Dijagnoza imunološki uzrokovane neplodnosti

Tijekom dugog bračnog života bez uporabe kontracepcije, te u prisustvu mikro-regije sluznice u genitalnih organa može odvijati postupno uočiti imunizacije antigeni spermija. Fizikalni pregled supružnika, sastoji se u pustom braka, ne mogu utvrditi uzrok neplodnosti u 10-15 % slučajevi. To je u ovoj skupini neplodnih bračnih drugova prilikom primjene posebne metode istrage tajne cervikalnom kanalu, sjemena plazma i serum spermija protutijela često otkrije (ASAT), Koristi kvalitativne i kvantitativne ispitivanja imunoloških istraživanja.

Postkoytalnыy testa (FCT)

Postkoytalnыy testa (FCT) To se odnosi na kvalitativnom imunoispitivanjem. Negativan rezultat testa ukazuje na nedostatak spermija u kanalu vrata maternice tajna, ali ne možete utvrditi uzrok njihove odsutnosti.

Način. Po broju pokretnih spermija u kanalu vrata maternice tajna, dobiven nakon koitusa, utvrditi razmjere kršenja njihove prodorne sposobnosti s neplodnošću ili imunitet im sluzi u cervikalnom kanalu.

FCT potrebno je provesti sljedeće uvjete: Studija treba provoditi u razdoblju ovulacije, koji je otkrio colpocytologic ili drugi način, nakon prethodnog Apstinencija supružnika u roku 2-3 dana.

Metodologija. Nakon uobičajenog koitusa za žene 30 Zapisnik treba ležati na leđima, savijanje koljena. Ispiranje i čišćenje zabranjeno, potrebna samo sanitarnog ubrus, koja je uklonjena tijekom snimanja za proučavanje sluzi u cervikalnom kanalu. Nakon 2-4 sata, dopušteno i nakon 6-10 sati (vrijeme, proteklo prije studija, navedeno u analizi) nakon spolnog odnosa cerviks izložena pomoću zrcala Cuzco i endocervikalnog sluz aspirira ili injekcije tuberkulina (bez igle), jednu pipetu s gumenim balonom, ili polietilen kateter.

Prilikom pranja instrument ne smiju se koristiti sredstva za dezinfekciju, kao i oni utječu na pokretljivost spermija. Jedna kap dobivenog sluzi u cervikalni kanal se prenese u zagrijanu stakalce, obložene pokrovni, Teritorij namazane tekući parafin curiti. Formulacija odmah mikroskopiruyut (Okular 7X, 40X cilj), utvrđivanja broja i pokretljivosti spermija prirodu. Lijek se može detektirati s aktivnim spermija progresivnom pokretljivosti, oscilirajući pokret (fenomen jeku) i fiksna.

Prihvaćeno dati pet vrsta zaključaka FCT.

• Izvrsno (relevantne norme): u pet područja pogled do 15-20 s aktivnim sperme progresivne pokretljivosti i više. Sperma s fenomenom oscilacija manji od 25 %.
• Zadovoljavajući: u pet područja pogled prema gore 10 Aktivni sperme progresivna pokretljivost i manje 25 % sperma s fenomenom jeku.
• Loše: manje 5 spermatozoida u pet područja pogledom.
• Minus: odsutnost sperme.
• Sumnjiv: u pet područja pogledom više 5 aktivne pokretnih spermija i više 25 % fenomen jeku.

Kad peti tip FCT često promatraju imunološki nekompatibilnost između supružnika, Stoga je potrebno odrediti ACAT. Da biste identificirali ACAT tajni endocervikalnog, plazme, sjemena ili krvni serum i prikazati ih (aglutinacije ili imobilizirane) To zahtijeva imenovanje kvantitativnih imuno.

Negativna PBC Studije početi s definicijom prodoran (penetracija) sposobnost sperme putem penetrativno testu (Petka) i podložnost sperme lučenja cervikalni kanal pomoću test kontakt sperme i cervikalne sluzi (TKSTSS).

Penetracionnyj test (TP)

Tanka duljina kapilarne 10 Vidi upisali tijekom ovulacije sluz u cervikalnom kanalu. Jedan otvoren kraj kapilare zatvara gline, a drugi se nalazi u epruvetu s test svježim ejakulata (ne više 3 sati nakon ejakulacije). S glina u kapilari je pričvršćen na uspravni cijev. Uzorak se inkubira u termostatu na temperaturi 37 ° C 1 ne. Na kvaliteta ejakulata je suditi po dubini penetracije spermija u sluzi u cervikalnom kanalu. Postoje tri vrste stakleničkih plinova.

