hemoglobinuria הלילי התקפי – המחלה Marchiafava מישל

hemoglobinuria הלילי התקפי נמצא לעיתים נדירות יחסית רכשה צורת אנמיה המוליטית, מחובר עם שינוי של מבנה של אריתרוציטים, נויטרופיל ולבנים וטסיות דם. זורם עם סימנים של המוליזה קרישה תוך-כלית, שם יש hemoglobinuria, gemosiderinuriya, להגביר רמת המוגלובין חינם פלזמה. המחלה, זה מורכב לעתים קרובות על ידי עורקים היקפיים ואיברים פנימיים פקקת כלי דם.

אטיולוגיה, פתוגנזה של התקפי gemoglobinurii ליליים

התיאור הראשון של המחלה ניתנה 1882 ז. מתואר באופן מפורט יותר 1928 ז.

הוא השם הנפוץ של המחלה hemoglobinuria הלילי התקפי (APG), עם זאת, הוא אכן מתאים המחלה הקטן, כי אין hemoglobinuria התקפי הנוכחי הוא ציין לא תמיד.

קרישה תוך-כלית המוליזה עם gemosiderinuriej בנוסף APG נצפית בצורות רבות של אנמיה המוליטית אוטואימונית כמו עם חום, עם נוגדנים קר, במיוחד כאשר טפסים עם חום gemolizinami, כמו גם כמה צורות של אנמיה המוליטית תורשתית, הקשורים הפרה של מבנה הממברנה כדוריות דם אדומות.

מחלת Markiafavy-שזכו בעבודה בתחרות נצפתה בגילאים שונים. הסיבה הרס מוגבר של כדוריות דם אדומות היא שאריתרוציטים עצמם לערוק.

כדוריות דם אדומות של חולים עם PNH, כאמור לעיל, komplementom לכווץ בקלות בעת יצירת תנאים אופטימליים את תוקף, או מתי acidification סרום, או מתי להגדיל את ריכוז המשלים סביב כדוריות דם אדומות על-ידי יצירת ריכוז יונים ב- saharoznoj רביעי. כדוריות דם אדומות של חולים עם PNH מוגברים רגישות להשפעות של נוגדנים כמו אגלוטנינים, ו, במיוחד, hemolysins.

כאשר PNG משפיע לא רק תאי דם אדומים, אבל לויקוציטים, טסיות הדם של המטופל. טסיות הדם, לויקוציטים של חולים עם PNH יש רגישות מוגברת להשפעות של המשלים כאשר acidification סרום, רביעי עם סוכרוז נמוך כוח יונית. שהם הרבה פעמים יותר רגישים להשפעות של izoaggljutininov, מאשר תורם טסיות, לויקוציטים. כך, טסיות דם ותאי דם לבנים יש באותו הפגם בקרום, זה של כדוריות דם אדומות.

לזהות נוגדנים על פני השטח של תאי דם אדומים, לויקוציטים, טסיות הדם ובכך להוכיח חברות של APG autoagressivnyh לקבוצה של מחלות לא יכול להיות השיטות הכי רגיש.

שם זה משכנע ראיות לקיומה של שתי אוכלוסיות שונות של APG ב אריתרוציטים. התאים עמיד ביותר באדם בריא הוא רטיקולוציט APG שברירי ביותר. זה מצביע על כך, את אוכלוסיית תאי הדם האדומים פתולוגיים פשוט לא שרדו את ההבשלה, אריתרוציטים בוגרת מבוגרת מתייחסים לאוכלוסיה בריא או כמעט בריא.

לפי 1970 במחקר של כדוריות דם אדומות לטינה, PNG המושפעת, התגלה, שהם מכילים, כמו עם נשים מולאטים בריא, גרסאות electrophoretic של שני רגיל מר 6-FD; Variant, נפוצה בקרב אנשים של אפריקה, והאפשרות ב, טיפוסי של אוכלוסיית אירופה. אחרי שביליתי המוליזה הפך, כי לא נורמלי תאי דם אדומים מכילים רק אפשרות אחת. מר 6-FD, נורמלי בתאי הדם האדומים – הן electrophoretic וריאציות של g-6-PD. לפיכך, lysed RBCs הם צאצאים של תא בודד.

