Fibrinólisis Investigación
Para las clínicas es extremadamente importante como la identificación de aumento de la actividad fibrinolítica de la sangre, y su reducción, que puede deberse al consumo intensivo de los activadores del plasminógeno y cuando activación y fijación en el pelotón, y trombos, o bien aumentar antiplazminovoy antiaktivatornoy y la actividad de plasma. Siempre hay que recordar, que la intensa fibrinólisis en racimos y trombos, detectable para mejorar el contenido del FDP en el plasma, lógicamente combinados con los activadores del plasminógeno y de reducción de la reserva en el plasma (sangre circulante).
El estado de la lisis del coágulo naturales
Una visión general del estado de la lisis del coágulo naturales puede proporcionar un método Kotovshchikova-Kuznik modificación en. P. Baluda o modificación E. P. Ivanova.
El principio del método es, que dado el hematocrito, y el contenido de células rojas de la sangre se determina por el número de la última, abandonado el manojo en un depósito durante un cierto período de incubación. Al aumentar el volumen de la actividad fibrinolítica de la sangre de esta fracción (tercero) aumento de eritrocitos. En el caso de aguas profundas anticoagulación y hipofibrinogenemia, que producen racimos defectuosos y más flexibles, estos métodos pueden dar resultados engañosos.
En un procedimiento de modificación de Bidwell D. EN. Andreenko fibrinólisis evaluada por la pérdida de los coágulos de fibrina.
Las fracciones de la actividad fibrinolítica estudio euglobulina de plasma
Investigación fracciones de plasma actividad fibrinolítica euglobulina es la prueba básica más importante, lo que se confirma por la Comisión de la Sociedad Europea de Trombosis.
Para ello, utilice cualquiera de los métodos clásicos de determinar euglobulina coágulo lisis, una definición de la fracción de euglobulina actividad lítica sobre placas de fibrina (en este último caso, el efecto de diferentes cantidades de lecturas de la prueba de fibrina nivelado). Lisis en estas pruebas se debe a la, en la fracción de euglobulina era activadores de plasminógeno aislados y, mientras que los inhibidores de la fibrinolisis, elimina la mayor parte de. Por lo tanto, utilizando la prueba de euglobulina medido los niveles en plasma de los activadores del plasminógeno y.
En la preparación de sangre debajo de metabolismo basal, t. es. en la mañana con el estómago vacío, antes de levantar al paciente de la cama, activador tisular del plasminógeno en la sangre es casi ningún. Por lo tanto, en tales condiciones se determina principalmente por el estado interno (sanguíneo adecuado) La activación de plasminógeno.
Este proceso se puede acelerar en gran medida por la activación de pre-contacto de factores XIIa-calicreína-quininógeno VM caolín, resultando en la reducción de lisis euglobulina con 2,5-3 horas a 2-10 minutos. Activación por contacto Este principio se basa métodos para determinar la XII-fibrinólisis dependientes.
La capacidad de los endotelial vascular secretada en el torrente sanguíneo fibrinólisis activador externo (de tipo tisular activador, Divide Bridging Digital) Se estima para acelerar la lisis euglobulina después de comprimir los vasos del manguito de la unidad de medición de la presión arterial (degustar Oyvina-Chekalinoy), o después de la carga física dosificado en el cicloergómetro, o la estimulación farmacológica (derivados de vasopresina - desmopresina o adiuretinom).
En la literatura, muchas modificaciones de estas técnicas.
Así, por ejemplo,, durante prueba de compresión en técnica clásica presión del manguito se mantiene en 10,7 kPa (80 mm Hg. Art.) o una 1,3 kPa (10 mm Hg. Art.) mayor diastólica durante 15-20 minutos, y en la modificación más reciente de la prueba en. P. Pelota - 3 min a compresión en 1,3 kPa (10 mm Hg. Art.) mayor presión arterial sistólica. En ambos casos, la segunda vez para estudiar la sangre tomada de la embarcación pellizcado para quitar las esposas.
Con tales muestras se pueden estudiar el efecto de la compresión no sólo la fibrinólisis, y otras propiedades anti-trombóticas de las paredes vasculares (anticoagulante, antiagregante y así sucesivamente.).