• Potvrdan - Dubina penetracije (najveća udaljenost u centimetrima, putovao barem jednog spermija) iznad 5 cm; broj spermija u točki maksimalnog više prodora 5 na vidiku, i broj pokretnih spermatozoida u gornjoj trećini kapilare veća od 50 %.
• Sumnjiv - Da je dubina penetracije up za 5 Pogledajte manje sperma count 5, njihova mobilnost u gornjoj trećini kapilarnih dosegne 50%.
• Minus - Dubina penetracije spermija dosegne 1 cm.

Sposobnost spermija penetracije To ovisi o fazi menstrualnog ciklusa. Ona počinje izlaziti iz 9. dan menstrualnog ciklusa,, postupno aktiviranje, dostiže svoju maksimalnu izraz u razdoblju ovulacije, održati na ovoj razini za dva dana, a zatim postupno smanjuje.

Test kontakt sjemena i sluzi vrata maternice (TKSTSS)

Na slajdu je staviti malu kap sluzi iz grlića maternice kanala, uzeti od žene tijekom ovulacije, i broj istog kap veličine ejakulata. Oba kapi su prekrivene pokrovnim staklom, koji je blago pritisnutim, pridružio se pada. Lijek se stavi u vlažnoj komori (Petri dish vlažnim pamuk obrisak) i inkubirane u termostatu na temperaturi 37 ° C 1 ne.

Pod tim uvjetima, normalni spermiji prodrijeti u tajnu normalan cervikalnom kanalu, kao što se može vidjeti pod mikroskopom pod povećanjem 200x. Za račun za reakciju u blizini granice između dva medija broji broj prodire tajnu kanala sperme vrata maternice u dva susjedna područja pogledom.

Uz izvrsnu TKSTSS u dva područja pogled otkriva više 25 aktivno pokretne sperme u fenomenu jeku manje 25 %. Ako zadovoljavajuće TKSTSS u dva područja pogledom otkrila više 15 aktivno pokretne sperme, TKSTSS u niski - manje od 15. Negativna odsutan penetracije TKSTSS, Ako upitna - fenomen oscilacija prelazi 25 %.

U ovom testu, kao u PCT, fenomen jeku, iznad 25 %, vjerojatno, To ukazuje na prisutnost ACAT i zahtijeva imenovanje kvantitativnih imuno.

Koristeći sjemena i cervikalne sekreta kanala neplodnim i plodne ljude u različitim količinama korištenja TKSTSS identificirati neplodno muža.

• Primjer 1. Gledano tajni kanal vrata maternice u žena neplodnih parova i kontrola ejakulirati zdravih muškaraca. Izvrsna TKSTSS ukazuje na slabu sposobnost prodiranja sperme muža i osjetljivost normalnog izlučivanja cervikalne kanala.
• Primjer 2. Gledano puna tajna cervikalnog kanala zdrave žene i njezin suprug ejakulat od neplodnih parova. Loše TKSTSS ukazuje na slabu prodor sperme.
• Primjer 3. Taken tajna endocervikalnog žene neplodne parove i kontrola ejakulirati zdravih muškaraca. Loše TKSTSS ukazuje inferiornosti tajni cervikalni kanal, koji očito ne prodiru normalan spermija.

Kvantitativne imunološki testovi

Mikroagglyutinatsionny Test Friberg

Mikroagglyutinatsionny Test Friberg (TF) dovoljno osjetljivi i dostupan je za klinička dijagnostičkim laboratorijima. Korištenje TF može utvrditi prisutnost ACAT i aglutinacije titar u različitim materijalima (plazma ejakulat, ekstrakti sluzi u cervikalni kanal i u serumu od oba supružnika).

Reagensi:

1. Fosfatni pufer otopina soli (FSB) 0,01 М pH 7,2-7,4.

2. Vazelinovoe ulja.

Oprema: mikroskop, tuberkulin injekcije, mikroagglyutinatsionnye pipeteu 1 ml, mikropipeta kapacitet 0,1 ml.