עובדה זו בדיוק רב מעיד על קיומם של שתי האוכלוסיות של אריתרוציטים, שונה לא רק פונקציונלית, כ, למשל, ב- mikrosferocitoze, אבל גם לפי מקור: במילים אחרות, היא מאשרת את הנוכחות של התאים המשובטים פתולוגי, לא. זה. מוטציה סומאטית. הזהות של כדוריות דם אדומות ממברנה נגעים, נויטרופילים ולבנים וטסיות דם עולה כי, מידע זה פתולוגי סביר מקבל את הכלוב, הבא עבור גזע, לא. זה. mielopojeza התא הקדם. צמיחה Blastomnyj PNG אינה ספציפית. לתאר רק מקרים בודדים של התפתחות מהירה של לוקמיה על רקע PNG. עם זאת, ניתן להניח, PNG זה הוא וריאציה של גידול שפיר של מערכת הדם, במשך זמן רב, בהפקת אין התפשטות תאים סרטניים, מאפיין של צורות אחרות של לוקמיה.

Komplementchuvstvitel'nosti מנגנון הפיתוח ב- PNG בזמן לא ברור.

משמעותיות שינויים בפעילות של אנזימים של מחזור pentozno-פוספט גליקוליזה. לא.

כאשר PNG קטנה הפעילות של אצטילכולין אסטראז של אריתרוציטים, קרוב לוודאי עקב שיבוש המבנה של ממברנות תאי הדם האדומים, כי האנזים ממוקם על פני הממברנה ובקלות שבורים מתי התבוסה. ידוע, כי השימוש של מעכבי של אצטילכולין אסטראז אינו משפיע על ההישרדות של אריתרוציטים. עם זאת, נפילתו של פעילות אצטילכולין אסטראז נצפית גם בצורות אחרות של אנמיה המוליטית, ולכן לא יכול להסביר את תופעת komplementchuvstvi מוגברת- Lems.

יש ראיות, עדויות של עלייה במספר של חומצות שומן בלתי רוויות, כלול המבנה של פוספוליפידים, כדוריות דם אדומות ממברנה. יש אפשרות, בכל ליפידים – הוא רק בבואה של שינויים אחרים במבנה של ממברנות תאי הדם האדומים. במחקר של חלבון של כדוריות דם אדומות קרום בחולים עם PNH לזיהוי ג'ל אלקטרופורזה בנוכחות נתרן dodecilsulfata להגדיר, זה, במספר שברים של תכולת החלבון שונה באופן משמעותי הפקד.

התפקיד המרכזי בפתוגנזה של סיבוכים קדחת APG בדרגה vnutrisosudistomu פירוק של כדוריות דם אדומות וגירוי גורמי קרישה, שוחררו אריתרוציטים במהלך הפרידה שלהם. מתי APG הרס בעיקר רטיקולוציט, יכול להיות, זה צריך להסביר את שכיחות הסיבוכים קדחת במחלה זו, שלא כמו צורות אחרות של anemias המוליטית, בליווי המוליזה קרישה תוך-כלית בולטת.

הביטויים הקליניים gemoglobinurii ליליות התקפי

המחלה בדרך כלל מתחיל עם יבבה. חולים מתלוננים על חולשה, חולי, סחרחורת. לפעמים skler subicteric הערות. לעיתים קרובות תלונות הראשון כאב ראש, כאבי בטן של לוקליזציה שונים. נטייה מוגברת כגון היווצרות גורמת למטופל לטיפול רפואי. Hemoglobinuria די נדיר התסמינים הראשונים של המחלה, חלק מהחולים של APG מוסיקאליות בכלל. במקרים מסוימים הוא מופיע בפעם הראשונה דרך 2-3 שנים ואפילו דרך 10 שנים לאחר תחילתה של המחלה.

אחת התכונות האופייניות של PNG-התקפי כאבי בטן. לוקליזציה של זה עשויים להיות שונים מאוד. מחוץ לתקופת בה כאב בטן, בדרך כלל, לא נצפה. לעיתים קרובות מצטרפת ההקאה. ככל הנראה, כאבי בטן אצל חולים עם PNH מזוהה עם פקקת כלי מצע המעי העליון.