Las pruebas de estrés forma estandarizada, a euglobulina normales lisis se aceleró en 2 o más veces (no haciendo investigación en un metabolismo basal lleva a una muy grandes errores aleatorios, Por lo tanto, el paciente antes del estudio comenzó en la mañana no debe salir de la cama, venopunción debe llevarse a cabo en la Casa).
El debilitamiento de la reacción a la compresión carga o indicar una falta de reactividad del sistema fibrinolítico y mayor riesgo de trombogénico, verificado que el número de estudios.
El contenido de plasminógeno en el plasma
El contenido de plasminógeno en el plasma Puede ser semi-cuantitativamente evaluado mediante la adición de dosis específica facción euglobulina de la estreptoquinasa. De acuerdo con el procedimiento Slobozhankinoy - Fedorova, elegido tal actividad estreptoquinasa, que proporciona euglobulina lisis de 9-11 minutos, Sin embargo, es posible utilizar grandes concentraciones (Los valores estándar se muestran en cada laboratorio separado). En la deficiencia de tiempo de lisis del plasminógeno en esta prueba se extiende a más, cuanto menor sea este proenzima.
El coágulo de plasma lisis estudio
Un estudio paralelo de plasma lisis del coágulo por el mismo procedimiento en la estimulación de la estreptoquinasa permite diferencias resultantes cifras para estimar la actividad de antiplasmina en el plasma de prueba, porque fracción de euglobulina-antiplasmina prácticamente ningún, y coagulado en plasma entero que tiene.
La cantidad se calcula a razón de antiplasmina
(Plc ARENA)/ARENA;
donde PLC — tiempo en presencia de coágulo de plasma estreptoquinasa lisis,
ELS - euglobulina tiempo de lisis del coágulo en presencia de la misma dosis de estreptoquinasa.
Adicional, El uso de este factor, actividad antiplasmina se determina como porcentaje de la curva pre-dilución compilado (obtenido en muestras mixtas de plasma normal de la sangre).
De manera más precisa, sin embargo, fácil de implementar métodos de investigación fibrinólisis por azofibrina división, representa un compuesto de fibrina, covalentemente svyazannogo con hromogennыm substratom (azopeptidom)
El principio del método es, que tres tubos de pipeta 10 mg azofibrina, mezclado con tampón (pH 7,4), a continuación, dos de ellos pipeta 0,15 ml de plasma sanguíneo y estudió con más detalle en uno de estos tubos - 10000 U / ml de estreptoquinasa.
Después de la incubación 1 h, la solución se filtró y se espectrofotómetro fotométrica a longitud de onda 440 colorímetro nm o médico en filtro de luz azul.
Actividad de la plasmina se determina por el plasma en la muestra sin estreptoquinasa Cambio en la densidad óptica del filtrado en comparación con el contenido de los tubos tercero, y los niveles plasmáticos de plasminógeno - en la muestra con estreptoquinasa. La incubación de la plasmina y el estudio del plasma en el mismo sustrato está decidido antiplazminovaya Actividad. Los puntos de referencia, obtenida en los estudios de plasma normal, aceptado para 100 %.
Así, con la ayuda de un conjunto relativamente pequeño de métodos simples de laboratorio funcional puede tener una idea sobre el estado de los diversos mecanismos de fibrinolisis, contenidos en el plasma y liberado del plasminógeno paredes vasculares, sus activadores e inhibidores.
Como en el estudio de la coagulación sanguínea, Estos datos se pueden complementar de manera significativa determinación inmunológica de componentes del sistema de la fibrinolisis y productos de degradación de fibrinógeno y fibrina.
Los métodos para la detección de "testigos" y los marcadores moleculares de la coagulación intravascular y la fibrinólisis
En el proceso de la coagulación intravascular y asocia intensa fibrinolisis ocurre, un lado, y un consumo más o menos marcada reducción en la sangre de algunos componentes del sistema hemostático, Por otro lado - el aspecto de las partes, fragmentos y metabolitos, que en plasma normal no contiene o contiene una pequeña cantidad de.
La identificación de estos "testigos", y marcadores de activación de la coagulación intravascular y la fibrinólisis es de gran valor diagnóstico en la coagulación intravascular diseminada, enfermedades tromboembólicas de diferente origen y mikrotrombovaskulitah (infeccioso, Inmune, tumor etc.. d.).