Način. Krvni test serum inaktiviran inkubacije u inkubatoru na 56 ° C 30 m. Ejakulirati, dobiva masturbacija, Odmah razrijeđena tako da je FSB, koncentracija spermija 40 milijuna. u 1 ml.

Zbog materijala (plazma ejakulat, izvući tajnu cervikalni kanal ili serumu) priprema niz razrjeđenja 1:4 za 1:128 koristeći kao tekućina za razrjeđivanje FSB. U jažice s parafinskim uljem mikroagglyutinatsionnyh metalne ploče injekcije tuberkulina s iglom uvodi (pod vazelinovoe ulja) Male kapi svakog razrjeđenja ispitivanog materijala. Nakon svakog uzorka se ispere četiri puta špricu. U svako razrjeđenje dodano je na 5 puta manji pad ejakulata, i 4 h na sobnoj temperaturi otkrivenih agglutinates. Zadnje uzgoj, pri čemu pod mikroskopom na 100x povećanja otkriven 3 slijepiti u pregledu i više, aglutinacije titar odgovara ACAT.

Spermoimmobilizuyuschy Test Izodzhima (SIT).

Titar seruma imobilizirajući ACAT, plazme ili sjemena ekstrakt tajna cervikalni kanal određuje broj pokretnih spermatozoida u prisutnosti antigena (sperma).

Dijelovi.

1. Ejakulirati, koji je proizveden i pripravljeni su na sličan, za TF pomoću FSB; motilitet prelazi 70 %.

2. Komplementsoderzhaschaya seruma zamoraca.

3. Imunološki humanog seruma (IChS), daje u prisutnosti komplementa putem 1 h inkubacije imobilizacija 90 % sperma.

4. Normalno humanog seruma (NCHS), inaktivira zagrijavanjem na temperaturi 56 ° C 30 m.

5. Test inaktiviranog seruma, plazma i sjeme izvaditi tajni cervikalni kanal.

Način. Za procjenu komplementarnu djelatnost imobilizirati 1. cijev uvodi 0,5 ml izotonične otopine natrijevog klorida, utvrditi promjene u pokretljivosti spermija bez ASAT 2. epruveta - 0,5 ml NHS, Kontrola imobilizacija treći cijev - 0,5 ml ICHS i odrediti ACAT imobiliziranjem 4. cijev - 0,5 ml seruma, ili plazmi ejakulata, ekstrakt ili izlučivanje endocervikalnog.

Zatim, svaka cijev uvodi 0,1 ml dopuna. Posljednja stvar za sve epruvete se dodaje 0,05 sperme ml suspenzije u koncentraciji 40 milijuna. u 1 ml. Stativ epruvete su stavljene u inkubator pri temperaturi 37 ° C 1 ne. Cijevi su uklonjeni iz peći i pažljivo mućka odražavaju taložne agglutinated sperme.

Za procjenu rezultata pod velikim povećanjem mikroskopa (400x) izračunati postotak pokretnih spermija u kapi epruvetu, nanese na stakalce i pokrivena poklopcem. Isto tako, postavlja postotak pokretnih spermija u kapljicama u epruvetama s NHS i ICHS. Rezultat reakcije u obzir formule

SIT = K / A

gdje je K - broj pokretnih spermija u kontroli s ICHS i NHS;

O - broja pokretnih spermija u epruveti (Ispitivanje seruma, ili plazmi ejakulata, ili tajna cervikalnog kanala).

S prosječnom SIT<2 test negativan (broj pokretnih spermija u kontroli i u epruvetama od približno iste), Ako je indeks CTI>2 - Test je pozitivan, t. je. u materijalu (serum, plazma ili sjeme izvaditi tajnu cervikalni kanal) imobilizirani ACAT.

• Primjer 1. Prizemlje kontrola na ICHS - 10 % pokretnih spermija. Druga kontrolna s NHS - 80% pokretnih spermija. Dva kontrole zajedno - 90 % pokretnih spermija. U epruvetu - 80 % pokretnih spermija.

SIT = R / D = 90/80 = 1,1

Test je negativan, ACAT imobilizirana odsutan.

• Primjer 2. U epruvetu - 40 % pokretnih spermija, Međutim, u kontroli, u primjeru 1.

SIT = 90/40 = 2,2

Test pozitivan. Postoji imobilizirani antitijelo (ASAT), kroz koje pokretljivost spermija znatno smanjen.