פקקת כלי דם היקפיים (לעתים קרובות יותר מאשר לא-עורקי הגפיים העליונים והתחתונים, לפחות-כלי-כליות) גם סימפטום אופייני התקפי gemoglobinurii ליליים. ב 12 % APG המטופלים נצפתה throm. סיבוכים תרומבו הם הגורם השכיח ביותר למוות במחלה זו.

מתי אובייקטיבית המחקר של חיוורון לעיתים קרובות ראוי לציין החולה עם נגיעה קלה של zheltushnym. לעיתים קרובות יש נפיחות פנים, שובע מוגזם לפעמים. אולי עלייה קלה של הטחול והכבד, אמנם זה לא אופייני APG.

עבור gemoglobinurii ליליות התקפי מאופיין על-ידי סימנים של המוליזה קרישה תוך-כלית, הדבר החשוב ביותר מהם הוא המוגלובין חינם פלזמה מוגברת. בנושא זה מדי פעם כמעט כל החולים של APG. עם זאת, מידת הגדלה של המוגלובין חינם פלזמה משתנה, תלוי, ובאיזו תקופת המחלה המחקר. במהלך המשבר הזה פרופורציה מגביר באופן משמעותי, חלה גם עלייה במספר metal'bumina פלזמה.

רמת ההמוגלובין חינם פלזמה תלוי מידת המוליזה את הרגע, תוכן gaptoglobina, דרגת סינון של המוגלובין בשתן ואת המהירות של המוגלובין מורכב הרס — haptoglobin. במקרה של מידה קטנה של המוליזה המוגלובין חינם פלזמה רמות לא תספיק לסנן את זה דרך המסנן כליות. לכן, hemoglobinuria אין חובה סימפטום למחלה. כאשר עוברות nefronov canaliculi מופרש על ידי ההמוגלובין הוא חלקית הרס שהופקדו אפיתל צינורי. זו הסיבה hemosiderin השתן.

מסופק עם שתן hemosiderin של הרוב המכריע של חולים עם התקפי hemoglobinuria ליליים. Gemosiderinurija לפעמים לא מופיע מיד. . זה חשוב, אבל לא ספציפית PNG סימן למחלה.

מעבדה בפרמטרים paroxizmalna לילה gemoglobinurii

המוגלובין אצל חולים עם PNH נע בין 1.86 — 3,1 mmol / L (30-50 גרם/ליטר) אפילו יותר נמוך לשגרה במהלך הפוגות.

המספר של אריתרוציטים בחולים עם PNH מקטין את רמת צמצום של המוגלובין. מחוון צבע פרק זמן ארוך יותר נשאר קרוב יחידה. איפה, אם החולה מאבד כמויות משמעותיות של ברזל עם שתן בצורה של hemosiderin, המוגלובין, רמות הברזל ופוחת. מחוון צבע נמוכה נצפית במחצית מהחולים. חלקם בעלי רמות המוגלובין (P) גבוהות, במיוחד בתקופות של גדל.

חלק גדול מהחולים תוכן רטיקולוציט מוגברת, אבל נמוכה יחסית (2- 4 %). המספר של לויקוציטים ב- PNG ברוב המקרים מופחתת. אצל חולים רבים זה גרם 1.5-3 1 l, אבל לפעמים מופחתת ל- 0.7-0.8 גרם 1 l. לויקופניה, בדרך כלל, אין על-ידי הפחתת המספר של גרנולוציטים נויטרופילים. לפעמים בדם APG רגילה או גבוהה – עד 10-11 גרם 1 l.

מתי APG מפחית את פעילות Phagocytic נויטרופילים של גרנולוציטים.

תרומבוציטופניה גם לעתים קרובות PNG, עם זאת, למצב התפקודי של טסית דם רגיל. כנראה, זה מסביר בנגישות של דימום סיבוכים כאשר מחלה זו, למרות ספירת טסיות לפעמים מצטמצם באופן משמעותי – עד 10-20 גרם 1 l. בדרך כלל, רוב המטופלים טסיות הדם 50-100 גרם 1 l. ספירת טסיות רגילה אינה שוללת אבחנה של התקפי gemoglobinurii ליליים.

במחקר של מח העצם הסימפטומים שזוהו, בעיקר מאפיין של אנמיה המוליטית הוא hematopoiesis נבט גירוי אדום ב mielokariocitov מספר נורמלי. אצל חלק מהחולים יש ירידה קלה במספר מגקריוציט.