Consumo de marcadores y la activación de la hemostasia plaquetas
Para los marcadores de consumo y activación de plaquetas son hemostasis trombocitopenia, el aumento de los componentes del plasma de los gránulos - antigeparinovogo factor de 4 Plaqueta, (3-tromboglobulina et al., así como la preservación de la circulación funcional menos activo y menos agregación de las plaquetas.
Marcadores principales de daño y la discapacidad funcional del endotelio vascular - aumentar los niveles plasmáticos de factor de von Willebrand, respuesta de relajación euglobulina vasos lisis durante el manguito de compresión, el ejercicio físico o la administración de análogos de la vasopresina.
Hipercoagulabilidad
Hipercoagulabilidad, si está disponible, puede indicar la activación de la coagulación sanguínea. Ella reveló por las pruebas de coagulación generales y estudios de imagen (tromboelastografía), y clínica - basado en la dificultad de obtención de sangre de una vena - trombosis tanto de la vasija de pulmón, y la aguja, e incompleta estabilizar sangre por agitación con citrato (La educación en macro vitro- y microcoágulos).
Esta sangre coagulada en parte es completamente inadecuado para un mayor estudio del sistema hemostático, así que asegúrese de centrifugar la sangre debe ser revisado, si se coagula. En presencia de coágulos de sangre no está sujeto a un mayor estudio (pero puede ser utilizado para la preparación de suero y una serie de análisis bioquímicos). La experiencia muestra, no basta la adhesión a esta recomendación es a menudo una fuente de graves errores en el estudio del sistema hemostático.
Hipercoagulabilidad en algunas pruebas todavía no hay evidencia del peligro de trombógena. Además, Un gran número de trombofilia, que se caracterizan por el hipo inicial, lugar hipercoagulabilidad. Estos incluyen trombofilia, causada por la deficiencia del factor XII, precalicreína y quininógeno VM, disfibrinogenemiyami, deficiencia de proteína C, etc.. d. Coagulación prácticamente sin cambios en la propensión a la trombosis debido al aumento del índice de hematocrito (a menudo mientras que hay hipocoagulación), trombocitemia, inferioridad de la fibrinólisis, y así. d.
Sobre la base de las razones dadas, no puede equipararse con el riesgo de hipercoagulabilidad y trombogénico, no por lo que la función está actualmente entre los trombofilia estigmas incluido.
La activación del "puente" entre los factores XIIa calicreína y Factor VII
La activación del "puente" entre los factores XIIa calicreína y Factor VII, que es reconocido por examinar el tiempo de protrombina con tromboplastina bovina y después de enfriar a estudiar el plasma sanguíneo durante 18-24 h a 4 ° C (activación de prueba de frío). En un número de trombofilia después de enfriar disminución observada en el tiempo de protrombina 25-50 %. Otros tromboplastina, excepto bovina, para este estudio no son adecuados.
La presencia en el plasma de péptido libre A
La presencia en el plasma de péptido libre A, detectado por métodos inmunológicos, Es thrombinemia evidencia directa, principalmente debido a la trombina escinde de la molécula de fibrinógeno péptidos A. La técnica de la disponibilidad limitada debido a dificultades en la obtención de la inmune anti-A en suero.
Además, aumento de péptido plasma generalmente transitoria, ya que se elimina rápidamente del sistema de circulación de los fagocitos mononucleares. En este sentido, el nivel de péptido A informativo solamente cuando el aumento, que es una señal fiable de la presencia de trombina activa en la sangre.
La estratificación y la formación de una piscina de fibrinógeno en los complejos de monómero de fibrina soluble en plasma (RFMK)
En las personas sanas, las propiedades del fibrinógeno, La movilidad electroforética y la sensibilidad a la trombina, coagulado completamente en el ensayo de trombina mediante la adición de 12-14 segundos trombina-.
En contraste, cuando la activación de la coagulación intravascular (trombinemii) y la fibrinólisis ocurre piscina fibrinógeno paquete, Educación SFMC, la unión del fibrinógeno (Fibrinógeno Bloqueado), y, quizás, producto temprano de la fibrinólisis (fragmentos X y V), y principios y finales FDP estado libre. SFMC y asociado fibrinógeno o trombina influenciada no coagulan (permanecido en el suero), o coagular lentamente y sólo cuando se expone a altas concentraciones de trombina (3-segundos). Para detectar el plasma y suero SFMC y otros componentes inertes piscina fibrinógeno, las siguientes pruebas paracoagulation.
