obojena hematoksilineozinom ili Pappenheimom, brojao barem 200 sperma, dok je broj normalnih i patoloških oblika, kao i stanice spermatogeneze izražene u postotku. Brojanje se izvodi pomoću uronjivog sustava mikroskopa i aparata za brojanje leukograma s prethodno promijenjenim imenima ključeva.

U normalnom ejakulatu normalni oblici sperme su 80-85 %, ponekad 100 %, to uključuje fiziološke mogućnosti, koje karakteriziraju ili su neobično sužene, ili smanjena, ili povećana glava.

Mladi, ili nezrela, oblici sperme imaju citoplazmatski ostatak oko glave i vrata ("ovratnik"), promatrane čestim spolnim odnosima i nisu sposobne za oplodnju.

Stari oblici sperme (hiperkromija, akromija, vakuolizacija glave) pojavljuju se u ejakulatu nakon dulje spolne apstinencije i nisu prikladni za oplodnju.

Patološki oblici uključuju spermu s deformacijama glave: megalospermatozoa (gigantski spermatozoidi), makro, mikrospermatozoa, kupast, dvoglave sperme s jednim vratom i jednim repom, bez vrata s jednim ili više repova, bez repa, s repom bez glave itd..

U zdravih muškaraca abnormalni oblici spermatozoida obično se ne mogu naći u normalnom ejakulatu., ali ponekad njihov broj s normalnom gnojidbenom sposobnošću ejakulata može doseći 20 %, od čega približno 15 % čini patologiju glave, 3-5 % - tijela, 2-5 % - rep.

S patološkom spermatogenezom, sekretorni oblik neplodnosti otkriva spermu s patologijom glave i vrata. Patologija repa obično izlučujući, nastaje kada spermij prolazi kroz vas deferens.

Odvojeno smještene spolne stanice u različitim fazama diferencijacije i sazrijevanja također su jasno vidljive u obojenim pripravcima., što je važno za razlikovanje aspermije i azoospermije.

Spermatogonija imaju zaobljeni, ponekad ovalne, promjer im je 5-12 mikrona. Jezgra zauzima približno jednu trećinu stanice, tamno- ili svijetle boje, s 1-2-3 nukleusa- lame, često smješten u blizini karioleme (nuklearna omotnicu), sitnozrnasta struktura kromatina. Citoplazma uzkaya, bazofilna, Homogen. Spermatogonije se mitotički dijele nekoliko puta. Postoje stanice s dobro definiranim stadijima mitoze.

Dio stanica, nastala kao rezultat mitoze, diferencirati u spermatocite I, a zatim II red. Spermatocite koje naručujem - okrugle ili poligonalne stanice promjera 17-19 mikrona s velikom okruglom jezgrom i laganom sitnozrnastom citoplazmom. U obojenim pripravcima vidljiva je prozirna perinuklearna zona.

Spermatociti II reda nastala kao rezultat mejoze. Oni su manji, nego spermatociti prvog reda (promjer 15 m), ali morfološki gotovo identični. Češći u ejakulatu, nego spermatociti prvog reda, ali mnogo rjeđe, nego spermatide.

Spermatydы - mali, okrugle ili izdužene stanice promjera 12-15 mikrona s okruglim hiperkromnim jezgrama, centralno ili ekscentrično smješteno. Moguća prisutnost multinukleiranih spermatida. Pale citoplazmi, bazafilni, često sadrži sitne šupljinc.

Spermatide se pretvaraju u spermu.

Stanice spermatogeneze u normalnom spermatogramu nisu veće od 2 %. Veliki broj njih se opaža s sekretornom neplodnošću..

Za fazno kontrastnu mikroskopiju ejakulat se razrijedi izotoničnom otopinom natrijevog klorida uz dodatak male količine 1 % vodena otopina rivanola ili karbolne kiseline za smanjenje pokretljivosti sperme.

S fluorescentnom mikroskopijom jedna kap ejakulata i jedna kap akridin naranče razrijeđena na staklu 1:20000. Kapi se pomiješaju i prekriju pokrovnim listićem. Za mikroskopiju se koriste okular 7X i objektiv 40X. Živa sperma postaje zelena, mrtva - narančasta. Normalne i patološke oblike sperme lako je razlikovati zbog svojih morfoloških karakteristika..

Pravila rada na faznom kontrastu i fluorescentnim mikroskopima opisana su u uputama za ove uređaje.. Kad se koristi mikroskopija faznog kontrasta i luminiscencije, spermatogram se izračunava prema općim pravilima.

Na temelju mikroskopskog pregleda ejakulata mogu se identificirati različita patološka stanja.

• Aspermija - odsutnost sperme i stanica spermatogeneze u ejakulatu.
• Azoospermija - odsutnost spermatozoida u prisutnosti stanica spermatogeneze.
• Astenospermija - smanjenje broja pokretnih stanica i povećanje broja patoloških oblika s normalnim ukupnim brojem sperme.
• Oligoastenospermija - smanjenje broja spermija i njihovih pokretnih oblika te porast broja patoloških oblika.
• Nekrospermija - nepokretnost sve sperme u pripravku čak i nakon "revitalizacije".
• Aquinospermia - država, u kojem se, za razliku od nekrospermije, prethodno nepokretni spermatozoidi nakon "revitalizacije" počinju aktivno kretati.