רמת ברזל בסרום PNG תלוי בשלב של המחלה, קרישה תוך-כלית המוליזה ורמת הפעילות של דם. איפה, אם חולים יש hemoglobinuria קבוע או תכופים, כמו גם gemosiderinurija מתמדת, התוכן של ברזל בגוף, ולכן, ובירידות בנסיוב, לפעמים מאוד משמעותית. לפעמים PNG מתחיל עם סימנים של התפתחות. ברזל מאחסן בגוף של המטופל APG תלויים, צד אחד, מפני אובדן ברזל בשתן, ו, לעומת זאת, עוצמת אריתרופויזה. לכן, אתה לא יכול לקחת ברזל אבחון לקוי סימן gemoglobinurii ליליות התקפי.

רמת בילירובין בסרום PNG ברוב המקרים, ממוקד מוגבר או רגיל, בעיקר דרך עקיפה. תוכן בילירובין הממוצע הוא 22-28 μmol/l. יש להביא בחשבון, כי כאשר המוגלובין המוגלובין נוצר ריקבון vnutrisosudistom-gaptoglobinovyj מתחם, מי ובסופו של דבר גם תיפרד היווצרות של בילירובין.

חלק מהחולים במחלה PNH מתחיל עם ציורים של אנמיה אפלסטית.

האבחנה של gemoglobinurii ליליות התקפי

אם gemoglobinurii ליליות התקפי מבנה מעטפת של אריתרוציטים שבור, כפי שמשתקף מדרגה גבוהה של רגישות להשפעות של המשלים שלה. רגישות יתר זו מזוהה באמצעות דגימות גם המה, או יותר רגישים saharoznoj דגימות. במקרים מסוימים, עם זאת,, במיוחד בצורת gemolizinovoj אוטואימוני, מדגם saharoznaja יכול לתת תוצאה חיובית שקרית. Gemoliziny קבועים על פני השטח של תאי הדם האדומים שלהם ובפני משלים saharoznoj רביעי הרס שלהם, בעוד PNG מאופיין על ידי ההרס של תאים komplementom ללא חשיפה נוגדנים.

כדי לא לכלול טופס gemolizinovoj אוטואימוני המחקר מומלץ hemolysins כמתואר לעיל, באמצעות הצלב-saharoznoj עם סרום דגימות אריתרוציטים odnogruppnogo של החולה ושל התורמים, ולא להפך, כמקובל. מתי דגימה ישירה APG הוא חיובי, קרוס- שלילי. מתי gemolizinovoj טופס AIGA עלולה להתרחש חיובי, ודגימת שלילי קרוס-. במקרים אלה מומלץ להשתמש הדגימות saharoznoj באפשרות השלישית — באמצעות שני סרום, תאי הדם האדומים של המטופל. מידת המוליזה ב וריאנט זה המינימום כאשר PNG ו- gemolizinovoj מקסימלית בצורת AIGA. להסביר שתוצאה כזאת יכולה להיות רק נוגדנים ספציפיים מאוד של הסרום של הטופס gemolizinovoj החולה של אנמיה המוליטית אוטואימונית כדי אנטיגן, זמין בכמויות גדולות ב אריתרוציטים של חולה, מ ב אריתרוציטים של התורם. דוגמה חיובית ישירה saharoznaja בחולים אלה קשורה, כנראה, עם הנוכחות של אריתרוציטים קבוע נוגדנים.

זיהוי של hemolysins בשיטת agregatgemaggljutinacii מסייע לשים את האבחנה הנכונה. לא ניתן להשתמש נסיוב התורם של חולים, כמו במקרה של gemolizina לא בהכרח תוצאה תוכן lozhnopolozhitel'nym. תוצאה שלילית עלולה להתרחש, אם המקור משתמש סרום החולה המשלים APG או סרום חולה שחמת הכבד, דלקת מפרקים שגרונית, זאבת אדמנתית מערכתית ומחלות אחרות, ב המשלים אשר מקטין רמת. Saharoznaja שהמה דוגמה, דוגמה הופך פחות בולט, אם אתם נוטלים דם מחולה משמש נוגד קרישה הפרין, במקום סודיום ציטרט. לאחר משבר היילוד בעוצמה מופחתת המה דגימות דגימות saharoznoj, . אבל הם לא הופכים שליליים.