Naftolovyj Beta-test
Naftolovyj Beta-test (nombre anterior - la definición de fibrinógeno B) insuficientemente específica, por lo que ahora rara vez se utiliza.
Su esencia radica en el hecho, que la solución de plasma sanguíneo se añadió β-naftol en 50 % etanol (5 gotas para 1 ml). Si después 10 min con agitación, se precipita en forma de copos gruesos, la muestra se considera positiva.
Prueba de Etanol
Prueba de Etanol - legkovypolnim, para que se 0,4 ml de plasma investigó, estabilizado citrato de sodio mezclado con ácido aminocaproico (para bloquear la fibrinólisis), añadir 0,15 ml 50 % etanol (concentración controlada Alcoholímetros).
Educación a través 10 min suave indica la presencia de un coágulo en el plasma sanguíneo SFMC. Prueba específica, sino que revela sólo una parte de la SFMC (básicamente - krupnomolekulyarnyh), Le da un resultado positivo en la DIC, trombosis y otros tipos thrombinemia. En el estadio III el motor en el fondo de hipofibrinogenemia severa (menos de 0,5-0,7 g / l), como para la heparinización, prueba de etanol a menudo se convierte en negativo.
Prueba Protaminsulfatny
Protaminsulfatny prueba se basa en la deposición de los primeros productos de la fibrinólisis y de la sulfato de protamina SFMC, obtenido a partir de la leche de pescado. La prueba es muy específica, sino por su conducta adecuado sólo ciertos tipos de sulfato de protamina.
La capacidad de inactivar la heparina y sulfato de protamina causa no relacionada paracoagulation. Por esto, las muestras de protamina sulfato, utilizado para probar paracoagulation, En primer lugar, debemos ser probados en una solución o un monómero de fibrina, o un plasma normal, al que se añade una pequeña cantidad de pre-trombina y la estreptoquinasa (o simplemente estreptoquinasa).
Cuando esta prueba se convierte en positivo, sulfato de protamina es adecuado para uso diagnóstico. En muchos kits de diagnóstico de propiedad incluye el control (Referencia) plasma, dando protaminsulfatnogo prueba positiva. Se utiliza para el reactivo de prueba.
Debe tenerse en cuenta, qué utilizando pruebas de etanol y protaminsulfatnogo identifican los diferentes componentes de la piscina fibrinógeno, en relación con la que sus resultados no siempre coinciden entre sí. Así, en algunos pacientes con DIC ambas pruebas son positivas, otros - sólo uno de ellos. Por lo tanto, para un diagnóstico fiable es necesario para llevar a cabo ambas pruebas.
Prueba Ortofenantrolinovy
Prueba Ortofenantrolinovy (OFT) - Muy informativo, Permite para la determinación cualitativa y cuantitativa de SFMC en el plasma con una pequeña cantidad de plaquetas (más centrifugó 20 en minutos 4000 / Min).
Para la realización de la prueba sólo es adecuado ortofenantrolin clorhidrato. La solución ortofenantrolina 0,033 M (0,78 %) Se mezcla a temperatura ambiente durante cantidades iguales (por 0,1 ml) para estudiar plasma en un portaobjetos y el balanceo determinado el tiempo de aparición de los primeros copos mezclados.
La grabación se realiza para 2 m.
Resultados (en segundos) convertido a través de la curva de calibración en la cantidad SFMC. Una curva de calibración se preparó añadiendo diversas concentraciones fibrinmonomera, obtenido por el método Radzevich-Hodorova, un pool de plasma sanguíneo de los seres humanos sanos (Donante). Normalmente aparecen en escamas 120 de; el más rápido que aparecen, más SFMC contenida en el plasma de prueba.
Enfermedad fiable prueba, que el etanol y protaminsulfatny.
Identificación de aglutinación de eritrocitos SFMC, pokrыtыh fibrina-monomerami (FM-test)
I eritrocitos humanos(oh) Grupos abarcados por los monómeros de fibrina se utilizan en DIAGNOSTICUM.
El plasma sanguíneo se mezcla con eritrocitos de ensayo de vidrio. La aparición de aglutinación (estimado por + a +++) Se indica la presencia de SFMC, interactuar con monómeros de fibrina en la superficie de las células rojas de la sangre.