ההגדרה של המוגלובין חינם פלזמה Derviz בינג שינוי השיטה, Bjalko עם התקפי gemoglobinurii ליליים

השיטה מבוססת על היכולת של המוגלובין להגיב עם חומצה-benzidine רביעי בנוכחות חמצן עם הקמת שצבעו ירוק, גלגול קודם בצבע כחול, ואז באדמדם-סגול. עוצמת הוא יחסי למספר של המוגלובין.

ריאגנטים.

1. מאגר אצטט 0,1 M, pH 4,6: 27,22 g סודיום אצטט מומס 1 ליטרי מים (0,2 פתרון M של); בהנורה מדידה אחר קוק 1 l 0,2 ז תמיסה של חומצה uksousnokisloy; מעורב 480 ml מס 1 ו 520 ml מס 2.
2. מי חמצן 0,3 % פתרון (להכין לפני השימוש על ידי גידול של פתרון ב 100 זמן).
3. Soljanokislyj benzidine 0,1 % פתרון: 50 מ ג soljanokislogo benzidine מומס 35-40 מ"ל של מאגר אצטט, מחממים את הפתרון 80 ° C באמבט מים ואחרי קירור להביא המאגר acetatnym 50 מיליליטר.

מסנן הבקבוקון ואת החנות בחושך בטמפרטורת החדר לא יותר 7 ימים. ריאגנט משיניך אינו מתאים, מהיר potemnenii עליך perekristallizovat' benzidine מאלכוהול.

שיטה.

דם ללימודי שנלקחו ורידים המחט יבש בצינור silikonirovannuju, מכיל כל קרישה. דם עם קרישה centrifuged יותר 10 דקות ב 1500 / דקה. לאחר ההפרדה של צנטריפוגה פלזמה שלה שוב 10 דקות ב 8000 סל ד עבור התצהיר של לויקוציטים.

בצינור מבחן מלא 4 אצטט חיץ מיליליטר, 2 ml מימן על-חמצני, 2 benzidine מ ל ו 0,04 ml בדיקת סרום מעורב והשאיר לעמוד 3 מ ', ואז לשפוך את אורך אופטי Cuvette 1 ראה, fotometrirujut נגד פתרון פיצוי-מגן ירוק. האינטנסיביות של שצבעו כחול עולה במהלך 4-5 דקות, לכן, מדידה של חוזר 3 - 5 פעמים ברציפות ולהקליט את הקריאות המרבי. אחרי 5-6 דקות צביעה הנסיוב הופך גוון סגול-חום, ערך צפיפות אופטית מתחיל להקטין. שתי תוצאות מירבי מזוהה שהצפיפות האופטית של המדיום הוא נלקח.

פתרון פיצוי, המורכב 6 אצטט חיץ מיליליטר, 8 ml מימן על-חמצני, 3 benzidine מ ל ו 0,06 מיליליטר של תמיסת נתרן כלורי איזוטוני, להכין באותו הזמן עם.

התצוגה עקומת כיול על פתרון של המוגלובין. בדם, נלקח לפתרון של המוגלובין, למדוד את תוכנו (kolorimetre רפואי או רפואי refraktometre). להכין פתרון של ריכוז המוגלובין 1 גר '/ ליטר, ממנו להכין פתרונות של ריכוז נמוך יותר: 0,005,0,025, 0,05, 0,1 ו 0,2 גר '/ ליטר. כל פתרון שיתקבל להוסיף 0,04 מ של תערובת 4 אצטט חיץ מיליליטר, 2 benzidine מ ל ו 2 ml מימן על-חמצני.

Gemolizata הפתרון העיקרי (1 גר '/ ליטר) לכיול עקומת יש לאחסנו במזג אוויר קר, ואני עובד ריכוז נמוך יותר של פתרונות צריך להיות מוכן מיד לפני הבדיקה.

בדרך כלל, ב 1 מכיל ליטרים של פלזמה 0,0005 mmol / L (0,01-0.04 g) המוגלובין.

ההגדרה של hemosiderin בשתן עם התקפי gemoglobinurii ליליים

ההשפלה של המוגלובין ברזל אפיתל אבובית הכליה it הספוחה והוא חלק hemosiderin. Slushhennye תאים של האפיתל הכרישים כליות במקרים אלה מכילים גרגירים של hemosiderin.

מחקר קפדני של משקע שתן לאחר צנטריפוגה תבואה hemosiderin גלוי, ללא צביעה מיוחדת. עם זאת, הם להתבלט יותר בבירור בעת צביעת ב שיטת Perlsa.

שיטה.

לאחר צריך שתוציאו השכבה העליונה שתן למצוץ ביטול, כדי פרצים להוסיף פתרון svejeprigotovlenny 1 % צהוב בדם מלח ו 1 % חומצת מימן כלורי (מערבבים כמויות שוות של 2 % תמיסת חומצה הידרוכלורית ומלח דם צהוב). לאחר 10 דקות לאחר ערבוב, התערובת הוא centrifuged, מסתכל המשקע. דגן hemosiderin מכתים כחול.

קביעה של פלזמה metgemal'bumina בשיטת Spectrophotometric

ריאגנטים.

1. Izoosmoticheskij מאגר פוספט (pH 7,4): מעורב 18 מיליליטר 0.15 ז הפתרון סודיום digidrofosfata (24,4 g YaN2R04 על 1 ליטרי מים) ו 82 מיליליטר 0,15 ז פתרון נתרן מימן (21,3 g NaH₂לאחר₄ ב 1 ליטרי מים).
2. ביסולפיט.
3. נתרן הידרוקסידי 1 M.
4. פתרון אנושי אלבומין (40 גר '/ ליטר).
5. פתרון gemina (5 מ"ג / 100 מ"ל); מכין באופן מיידי על ידי המסת gemina בכמויות קטנות של סודה קאוסטית, ואז: מביא את זה עד הכמות הנדרשת של אלבומין פתרון.

שיטה.

K 2 סרום ml או פלזמה דם נוסף 1 פתרון izoosmoticheskogo zabuferernogo מ, pH 7,4. התערובת הוא centrifuged 30 דקות ב- 1200-1500 סל ד. לקבוע הצפיפות האופטית- 569 ננומטר. ואז אם פלזמה מדולל מושם במבחנה ולהוסיף כ 5 מ ג יבש כדאי שאלך סולפט נתרן. דרך 5 מין למדוד שוב ושוב הצפיפות האופטית-באותם אורכי גל. ההבדל בין שני ערכים צפיפות אופטית מקביל הצפיפות האופטית של metgemal'bumina. Metgemal'bumina הריכוז נקבע על פי לוח הזמנים כיול.

כיול גרף התצוגה כדלקמן. פתרון gemina albuminom העברת לתוך צינורות בכמות של 0,01 ל 0,1 גר '/ ליטר (מ 0,2 ל 2 מיליליטר). צינורות אלה, איפה כמות פתרון פחות 2 מיליליטר, מסתכם 2 אלבומין ml. לאחר מכן להוסיף על 1 ml פוספט מאגר izoosmoticheskogo. Centrifuge את התערובת- 1500 / דקה, ואז למדוד הצפיפות האופטית. ההבדל בין מידות מוחל על התרשים, בהתאמה מספר gemina.

פלזמה נורמלי gemal'bumin חסר. הוא מופיע במקרה של המוליזה קרישה תוך-כלית, למשל, אם הטופס ליליות התקפי gemoglobinurii או gemolizinovoj של אנמיה המוליטית אוטואימונית, כמו גם העדר gaptoglobina, מתי heme נקשר לאלבומין.

המשפט המה paroxizmalna לילה gemoglobinurii

המה למשפט בהתבסס על הנמכת ההתנגדות של כדוריות דם אדומות של חולים עם PNH pH נמוך רביעי בנוכחות סרום טריים משלימים.

ריאגנטים.

1. פתרון של חומצה הידרוכלורית 0,2 n.
2. פתרון אמוניה 0,04 %.

שיטה.

וינה לקחת 5- 6 מיליליטר של דם. משמש נוגד קרישה, סודיום ציטרט או אוקסלט. במקביל לקחת 15-20 מ"ל של דם מהתורם באותה קבוצה. להפריד כדוריות דם אדומות פלזמה דם של החולה, התורם.