La prueba es muy sensible, revela una concentración superior SFMC 10 mg / ml.
Identificación completa de la coagulación del fibrinógeno y SFMC piscina utilizando veneno efa arena
El efa solución veneno arena o fracción de coagulación (ehitoks, ekarin) fibrinógeno totalmente coagulada, Todos los productos SFMC y la fibrinólisis temprana, en relación con la que se puede utilizar para evaluar la cantidad total de componentes de la coagulación de fibrinógeno en el plasma sanguíneo de la piscina y el número de SFMC y fibrinógeno bloqueado, que queda después de la caída inicial en el suero, obtenido después de la coagulación de la trombina.
Usar la concentración del veneno, que provoca la coagulación de plasma normal durante 20-30.
En presencia de la muestra SFMC fibrinógeno en plasma veneno revelado más de, que en el ensayo con trombina, en el suero, obtenido después de 15 segundos de trombina coagulación, con la adición de veneno producido un segundo coágulo, que va todo el SFMC y fibrinógeno bloqueado asociado, así como el PDF antes.
Estos fenómenos son típicos para thrombinemia y coagulación intravascular masiva (DIC, tromboembolismo, y col.), mientras que en el suero de personas de prueba sanas no revela ninguna SFMC veneno y fibrinógeno bloqueado. Después de fibrinógeno veneno coagulación y derivados macromoleculares no han encontrado ninguna cromatografía, audio a través de prueba de estafilococos adhesiva.
En adición a lo anterior, para determinar las SFMC y escisión temprana productos de fibrinógeno (o fibrina) plasmina puede aplicarse siguientes pruebas.
Prueba de adherencia de los estafilococos
Prueba de adherencia de los estafilococos (TSS, Prueba klamping estafilocócica) - Un método simple y altamente informativo de detectar SFMC suero y producto temprano de la fibrinólisis (фрагментов X, así como el fibrinógeno de bloqueo asociado).
Se basa en la capacidad de ciertas cepas de Staphylococcus (Neumann Д2S и др.) debido a la presencia en su superficie un klamping factor particular se someten a la influencia de aglutinación del suero restante, SFMC después de la coagulación y principios PDF (фрагментов X).
Sangre de Investigación se toma en la solución estabilizante mezclado con la prevención de ácido aminocaproico fibrinolisis in vitro.
La prueba se realiza en el cristal o en placas 74 nidos mezclando volúmenes iguales de herramientas de diagnóstico y el estudio de suero de la sangre a diluciones 1:2, 1:4, 1:8 Y t. d.
Tomado en cuenta la dilución final, que la aglutinación aún determinada. En las personas sanas, el contenido de SFMC y principios del FDP en el suero no exceda 0,002 g / l (2 ug / ml).
Determinación inmunológica de la temprana y tardía FDP en el suero
Determinación inmunológica de la temprana y tardía FDP en el suero se basa en la capacidad de producir suero inmune piscina componentes de precipitación antifibrinogenovoy fibrinógeno (La sensibilidad se determinó mediante diluciones de suero de fibrinógeno).
Cuando inmunoelectroforesis debido a diversos SFMC movilidad, фрагментов X, Y, D y E son tal vez indicativo de su determinación. La evaluación cuantitativa se realiza mediante el examen de las diferentes diluciones de fibrinógeno, plasma y suero. Pruebas más específicas con antisueros específicos anti-D, dímero anti-D, etc..
Prueba de látex PDF
Prueba unión de partículas de látex, cargado con anti-D, анти-E, антидимер D и др. (Prueba de látex PDF), es determinar utilizando kits de diagnóstico PDP enumerado pegar la partícula de látex mediante la mezcla de diferentes diluciones de suero.
Determinación de plasma activado factor XIII como un indicador de la trombina en la circulación de la sangre
Фактор XIII, activable por trombina en presencia de iones de calcio, Una cadena se divide en, obladayushtuyu fibrina-stabiliziruyushtey aktivnostyyu, y la cadena inercial S.
Determinación separada de su contenido (en el grado de estabilización de oligómeros de fibrina y inmunológica) para diagnosticar la coagulación intravascular de la sangre por la presencia thrombinemia. Método complejo, Se utiliza principalmente para la investigación científica. Se están desarrollando métodos más asequibles para la determinación del factor XIIIa.