הסרום של התורם הוא שפך על 0,5 מ ל 6 צינורות, שניים מהם לשים 20 דקות באמבט מים עם טמפרטורת 56 ° C כדי להשבית את המשלים סרום, ארבעה צינורות הבדיקה אחרים נותרו בטמפרטורת החדר. דם אדום תאים המטופל לשטוף פעמיים izotoniceski תמיסת נתרן כלורי, ואז suspenzirujut הפתרון אותו יחס 1:1.

דיאגרמה של המחקר מוצגים בטבלה.

לערבב התוכן של כל מבחנה, לשים על שלך 1 h ב- thermostat בטמפרטורה 37 מעלות צלזיוס, ואז centrifuged.

עבור סרק שנדגמו 0,05 כדוריות דם אדומות מ' של המטופל התורם מתווסף בנפרד 0,55 מיליליטר של תמיסת נתרן כלורי איזוטוני.

לאחר צנטריפוגה מידת המוליזה יכול להיות מוערך על ידי העין. כדי לכמת את מידת המוליזה כל צינור כדי 4,7 מיליליטר 0,04 % הוספת אמוניה פתרון 0,3 שכבת פני השטח של ml, אבל את מבחנה עם הפריצה סרק — 0,3 מ של הסרום הפניה.

כדי לזהות 100 % המוליזה כדי 4,7 ml אמוניה פתרון להוסיף 0,3 mL ההשעיה של אריתרוציטים (0,05 ml החולה אריתרוציטים ב 0,55 מיליליטר של תמיסת נתרן כלורי איזוטוני).

צפיפות אופטית של הפתרון נמדד ב kolorimetre הרפואי ולהשוות את הקריאות עם צפיפות אופטית אמוניה פתרון ללא כדוריות דם אדומות:

% המוליזה =((הוא₁-הוא₂)/הוא₃)*100;

איפה E₁ -צפיפות אופטית של ניתוח בדיקה; הוא₂-צפיפות אופטית מדגם ריק; הוא₃-צפיפות אופטית 100 % gemolizata.

בדרך כלל, לא יותר מאשר gemoliziruetsja 5 % כַּדוּרִית אֲדוּמָה.

המדגם נחשב לחיובי שבט ההאמה במקרה, אם gemoliziruetsja יותר 6 % כַּדוּרִית אֲדוּמָה.

בצורת paroxizmalna לילה gemoglobinurii, gemolizinovoj gemoliziruetsja אוטואימוני, לפעמים עד 50-80 % כַּדוּרִית אֲדוּמָה. למחלות אלה מאופיין על-ידי המוליזה רק בנוכחות סרום neinaktivirovannoj (-. לא- 2). אם איון של סרום אינה מונעת המוליזה (-. לא- 3), אנחנו יכולים להניח את קיומו של צורות אחרות של אנמיה המוליטית או טעות בקביעת מחקר.

על ההרס של כדוריות דם אדומות של חולים עם התקפי hemoglobinuria ליליים רביעי ב- pH 6,5 דורש נוכחות חובה של המשלים, הכלול הסרום טריים.

מבחן התאמה Saharoznaja עם התקפי gemoglobinurii ליליים

מדגם Saharoznaja מבוסס על, כדוריות דם אדומות של חולים עם טופס ליליות התקפי hemoglobinuria, gemolizinovoj של אנמיה המוליטית אוטואימונית נהרסים בפתרונות של עוצמת יוניים נמוכה בנוכחות המשלים.

ריאגנטים.

1. תמיסת סוכרוז: 9,42 סוכרוז מומס 0,005 מאגר fosfatnom M; pH 6,2 (91 מיליליטר 0,005 מ ' NaH₂לאחר₄ ו 9 מיליליטר 0,005 נה ז₂HPO₄).
2. ריאגנט לקביעת ריכוז המוגלובין: 200 mg דם אדום מלח מומס 1 מים מזוקקים l, יש להוסיף 0,5 atsetontsiangidrina מ.

שיטה.