La detección de la activación de la protrombina
Cuando el factor de protrombina activado Xa escinde el fragmento F1-2 sustrato, determinado inmunológicamente. El aumento en el contenido de este último en el plasma indica la activación de la coagulación sanguínea.
Identificación de marcadores de activación celular de la coagulación intravascular
El fenómeno de daño (Fragmentación) eritrocitos
Cuando DIC y otros tipos de bloqueos microcirculación en los vasos pequeños glóbulos rojos están expuestos a lesión, en relación con la que los frotis de sangre aumenta el número de células fragmentadas (más de 7 10%).
Más específicamente, este fenómeno está determinado por la separación de células sanguíneas en un gradiente de densidad de Ficoll-verografin (densidad 1,077) como se describe en, utilizado en la inmunología para el aislamiento de linfocitos y monocitos. El timbre normal interfase de leucocitos es de color opalescente blanquecina y su cámara de recuento contiene menos de Goryaeva 400 eritrocitos 1 l (más frecuentemente a lo sumo 200).
Cuando el número de DIC emergente (Dañado) glóbulos rojos se incrementa dramáticamente (para 1000-1040 000 en 1 l y más), en relación con el que el anillo está pintado en color rosa o rojo. Cuantitativamente, el fenómeno se calcula contando el contenido de células rojas de la sangre en la interfase (cámara de Goryaeva).
El método permite diferenciar entre DIC y el bloqueo de la microcirculación trombosis de los vasos, en el que el daño a las células rojas de la sangre ligeramente.
El fenómeno de la producción de tromboplastina por los monocitos
Algunos tipos de DIC (especialmente el origen inmunológico e infeccioso) monocitos se activan y adquieren la capacidad de producir tromboplastina tisular.
Para detectar este fenómeno células de la sangre están separadas por gradiente de densidad (Mezcla de Ficoll-verografinovaya, densidad 1,077) para obtener una fracción, que contiene un gran número de monocitos, cultivada brevemente, y después la suspensión se determina por la actividad de coagulación antes y después de romper las células. En proceso infeccioso-séptico grave, esta función puede ser suprimida por los monocitos.
La identificación de plasma bajar (consumo) componentes de la coagulación, fibrinolíticos, y calicreína-quinina sistemas
En DIC aguda y subaguda observe un aumento de consumo y el metabolismo de un número de componentes del sistema hemostático, Por lo tanto, el nivel de plasma se reduce significativamente. Especialmente pronunciada inhibición de factor VIII, V, антитромбина III, белков C и S, fibronectina, prekallikreina, quininógeno alto peso molecular, plasminógeno.
La determinación de algunos de estos parámetros es importante no tanto para el diagnóstico, la forma de evaluar la gravedad del proceso y la eficacia de la terapia de sustitución.
El nivel de factor I (fibrinógeno) menudo reducida, qué, Sin embargo, inicialmente enmascarada por un alto contenido de su plasma en enfermedades infecciosas e inmunológicas, toxemia del embarazo, y otras formas de patología.
Identificar neoantigenov
Durante la activación de factores de coagulación y la fibrinolisis y la posterior formación de sus complejos con antagonistas fisiológicos surgir nuevos marcadores antigénicos, no hay separada en partes constituyentes de estos pares. Así, por ejemplo,, complejo de trombina-antitrombina III antígeno formulario, no es característica de "individualmente o trombina, ни антитромбину III.
De manera similar, formado en plasmina emparejamiento neoantígeno - antiplasmina y así sucesivamente. d. En la presencia de antisueros para estos neoantigenam fácil de establecer la presencia de enzimas clave coagulación de la sangre activado (La trombina) y la fibrinólisis (plasmina).
Clínica moderna tiene suficientemente amplio conjunto de pruebas, identificar la activación intravascular de coagulación de la sangre y la fibrinolisis.
Muchas de estas pruebas están disponibles públicamente, rápida y fácil de implementar. Su uso en combinación con algunos otros estudios proporciona el diagnóstico de laboratorio fiable de DIC y otros tipos de coagulación intravascular masiva. Observación de los marcadores de la coagulación intravascular que se establece para la correcta evaluación de la dinámica del proceso patológico, la eficacia e idoneidad de la terapia.