דם בחולה לקחת מווינה על שני צינורות הוא יבש (8מ-10) עם נוגד קרישה (2- 3 מיליליטר). בתור קרישה להשתמש סודיום ציטרט. אריתרוציטים צינוריות איסוף דם עם קרישה פעמיים להלבין izotoniceski תמיסת נתרן כלורי. לאחר החילוץ הלבנת כספים, supernatant ל 0,4 ml אריתרוציטים להוסיף 0,25 מיליליטר של תמיסת נתרן כלורי איזוטוני.

במקביל לקחת דם מתורם באותה קבוצה של דם שני צינורות — עם נוגד קרישה (2מ-3), הוא מטופל באופן זהה, כמו הדם של המטופל, יבש (8- 10 מיליליטר) כדי לקבל סרום. לאחר ההפרדה של הסרום של התורם 0,5 ml שמניחים אותה באמבט מים בטמפרטורה 56 מעלות צלזיוס 30 מינימום עבור איון של המשלים. הסרום של התורם צריך להשתלט מההוויה היומיומית ולהמשיך בקור. ערכת לימוד נתונה בטבלה.

הצינורות מוכנסים התרמוסטט על 30 טמפ מינימלית 37 מעלות צלזיוס, ולאחר מכן צנטריפוגה עבור 10 מהירויות min 2000 סל ד ולהעריך את מידת המוליזה.

כדי לעשות זאת, בצינור המבחן הוא שפך על 3,4 ml ריאגנט לקביעת ריכוז המוגלובין ו 0,6 ml-- משקעים של כל ציוד מתכלה. דרך 10 מין למדוד את הצפיפות האופטית של הפתרון צינורות עם 540 ננומטר על בריאות refraktometre (ספקטרופוטומטרים) או kolorimetre רפואי (דצמ fotokolorimetre-m) מתי ירוקה מסכת ברזל, על ידי השוואת הנתונים שהושג עם צפיפות אופטית לפתרון נחישות המוגלובין. לוקח הממוצע של שתי המקראות התנסות. החישוב מתבצע לפי הנוסחה:

% המוליזה במבחנה =((הוא₁-הוא₅)/(הוא₈-הוא₅))*100

איפה E₁ -צפיפות אופטית של הפתרון במבחן צינור. לא. 1; הוא₅ -צפיפות אופטית של הפתרון במבחן צינור. לא. 5, כדי לא לכלול את הנסיוב צביעה; הוא₈ -צפיפות אופטית של הפתרון במבחן צינור. לא. 8, איפה המוליזה 100%.

לקבלת דוגמאות קרוס-saharoznoj (-. לא- 2) 100%-th המוליזה במבחנה ייחקר מס 7.

הערכה של תוצאות.

נורמלי in-vitro מס 1, מכיל כדוריות אדומות ובחן את החולה, המוליזה אינו עולה על 2-3 %.

בצורת paroxizmalna לילה gemoglobinurii ו- gemolizinovoj אוטואימוני (Aiga) במבחנה זו חורג המוליזה 6 % במבחנות-. לא- 4, המכיל את הדם של המטופל inaktivirovannuju סרום של התורם, מבחנה # 5, המכילה אריתרוציטים, סרום התורם, ומספר 6, המכיל סרום במקום פתרון מול נתרן כלורי-המוליזה לא יעלה על 1-2 %.

משפט קרוס-saharoznaja (-. לא- 2) כאשר gemolizinovoj צורת AIGA בדרך כלל חיובי (בנוכחות hemolysins ב הנסיוב), אבל זה יכול להיות שלילי. במבחנה מס 3 (כדוריות דם אדומות, הסרום של המטופל) המוליזה כפי שנצפה ב APG, ב gemolizinovoj בצורת AIGA. ב- paroxizmalna לילה gemoglobinurii המרבי המוליזה מזוהה מדגם saharoznoj רגיל (-. לא- 1), פחות מודגשת — עם החולה תא משלו לדוגמה (-. לא- 3); אין המוליזה בדוגמת קרוס-saharoznoj (-. לא- 2).

כאשר gemolizinovoj צורת AIGA הכי בולט המוליזה מזוהה במדגם עם נסיוב הדם משלך אריתרוציטים של חולה (-. לא- 3), פחות בולטת — במבחנה מס 1. במבחנה מס 2 תמס נצפית לעתים קרובות, אבל חוסר אינה שוללת טופס gemolizinovuju AIGA.